全 文 ：书收稿日期:2013-12-31
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81073154) ;国家科技部“十二五重大创新药创制”科技重大专项课题“中药
质量安全检测和风险控制技术平台”(2014ZX09304-307-02) ;教育部创新团队发展计划和辽宁省高校创新团队支持
计划资助项目
作者简介:张毅(1976-) ，男(汉族) ，重庆人，副主任中药师，主要从事中药质量控制与研究工作，Tel． 023-86072771，
E-mail zy157343156@ 163． com;* 通讯作者:孟大利(1976-) ，男(汉族) ，辽宁阜新人，副教授，博士，主要从事中药、
天然药物及民族药活性成分的发现与质量评价研究，以及中药新药研究与开发工作，Tel． 024-23986475，E-mail
mengdl@ 163． com。
文章编号:1006-2858(2014)08-0610-03
清香藤茎化学成分的分离与鉴定
张 毅1，梁 旭2，张正锋1，孟大利2* ，李 铣2
(1. 重庆市食品药品检验所 重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121;
2. 沈阳药科大学“基于靶点的药物设计与研究”教育部重点实验室，辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 研究清香藤茎(Jasminum lanceolarium Ｒoxb.)的化学成分。方法 采用反复硅胶吸附柱
色谱、Sephadex-LH20 柱色谱、开放 ODS柱色谱、高效液相色谱等手段进行分离纯化，并通过理化性
质与光谱分析方法鉴定化合物的结构。结果 分离鉴定 9 个化合物，分别为 vanilloloside(1)、E-松
柏苷(E-coniferin，2)、3，5-二甲基苯甲醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3，5-dimethoxy-benzyl alcohol-4-O-
β-D-glucopyranoside，3)、甲基松柏苷(methylconiferin，4)、甘露醇(mannitol，5)、丁香脂素-4，4-O-双-
β-D-葡萄糖苷(syringaresinol-4，4-O-bis-β-D-glucoside，6)、反式肉桂酸(tans-cinnamic acid，7)、阿魏
酸(ferulic acid，8)和(+)-cycloolivil(9)。结论 化合物 1-4 为首次从素馨属中分离得到。
关键词:清香藤;化学成分;结构鉴定
中图分类号:Ｒ 28 文献标志码:A
素馨属植物中化学成分的研究开始于 20 世
纪 80 年代，研究表明，素馨属植物的化学成分主
要为环烯醚萜、木脂素、苯丙素、生物碱等，其中裂
环环烯醚萜苷和木脂素类化合物最多。清香藤
(Jasminum lanceolarium Ｒoxb. )又名川香茉莉、
破骨风、北清香藤，为素馨属重要的一种植物，分
布于印度、缅甸和我国长江流域以南各省。其性
平，微苦、辛，具有袪风除湿，活血止痛的功效，用
于治疗风湿腰腿骨关节疼痛，跌打损伤，疮毒，痈
疽等症［1］。近年来的研究表明，清香藤植物中的
主要化学成分为环烯醚萜、木脂素和黄酮类等。
在课题组前期研究的基础上，采用溶剂分步
萃取和各种色谱手段(硅胶柱色谱、Sephadex
LH-20、HPLC 等) ，进一步从清香藤药材体积分数
为 70%的乙醇提取物的正丁醇萃取物中分离得
到了 9 个化合物;根据理化常数和波谱分析等手
段，分别鉴定为 vanilloloside (1)、E-松柏苷
(E-coniferin，2)、3，5-二甲基苯甲醇-4-O-β-D-吡喃
葡萄糖苷(3，5-dimethoxy-benzyl alcohol-4-O-β-D-
glucopyranoside，3)、甲基松柏苷(methylconiferin，
4)、甘露醇(mannitol，5)、丁香脂素-4，4-O-双-β-
D-葡萄糖苷(syringaresinol-4，4-O-bis-β-D-gluco-
side，6)、反式肉桂酸(tans-cinnamic acid，7)、阿魏
酸(ferulic acid，8)和(+)-cycloolivil(9) ，其中化
合物 1-4 为首次从素馨属中分离得到。
1 仪器与材料
AＲX-300、AV-600 核磁共振仪(瑞士 Bruker
公司) ，氘代试剂(瑞士 AＲMAＲ 公司) ，Shimadzu
LC-6AD 高效液相色谱仪(日本 Shimadzu 制作
所) ，YMC-Pack ODS-A 色谱柱(日本 YMC 公
司)。
薄层用硅胶 GF254 和柱色谱硅胶(青岛海洋
化工厂) ，Sephadex LH-20(瑞典 GE Healthcare 公
司) ，ODS 柱层析填料(日本 YMC 公司) ，柱色谱
试剂均为 AＲ级(山东禹王化工有限公司)。
本实验中所用植物药材清香藤由湖南省中医
药研究院中药研究所提供，经彭艳梅副教授鉴定
为清香藤 Jasminum lanceolarium Ｒoxb. 。
第 31 卷 第 8 期
2 0 1 4 年 8 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol. 31 No. 8
Aug． 2014 p. 610
DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2014.08.009
2 提取与分离
清香藤药材藤茎 5. 5 kg，用体积分数为 70%
的乙醇溶液加热回流提取 3 次，合并提取液，经减
压回收后分别用乙酸乙酯、正丁醇萃取、浓缩。正
丁醇萃取物(150 g)经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-
甲醇(体积比为 100 ∶ 0-0 ∶ 100)梯度洗脱，体积比
为 100∶ 6 洗脱部位经硅胶柱色谱，以二氯甲烷 /甲
醇梯度洗脱，所得洗脱流份直接经甲醇重结晶处
理得到化合物 2(18 mg)、7(12 mg)、9(12 mg) ;
体积比 100∶ 8 洗脱部位经硅胶柱色谱，以二氯甲
烷-甲醇系统梯度洗脱，再进一步经 Sephadex
LH-20柱色谱分离得到化合物 4(18 mg)、1
(17 mg)、8(21 mg) ;体积比为 100 ∶ 10 洗脱部位
先后采用硅胶柱色谱和 ODS 柱色谱，得到化合物
3(19 mg)、5(16 mg) ;体积比为 100∶ 12 洗脱部位
经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱，
再经 ODS 柱色谱分离，进一步利用制备型 HPLC
柱色谱分离纯化得到化合物 6(11 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:白色粉末 (甲醇)。 1H-NMＲ
(300 MHz，DMSO-d6) :低场区 δ:7. 02(1H，d，J =
8. 3 Hz)、6. 93(1H，d，J = 1. 2 Hz)、6. 79(1H，dd，
J =8. 3，1. 2 Hz)为一组苯环 ABX 偶合系统的氢
信号;δ 4. 41(2H，d，J = 4. 0 Hz)为连氧亚甲基信
号;δ 3. 75(3H，s)为甲氧基信号;δ 4. 86(1H，d，
J = 7. 0 Hz)的糖端基质子信号提示其相对构型为
β;13C-NMＲ(75 MHz，DMSO-d6)中给出 14 个碳
信号，其中 δ:148. 8、145. 3 为 3、4 位邻二氧取代
的芳香碳信号;δ 55. 6 为甲氧基碳信号;δ:100. 2、
77. 0、76. 9、73. 2、69. 7、60. 7 为葡萄糖的碳信号;δ
62. 7 为羟甲基碳信号。上述波谱数据与文献［2］
对照基本一致，故鉴定其为 vanilloloside。
化合物 2:白色粉末 (甲醇)。 1H-NMＲ
(300 MHz，DMSO-d6)中 δ 7. 06 (1H，d，J =
1. 5 Hz)、7. 02(1H，d，J = 8. 4 Hz)、6. 90(1H，dd，
J = 1. 5，8. 4 Hz)、6. 47(1H，d，J = 15. 9 Hz)、6. 28
(1H，dt，J = 15. 9，5. 1 Hz)表明结构中存在三取
代苯环和反式双键片段;δ 4. 10(2H，t，J = 4. 5，
9. 0 Hz)为亚甲基质子信号;δ 3. 78(1H，s)为甲氧
基质子信号;δ 4. 89(1H，d，J = 7. 2 Hz)的糖端基
质子信号提示其相对构型为 β。 13C-NMＲ
(75 MHz，DMSO-d6)共 16 个碳信号，δ:146. 1、
149. 1 为 3、4 位邻二氧取代芳香碳信号;δ 55. 7
为甲氧基碳信号;δ:100. 0、77. 1、76. 9、73. 3、
69. 7、60. 8 为葡萄糖碳信号。上述数据与文献
［3］基本一致，鉴定其为 E-松柏苷(E-coniferin)。
化合物 3:白色粉末 (甲醇)。 1H-NMＲ
(300 MHz，DMSO-d6)中，δ 6. 63(2H，s)表明结
构中存在对称四取代苯环结构;δ 4. 42(2H，d，J =
2. 1 Hz)为连氧亚甲基信号;δ 3. 74(6H，s)的为两
个甲氧基信号;δ 4. 86(1H，d，J = 7. 2 Hz)的糖端
基质子信号提示其相对构型为 β。 13C-NMＲ
(75 MHz，DMSO-d6)中给出 15 个碳信号，其中 δ
152. 6(× 2)和 138. 3 为三连氧取代的芳香碳信
号;δ 56. 4(× 2)为 2 个甲氧基碳信号;δ:102. 8、
77. 3、76. 6、74. 2、70. 0、61. 0 为葡萄糖碳信号;
δ 63. 0为羟甲基碳信号。经与文献［4］对照基本
一致，故鉴定为 3，5-二甲氧基苯甲醇-4-O-β-D-吡
喃葡萄糖苷(3，5-dimethoxy-benzyl alcohol-4-O-β-
D-glucopyranoside)。
化合物 4:白色粉末 (甲醇)。 1H-NMＲ
(300 MHz，DMSO-d6) :低场区 δ:7. 09(1H，d，J =
1. 2 Hz)、7. 02(1H，d，J = 8. 5 Hz)、6. 92(1H，dd，
J = 1. 2，8. 5 Hz)、6. 57(1H，d，J = 15. 8 Hz)、6. 25
(1H，dt，J = 15. 8，5. 8 Hz)的质子信号提示结构
中存在三取代苯环和反式双键;δ 4. 01(1H，d，J =
5. 8 Hz)为连氧亚甲基信号;δ:3. 78(3H，s)、3. 27
(3H，s)为甲氧基信号;δ 4. 89(1H，d，J = 7. 0 Hz)
的糖端基质子信号提示其相对构型为 β。通过理
化性质，并与文献［5］对照，鉴定化合物 4 为甲基
松柏苷(methylconiferin)。
化合物 5:白色针晶(甲醇) ，mp 167 ～
168 ℃。1H-NMＲ(300 MHz，DMSO-d6)谱中 δ:
4. 39(2H，d，J = 5. 2 Hz)、4. 31(2H，t，J = 5. 7，
11. 2 Hz)、4. 12(2H，d，J = 7. 0 Hz)、3. 35-3. 64
(8H，m)为 4 组连氧碳上的质子信号和醇羟基活
泼质子信号。13C-NMＲ(75 MHz，DMSO-d6)δ:
71. 4(C-2，5)、69. 8(C-3，4)、64. 0(C-1，6)。通过
理化性质和波谱数据分析，并与文献［6］对照，鉴
定该化合物为甘露醇(mannitol)。
化合物 6:白色粉末(甲醇) ，［α］20D -15. 3°(c
0. 20，MeOH-H2O)。
1H-NMＲ(300 MHz，DMSO-
d6)谱中 δ 6. 66(4H，s) ，提示结构中可能存在对
称四取代的两个苯环;δ:4. 67 (2H，d，J =
3. 5 Hz)、4. 20(2H，dd，J = 8. 6、6. 4 Hz)和 δ3. 83
(2H，dd，J = 9. 0、2. 8 Hz)为连氧碳上质子信号，
116第 8 期 张 毅等:清香藤茎化学成分的分离与鉴定
结合 δ 3. 03(2H，m)质子信号，提示存在双四氢
呋喃环片段;δ 3. 76(12H，s)为 4 个甲氧基质子
信号;δ 4. 89(2H，d，J = 7. 1 Hz)的糖端基质子信
号提 示 其 相 对 构 型 为 β 构 型。 13C-NMＲ
(75 MHz，DMSO-d6)谱中共给出 34 个碳信号，δ:
152. 7(× 4)、137. 2(× 2)、133. 7(× 2)、104. 2
(× 4)为 2 组三连氧取代苯环碳信号;δ:102. 7、
77. 3、76. 6、74. 2、70. 0、61. 0 为 2 组葡萄糖碳信
号;δ 56. 5(× 4)为甲氧基碳信号;结合 δ:85. 2
(× 2)、71. 4(× 2)、53. 7(× 2)碳信号，提示结构
中含有两个 C6-C3 骨架。以上信息表明该化合物
为双四氢呋喃环木脂素苷类化合物。经与文献
［7］对照基本一致，故鉴定为丁香脂素-4，4-O-双-
β-D-葡萄糖苷(syringaresinol-4，4-O-bis-β-D-glu-
coside)。
化合物 7:白色粉末 (甲醇)。 1H-NMＲ
(300 MHz，DMSO-d6)谱低场区 δ 8. 36(1H，brs)
和 δ8. 73(1H，brs)为 2 个酚轻基活泼氢信号;δ:
6. 65(lH，d，J = 1. 6 Hz)、6. 70(1H，dd，J = 8. 0，
1. 6 Hz)和 6. 52(1H，d，J = 8. 0 Hz)为芳香环
ABX 偶合系统质子信号;δ:6. 55(1H，s)、6. 05
(1H，s)为苯环上对位的 2 个质子信号;δ 3. 74
(3H，s)和 δ3. 74(3H，s)示 2 个甲氧基的存在。
综合理化性质及波谱数据，并与文献［8］中报道
的木脂素类化合物(+)-cycloolivil 数据进行比较
基本一致，故鉴定该化合物为(+)-cycloolivil。
化合物 8:无色针晶(氯仿) ，mp 130 ～
132 ℃。1H-NMＲ(300 MHz，CDCl3)谱中 δ:7. 56
(2H，m)、7. 42(3H，m)提示为单取代苯环结构;
δ:7. 83、6. 50(both 1H，d，J = 16. 0 Hz)提示结构
中存在一对反式双键。其波谱数据与文献［9］报
道数据基本一致，故鉴定该化合物为反式肉桂酸
(tans-cinnamic acid)。
化合物 9:白色针状结晶(氯仿) ，mp 170 ～
172 ℃。1H-NMＲ(300 MHz，DMSO-d6)谱中 δ:
7. 28(1H，d，J = 1. 6 Hz)、7. 08(1H，dd，J = 8. 0，
1. 6 Hz)、6. 78(1H，d，J = 8. 0 Hz)为苯环的 ABX
偶合系统质子信号;δ7. 51 /6. 40(both 1H，d，J =
16. 0 Hz)提示结构中存在反式双键;δ:12. 14
(1H，brs)、9. 84(1H，brs)分别为羧基和酚羟基活
泼质子信号，δ3. 81(3H，s)甲氧基氢信号。以上
数据与文献［10］报道基本一致，故鉴定该化合物
为阿魏酸(ferulic acid)。
致谢:本课题获得国家自然科学基金
( 81073154) 、国家科技部“十二五重大创新药创
制”科技重大专项课题“中药质量安全检测和风
险控制技术平台”( 2014ZX09304-307-02 ) 、以及
教育部创新团队发展计划和辽宁省高校创新团队
支持计划的资助。
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(下转至第 668 页)
216 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 31 卷
Manipulation of large DNA fragments using homolo-
gous recombination
NI Xian-pu，JI Zhou-xiang，XIA Huan-zhang*
(School of Life Science and Biopharmeceutics，Shenyang Pharmaceutical Univercity，Shenyang 110016，China)
Abstract:Objective To introduce efficient and simple methods used for preparing large DNA fragments．
Methods The preparation methods of large DNA fragments were analyzed and summarized based on pub-
lished articles． Ｒesults The application of Ｒed /ET of E． coli，DNA assembler and transformation-associated
recombination(TAＲ)of Saccharomyces cerevisiae were reviewed． Conclusions Clone DNA based on ho-
mologous recombination not only improve large DNA clone efficiency，but also simplify the procedures．
Those methods have broad application prospects in the preparation of large DNA fragments，which is used
for the manufacture of biological medicines by combinatorial biosynthesis and synthetic biology．
Key words:synthetic biology;homologous recombination;ＲecET;DNA assembly;transformation-associated
recombination(TAＲ

)
(上接第 612 页)
Isolation and identification of chemical constituents
from the stem of Jasminum lanceolarium Ｒoxb．
ZHANG Yi1，LIANG Xu2，ZHANG Zheng-feng1，MENG Da-li2* ，LI Xian2
(1． Chongqing Institute for Food and Drug Control，Chongqing Engineering Center for Pharmaceutical
Process and Quality Control，Chongqing 401121，China;2． Key Laboratory of Structure-Based Drug Design
and Discovery，Shenyang Pharmaceutical University，Ministry of Education，Shenyang 110016，China)
Abstract:Objective To study the chemical constituents from the stem of J． lanceolarium． Methods The
compounds were isolated by chromatography on silica gel column，Sephadex LH-20 column，ODS column，
HPLC，and their structures were determined on the basis of special analysis． Ｒesults Nine compounds were
obtained and identified as vanilloloside(1) ，E-coniferin(2) ，3 5-dimethoxy-benzyl alcohol-4-O-β-D-gluco-
pyranoside(3) ，methylconiferin(4) ，mannitol(5) ，syringaresinol-4，4-O-bis-β-D-glucoside(6) ，tans-cin-
namic acid(7) ，ferulic acid(8)and (+)-cycloolivil(9)． Conclusions Compounds 1-4 are isolated from the
genus of Jasminum for the first time．
Key words:Jasminum lanceolarium Ｒoxb．;chemical constituents;

structural identification
关于变动《沈阳药科大学学报》投稿网站的通知
《沈阳药科大学学报》网站的网址更改为 http:/ / syyd． cbpt． cnki． net，投稿作者可以登录新网站网址
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特此公告
《沈阳药科大学学报》编辑部
866 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 31 卷