全 文 ：90 dB组作用 28 d) ,这些变化的指标又都恢复到对
照组水平 .
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编辑　何扬举
· 经验交流· 　文章编号: 1000-2790( 2001) 05-0467-01
流式细胞术检测九节龙皂甙对 Hela细
胞凋亡的诱导作用
梁克明 1 ,王四旺 2 , 谢艳华 2 , 王晓娟2　 (第四军医大
学: 1西京医院放射治疗科 , 2药物研究所 ,陕西 西安 710033)
关键词: 九节龙皂甙 ;细胞凋亡 ;流式细胞术 ; Hela
中图号: R979. 1　　　文献标识码: E
0　引言　 细胞凋亡 ( Apoptosis)是一种生理性细胞程序化死
亡 ,与肿瘤的发生、发展密切相关 ,已成为当前肿瘤研究的新
热点 . 九节龙皂甙是从川产九节龙全草中提出的单体 [1] ,我
们观察九节龙皂甙诱导 Hela细胞凋亡 ,采用流式细胞术
( flow cy tomet ry , FCM )进行分析 ,结果如下:
1　材料和方法
1. 1　细胞系及细胞培养　人宫颈癌细胞株 ( Hela)为上皮样
癌细胞 ,本校 403研究所提供 . 细胞培养方法见参考文献
[ 2].
1. 2　细胞凋亡的诱导和分析　实验组分别以 1. 56～ 50. 0
μg· m L- 1九节龙皂甙 (本校药物研究所提供 )作用 Hela细胞
( 106· m L- 1 ) 0～ 72 h,未经过药物处理的细胞为阴性对照
组 ,加入等量培养液 ( 100 mL· L- 1胎牛血清的 RPMI 1640培
养液 )中细胞常规培养 ,按作用不同时间 ,分别收集细胞 ,经
PBS洗涤 2次 ,加入 - 4℃ 700 mL· L- 1乙醇固定过夜 ,离心
收集细胞 ,再经 PBS洗涤后 ,依次加入膜穿孔剂 ,溴化乙锭
( P I)和 Rnase 4℃染色 30 min, 350目筛网过滤 , Epics-pro file
Ⅱ 流式细胞仪 (美国 Coulter公司 )上进行 DN A含量及细胞
周期分析 .
2　结果　 细胞凋亡过程中 ,核内 DNA被降解成寡核苷酸片
断 ,经 P I染色后可直接观察到细胞 DN A含量变化 .染色的小
分子 DNA在细胞周期分布图中 ,形成正常二倍体细胞 DN A
峰 ( G1峰 )之前的亚二倍体峰 ,即 Apoptosis峰 (亦称 Ap峰 ) ,
是凋亡细胞核固缩及 DN A降解的结果 ,根据 Ap峰可测凋亡
细胞占细胞总数的比例 . 图 1示 6. 25 mg· L- 1作用 48 h后
收稿日期: 1999-06-16;　修回日期: 1999-10-08
作者简介:梁克明 ( 1969-) ,男 (汉族 ) ,吉林省通化市人 . 硕士生 (导师
王四旺 ) . Tel. ( 029) 3374018
G1峰前出现凋亡峰 ,占细胞总数的 34. 5% ,而阴性对照组细
胞 G1峰无凋亡峰出现 (图 2) .
图 1　凋亡 Hela细胞的 FCM分析
图 2　正常 Hela细胞的 FCM分析
3　讨论　九节龙皂甙各剂量处理组随时间的增加 S期
( DN A合成期 )及 G2期 ( DN A合成后期 )细胞数少于阴性对
照组 , G1期 ( DN A合成前期 )细胞数较阴性对照组增加 ,表明
九节龙皂甙抑制了癌细胞 DN A合成 ,使癌细胞增殖活性受到
抑制 . 同时在计算机显示屏上动态观察到 ,九节龙皂甙处理
48 h后 ,随电压增高 ,大部分细胞碎片移动 ,但有部分细胞并
不移动 ,这一现象可能是药物使 Hela细胞改变了形态 ,体积
减小所致 ,至于确切其机制有待进一步阐明 .
参考文献:
[1 ]张清华 , 王晓娟 ,缪振春 . 川产九节龙皂甙的化学研究 [ J ]. 药
学学报 , 1993; 28( 9): 673- 678.
[2 ]司徒镇强 , 吴军正主编 . 细胞培养 [M ]. 西安:世界图书出版公
司 , 1996: 127- 134.
编辑　王小仲
467第四军医大学学报 ( J Four th M il Med Univ ) 2001; 22( 5)