全 文 ：［收稿日期］ 20120713(006)
［基金项目］ 陕西省教育厅科学研究计划项目(2010JK499) ;咸阳市科技发展计划项目(2010-K14-02(5) )
［通讯作者］ * 卫昊，讲师，从事中药药理学研究，Tel:13992011980 ，E-mail:weihao217@ 163． com
秦岭柴胡不同提取物保肝作用量效关系研究
卫昊1* ，刘清1，卫伟光2
(1. 陕西中医学院，陕西 咸阳 712046;2. 陕西省西安植物园，西安 710061)
［摘要］ 目的:探讨两种产地秦岭柴胡不同提取物对 D-氨基半乳糖致急性肝损伤小鼠的保护作用，并初步筛选最佳提取
工艺和活性部位。方法:将小鼠分为 9 组:空白对照组，半乳糖胺模型组，联苯双酯滴丸(150 mg·kg － 1) ，秦岭柴胡 1 号样品水
提组、65%醇提组、95%醇提组，秦岭柴胡 2 号样品水提组、65%醇提组、95%醇提组。剂量为 5. 0 g·kg － 1，灌胃给药，给药体积
20 mL·kg － 1，模型组和空白组分别灌胃给予同体积生理盐水，每天 1 次，连续给药 7 d 后，采取小鼠腹腔注射 D-氨基半乳糖盐
酸盐溶液造模，16 h 后眼静脉采血，测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性;同时测定肝匀浆中丙二醛(MDA)
含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:2 种产地秦岭柴胡的水提组、65% 醇提组、95% 醇提组均能不同程度降低 CCl4 模
型小鼠血清 ALT，AST 活性，降低肝脏 MDA 的含量，增强 SOD 活性，其中以东太白产秦岭柴胡 65%醇提物作用最强(P ＜ 0. 01，
P ＜ 0. 05)。结论:秦岭柴胡对 D-氨基半乳糖盐酸盐所致小鼠急性肝损伤具有较明显的保护作用，其保肝作用与柴胡皂苷 a，d
含量存在一定的量效关系。
［关键词］ 秦岭柴胡;D-氨基半乳糖盐酸盐;保肝作用
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)24-0237-04
［网络出版地址］ http:/ / www． cnki． net / kcms / detail /11． 3495． R． 20121012． 0910． 008． html
［网络出版时间］ 2012-10-12 9:10
Experimental Study on Dose-effect Relationship of Hepatoprotective Effect
of the Different Extraction from Bupleurum longicaule var． giraldii
WEI Hao1* ，LIU Qing1，WEI Wei-guang2
(1. Shaanxi University of Traditional Chinese Medicine，Xianyang 712046，China;
2. Xian Botanical Garden of Shaanxi Province，Xian 710061，China)
［Abstract］ Objective: To discuss protective effect of different extractions of two origin Bupleurum
longicaule var． giraldii on acute liver injury in mice caused by intraperitoneal injection (ip) D-galactosamine，
and to screen the optimum process and the active site of extraction． Method:The mice were divided into 9
groups:control group，model group，galactosamine group，bifendate group (150 mg·kg － 1) ，water extraction
group，65% ethanol extract group，95% ethanol extract group of B． longicaule var． giraldii sample No． 1 and
No． 2，delivery 20 mL· kg － 1 by intragastric administration (ig)． Model group and control group were given
normal saline by ig once a day with the same dose． After continuous administration of 7 days，model of mice were
made by intraperitoneal injection of D-galactosamine hydrochloride solution，and after 16 hours，ocular venous
blood were collected to determine the serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase
(AST) activities and the malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) activity in liver
homogenate． Result:Two origin of B． longicaule var． giraldii on aqueous extraction group，65% ethanol group
and 95% ethanol group showed that they all could decrease the serum ALT and AST activity in model，reduce the
content of liver MDA and increase the SOD activity，and the 65% ethanol extract of B． longicaule var． giraldii
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第 18 卷第 24 期
2012 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 24
Dec．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.24.048
gathered from East Taibai Mountain had the strongest effect (P ＜ 0. 01，P ＜ 0. 05)． Conclusion:B． longicaule
var． giraldii has obvious protective effect on D-galactosamine hydrochloride induced acute liver injury in mice．
There is a dose-effect relationship between its hepatoprotective effect and saikosaponin a，d content．
［Key words］ Bupleurum longicaule var． giraldii;D-galactosamine hydrochloride;hepatoprotective effect
秦岭柴胡又名金柴胡，为伞形科柴胡属多年生
草本植物，属于陕西省重点保护的药用植物种类之
一，主产秦岭太白山、光头山及佛坪等地［1］，味苦，
性微寒，是陕西秦巴山区民间习用的重要中草药。
具有发表祛风、清肝利胆、清心火、通经之功效，主治
感冒、虚劳骨蒸、月经不调、肝气不舒、黄疸等症，其
在疗效上与柴胡不完全一致，有其独到之处。因秦
岭柴胡为区域民间用药，地方使用较为广泛，疗效较
为显著，但尚缺乏系统性研究，尤其对其化学成分、
药理作用实验研究的文献报道较少［2-4］。本实验在
对其指标成分含量检测研究的基础上，主要对其保
肝降酶药理作用进行研究，并初步筛选其制剂提取
工艺与最佳药材来源。
1 材料
1. 1 药物 秦岭柴胡:1 号药材样品于 2011 年 7
月采自东太白山(陕西眉县)海拔 3 400 ～ 3 500 m
处;2 号药材样品于 2011 年 7 月采自西太白山(陕
西太白县)海拔 3 400 m 左右处。样品经陕西中医
学院生药教研室王西芳教授鉴定均为伞形科柴胡属
秦岭柴胡 (Bupleurum longicaule Wall． var． giradii
Wolff．) ，全草入药。称取秦岭柴胡 1 号、2 号样品各
250 g，分别以水、65%乙醇、95%乙醇为溶剂回流提
取 2 次，第 1 次加 14 倍量，第 2 次加 10 倍量，每次 2
h，过滤，合并滤液，回收乙醇并浓缩定容至1 000 mL
即得，质量浓度为生药 0. 25 g·mL － 1。联苯双酯滴
丸(浙 江 万 邦 药 业 股 份 有 限 公 司 生 产，批 号
110910)。
1. 2 试剂 D-氨基半乳糖盐酸盐(KAYON 公司生
产，批号 T0016) ，MDA 测试盒(批号 20120508) ，
SOD 试剂盒(批号 30120505) ，考马斯亮蓝蛋白测定
试剂盒(批号 20120515) ，均为南京建成生物工程
研究所产品。
1. 3 动物 昆明种小鼠，体重(20 ± 2)g，雌雄各
半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可
证号 SCXK(陕)2007-001。
1. 4 仪器 Waters 2695 Speparations Module 高效
液相色谱仪(美国 Waters 公司) ，UV1102 型紫外分
光光度计(上海天美科学仪器有限公司) ，BT224S
电子天平［赛多利斯科学仪器(北京)有限公司］，
YLS-7A 微量进样器(宁波市镇海三爱仪器厂) ，
HH． W21. 420 型电热恒温水箱(天津市森斯特仪器
有限公司)。
2 方法
2. 1 秦岭柴胡不同提取物含量测定［5］ 分别取药
材提取物浓缩液各 2. 0 mL 置于分液漏斗中，以乙醚
萃取 3 次，每次 30 mL，弃去乙醚层，再向分液漏斗
中加入 30 mL 水饱和正丁醇，摇匀，静置 30 min，分
层后分取上层萃取液，重复萃取 3 次。合并上层萃
取液并置于分液漏斗中，加入 60 mL 正丁醇饱和的
水溶液洗涤，静置分层后分取上层溶液，重复操作 1
次，并合并上层液。将得到的上层液在蒸发皿中水
浴挥干正丁醇，再以甲醇溶解并定容至 2 mL 即得。
采用 HPLC 法［色谱条件 Diamon-sil C18(250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ，流动相乙腈-水(25 ∶ 75) ，流速
1 mL·min － 1，检测波长 210 nm］分别测定提取物中
柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 的含量。
2. 2 秦岭柴胡保肝作用［6-10］
2. 2. 1 分组和给药 取小鼠 117 只，按体重随即分
成 9 组，每组 13 只，雌性 7 只，雄性 6 只。分别为空
白对照组、半乳糖胺模型组、联苯双酯滴丸阳性组
(150 mg·kg － 1)、秦岭柴胡 1 号样品水提组，1 号样
品 65%醇提组，1 号样品 95% 醇提组，秦岭柴胡 2
号样品水提组，2 号样品 65%醇提组，2 号样品 95%
醇提组。 ig 给药，剂量为 5. 0 g·kg － 1，给药体积
20 mL·kg － 1，模型组和空白组分别 ig 给予同体积生
理盐水，每天 1 次，连续给药 7 d。末次给药 1 h 后，
ip 10% D-氨基半乳糖盐酸盐 10 mL·kg － 1，空白组 ip
等容量的蒸馏水溶液，禁食不禁水。
2. 2. 2 检测指标 造模 16 h 后，摘取眼球取血，冷
冻离心(3 000 r·min － 1)10 min 后，取血清检测 ALT，
AST 活性。采血后，快速处死小鼠，取肝右叶组织约
0. 15 g，在冰生理盐水中漂洗，滤纸拭干，置于匀浆
器中，加生理盐水在冰水浴中制成 10% 肝组织匀
浆。冷冻离心，取上清液冷藏，待测。按照试剂盒说
明配制考马斯亮蓝蛋白测定试剂、MDA 测试试剂、
SOD 测试试剂:用紫外分光光度计分别在 595，550，
532 nm 波长下检测组织蛋白，SOD，MDA。
2. 3 统计学方法 实验数据均以 珋x ± s 表示，采用
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 24
Dec．，2012
SPSS 11. 0 软件处理分析，组间差异采用 Student’s t
检验。P ＜ 0. 05 为有统计学意义。
3 结果
3. 1 两种产地秦岭柴胡不同提取物含量测定 两
种产地秦岭柴胡提取物中以 65% 乙醇提取液柴胡
皂苷 a 含量最高，其中秦岭柴胡 1 号样品柴胡皂苷
含量明显高于 2 号样品。比较而言各组提取物中柴
胡皂苷 d 含量均较低。见表 1。
3. 2 对急性肝损伤小鼠血清 ALT，AST 活性的影响
与模型组比较，各给药组均可不同程度降低肝损
伤小鼠血清中 ALT，AST 活性。其中以秦岭柴胡 1
号样品(即东太白秦岭柴胡)作用稍强;不同提取物
中，2 种产地秦岭柴胡均以 65% 醇提组降低血清
ALT，AST 活 性 作 用 最 为 明 显 (P ＜ 0. 05，
P ＜ 0. 01) ，提示东太白秦岭柴胡 65%醇提组保肝作
用效果最好。见表 2。
3. 3 对急性肝损伤小鼠肝匀浆中 MDA 含量和
SOD 活性的影响 与模型组比较，秦岭柴胡各给药
组均可不同程度降低模型小鼠肝匀浆中 MDA 水
平，增强 SOD 活性。秦岭柴胡 1 号样品即东太白秦
岭柴胡水提组和 65% 醇提组均降低小鼠肝组织
MDA 水平，增强 SOD 活性作用明显(P ＜ 0. 05，P ＜
0. 01) ，整体效果优于 2 号样品即西太白秦岭柴胡，
其中以东太白秦岭柴胡 65% 醇提组抗氧自由基作
用最佳。见表 3。
表 1 两种产地秦岭柴胡不同提取物中柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d 含量 %
样品 柴胡皂苷 a 柴胡皂苷 d 柴胡皂苷(a + d) 柴胡皂苷(a + d)平均值
秦岭柴胡 1 号样品水提物 0. 147 6 0. 006 1 0. 153 7 0. 148 0
0. 136 8 0. 005 5 0. 142 3
秦岭柴胡 2 号样品水提物 0. 105 7 0. 002 4 0. 108 1 0. 105 6
0. 099 8 0. 003 3 0. 103 1
秦岭柴胡 1 号样品 65%乙醇提取物 0. 287 8 0. 008 0 0. 295 8 0. 291 9
0. 279 1 0. 008 8 0. 287 9
秦岭柴胡 2 号样品 65%乙醇提取物 0. 220 0 0. 001 8 0. 221 8 0. 222 8
0. 222 0 0. 001 7 0. 223 7
秦岭柴胡 1 号样品 95%乙醇提取物 0. 155 4 0. 001 9 0. 157 3 0. 1592
0. 159 3 0. 001 8 0. 161 1
秦岭柴胡 2 号样品 95%乙醇提取物 0. 190 3 0. 006 0 0. 196 3 0. 196 3
0. 188 7 0. 007 7 0. 196 4
表 2 秦岭柴胡对急性肝损伤小鼠肝脏指数，血清 ALT，AST 活性的影响(珋x ± s，n = 13)
组别
剂量
/ g·kg － 1
肝脏指数
/ g·100 g － 1
ALT
/U·L － 1
AST
/U·L － 1
空白 － 3. 48 ± 0. 44 36. 01 ± 11. 422) 130. 62 ± 42. 282)
模型 － 4. 43 ± 0. 76 57. 07 ± 20. 10 229. 65 ± 76. 79
联苯双酯滴丸 0. 15 4. 22 ± 0. 49 33. 76 ± 14. 262) 175. 29 ± 66. 57
1 号样品水提液 5 4. 03 ± 0. 81 43. 27 ± 25. 62 181. 23 ± 73. 27
1 号样品 65%醇提液 5 4. 32 ± 0. 42 39. 99 ± 13. 741) 155. 43 ± 65. 361)
1 号样品 95%醇提液 5 4. 37 ± 0. 54 49. 79 ± 14. 44 182. 53 ± 74. 51
2 号样品水提液 5 4. 10 ± 0. 43 53. 91 ± 25. 06 207. 59 ± 67. 19
2 号样品 65%醇提液 5 3. 79 ± 0. 34 41. 76 ± 10. 441) 166. 37 ± 53. 49
2 号样品 95%醇提液 5 3. 81 ± 0. 37 42. 78 ± 11. 15 177. 48 ± 37. 93
注:与模型组相比1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01。
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卫昊，等:秦岭柴胡不同提取物保肝作用量效关系研究
表 3 秦岭柴胡对急性肝损伤小鼠肝匀浆中 MDA 含量和 SOD 活性的影响(珋x ± s，n = 13)
组别 剂量 / g·kg － 1 组织蛋白 / g·L － 1 MDA /μmol·g － 1 SOD /kU·g － 1
空白 － 1． 593 ± 0． 638 12． 86 ± 4． 971) 61． 07 ± 27． 041)
模型 － 1． 530 ± 0． 785 21． 52 ± 8． 22 38． 34 ± 12． 92
联苯双酯滴丸 0． 15 1． 577 ± 0． 459 18． 73 ± 3． 51 41． 87 ± 14． 84
1 号样品水提液 5 1． 640 ± 0． 310 13． 46 ± 7． 671) 48． 25 ± 7． 10
1 号样品 65%醇提液 5 1． 440 ± 0． 465 13． 00 ± 4． 101) 55． 60 ± 22． 061)
1 号样品 95%醇提液 5 1． 253 ± 0． 378 16． 93 ± 7． 25 43． 12 ± 15． 62
2 号样品水提液 5 1． 553 ± 0． 604 19． 11 ± 5． 35 49． 12 ± 8． 31
2 号样品 65%醇提液 5 1． 587 ± 0． 298 17． 69 ± 5． 15 55． 60 ± 30． 051)
2 号样品 95%醇提液 5 1． 578 ± 0． 372 14． 13 ± 7． 00 55． 88 ± 2． 832)
注:与模型组相比1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01。
4 讨论
肝损伤改善作用与有效部位(或成分)相关性分
析 2 种产地秦岭柴胡 65%乙醇提取液保肝降酶作
用最好，可使四氯化碳 /D-氨基半乳糖致小鼠急性肝
损伤血清 ALT，AST 值明显降低，肝组织匀浆中 SOD
活性明显增强，MDA 含量下降。而从柴胡皂苷含量
测定结果可知，1 号样品太白秦岭柴胡 65%醇提组柴
胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 总和最高，由此可见秦岭柴胡
的保肝作用可能与柴胡皂苷含量存在一定的量效
关系。
产地对药物作用的影响分析 本次实验所用秦
岭柴胡产地分别为陕西眉县太白山(习称东太白)和
陕西太白县太白山(习称西太白) ，两地都属于秦岭
山系，药材采集点海拔高度相近，但由于生长地貌、土
壤等因素影响，导致所含有效成分和药理作用有所差
异，总体而言东太白秦岭柴胡保肝作用明显优于西太
白秦岭柴胡，因此可以优选东太白秦岭柴胡为该品种
最佳药材来源。
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［责任编辑 聂淑琴］
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第 18 卷第 24 期
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Vol． 18，No． 24
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