全 文 ：第 4 卷第 4 期
20 0 5年 1 2月 杨 凌 职 业 技 术 学 院 学 报J u or n al o fY a ng l i ng V oe at i o n al & Te e h ni e al C ol le g e
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〔)e e . 20 0 5
云南西双版纳香荚兰种植园土壤微生物类群初探
王 燕 , 程联社
(杨凌职业技术学院 , 陕西 杨凌 7 1 2 1 0。 )
摘 要 :对采 自西双版纳香英兰 n 个不 同种植区土样中的细菌 、放线菌和真菌三大微生物类群进行了分析 ,分离出
真菌优势种群 14 种 、细菌 31 种 、 放线菌 8 种 。 细菌中芽胞杆菌占半数以上 ,放线菌中金色类群和白抱类群占优势 。 要
从土壤的微生物区系对其病害进行调控 ,需要进一步摸清优势种群与病害的关系 ,并从中找出其有拮抗性的优势
菌 ,分析研究诱发其有拮抗性的优势种群条件 。
关健词 :香英兰 ;根腐病 ;微生物区系
中图分类号 : 5 1 5 4 . 3 文献标识码 : A 文章编号 : 1 67 1一 9 1 31 ( 2 0 0 5 ) 0 4一 0 0 0 8 一 0 3
T h e P r i m a r y S t u d y o f t h e 5 0 11 M i e r o o r g a n i s m s i n t h e
V a n i l l a P l a n ifo l
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K e y w o r d s
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香荚兰 , 又名香草兰 , 属于兰科香子兰属 ,是名
贵的多年生热带香料作物 。 有 “ 食品香料之王 ” 的美
称 ,用于化妆业可制高档香水 ;用于制药业 , 可制芳
香型神经系统兴奋剂 。随着栽培措施的改变 ,各种植
区相继发生了一些严重的病害 ,尤其是根腐病和萎
蔫病造成相当大的损失 。 有的种植园几乎全部毁灭 。
病害问题 已成为阻碍香英兰进一步扩大生产的一个
重要因素 , 值得特别重视 , 由于香荚兰根腐病的病原
物主要在土壤中存活 ,使得化学防治比较难以发挥
作用 ,且会影响香英兰的品质 ,恶化环境质量 。 生物
防治由于其社会效益 、 生态效益 、 长远利益愈来愈引
起人们的重视 。 因此有必要探明香英兰种植区主要
土壤微生物类群 , 对其微生物区系进行分析 , 以便从
中找出具有抑病作用的微生物用于香英兰根部主要
病害的生物防治 。
1 材料与方法
1
.
1 样品的采集
由宗兆锋老师于 2 0 0 4 年元月 21 ~ 24 日在西双
版纳热带作物所香英兰种植 园 、 云南省香料公司香
英兰种植园 ,对无病区 、 重病区中的种植带和非种植
带土壤 , 以及健康和发病的香荚兰不同部位进行 了
采样 ,带回后 4℃冰箱保存 。
1
.
2 实验方法
土壤微生物 区系分析按照程丽娟等人编写的
“ 微生物学实验技术 ” 进行 , 细菌 、 放线菌 、 真菌的数
量测定采用稀释平板法 , 培养基的选择及方法见表
1
。
收稿 日期 : 2 ( )O d一 1 2一 ( ) 9
作者简介 : 王 燕 ( 1 9 7 4 一 ) . 女 , 陕西韩城人 . 助讲
第 4期 王 燕等 : 云南西双版纳香英兰种植园土壤微生物类群初探
表 1 实验方法列表
徽生物类群 所用培养基 分离稀释度
牛肉青蛋白脉 10 一 s一10 一 ,
高氏 l 号 1 0 一 3 ~ 1 0 一 `
P D A 1 0 一 2 ~ 1 0 一弓
涂板菌量 培养
m l 天数
0
。
0 5 3~ 4
0
.
0 5 5~ 7
0
.
0 5 3~ 5
措施有关 ,推知病土中的这些条件都比较适宜土壤
微生物的生存和繁殖 , 这也可能是造成香荚兰病害
的主要原因 。
L 3 结果观察与镜检
真菌通过显微镜检 ,依据孙广宇等人的 “ 普通植
物病理学 ” ,张纪忠主编的 “ 微生物分类学 ” 进行初步
分类鉴定 ,鉴定到亚门 。 细菌通过观察菌落特征 、 颜
色 、大小 、革兰氏染色反应等初步确定其类型 。 放线
菌通过观察菌落形态 、颜色 、大小等 ,对照图谱初步
确定其类群 。
1
.
4 数据处理
微生物总数计算公式 :
微生物总数 C F U 一计数平均菌落数 /稀释度 X
0
.
0 5 m l
即 : 微生物总数 C F U ~ 计数皿平均菌落数 X 稀
释倍数 x Z o ( 1滴 = o . o s m l )
本实验中 ,计数皿平均菌落数为每个浓度的 3
个重复菌落的平均 数 , 按理论值 10 一 ’ 、 10 一 3 、 10 一 `
… … 的菌落数应成倍减少 ,但如有误差本实验均选
高浓度者计算 。
图 1 不 同土坡中分离的真菌 、 放线菌总数
2 结果和讨论
2
.
1 土坡中微生物总数统计
从图 1 和图 2 可以看出 3 # 、 7 # 和 n # 病土中
真菌总数 已达到 1 05 ,而健土中均没达到 10 , ; 8 # 病
土中细菌总数均达到 1 0 , ,而健土中 6 # 、 10 # 达到
1护 ; 放线菌病土 中 n # 病土中放线菌数量达 1护 ,
而健土中均未达到 1。” 。 横向来看每个土样 中细菌
最多 ,其次为放线菌 , 真菌最少 。 分析病土中微生物
总数要 比健土 中多 , 可能与当地的土 质和栽培管理
图 2 不同土样中分离的细菌菌落数
2
.
2 真菌的结果统计
表 2 健土中分离的真菌优势种群
样 品 优 势 菌 特 征 归 类
1 # 湿润 , 中间突起 , 有稀疏菌丝 半知菌
5 # 墨绿色粉粒状抱子 半知菌
6 # 中间白色羽毛状 , 边缘无菌丝 半知菌
10 # 肉色抱子 ,产黑色色素 半知菌
从表 2 和表 3 可以看 出 ,在病 、 健土的优势菌
中 ,仅 8 # 土样 中有鞭毛菌 , 其余均为半知菌 ,且在
镜检过程中发现多为镰刀菌 ,可初步推知造成香英
兰根腐病的病原菌可能为半知菌亚门中的镰刀菌 。
同时在对其它 1 0 多种非优势菌的鉴定中 ,除半知
菌外还出现了接合菌 、 子囊菌等 ,还发现一些病原菌
中有八面体结晶 ,且多为子囊菌 。这说明在热带气候
环境影响下 ,西双版纳香夹兰种植园土壤中有着复
杂的微生物种类 。
表 3 病土中分离的真菌优势种群
样品 优 势 菌 特 征 归类
2 # 浅紫红色绒毛 , 产黑色素 半知菌
3 # 浅紫红色绒毛 , 产黑色素 半知菌
4 # 4一 1 白色成束状菌丝 ,蓬松 半知菌
4一 2 中间突起 , 菌丝不发达 ,浅土色了抱子 半知菌
7 # 墨绿色有同心轮纹和放射状沟 半知菌
8 # 8一 3 驼黄色菌丝浓密 鞭毛菌
8 一 9 墨绿色抱子 , 粉粒状 半知菌
9 # 9 一 1 墨绿色抱子 , 粉粒状抱子 半知菌
9 一 8 紫红 色绒毛 , 中间突起 半知菌
1 # 中间墨绿色颗粒 , 菌丝不发达 , 黄绿色 半知菌
l 0 杨 凌 职 业 技 术 学 院 学 报 第 4卷
2
.
3细菌的菌落形态及镜检结果
裹 4 恤康土幼中分离的细菌种类
样品 种类
1# 1一 1
1一 2
1一 3
l 一 4
5 # 5一 1
5一 2
5一 3
6 # 6一 1
6一 2
10 # 10 一 l
10 一 2
10 一 3
形态特征
霉状
边缘裂叶状 ,干燥
乳白色 ,蜡质 ,无光泽 , 份3 . 5
乳白色 ,中间折皱 ,有突起边
干缩 , 有皱折 , 中 2 , 5 m m
粘稠 ,湿润 ,乳白色 , 。 4 . 0 m m
湿润 ,菌落不均一
粘稠 ,湿润 ,乳白色 , 巾45 m m
枯红色 ,湿润 , 有光泽 , 边缘规
则 ,。 l · 5 m m
千缩 , 皱折 , 边缘隆起
皱折 ,边缘锯齿状
湿润 ,有光泽 , 四周隆起 ,。 3 m m
表 5 病土中分离的细苗种类
菌落特征
淡黄色 ,有光泽 ,回形 , 小2 m m
蜡质 , 中间干缩皱折 ,小n m m
乳白色 ,凝乳状 ,圆形 ,。 s m m
干缩 ,皱折 , 边缘不规则
乳白色 ,粘稠 ,湿润 , 。 8 . 5 m m
粘稠 ,湿润 ,枯红色 ,巾 4 m m
同 6一 2
蜡质边缘不规则
枯草芽抱杆菌 , 中 9 m m
蜡质 ,乳白色 , 边缘锯齿状
淡桔红色 ,有光泽 , 。 1 m m
边缘裂叶状 ,蜡质
干燥 , 边缘突起一圈 ,有皱折
表面蜡质四周隆起 ,乳白色
边缘裂叶状 ,蜡质
湿润 , 有光泽 ,菌落不均一
干缩 , 隆起呈火山口状 , 。 1 m m
半透明 ,淡黄色 , 湿润 , 。 7 m m
表面蜡质 ,边缘波浪形 , 。 1 m m
细胞特征
芽抱杆菌 , G -
杆菌 G -
杆菌 G -
芽抱杆菌 G -
杆菌成对
出现 G -
杆菌 G +
杆菌 G 十
杆菌 G -
球菌 G 十
杆菌 G -
杆菌 G -
杆菌 G -
细菌种类 , 病土中有 19 种 。 总体看来 , 芽胞杆菌几乎
占了一半 。 健土中芽胞杆菌占 42 % , 其余多为革兰
氏阴性菌 。 病土中芽胞杆菌占 58 写 , 革兰氏阳性菌
与阴性菌几乎各占 50 写 。 统计发现健土中 6一 2 为
优势菌 ,病土中 2一 1、 7一 1 、 8一 1均为优势菌 。
样品 种类
2 # 2一 l
2一 2
3 # 3一 1
4 # 4一 l
4一 2
4一 3
7 # 7一 l
7一 2
7一 3
8 # 8一 1
8一 2
8 一 3
8一 4
9 # 9一 l
9一 2
9一 3
1 1 # 1 1一 l
1 1一 2
1 1一 3
细胞特征
杆菌 G -
芽抱杆菌 G +
杆菌 G -
芽抱杆菌 G -
球菌 G 十
杆菌 G 十
球菌 G 十
芽抱杆菌 G +
芽抱杆菌 G 十
芽抱杆菌 G -
芽抱杆菌 G -
芽抱杆菌 ,
菌体大 G +
芽抱杆菌 G -
芽抱杆菌 G -
芽抱杆菌 G -
杆菌 G 十
杆菌 G -
杆菌 G -
芽抱杆菌 G +
从表 4 和表 5 可以看出 ,健土中有 12 种不同的
图 3 不 同土样中分离的王要放践百比 例
2
.
4 放线菌的结果统计
从图 3 可以看出 , l # 、 5 # 健土中白抱类群占优
势 , 6 # 、 10 # 中金色类群占优势 , 6 # 中放线菌种类
最多 , 仅无黄色类群和粉红抱类群 ,健土中均未发现
黄色类群和粉红抱类群 。病土中金色类群 占优势 ,依
次为金色类群 、 白抱类群 、灰褐类群 、 淡紫灰类群 ,其
中粉红抱类群在病 、健土中均未发现 。
2
.
5 讨论
以上结果已探明了香荚兰种植园土壤的微生物
类群 , 找出了病 、 健土样 中各 自的优势种群 ,为进一
步摸清优势种群与病害的关系 ,并从中找出其有拮
抗性的优势菌提供了条件 。
今考文献 :
【lj 张纪忠 . 微生物分类学〔M 〕. 上海 : 复旦 大学出版社 ,
1 9 8 8
.
【2〕 阮兴业 ,等 . 香荚兰病害研究综述〔J ] . 云南农业大学学
报 , 1 9 9 8 , 1 3 ( l ) : 1 3 9 一 1 4 4 .
【3〕 郝立勤 . 云南省香英兰生产的发展前景 [ J〕. 热带作物
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【4 ] 杨雄飞 , 等 . 西双版纳香英兰根腐病发病规律研究 [ J〕.
云南热作科技 , 1 9 9 9 , 2 2 ( 2 ) : l一 6 .
「5 ] 陈皓文 ,洪旭光 . 中国南极长城站室内空气微生物状况
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[6〕 来航线 , 朱铭羲 , 等 . 西藏索马地 区土壤放线菌的初步
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