全 文 ：2011年 2月　第 13卷　第 2期 中国现代中药　ModernChineseMedicine Feb.2011　Vol.13　No.2
质量标准
■ [基金项目 ] 　甘肃省科技支撑计划项目(0804NKCA119-08);甘肃省中医药科研项目(07-CZK-50);兰州市科技计划项目(2008-1-172)
[通讯作者 ] 　＊景明 , Tel:(0931)8765459, E-mail:jm@gszy.edu.cn
不同产地藏药材湿生扁蕾中活性成分含量的研究■
景明＊ , 罗永皎 , 李硕 , 李成义
(甘肃中医学院 , 甘肃　兰州　730000)
[摘要 ] 　目的:通过测定不同产地 、 不同采收时期湿生扁蕾中木犀草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮的
含量 , 考察湿生扁蕾的最佳采收期与最佳产地。 方法:用 RP-HPLC法 , 样品直接用 70 %乙醇提取进样 ,
ZORBAXSB-C18柱 , 检测波长为 260 nm, 柱温 30 ℃, 甲醇 -0.4 %磷酸水溶液梯度洗脱 , 流速 1 mL·min-1。分析了
甘肃 15个不同产地湿生扁蕾药材中木犀草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮的含量。结果:15个不同产地湿生
扁蕾药材中木犀草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮的含量差别较大 , 其中木犀草素最高为 1.79 mg·g-1 , 最低
为 0.24 mg·g-1 , 1, 7-二羟基 -3, 8-二甲氧基 酮最高为 0.68 mg·g-1 , 最低为 0.13 mg·g-1。结论:同一产地以 8
月份采收的湿生扁蕾中木犀草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮的含量最高;甘肃 15个产地中以临潭县下拉地
村产湿生扁蕾中木犀草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮的含量最高。 　
[关键词 ] 　湿生扁蕾;含量测定;反相高效液相色谱
湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物 Gentianopsis
paludosa(Munro)Ma.的干燥全草 , 藏药称机合斗 ,
产于甘肃 、 青海 、 四川 、 西藏等地区 , 生长在海拔
2 300 ～ 4 100 m的河滩草地 、 沟边 、 山坡。具有清
热解毒 、 健脾止泻等功能 , 藏医用全草治疗肝炎 、
胆囊炎 、热病发斑 、 目赤肿痛 、 消化不良 、 肠胃炎
等 [ 1] 。所含的化学成分包括黄酮类 、 酮类 、 三萜
类 、三十烷醇 、 胡萝卜苷及 β-谷甾醇 , 还含有酚
类 、有机酸等[ 2-3] , 其中 酮类 、 黄酮类具有抗炎 、
镇痛 、 解热 、抗腹泻作用 [ 4-5] 。 《中华人民共和国卫
生部药品标准·藏药分册 》 中收载了湿生扁蕾药材 ,
但其质量标准中未制定含量测定指标 。本实验拟采
用 RP-HPLC测定藏药湿生扁蕾中木犀草素和 1, 7-
二羟基 -3, 8-二甲氧基 酮的含量 , 对不同产地 、
不同采收期湿生扁蕾中木犀草素和 1 , 7-二羟基 -3,
8-二甲氧基 酮的含量作一比较 , 为该药材的质量
评价提供参考依据。
1　仪器与试药
AgilentHP1200高效液相色谱仪(美国安捷伦);
ZORBAXSB-C18色谱柱 (美国安捷伦);AE-240电子
天平(梅特勒 -托利多仪器上海分公司);KQ-100
超声波清洗器(昆山市超声技术有限公司);R-200
旋转蒸发仪(瑞士布奇)。甲醇(色谱纯 , 天津市光复
精细化工研究所);磷酸(分析纯 , 白银良友化学试剂
有限公司);水为重蒸馏水;其他试剂均为分析纯。
木犀草素对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号:111520-200201), 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧
基 酮对照品(自提 , HPLC归一化法测定纯度达 98
%以上)。湿生扁蕾药材采自甘肃 15个不同产区 ,
经甘肃省药品检验所中药室宋平顺主任中药师鉴定
为湿生扁蕾 。
2　方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:ZORBAXSB-C18 (250 mm×4.6 mm,
5 μm);柱温:30 ℃;流速:1 mL·min-1;进样量:
10 μL;检测波长:260 nm;流动相:甲醇(A)-0.4
%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 15 min, A∶B=35∶
65, 15 ～ 60 min, A∶B=60∶40);记录时间为 60 min。
理论塔板数均大于 3 000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取木犀草素对照品 5.4 mg、 1, 7-二羟
基 -3, 8-二甲氧基 酮对照品 4.3 mg, 置 10 mL量
瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 精密吸取 1 mL, 用甲
醇定容至 5 mL量瓶中 , 作为对照品溶液 。
2.3供试品溶液的制备
精密称取不同产地 、 不同采收期湿生扁蕾药材
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DOI :10.13313/j.issn.1673-4890.2011.02.014
2011年 2月　第 13卷　第 2期 中国现代中药　ModernChineseMedicine Feb.2011　Vol.13　No.2
的干燥粉末(60目)1.0 g, 置于 50mL量瓶中 , 加
入 70%乙醇 40 mL, 超声处理 20 min, 放冷 , 用
70 %乙醇定容至 50 mL, 摇匀 , 0.45 μm微孔滤膜
滤过 , 滤液作为供试品溶液。
2.4线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液 2, 4 , 8 , 10 , 12 ,
16 , 18, 20 μL, 进样测定 , 以对照品进样量
(μg)为横坐标 , 峰面积积分值为纵坐标 , 绘制
标准曲线 。木犀草素和 1, 7-二羟基 -3, 8-二甲氧
基 酮 的回 归 方程 分 别为 :Y=84.526X-
49.163(r=0.999 4), Y=112.431X-117.129
(r=0.999 1)。结果木犀草素和 1 , 7-二羟基 -3 ,
8-二甲氧基 酮分别在 0.216 ～ 2.16 μg和 0.172
～ 1.72 μg线性良好 。
2.5精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 10 μL, 按上述色谱
条件 , 重复进样 5次 , 木犀草素和 1, 7-二羟基 -3,
8-二甲氧基 酮的 RSD分别为 1.03 %和 0.97 %,
表明仪器精密度良好 。
2.6稳定性试验
精密吸取供试品溶液 , 按上述色谱条件 , 分
别于 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 12 h各进样 10 μL, 木犀
草素和 1 , 7-二羟基 -3 , 8-二甲氧基 酮的 RSD
分别为 1.09 %和 1.21 %, 表明样品溶液在 12 h
内稳定 。
2.7重复性试验
精密称取同一批湿生扁蕾药材 1.0 g, 共 5份 ,
分别按 2.3项下方法制备样品溶液 , 按 2.1项下色
谱条件 , 各取 10μL进样测定 , 木犀草素和 1, 7-二
羟基-3, 8-二甲氧基 酮的 RSD分别为 1.71 %和
1.36%。
2.8加样回收率试验
精密称取已知含量的湿生扁蕾药材 (木犀草素
含量:1.79 mg·g-1 , 1, 7-二羟基 -3 , 8-二甲氧基
酮含量:0.68 mg·g-1)0.5 g, 共 5份 , 每份精密
加入一定量的木犀草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧
基 酮对照品 , 按 2.3项下方法制备样品溶液 , 依
法测定含量 , 计算回收率 , 结果见表 1。
2.9样品含量测定
取不同产地 、 同一产地 (甘肃临潭县下拉地
村)不同采收期湿生扁蕾药材样品 , 按 2.3项下
方法制备样品溶液 , 分别精密吸取 10 μL, 按上述
色谱条件测定 , 计算含量 , 结果见表 2、 表 3及图
1、 图 2。
表 1　加样回收率试验
成分 取样量 /g
样品中
含量 /mg
对照品加
入量 /mg
测得量
/mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
RSD
/%
木犀草素 0.497 3 0.890 2 0.86 1.736 1 98.42
0.501 7 0.898 0 0.86 1.739 2 97.91
0.510 2 0.913 3 0.86 1.758 5 98.38
0.487 8 0.873 1 0.86 1.711 0 97.47
0.492 4 0.881 4 0.86 1.713 5 96.83
97.80 1.13
1, 7-二羟 0.497 3 0.338 2 0.32 0.653 4 98.28 97.99 1.02
基-3, 8- 0.501 7 0.341 1 0.32 0.652 6 97.50
二甲氧基 0.510 2 0.346 9 0.32 0.662 0 98.61
酮 0.487 8 0.331 7 0.32 0.645 8 98.21
0.492 4 0.334 8 0.32 0.646 0 97.37
表 2　不同产地湿生扁蕾中木犀草素和 1, 7-二羟
基-3, 8-二甲氧基 酮的质量分数
/mg·g-1
产地 采收日期/年-月-日 木犀草素
1, 7-二羟基-3,
8-二甲氧基 酮
甘肃临潭县冶力关村 2008-07-22 1.48 0.57
甘肃临潭县下拉地村 2008-07-22 1.79 0.68
甘肃卓尼县上卓村 2008-07-22 0.93 0.33
甘肃卓尼县口子下村 2008-07-22 1.15 0.41
甘肃卓尼县刹地沟村 2008-07-22 1.54 0.69
甘肃临潭县江果河村 2008-07-23 1.21 0.46
甘肃合作市多合寺村 2008-07-23 0.91 0.37
甘肃合作市德乌鲁村 2008-07-25 1.10 0.42
甘肃合作市上上加寺村 2008-07-25 0.77 0.29
甘肃合作市日多马村 2008-07-25 1.33 0.51
甘肃碌曲县科才沟口村 2008-07-27 1.24 0.46
甘肃碌曲县唐龙多村 2008-07-27 0.96 0.35
甘肃夏河县洛赤霍纳尕村 2008-07-28 0.78 0.27
甘肃夏河县观音大庄村 2008-07-28 1.11 0.44
甘肃夏河县甘加贡玛村 2008-07-28 0.24 0.13
表 3　不同采收期湿生扁蕾中木犀草素和 1, 7-二羟基
-3, 8-二甲氧基 酮的质量分数
/mg·g-1
采收日期
/年-月-日 木犀草素 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮
2009-07-14 1.03 0.39
2009-07-20 1.26 0.47
2009-07-28 1.59 0.62
2009-08-07 1.64 0.65
2009-08-15 1.66 0.64
2009-08-24 1.53 0.60
2009-09-03 1.42 0.57
2009-09-15 1.40 0.52
2009-09-22 1.38 0.47
2009-10-04 1.33 0.44
2009-11-09 1.35 0.41
2009-12-07 1.30 0.39
·30·
2011年 2月　第 13卷　第 2期 中国现代中药　ModernChineseMedicine Feb.2011　Vol.13　No.2
3　讨论
实验曾考察了乙腈 -水 、甲醇 -水 、甲醇 -0.4%
磷酸水溶液为流动相的梯度洗脱系统 , 结果以甲
醇 -0.4 %磷酸水溶液为流动相线性梯度洗脱 , 木犀
草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮峰可以达到基
线分离 , 峰形对称 , 分离度好。同时对检测波长进行
了选择 , 通过比较 254, 260, 270, 280nm检测波长
下的色谱图 , 发现检测波长为 260 nm时 , 色谱峰
最高 。
实验中还曾对超声与热回流进行比较 , 结果两
种提取方法提取物的含量相当。同时对提取溶剂甲
醇 、 70%甲醇水溶液 、 无水乙醇 、 70 %乙醇水溶液
进行考察 , 结果以 70%乙醇提取物的含量最高。对
超声提取时间 10, 20, 30, 40min的考察表明 , 70%
乙醇超声 20 min提取基本完全 , 故采用 70 %乙醇
超声提取 20 min。
实验结果表明 , 甘肃 15个不同产地湿生扁蕾全
草中木犀草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮的
含量差别较大 , 其中木犀草素最高为 1.79 mg·g-1
(甘肃临潭县下拉地村), 最低为 0.24 mg·g-1(甘肃
夏河县甘加贡玛村), 1, 7-二羟基 -3, 8-二甲氧基
口山 酮最高为 0.68mg·g-1(甘肃临潭县下拉地村),
最低为 0.13 mg·g-1(甘肃夏河县甘加贡玛村);而
且同为甘南地区不同县村之间也有较大差异。分析
影响本实验结果的因素可能是生态环境(光照 、 气
候 、土壤等)和采收期的不同所致 。
本方法简便 、 准确 、 重复性好 , 可以作为控制
湿生扁蕾药材质量的方法之一;不同产地的湿生扁
蕾中木犀草素和 1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基 酮的
含量差别较大 , 有必要进行最佳产地的优选和不同
采收期的含量比较研究。
参考文献
[ 1] 张宝琛 , 甄润德 , 胡柏林 ,等 .湿生扁蕾的化学成分研究
[ J] .中草药 , 1980, 11(4):149.
[ 2] 李作平 , 霍长虹 , 郑小莉 .扁蕾的化学成分研究 [ J] .中
国现代应用药学杂志 , 2003, 20(1):24.
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研究 [ J] .中国药学杂志 , 2005, 40(14):1059.
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菌作用初探 [ J] .天然产物研究与开发 , 2005, 17(5):
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[ 5] 米琴, 曹长年 , 赵宙光 ,等 .藏药湿生扁蕾有效成分的研究
[ J] .青海师范大学学报(自然科学版), 2005, 23(2):64.
(收稿日期　2010-11-22)
ResearchofActiveIngredientContentinGentianopsisPaludosaFromDiferentPlaces
JINGMing, LUOYong-jiao, LIShuo, LICheng-yi
(GansucolegeofTCM, Lanzhou730000, China)
[ Abstract] 　Objective:ToidentifytheoptimalharvesttimeandareaofGentianopsispaludosa(Mum.)Ma, the
contentsofluteolinand1, 7-dihydroxy-3, 8-dimethoxyxanthoneofGentianopsispaludosa(Mum.)Mafromdiferentareas
anddiferentharvestphasesweredetermined.Methods:RP-HPLCmethodwasusedZORBAXSB-C18 columnwas
applied.Thedetectionwavelengthwassetat260nm.Thecolumntemperatureat30℃.Themobilephaseconsistedof
methonal-0.4% phosphoricacidsolutioninagradientelutionmodeat1 mL·min-1。Thecontentofluteolinand1, 7-
dihydroxy-3, 8-dimethoxyxanthoneofGentianopsispaludosa(Mum.)Mafrom15 diferentareasofGansuwereanalysed.
Results:Thecontentsofluteolinand1, 7-dihydroxy-3, 8-dimethoxyxanthoneofGentianopsispaludosa(Mum.)Mafrom
15 diferentareasweresignificantlydiferent.Luteolin, thehighestwas1.79mg·g-1 andthelowestwas0.24mg·g-1.
1, 7-dihydroxy-3, 8-dimethoxyxanthone, thehighestwas0.68 mg·g-1 andthelowestwas0.13 mg·g-1.Conclusion:
Fromthesameplace, theluteolinand1, 7-dihydroxy-3, 8-dimethoxyxanthoneofGentianopsispaludosa(Mum.)Ma
gatheredatAugusthavethehighestcontent.15 diferentareasofGansu, theluteolinand1, 7-dihydroxy-3, 8-
dimethoxyxanthoneofGentianopsispaludosa(Mum.)MafromXialadivilageinLintancountywerethehighest.
[ Keywords]　Gentianopsispaludosa(Mum.)Ma;Contentdetermination;RP-HPLC
·31·