全 文 ：高效液相色谱分析青藏高原长梗喉毛花植物中的 酮
师治贤＊ 胡风祖 刘 梅
(中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 810001)
2001-12-19收稿;2002-05-08接受
1 引 言
龙胆科(Gentianacese)植物长梗喉毛花(Comastoma Pedunlulatum[ Rogle ex D.Dou] Holub)分布在西藏 、青海 、甘肃和四川
北部 ,生长在海拔 3000 ～ 4800 m的河滩和高山草甸等环境中。《晶珠本草》记载:植物长梗喉毛花比之加滴色淡而软 , 叶
微黄。藏名“桑斗” ,藏医常用药。全草入药 , 性味苦寒 ,有利湿祛痰 、清热解毒 、舒肝利胆等功效。
藏药长梗喉毛花富含 酮类化合物 , 酮又称苯并色原酮。自然界得到 酮是黄色的酚性化合物 ,它是有广泛的生
理活性 ,具有解肝毒 、护肝 、抗炎 、抗病毒和显著抑制黄嘌呤氧化酶等活性 , 近年研究发现 , 酮化合物在血小板凝集和
ATP释放 , 抑制血管紧张肽的活性 , 降血糖 ,抗肿瘤 , 增强免疫功能有明显的疗效。
为了深层次的挖掘和研究藏药的独特药效和生理活性物质的分布 , 为藏药的现代化提供理论和实践基础。因此 , 我
们用长梗喉毛花的新鲜植物全草甲醇提取物 , 溶剂回收后的浸膏经水液分散 , 分步萃取 ,在醋酸乙酯和正丁醇萃取的部
位 ,经聚酰胺柱粗分 , 得到的药用有效部位 ,用反相高效液相色谱进行了分离和分析 ,取得了满意的结果。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂 Toyo Soda HLC-803A高效液相色谱仪(东亚曹达公司), 紫外检测 , U6k进样阀 , RE-121 旋转蒸发仪(瑞
士公司)。试剂:甲醇(色谱纯),甲醇(A.R),正丁醇(A.R)(北京化学试剂厂),石油醚(A.R), 醋酸乙酯(A.R), 氯仿(A.R)
(西安化学试剂厂)。水为去离子水。
2.2 实验材料 实验用植物样系 1992年 8 月采自青海省共和县黑马河乡青海湖畔亚高山草甸 , 海拔 3290 m , 物候期为
盛花期。
2.3 酮成分的提取 实验用新鲜植物全草 ,经干燥粉碎后 , 用 6倍于样品的甲醇浸泡 3 天后 , 在 80℃水浴加热回流提
取 3 h , 同法提取 4次。合并提取液 , 回收溶剂至膏状。然后将膏状经水分散 , 用石油醚除去叶绿素 , 分步用氯仿 、醋酸乙
酯 、正丁醇萃取 , 其间醋酸乙酯和正丁醇萃取部分基本相同 , 回收溶剂 ,合并萃取液 ,经聚酰胺柱色谱粗分 , 在甲醇-水洗
脱部分为有效部位 ,合并浓缩 , 浓缩液用 0.45 μm 滤膜过滤 ,保存在冰箱备用。
2.4 色谱条件的选择 酮为原色酮 , 紫外吸收光谱中最大的吸收峰位一般比原色酮的波长要长 , 一般在 230、260、
310 、380 nm 左右出现最大峰值 , 经实验选择提取物的 酮在 254 nm 基本合适。 酮在 C18化学键的色谱填料柱上 ,经过
流动相的选择 ,以等度洗脱 , 流动相为甲醇∶水=45∶55(V V),流速为 1.0 mL min分离效果理想。
经实验选择色谱条件:色谱柱:Nucleosils C18 (3000×4 mm);流动相:甲醇∶水=45∶55(V V);紫外检测:254 nm;流速:
1.0 mL min;进样量 10μL。
3 结果与讨论
3.1 色谱峰的定性定量 根据有效部位的分离 ,提取物中含有 8 个重要组分 ,用重要 酮的标准品在同一色谱条件下 ,
进行标样加入法和保留值的比较 ,初步确定具有重要药用价值的 4 种重要成分。用相对峰面积归一化法计算了它们的
含量 ,占主要有效成分的 79.8%。这 4种成分中具有药用价值的重要的 酮化合物是:峰 3:1-o-[ β-D-吡喃木糖-1※6)-β-
D-吡 喃 葡 萄 糖 ]-8 羟 基-3 , 7-二 甲 氧 基 酮(1-o-[ β-D-xylopyranosy l-(1 ※ 6)-β-D-glucopyranosyl] -8-hydroxy-3 , 7-
dimethoxyxanthone)占 25.0%;峰 4:1-o-β-D-吡喃葡萄糖-3 , 8-二羟基-7-甲氧基 酮(1-o-β-D-glucopyranosyl-3 , 8-dihydroxy-7-
methoxyxathone)占 35.9%;峰 5:1-o-[ β-D-吡喃木糖-(1※6)-β-D-吡喃葡萄糖]-3 , 5-二甲氧基 酮(1-o-[ β-D-xylopyranory l-(1
※6)-β-D-glucopyranosyl] -3 , 5-dimethoxyxanthone)占 0.96%;峰 6:1-o-[ β-D-吡喃木糖-(1※6)-β-D-吡喃葡萄糖]-3 , 7 , 8-三甲
氧基 酮(1-o-[ β-D-xylopyranosyl-(1※6)-β-D-glucopyranosyl]-3 , 7 , 8-trimethoxy xanthone)占 17.9%。未鉴定的 4种组分占 21.20%。
3.2 4种 酮化合物的分离分析 为了进一步确正这 4种重要药用 酮的存在 ,根据反相色谱的分析模式 ,由于 4种重
要组分的分离度比较大 ,因此采用聚酰胺柱色谱进行放大实验 ,用 15%～ 40%的乙醇分步洗脱 ,薄层色谱检查 ,相同部分
合并 ,回收溶剂 , 得到 4种黄色或淡黄色的结晶。经紫外光谱 、红外光谱和核磁共振谱鉴定确定 4种 酮化合物的存在。
因此 ,反相高效液相色谱在等度的甲醇-水体系中 酮类化合物能够得到很好的分离和分析 , 可作为进一步纯化和制备
天然 酮的信息。
第 30 卷
2002年 12月
分析化学(FENXI HUAXUE) 来稿摘登
Chinese Journal of Analytical Chemistry
第 12期
1532