全 文 ：China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 7 中国药房 2012年第23卷第7期
九节龙为紫金牛科植物九节龙Ardisia pusilla A. DC.的干
燥全株，具有活血通络、消肿止痛、止咳的功效，为我国南方各
地民间常用药物，被 2010年《四川省中药材标准》收载。九节
龙含有抗癌、抗肿瘤作用的九节龙皂苷[1]，以及没食子酸、山柰
酚，柚皮素等成分[2]。宋良科等[3]对九节龙中的止咳成分岩白
菜素进行了定量分析，认为达到了药材规定的止咳剂量。有
Δ国家科技基础条件平台工作项目子课题（2005DKA21000）
＊硕士研究生。研究方向：药用植物资源及天然活性组分。电
话：029-82657019。E-mail：haiyang20031149@126.com
#通讯作者：副教授。研究方向：中药资源与品质评价。E-mail：
songlk591@126.com
·中药分析与鉴定·
HPLC法测定九节龙中抗炎止咳主要化学组分的含量Δ
何海洋＊，宋良科 #，王 岩，王小宁，汤 昊，董关涛（西南交通大学生命科学与工程学院，成都 610031）
中图分类号 R284.1；R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2012）07-0618-04
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.07.15
摘 要 目的：筛选九节龙的抗炎止咳化学组分并对其进行含量测定。方法：采用高效液相色谱法测定九节龙中5种抗炎止咳化
学组分的含量。测定没食子酸、岩白菜素的色谱条件参照《中国药典》执行。测定杨梅素、山柰酚、槲皮素的色谱柱为Waters
Symmetry -C18（250 mm×4.6 mm，5 µm），流动相为甲醇-0.4％磷酸（45 ∶ 55），流速为 0.8 mL·min－1，柱温为 30℃，检测波长为 368
nm。结果：没食子酸、岩白菜素、杨梅素、山柰酚、槲皮素分离度良好，标准曲线在检测范围内均呈良好线性关系；平均加样回收率
均＞97％，RSD均＜2.0％（n＝6）。结论：九节龙的叶中5种组分的含量均明显高于全株和茎，采收时间以果期为佳。该测定方法
准确、稳定、重复性好，可为九节龙药材质量标准的制定奠定基础。
关键词 九节龙；抗炎止咳；化学组分；高效液相色谱法；含量测定
Content Determination of Main Chemical Compounds for Anti-inflammation and Relieving Cough of Ardi-
sia pusilla by HPLC
HE Hai-yang，SONG Liang-ke，WANG Yan，WANG Xiao-ning，TANG Hao，DONG Guan-tao（School of Life
Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To screen and determine the chemical components for anti-inflammatory and relieving cough of Ardi-
sia pusilla. METHODS：HPLC method was adopted to determine the contents of 5 chemical components for anti-inflammatory and
relieving cough of A. pusilla. The content determination of gallic acid and bergeninum were conducted according to chromatogram
conditions stated in Chinese Pharmacopeia. The determination of myricetin，kaempferol and quercetin were performed on Waters
Symmetry-C18（250 mm×4.6 mm，5 µm）column with mobile phase consisted of methanol-0.4％ phosphoric acid（45 ∶ 55）at a flow
rate of 0.8 mL·min－1. The column temperature was 30 ℃ and detection wavelength was set at 368 nm. RESULTS：The chemical
compounds of gallic acid，bergeninum，myricetin，kaempferol and quercetin had a high resolution. The standard curves of the com-
pounds had good linearity in the detection ranges. Average recoveries were all higher than 97％ and the RSDs were all lower than
2.0％（n＝6）. CONCLUSION：The contents of 5 compounds in the leaves are obviously higher than that in the whole plant and the
stem. The best harvesting time is fruit period. This method is accurate，stable and reproducible，and it can lay a foundation for the
establishment of quality standard for A. pusilla.
KEY WORDS Ardisia pusilla；Anti-inflammatory and relieving cough；Chemical compound；HPLC；Content determination
用。PEG4000是滴丸剂中常用的水溶性基质，因其熔点低，分
散性好，极易与药物熔融成固体分散体，有利于药物的溶解、
熔融、滴制和成型，并使整个工艺简化，产品质量和药效得到
提高。由于滴丸的成型和质量受多种因素影响，故本文采用
具量化指标的丸重变差异异系数、溶散时限及包括滴丸圆整
性、色泽和硬度在内的外观质量3项指标评定工艺的优劣。结
果，所制得的杜仲叶滴丸形状圆滑，大小均匀，表明所选工艺
是可行的。
参考文献
[ 1 ] 王著宇.中药滴丸制剂优势分析[J].中国制药信息，2002，
18（4）：20.
[ 2 ] 栾立标，朱家壁.布洛芬滴丸剂的研制及体外溶出度[J].
中国医药工业杂志，2000，31（9）：399.
[ 3 ] 宗建成，张 彬.通心舒滴丸成型工艺研究[J].中国实验
方剂学杂志，2005，11（2）：3.
[ 4 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010
年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录71.
（收稿日期：2011-03-27 修回日期：2011-07-25）
􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍􀤍
··618
中国药房 2012年第23卷第7期 China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 7
报道认为，没食子酸[4]、岩白菜素[5]、杨梅素[6]、山柰酚[7]及槲皮
素[8]具有抗炎或止咳作用，故笔者选择四川、重庆2个主产区的
6个采集地 22个样本，对样本中上述 5种成分进行薄层色谱
（TLC）定性分析，并在此基础上建立了高效液相色谱（HPLC）
定量分析方法，以为九节龙优良种质的筛选、资源的可持续利
用及药材质量标准的制定提供可靠依据。
1 仪器与试药
HPLC系统，含 515 HPLC泵、2487紫外检测器、Empower
色谱工作站（美国Waters公司）；KQ2200DB、KQ5200DE数控
超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率：200 W，频
率：40 kHz）；AUY220电子天平（日本岛津公司）；UPT-I-20L超
纯水机（成都超纯科技有限公司）。
HPLC用甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；没食子酸
（批号：110831-200302）、岩白菜素（批号：111532-200202）、山
柰酚（批号：110861-200808）、槲皮素（批号：100081-200406）对
照品均购于中国食品药品检定研究院；杨梅素标准品（成都曼
思特生物科技有限公司，批号：529-44-2，纯度：99.9％）。
九节龙药材分别采于四川峨眉山市善觉寺（1号采集地，简
称1号）、四川峨眉山市疗养院（2号）、重庆市北碚区天府镇（3号）、重
庆市合川区滩子镇（4号）、重庆市合川区狮滩镇（5号）、重庆市丰都
县保合镇（6号），经西南交通大学生命科学与工程学院宋良科副教
授鉴定为紫金牛科植物九节龙A. pusilla A. DC.。选择采集的50
个样本（存于西南交通大学生命科学与工程学院标本馆，标本编号
为1151C0006080000201～1151C0006080000250）中四川、重庆
主产区的22个样本，分茎、叶、全株进行分析；药材清洗、阴干，
以小型粉碎机粉碎成粗粉，备用。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
2.1.1 没食子酸 按照2010年版《中国药典》（一部）五倍子项
下[9]色谱条件进行测定。
2.1.2 岩白菜素 按照2010年版《中国药典》（一部）矮地茶项
下[9]色谱条件进行测定。
2.1.3 杨梅素、山柰酚、槲皮素 色谱柱：Waters Symmetry-C18
（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：甲醇-0.4％磷酸（45 ∶ 55）；流
速：0.8 mL·min－1；柱温：30℃；检测波长：368 nm。在上述色
谱条件下，5种成分对照品溶液和供试品溶液的色谱分别见
图 1～图3。
2.2 对照品溶液的制备
2.2.1 没食子酸 精密称取没食子酸对照品 2.2 mg，加 50％
甲醇制成每1 mL含44 µg的对照品溶液，备用。
2.2.2 岩白菜素 精密称取岩白菜素对照品4.1 mg，加甲醇制
成每1 mL含49.2 µg的对照品溶液，备用。
2.2.3 杨梅素、山柰酚、槲皮素 分别精密称取标准品杨梅素
2.6 mg和对照品山柰酚 2.9 mg（以 95.9％计）、槲皮素 2.6 mg
（以 97.3％计），加甲醇制成每 1 mL含杨梅素 39 µg、山柰酚 42
µg、槲皮素40.48 µg的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
2.3.1 没食子酸 取九节龙药材粉末约1 g，精密称定，精密加
入 4 mol·L－1盐酸溶液 50 mL，水浴 3.5 h，放冷，过滤。精密量
取续滤液5 mL，置25 mL容量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，
过0.45 μm有机微孔滤膜，备用。
2.3.2 岩白菜素 精密称定九节龙药材粉末 0.2 g，加入甲醇
20 mL，称定重量，超声提取40 min，放冷，再称定重量，用甲醇
补足失重，摇匀，过滤，取续滤液，过0.45 μm有机微孔滤膜，即
得。
2.3.3 杨梅素、山柰酚、槲皮素 精密称定九节龙药材粉末约
2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回
流 1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，过滤，取 15 mL续
滤液置于锥形瓶中，精密加入20％盐酸2 mL，加热回流1 h，放
至室温，用甲醇定容至25 mL容量瓶中，摇匀，过0.45 μm有机
微孔滤膜，备用。
2.4 线性关系考察
没食子酸（略）；岩白菜素（略）。
精密吸取杨梅素、山柰酚、槲皮素混合对照品溶液（3种成
分浓度分别为 39、42、40.48 µg·mL－1）2、4、6、8、10、12、14 μL，
按“2.1.3”项下色谱条件进样测定，计算峰面积。以进样量（X）
为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得杨梅
素、山柰酚、槲皮素的回归方程分别为Y＝22 242X+9 181（r＝
0.999 5，n＝7）、Y＝78 533X－72 430（r＝0.999 3，n＝7）、Y＝32
333X+30 130（r＝0.999 4，n＝7）。结果表明，3种成分的进样量
分别在 0.078～0.546、0.084～0.588、0.080 96～0.566 72 µg范
围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系。
1
1
1
0 2 4 6 8 10 12 14 min
A
0 2 4 6 8 10 12 14 min
B
图1 没食子酸的HPLC图
A.对照品；B.供试品；1.没食子酸
Fig 1 HPLC chromatograms of gallic acid
A. substance control；B. test sample；1. gallic acid
0 4 8 12 16 20 24 28 min
A
0 4 8 12 16 20 24 28 min
B
1
图2 岩白菜素的HPLC图
A.对照品；B.供试品；1.岩白菜素
Fig 2 HPLC chromatograms of bergeninum
A. substance control；B. test sample；1. bergeninum
1
0 10 20 30 40 50 60 70 min
A
0 10 20 30 40 50 60 70 min
B
2 3
1 2
3
图3 杨梅素、槲皮素、山柰酚的HPLC图
A.对照品；B.供试品；1.杨梅素；2.槲皮素；3.山柰酚
Fig 3 HPLC chromatograms of myricetin，quercetin and
kaempferol
A.substance control；B.test sample；1. myricetin；2. quercetin；3. kaem-
pferol
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China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 7 中国药房 2012年第23卷第7期
2.5 精密度试验
分别精密吸取“2.2”项下各对照品溶液重复进样 6次，进
样量 10 µL，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积。结果，没食子
酸、岩白菜素、杨梅素、山柰酚与槲皮素的RSD依次为1.17％、
1.86％、1.16％、1.37％、1.93％（n＝6），表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取“2.3”项下各供试品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件分
别于0、2、4、6、8、10、24 h进样，测定峰面积。结果，没食子酸、
岩白菜素、杨梅素、山柰酚和槲皮素的 RSD依次为 1.38％、
1.92％、1.95％、1.15％、1.10％（n＝7），表明供试品溶液在 24 h
内稳定性良好。
2.7 重复性试验
分别称取同一采集地（四川峨眉山市疗养院，2008年11月
采收）样品适量，共6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，照
“2.1”项下色谱条件测定峰面积。结果，没食子酸、岩白菜素、
杨梅素、山柰酚与槲皮素的 RSD依次为 1.30％、1.64％、
0.74％、0.47％、1.20％（n＝6），表明方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
没食子酸（略）；岩白菜素（略）。
取已知含量的同一批九节龙药材样品 6份各 1 g，精密称
定，分别精密加入一定体积的对照品溶液，照“2.3.3”项下方法
制备供试品溶液，按“2.1.3”项下色谱条件进样测定，计算加样
回收率，结果分别见表1～表3。
表1 杨梅素的加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 1 Results of recovery tests of myricetin（n＝6）
称样量/g
1.001 6
1.001 9
1.002 5
1.001 3
1.002 8
1.001 0
含杨梅素量/mg
0.210 4
0.210 6
0.211 3
0.210 2
0.211 0
0.210 8
加入量/mg
0.240 0
0.240 0
0.240 0
0.240 0
0.240 0
0.240 0
测得量/mg
0.445 0
0.450 2
0.448 1
0.444 7
0.450 2
0.449 2
回收率/％
97.75
99.83
98.67
97.71
99.67
99.33
x/％
98.83
RSD/％
0.87
表2 山柰酚的加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 2 Results of recovery tests of kaempferol（n＝6）
称样量/g
1.001 6
1.001 9
1.002 5
1.001 3
1.002 8
1.001 0
含山柰酚量/mg
0.608 3
0.608 4
0.609 3
0.608 2
0.609 1
0.608 2
加入量/mg
0.620 0
0.620 0
0.620 0
0.620 0
0.620 0
0.620 0
测得量/mg
1.204 0
1.201 2
1.220 3
1.204 7
1.215 6
1.217 9
回收率/％
96.08
95.61
98.55
96.21
97.82
98.34
x/％
97.10
RSD/％
1.20
表3 槲皮素的加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 3 Results of recovery tests of quercetin（n＝6）
称样量/g
1.001 6
1.001 9
1.002 5
1.001 3
1.002 8
1.001 0
含槲皮素量/mg
0.649 3
0.649 1
0.654 1
0.649 2
0.653 2
0.649 1
加入量/mg
0.680 0
0.680 0
0.680 0
0.680 0
0.680 0
0.680 0
测得量/mg
1.304 0
1.311 2
1.314 3
1.304 7
1.323 6
1.310 9
回收率/％
96.28
97.37
97.09
96.40
98.59
97.32
x/％
97.17
RSD/％
0.78
2.9 样品含量测定
取不同采集地及相同采集地不同采收时间的九节龙药材
样本粉末，精密称定，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按
“2.1”项下色谱条件进样测定峰面积，每个样本测定3份，取平
均值，以杨梅素、山柰酚、槲皮素含量的总和作为药材中总黄
酮含量。5种组分的含量测定结果见表 4。九节龙不同采集
地、不同部位中没食子酸和岩白菜素的含量对比见图 4；总黄
酮的含量对比见图5。九节龙不同采集地全株中没食子酸、岩
白菜素及总黄酮的含量对比见图 6。九节龙不同采收时间全
株中没食子酸、岩白菜素及总黄酮的含量对比见图7。
3 讨论
由本试验结果可知，九节龙的止咳组分岩白菜素的含量
比较稳定，与文献报道[9]基本一致；没食子酸的含量也较高，均
达到药用剂量，该药材的止咳效应可能与该2种成分协同作用
表4 5种组分的含量测定结果
Tab 4 Results of content determination of 5 compounds
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
采集地
四川峨眉山市善觉寺
四川峨眉山市善觉寺
四川峨眉山市善觉寺
四川峨眉山市疗养院
四川峨眉山市疗养院
四川峨眉山市疗养院
四川峨眉山市疗养院
四川峨眉山市疗养院
四川峨眉山市疗养院
四川峨眉山市疗养院
四川峨眉山市疗养院
四川峨眉山市疗养院
重庆北碚区天府镇
重庆北碚区天府镇
重庆合川区滩子镇
重庆合川区滩子镇
重庆合川区滩子镇
重庆合川区狮滩镇
重庆合川区狮滩镇
重庆丰都县保合镇
重庆丰都县保合镇
重庆丰都县保合镇
采集部位
叶
茎
全株
叶
茎
全株
叶
茎
全株
叶
茎
全株
叶
茎
叶
茎
全株
叶
茎
叶
茎
全株
采收时间
2008-06-05
2008-06-05
2009-08-21
2008-06-21
2008-06-21
2008-06-21
2008-11-24
2008-11-24
2008-11-24
2009-03-29
2009-03-29
2009-03-29
2008-06-14
2008-06-14
2008-08-11
2008-08-11
2008-08-11
2008-08-11
2008-08-11
2008-08-11
2008-08-11
2008-08-11
没食子酸/％
0.584 1
0.453 4
0.470 1
0.592 2
0.438 2
0.517 2
0.691 3
0.405 2
0.628 7
0.437 7
0.329 8
0.435 6
0.938 5
0.291 8
0.719 3
0.443 5
0.577 6
0.628 4
0.466 5
0.697 3
0.402 8
0.500 5
岩白菜素/％
0.609 1
0.501 3
0.509 8
0.752 5
0.546 8
0.657 2
0.895 6
0.516 1
0.770 9
0.548 3
0.358 6
0.562 1
0.662 8
0.482 7
0.538 6
0.414 9
0.624 6
0.520 1
0.407 0
0.624 7
0.445 3
0.555 3
杨梅素/％
0.020 5
0.011 7
0.028 6
0.038 8
0.033 2
0.033 9
0.028 5
0.019 7
0.025 4
0.042 5
0.023 3
0.031 6
0.061 9
0.013 2
0.037 2
0.025 5
0.025 8
0.028 1
0.015 6
0.021 0
0.012 1
0.019 9
山柰酚/％
0.042 5
0.024 8
0.036 2
0.067 5
0.031 7
0.048 1
0.110 9
0.064 8
0.084 4
0.051 5
0.027 8
0.034 2
0.120 2
0.054 1
0.065 2
0.037 6
0.047 7
0.057 6
0.030 1
0.069 7
0.026 4
0.051 8
槲皮素/％
0.066 5
0.031 1
0.037 3
0.058 6
0.029 2
0.040 5
0.102 8
0.049 8
0.075 4
0.067 1
0.023 9
0.040 6
0.059 1
0.028 8
0.071 3
0.028 0
0.060 7
0.084 5
0.034 6
0.089 5
0.029 3
0.079 4
总黄酮/％
0.129 5
0.067 6
0.102 2
0.164 9
0.094 0
0.122 5
0.241 1
0.134 2
0.185 2
0.161 1
0.075 0
0.106 4
0.241 2
0.096 0
0.173 6
0.091 1
0.134 2
0.170 3
0.080 4
0.180 2
0.067 8
0.151 1
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中国药房 2012年第23卷第7期 China Pharmacy 2012 Vol. 23 No. 7
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
含量
/％
图4 九节龙不同采集地、不同部位中没食子酸和岩白菜素的
含量对比
Fig 4 Comparison of the contents of gallic acid and bergeni-
num in different parts of A. pusilla from different habitats
0.30
0.25
0.20
0.15
0.10
0.05
0 1 2 3 4 5 6
采集地编号
含量
/％
叶总黄酮含量
茎总黄酮含量
图5 九节龙不同采集地、不同部位中总黄酮的含量对比
Fig 5 Comparison of the contents of total flavonoids in
different parts of A. pusilla from different habitats
1 2 3 4 5 6
采集地编号
叶没食子酸含量
茎没食子酸含量
叶岩白菜素含量
茎岩白菜素含量
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善觉寺 疗养院 滩子镇 保合镇
采集地
没食子酸含量
岩白菜素含量
总黄酮含量
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
含量
/％
图6 九节龙不同采集地全株中没食子酸、岩白菜素及总黄酮
的含量对比
Fig 6 Comparison of the contents of gallic acid，bergeni-
num and total flavonoids in whole plant of A. pusilla from dif-
ferent habitats
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
含量
/％
2008-06 2008-11 2009-03 2009-08
采集时间
没食子酸含量
岩白菜素含量
总黄酮含量
图7 九节龙不同采收时间全株中没食子酸、岩白菜素及总黄
酮的含量对比
Fig 7 Comparison of the contents of gallic acid，bergeni-
num and total flavonoids in whole plant of A. pusilla in differ-
ent harvest time
相关。九节龙中杨梅素、山柰酚、槲皮素均具有明显的抗炎作
用，总量也达到一般治疗量，说明九节龙的活血、止痛、消肿功
效可能与此相关。
根据图4、图5结果分析可知，九节龙叶中的5种化学组分
含量均明显高于全株和茎。九节龙为野生，其资源量在不断
减少，应考虑用叶入药，以减少药用量，更好地利用资源，达到
可持续不间断利用的目的。
试验结果还表明，四川峨眉山市疗养院所在地所产蔓性
斜升分枝型九节龙种质，其单株最长达1.5 m，鲜重53 g；5种主
要化学组分含量均高于其他样本，为九节龙优良种质资源，可
进行引种栽培。
由图 7所示，同一采集地九节龙中有效组分含量以 11月
最高，采收时间以果期为佳。
本试验在同一条件下测定杨梅素、山柰酚、槲皮素的含
量，方法稳定、重复性好，可为九节龙指纹图谱的建立和质量
标准的制定奠定良好的基础。
参考文献
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素的含量 [J].中药材，2007，30（4）：422.
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[ 9 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010
年版.北京：中国医药科技出版社，2010：62、338.
（收稿日期：2011-02-06 修回日期：2011-09-01）
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