全 文 ：　工艺与制备　
藏药喉毛花总黄酮提取工艺的实验研究■
中央民族大学 生命与环境科学学院(北京 100081)　钟伯雄　唐　丽　焦建那拉　杨　林　马　瑛
摘　要:目的:优选藏药喉毛花总黄酮的最佳提取工艺。方法:以芦丁为指标成分 , 用紫外分光光度法在 510nm处测定总黄
酮含量 , 以总黄酮含量为评价标准 , 应用正交实验 ,优选喉毛花总黄酮提取的最佳工艺。结果:喉毛花总黄酮的最佳提取工
艺为 50%乙醇 , 6倍量 , 回流提取 2h。结论:紫外分光光度法方便 、快捷 , 可用于喉毛花总黄酮提取工艺的优选。
关键词:藏药喉毛花;总黄酮;提取工艺;紫外分光光度法
中图分类号:R291.4　文献标识码:B　文章编号:1006-6810(2009)06-0058-02
　　藏药喉毛花是龙胆科(Gentianacese)喉毛花属植物长
梗喉毛花 ComastomaPedunlulatum[ RogleexD.Dou] Holub
的干燥全草 , 又名藏茵陈 ,藏药名桑斗 , 生长在海拔 3000 ～
4800m的林下 、灌丛 、河滩和高山草甸等环境中 , 产于青海
省玉树 、黄南 、海南 、海北等州 , 西藏 、甘肃 、四川北部 、新疆
地区和内蒙古地区亦有分布 〔1, 2, 3〕。 《晶珠本草》记录喉毛
花为藏蒙医常用药材 , 性味苦寒 , 有利湿祛痰 、清热解毒 、舒
肝利胆等功效。 为了有效开发和利用资源 , 本文采用正交
试验设计对喉毛花总黄酮的提取工艺进行了研究。本实验
在化学成分预试验的基础上 ,应用溶剂提取法 , 按正交设计
方法 , 以芦丁的含量为标准 ,考察了溶剂的浓度 、液料比 、提
取时间对总黄酮提取率的影响 ,找出优化条件 , 确定喉毛花
总黄酮的最佳提取工艺。本实验结果为制定喉毛花总黄酮
制备工艺提供依据。
1　仪器与材料
1.1　仪器:UV-4802H型紫外可见分光光度计 , DT/
DTA400电子天平 , RE-5203A型旋转蒸发仪 , AL104型电
子天平 , 中草药粉碎机。
1.2　材料:藏药喉毛花购于青海 , 经青海民族学院药学院
林鹏程教授鉴定为龙胆科喉毛花属植物长梗喉毛花 Comas-
tomaPedunlulatum[ RogleexD.Dou] Holub。芦丁对照品 , 北
京药品生物制品检定所提供 , 纯度为 99.2%,其他试剂均为
AR级 , 由北京化学试剂公司提供。
2　实验部分
2.1　样品的提取:准确称取喉毛花粗粉 20g9份 ,分别按照
表 1和表 2选择的因素水平进行回流提取 , 提取液热过滤 ,
石油醚脱脂及色素 , 萃取 2次后 , 乙醇层浓缩置于 100ml容
量瓶中 , 加水定容 ,得供试样品 。
　■本课题为国家自然科学基金青年基金资助项目(编号:
30701138),本课题为中央民族大学 URTP项目(编号:20082054)
　　作者简介:钟伯雄(1987-), 男 ,硕士研究生 ,研究方向:民族
药物药效物质基础研究
2.2　标准曲线的制备:精密称取减压 120度干燥至恒重的
芦丁对照品 20mg, 为甲醇适量 ,使充分溶解 , 放冷 , 100ml容
量瓶定容 ,摇匀(每 1ml含芦丁对照品 0.2mg)。
精密量取芦丁对照品溶液 0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、
6.0ml分别置于 25ml量瓶中 ,各加 50%乙醇至 6ml,加 5%
亚硝酸钠溶液 1ml, 混匀 , 放置 6min, 加 10%硝酸铝溶液
1ml, 摇匀 ,放置 6min, 加 4%氢氧化钠试液 10ml, 再加 50%
乙醇至刻度 ,摇匀 , 放置 15min, 以相应的试剂溶液为空白。
按分光光度法(中国药典 2000年版一部附录 VB)〔4〕 , 在
500nm波长处测定吸光度 , 以浓度(C)与吸光度(A)进行直
线回归 ,得回归方程:Y=12.968x-0.0189, R2 =0.9992,线
性良好。
2.3　正交实验设计与结果
2.3.1　正交设计:采用乙醇为提取溶媒 ,先以超声提取 、回
流提取 、水浴提取 3种方法进行方法学考察 ,确定回流提取
方法提取率较高 , 在此基础上根据药材性质和生产实验要
求 ,拟定影响提取率的 3个考察因素 , 液料比(A)、乙醇浓
度(B)和提取时间(C), 分别设立 3个水平 , 编制因素水平
表如表 1。
表 1　因素水平表
水平
水平
料液比(A) 乙醇浓度(B) 提取时间(C)
1 6倍量 95%乙醇 1
2 8倍量 70%乙醇 2
3 12倍量 50%乙醇 3
2.3.2　各组样品总黄酮的测定与数据处理:照标准曲线方
法进行操作 ,显色 , 在 510nm波长处测定吸光度 A, 由回归
方程计算样品中总黄酮的含量。总黄酮的提取量见表 2,方
差分析见表 3。
58 　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　2009年 6月第 6期DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2009.06.034
表 2　正交实验结果
列号 A B C 总黄酮提取率 %
1 1 1 1 0.659
2 1 2 2 1.156
3 1 3 3 1.543
4 2 1 2 0.815
5 2 2 3 1.024
6 2 3 1 1.518
7 3 1 3 0.897
8 3 2 1 1.400
9 3 3 2 1.465
k1 1.119 0.790 1.192
k2 1.119 1.193 1.145
k3 1.254 1.509 1.155
R 0.135 0.719 0.047
表 3　方差分析结果
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
液料比 0.036 2 0.132 5.140
乙醇浓度 0.778 2 2.853 5.140 ＊
回流时间(h) 0.004 2 0.015 5.140
　　注:＊为显著性因素
2.4　试验结果:由表 2直观分析来看 , 最佳提取工艺为
A1B3C3 , 即 6倍量 50%乙醇回流提取 3h。表 3方差分析表
明 , 乙醇浓度对其有显著性影响 ,即乙醇浓度 >液料比 >提
取时间。通过正交试验结果直观分析和方差分析得出藏药
喉毛花总黄酮提取的最佳工艺条件为 6倍量 50%乙醇回流
提取 3h,综合考虑溶剂提取杂质情况 , 且从经济 、环保的角
度考虑 , 长时间的提取会带来的经济成本 , 对环境的污染 ,
所以综合考虑选用工艺 A1B3C2 ,即采用 6倍量 50%乙醇提
取 2小时。
2.5　工艺验证:工艺筛选完成后 , 为考察上述最佳工艺的
稳定性 , 按该工艺条件与方法进行重复性验证试验 3次 , 分
别测定喉毛花总黄酮的含量 , 提取率分别为 1.510%,
1.742%和 1.720%。试验结果普遍优于正交实验表的试验
结果 ,重现性好 , 从而证明了该工艺的稳定可行。
3　结果与讨论
3.1　藏药喉毛花的化学研究很少 , 其抗肝炎 、肝纤维化作
用的有效成分也不是十分明确 , 故只选择了其中含量较高
的总黄酮为考察指标 , 并以该成分的产率作为工艺优选的
依据。
3.2　从表 3方差分析可以看出 , 乙醇的浓度对实验结果具
有显著性影响 ,各因素对提取率指标影响的大小顺序为:B
>A>C, 即乙醇浓度对实验结果影响最大 , 料液比次之 , 提
取时间对该工艺的影响最小。从正交实验的结果得出最佳
的提取工艺为 A1B3C3。
3.3　由直观分析表可以看出 , 虽然实验组 3总黄酮的产率
较高 ,但其在 6倍量 50%乙醇提取 3个小时后 , 同时含有较
多的杂质 ,且从经济 、环保的角度考虑 , 长时间的提取会带
来经济上的损失 ,对环境的污染也较大 , 所以综合考虑选择
工艺 A1B3C2 ,即 6倍量 50%乙醇提取 2小时。
3.4　在因素水平相同的情况下 , 正交设计一重复实验既避
免了使用更大的正交表 ,又提高了实验的精确度 , 通过重复
性实验 ,可较好的消除操作误差 、方法误差等对实验结果的
影响 ,使方差分析更准确 ,使结论更可靠。
参考文献
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卷)〔M〕.上海:上海科学技术出版社 , 1996.157-161.
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药房 , 1995, 6(3):38-39.
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的研究进展〔J〕.山西中医学院学报 , 2005, (1):23-26.
〔4〕国家药典委员会.中华人民共和国药典·一部〔M〕.北
京:化学工业出版社 , 2000.563.
2009年 1月 21日收稿
StudiesonExtractionProcessofTotalFlavonoidsof
TibetanMedicineHoumaohua
ZhongBo-xiong, TangLi, JiaojianNala, YangLin, MaYing
Abstract:Object:TooptimizetheextractionprocedureofthetotalflavonoidsfromTibetanMedicineHoumaohua
(ComastomaPedunlulatum).Methods:Theoptimizedextractionprocedurewasscreenedbyorthogonaltestac-
cordingtothecontentofthetotalflavonoidswhichwasmeasuredthroughUVspectroscopyat510 nmusingrutin
ascontrol.Rdsults:Theoptimizedextractionprocedurewasasfolows:50% alcohol, 6 timesvolumeoftheweight
ofthedriedmaterial, refluxing2h.Conclusion:UVspectrscopyisafastandconvienientmethodsuitableforthe
controloftheextractionofthetotalflavonoidsfromTibetanMedicineHoumaohua.
Keywords:TibetanMedicine;Totalflavonoids;Extractingtechnology;UVspectroscopy
592009年 6月第 6期　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志