全 文 ：·中草药· 北方园艺２０１２（０４）：１５６～１５８
第一作者简介：梁梓（１９８０－），女，硕士，讲师，研究方向为生物化学。
收稿日期：２０１１－１２－１９
超声波辅助法对四川九节龙总黄酮提取工艺的研究
梁 　 梓，汪 淑 芳，范 　 晶，刘 　 忠，刘 　 芳，张 维 敏
（乐山师范学院 化学与生命科学院，四川 乐山６１４００４）
　　摘　要：在超声波条件下，通过单因素试验与正交实验研究了四川九节龙黄酮提取的最佳条
件。结果表明：料液比１∶４０、超声功率３００Ｗ、超声时间１０ｍｉｎ、水浴提取温度８０℃为九节龙黄
酮的最佳提取条件，提取率为５．６８％。
关键词：九节龙；总黄酮；超声波辅助；最佳工艺；提取
中图分类号：Ｓ　５６７．２３＋９　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００１－０００９（２０１２）０４－０１５６－０３
　　九节龙（Ａｒｄｉｓｉａ　ｐｕｓｉｌａ　Ａ．ＤＣ）属紫金牛科
（Ｍｙｒｓｉｎａｃｅａｅ）紫金牛属（Ａｒｄｉｓｉａ）植物。主要分布在我
国南部及四川等地。具有直立灌木和匍匐生根的根茎，
常见于海拔约１　２００ｍ以下的山间林下或竹林下荫湿的
地方。九节龙的全株及根可供药用，其功能主要有清热
利湿、活血化瘀、舒筋活络、强筋壮骨等［１］。
目前已经从紫金牛属植物中分离出苯酚类、苯醌
类、黄酮类、香豆精类、皂苷类等药用活性成分［２－４］。其中
黄酮类化合物是紫金牛属植物中重要的活性物质，具有
抗肿瘤，治疗心脑血管，调节内分泌等功能［５］。超声波
提取法是一种较新的方法，不破坏有效成分，并且可以
强化浸提的效率。现采用乙醇浸提，超声波辅助提取，
　　　
研究九节龙总黄酮提取的最佳工艺，为四川九节龙的药
用价值评定和开发利用提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　试验材料
试材为九节龙叶片鲜品（于２０１０年５月采于乐山
师范学院绿心林下，采集全株叶片）；主要仪器与试剂有
Ｋ１９０１紫外可见分光光度计，ＢＳＳ２２４Ｓ电子天平，植物组
织捣碎机，ＪＹ９２?Ⅱ超声波细胞粉碎机；芦丁标准品由
ＳＩＧＭＡ公司提供，其它试剂均为国产分析纯。
１．２　试验方法
１．２．１　九节龙黄酮提取流程　新鲜九节龙叶片→除
杂→烘干（７０℃）→粉碎→过筛（４０目）→加入试剂→超
声波处理→水浴浸提→浸提液离心→上清液稀释→在
λ＝５１０ｎｍ处测其光吸收值

。
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Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｒａｎｕｌａｒ　Ｐｅａｃｈ　Ｊｕｉｃｅ　Ｄｒｉｎｋｓ
ＤＩＮＧ　Ｐｅｉ－ｆｅｎｇ，ＳＨＩ　Ｚｈｏｎｇ－ｌｉｎ
（Ｈｅｂｅｉ　Ｎｏｒｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ，Ｈｅｂｅｉ　０７５０００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｉｔｈ　ｐｅａｃｈ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｆｏｒ　ｂｅｖｅｒａｇｅｓ，ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｐｒｏｇｒａｍ　ｏｆ
ｇｒａｍｓ，ｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｘａｎｔｈａｎ　ｇｕｍ，ａｎｄ　ｓｏｄｉｕｍ　ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ，ｔｈｒｏｕｇｈ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ，ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　ａｎｄ　ｆｏｒｍｕｌａ
ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｇｒａｍｓ，ｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｘａｎｔｈａｎ　ｇｕｍ，ａｎｄ　ｓｏｄｉｕｍ　ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｔｏｏ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｐｅｃｔｉｎ∶ｘａｎｔｈａｎ　ｇｕｍ∶ｓｏｄｉｕｍ　ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ　ｃｅｌｕｌｏｓｅ　ｗｅｒｅ　２∶４∶７，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ａｄｄｅｄ
ｐｅｃｔｉｎ　ｐｅｒ　１００ｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｂｅｖｅｒａｇｅ　０．０７５ｇｒａｍｓ，０．１５０ｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｘａｎｔｈａｎ　ｇｕｍ，ｓｏｄｉｕｍ　ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ　ｃｅｌｕｌｏｓｅ　０．２６２５
ｇｒａｍｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｇｒａｎｕｌａｒ　ｐｅａｃｈ　ｊｕｉｃｅ　ｄｒｉｎｋｓ；ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ；ｘａｎｔｈａｎ　ｇｕｍ　ｐｅｃｔｉｎ；ｓｏｄｉｕｍ　ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ；ｃｅｌｕｌｏｓｅ
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北方园艺２０１２（０４）：１５６～１５８ ·中草药·
１．２．２　标准曲线制备　准确吸取浓度为０．２５ｍｇ／ｍＬ
的芦丁标准液１．０、２．０、３．０、４．０、５．０、６．０ｍＬ分别置于
２５ｍＬ容量瓶中，另取１．０ｍＬ蒸馏水作为调零。各加
入８０％的乙醇５．０ｍＬ，加入５％的亚硝酸钠１．０ｍＬ摇
匀，静置６ｍｉｎ；加入１０％的硝酸铝１．０ｍＬ摇匀，静置
６ｍｉｎ；加入４％的氢氧化钠１０．０ｍＬ，加入８０％的乙醇
至刻度，摇匀，放置１５ｍｉｎ，在λ＝５１０ｎｍ处测其光吸收
值，以吸光值对芦丁浓度作标准曲线。
１．２．３　总黄酮含量测定　分别准确称取样品１．０ｇ于
带塞的２５ｍＬ锥形瓶中，不同超声功率、超声时间处理，
加入提取剂，分别在不同的固液比及不同水浴温度下浸
提，提取液２　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ取上清液，取样
１．０ｍＬ于２５ｍＬ容量瓶中加入８０％的乙醇５．０ｍＬ，其
余步骤按芦丁标准曲线方法在λ＝５１０ｎｍ处测吸光值。
根据回归方程得出黄酮浓度，带入公式计算总黄酮提取
率。公式如下：Ｍｎ＝Ｃ×Ｖ×１０－３；黄酮含量（％）＝
（Ｍｎ／Ｍ）×１００％。式中：Ｍｎ－样液中总黄酮的质量（ｇ）；
Ｃ－样液中总黄酮的浓度（ｍｇ／ｍＬ）；Ｖ－提取液总体积
（ｍＬ）；Ｍ－样品重量（ｇ）。
１．２．４　总黄酮含量单因素测定　根据正交条件取九节
龙样品相应份数，每份１．０ｇ于带塞的２５ｍＬ锥形瓶中，
不同超声功率、超声时间处理，加入４０％乙醇提取剂，分
别在不同的固液比及不同水浴温度下浸提，提取液
２　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ取上清液，取样１．０ｍＬ于
２５ｍＬ容量瓶中加入提取剂５．０ｍＬ，按１．２．２标准曲线
方法测吸光度，计算总黄酮提取率。分别确定最佳超声
功率、超声时间、料液比及水浴温度。
１．２．５　正交实验及优选　在单因素试验的基础上，对其
黄酮提取有影响的主要因素（提取温度、料液比、超声功
率、超声时间）进行Ｌ９（３４）正交实验确定最佳提取条件。
图１　超声功率对九节龙总黄酮提取的影响
２　结果与分析
２．１　超声功率对九节龙总黄酮提取的影响
由图１可知，随着超声功率的增大，总黄酮提取量
增加。这是因为超声波细胞粉碎机利用超声波在提取
液中的分散效应，使提取液产生空化的作用，从而使九
节龙细胞组织破碎。这是利用物理方法捣碎不破坏材
料物质的成分，只改变了其物理状态，使细胞内容物大
量迅速扩散于提取液中。超声功率为３００Ｗ时，总黄酮
得率达到最大，总黄酮含量为４９ｍｇ／ｇ，提取率为４．９％；
其后随着超声功率的增大，超声波处理时温度升高，破
坏了溶解于提取液中的总黄酮类化合物，从而使黄酮提
取量降低。因此，最佳超声功率为３００Ｗ。
２．２　超声时间对九节龙总黄酮提取的影响
由图２可知，随着超声处理时间的增加，组织细胞
破碎更完全，总黄酮提取量增加，１０ｍｉｎ时效果最好，总
黄酮含量为５７ｍｇ／ｇ，提取率为５．７％；随着超声处理时
间延长，对总黄酮化合物有破坏作用，测定值降低。因
此，最佳超声处理时间为１０ｍｉｎ。
图２　超声时间对九节龙总黄酮提取的影响
２．３　料液比对九节龙总黄酮提取的影响
由图３可知，随着料液比的增加，总黄酮提取量也
增大，在料液比值达到１∶４０时总黄酮提取量达到最大
值为４１．４６ｍｇ／ｇ，提取率达到４．１５％；此后，随着料液比
的增大，总黄酮提取率变化不大，越见趋于稳定，即一定
比例的溶剂已将有效成分基本溶出。从提取效果和减
少溶剂考虑，因此，选取最适料液比为１∶４０。
图３　料液比对九节龙总黄酮提取的影响
２．４　水浴温度对九节龙总黄酮提取的影响
由图４可知，随着水浴提取温度的升高，总黄酮的
提取量亦随之增加，但增加较缓慢；当温度升到６０～
７０℃时，总黄酮提取量增大很明显，这是因为随着温度
的升高，分子运动速度加快，渗透、扩散、溶解速度加快，
同时高温可以引起细胞膜结构的变化，使总黄酮类化合
物迅速溶解到提取剂中，因此，随着提取温度的升高，黄
酮提取量增加；７０℃后，总黄酮提取量是缓慢持续增加
趋势；但当温度达到９０℃时，４０％的乙醇提取液接近沸
腾状态，乙醇提取液消耗量很大，考虑到经济性，采用
８０℃水浴提取，总黄酮含量为４３ｍｇ／ｇ，提取率为４．３％。
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图４　水浴温度对九节龙总黄酮提取的影响
２．５　超声波辅助处理正交实验
影响九节龙总黄酮提取结果的主次因素依次为
Ａ＞Ｄ＞Ｃ＞Ｂ，即料液比为影响九节龙总黄酮提取结果
的主要因素，其次是超声功率、超声时间和提取温度。
正交实验结果及极差分析显示最佳的提取工艺条件为
　　　表１ 　　提取紫金牛黄酮正交实验结果
试验号
因素
Ａ
料液比
／ｇ·ｍＬ－１
Ｂ
提取温度
／℃
Ｃ
超声时间
／ｍｉｎ
Ｄ
超声功率
／Ｗ
水平组合
总黄酮含量
／ｍｇ·ｇ－１
１　 １∶３０　 ６０　 １０　 ２００ Ａ１Ｂ１Ｃ１Ｄ１ ４４．９１
２　 １∶３０　 ７０　 １５　 ３００ Ａ１Ｂ２Ｃ２Ｄ２ ４５．４２
３　 １∶３０　 ８０　 ２０　 ４００ Ａ１Ｂ３Ｃ３Ｄ３ ４４．６９
４　 １∶４０　 ６０　 １５　 ４００ Ａ２Ｂ１Ｃ２Ｄ３ ５２．０８
５　 １∶４０　 ７０　 ２０　 ２００ Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ１ ５１．３７
６　 １∶４０　 ８０　 １０　 ３００ Ａ２Ｂ３Ｃ１Ｄ２ ５６．８４
７　 １∶５０　 ６０　 ２０　 ３００ Ａ３Ｂ１Ｃ２Ｄ２ ４８．９３
８　 １∶５０　 ７０　 １０　 ４００ Ａ３Ｂ２Ｃ１Ｄ３ ４９．１６
９　 １∶５０　 ８０　 １５　 ２００ Ａ３Ｂ３Ｃ２Ｄ１ ４８．９１
Ｋ１ １３５．０２　 １４５．９２　 １５０．９１　 １４５．１９
Ｋ２ １６０．２９　 １４５．９５　 １４６．４１　 １５１．１９
Ｋ３ １４７．００　 １５０．４４　 １４４．９９　 １４５．９３
ｋ１ ４５．００７　 ４８．６４０　 ５０．３０３　 ４８．３９７
ｋ２ ５３．４３０　 ４８．６５０　 ４８．８０３　 ５０．３９７
ｋ３ ４９．０００　 ５０．１４７　 ４８．３３０　 ４８．６４３
Ｒ　 ８．４２３　 １．５０７　 １．９７３　 ２．０００
　　注：＊ｋ１﹑ｋ２﹑ｋ３为同一水平总黄酮得率的平均值，Ｒ为极差。
Ａ２Ｂ３Ｃ１Ｄ２，即料液比为１∶４０、提取温度为８０℃、超声时
间为１０ｍｉｎ、超声功率为３００ Ｗ。总黄酮含量为
５６．８４ｍｇ／ｇ，提取率为５．６８％。
３　结论
超声波辅助提取九节龙总黄酮的最佳工艺条件为：
料液比为１∶４０、提取温度为８０℃、超声时间为１０ｍｉｎ、
超声功率为３００Ｗ，总黄酮含量为５６．８４ｍｇ／ｇ，提取率
为５．６８％。
九节龙总黄酮的提取率与同科块根紫金牛总黄酮
提取率为５．７５％，相比无明显差异［６］，但明显高于其它
植物（益母草总黄酮提取率为０．２８％［７］，野菊花总黄酮
提取率为２．８６％［８］，乌药叶总黄酮提取率为３．３１％［９］）。
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（该文作者还有王容，工作单位同第一作者。）
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　Ｗａｖｅ　Ａｓｓｉｓｔｅｄ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｏｔａｌ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＡｒｄｉｓｉａ　ｐｕｓｉｌａ
ＬＩＡＮＧ　Ｚｉ，ＷＡＮＧ　Ｓｈｕ－ｆａｎｇ，ＦＡＮ　Ｊｉｎｇ，ＬＩＵ　Ｚｈｏｎｇ，ＬＩＵ　Ｆａｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｗｅｉ－ｍｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｒｏｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌｅｓｈａｎ　Ｔｅａｃｈｅｒｓ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｌｅｓｈａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ　６１４００４）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｗａｖｅ　ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＡｒｄｉｓｉａ
ｐｕｓｉｌａ．Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ａｒｄｉｓｉａ　ｐｕｓｉｌａ　ｗｅｒｅ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｎ　ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ａｎｄ
ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｓｏｌｉｄ－ｔｏ－ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ
ｗａｓ　１∶４０，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ｗａｓ　３００Ｗ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　１０ｍｉｎ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　８０℃，ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｒａｔｅ　ｗａｓ　５．６８％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｒｄｉｓｉａ　ｐｕｓｉｌａ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｗａｖｅ　ａｓｓｉｓｔｅｄ；ｂｅｓｔ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
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