全 文 ：中国药房 2010年第21卷第3期 China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 3
Δ国家自然科学基金资助项目（30860393）
＊硕士。研究方向：生药质量及活性成分药效。E- mail：
xueshengcailiao@163.com
#通讯作者：教授，博士研究生导师，博士。研究方向：生药质量及
其研发。E- mail：zhhketi@163.com
狗肝菜为爵床科植物狗肝菜 Dicliptera chinensis（L.）
Nees的全草，其味苦、性寒，具有清热、凉血、利尿、解毒等功
效，临床常用于治疗热病斑疹、便血、溺血、小便不利、肿毒疔
疮等证。有文献报道，狗肝菜主要含有多糖、有机酸、氨基酸
等物质[1]，其中多糖具有保肝降酶的活性[2]，但对狗肝菜多糖的
提取工艺研究国内外尚未见报道。本研究采用单因素和L9（34）
正交试验法考察提取时间、温度、次数和料液比对狗肝菜多糖
得率的影响，以期为狗肝菜活性成分的进一步研究与资源应
用提供理论依据。
1 仪器与试药
UV- 2550紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）。狗肝
菜药材采自广西中医学院药用植物园，经广西中医学院药用
植物教研室韦松基教授鉴定为真品。葡萄糖（广东汕头市西
陇化工厂，批号：0703151）；苯酚、硫酸、乙醇、石油醚（30～
60℃）、丙酮、乙醚及其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 狗肝菜多糖的提取
称取干燥的狗肝菜全草粗粉100 g，加入适量石油醚脱脂，
无水乙醇除杂，各回流提取 2 h。药渣挥尽乙醇后沸水提取 2
次，每次1.5 h，合并提取液，浓缩至100 mL，氯仿-正丁醇（4 ∶1）
多次萃取（即Sevag法），除去蛋白质，加 95％乙醇使醇含量达
到80％，于4℃冰箱中醇沉12 h。抽滤，滤渣依次用乙醚、无
水乙醇、丙酮洗涤，即得狗肝菜多糖。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄糖 250 mg，蒸馏水溶
解后定容至 100 mL。准确吸取此溶液 1 mL，置于 25 mL量瓶
中，稀释至刻度，摇匀（含葡萄糖100 μg·mL- 1），备用。
2.3 标准曲线的制备
分别准确吸取标准溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，置于
具塞试管中，用蒸馏水补充至2 mL，以蒸馏水作空白，每管加
入5％苯酚溶液1 mL，再垂直快速加入浓硫酸5 mL，摇匀，放
置 10 min，沸水加热 15 min，之后用流水速冷至室温，于 487
nm波长处测定吸光度（A）。以检测浓度（C）为横坐标，A为纵
坐标，进行线性回归，得回归方程为A ＝0.007 74C + 0.036 38
（r ＝ 0.999 4）。结果表明，狗肝菜多糖检测浓度在20～70 μg·
mL- 1范围内与吸光度呈良好线性关系。
2.4 换算因子的测定
准确称取多糖 20 mg，溶于 100 mL容量瓶中，稀释至刻
度，摇匀。准确吸取此溶液 1 mL，置于具塞试管中，按“ 2.3”
项下方法测定吸光度，根据回归方程计算多糖溶液中葡萄糖
的浓度，按下式计算出换算因子：f ＝W/（C·D）。式中，W为多
糖质量（mg）；C为多糖浓度（μg·mL- 1）；D为稀释倍数。
2.5 供试品溶液的制备
准确称取生药狗肝菜1 g，以石油醚脱脂，水煎煮法提取，
醇沉、减压干燥，按“2.9”项下方法提取操作。精密称定各提取
物质量20 mg，然后加水定容至 250 mL，作为样品溶液。
2.6 多糖含量的测定[3]
精密吸取供试品溶液2 mL，置于具塞试管中，按苯酚-浓
·中药工艺与制剂·
正交试验优选狗肝菜中多糖提取工艺Δ
张可锋 1＊，朱 华 1、2＃，高 雅 2，邹登峰 1（1.桂林医学院，桂林市 541004；2.广西中医学院，南宁市 530001）
中图分类号 R284.2；R283 文献标识码 A 文章编号 1001- 0408（2010）03- 0219- 02
摘 要 目的：优选狗肝菜中多糖的最佳提取工艺。方法：以狗肝菜多糖得率为指标，提取时间、温度、次数和料液比为考察因素，
采用正交试验优选最佳提取工艺。结果：最佳提取工艺为提取时间2 h，提取2次，温度85℃，料液比1 ∶ 20。在此最佳工艺条件下
狗肝菜多糖得率为（3.26±0.3）％。结论：该工艺稳定、简单、可行，适用于工业化生产。
关键词 狗肝菜；多糖；提取工艺
Optimization of the Extraction Technology of Polysaccharides from Dicliptera chinensis by Orthogonal Ex-
periment
ZHANG Ke-feng，ZHU Hua，ZOU Deng-feng（Guilin Medical University，Guilin 541004，China）
ZHU Hua，GAO Ya（Guangxi TCM University，Nanning 530001，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To optimize the extraction technology of polysaccharides from Dicliptera chinensi. METHODS：The
orthogonal experiment was optimized with extracting rate of polysaccharides as index while with extracting time，extracting tempera-
ture，extracting times and solid- liquid ratio as factors. RESULTS：The optimal extraction technology was as follows：extracting
temperature of 85 ℃，extracting times of 2（2 hours per time）and solid- liquid ratio as factors of 1 ∶ 20. The yield of polysaccha-
rides was（3.26±0.3）％. CONCLUSION：The technology is table，simple and practical for industrial production.
KEY WORDS Dicliptera chinensi；Polysaccharides；Extraction technology
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China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 3 中国药房 2010年第21卷第3期
硫酸法，照“2.3”项下方法测定吸光度，由回归方程计算供试
品溶液中葡萄糖浓度 ，按公式：含量（％）＝（C∙D∙f/W）×
100％，计算供试品中多糖的含量；多糖得率（％）＝多糖含量×
干燥提取物质量（g）/原料质量（g）。其中，C为样品液中葡萄
糖的浓度；D为稀释因素；f为换算因子；W为样品质量。
2.7 加样回收率试验
精密称取 6份空白基质各 5 g，分别加入精制多糖 10 mg，
按“2.5”项下供试品溶液的方法制备和“2.3”项方法操作测定，
测定吸光度，计算加样回收率和 RSD，结果分别为 98.58％、
2.19％。
2.8 精密度试验
取样品液 2 mL，按“2.3”项方法测定 5次，测定吸光度，结
果RSD＝0.51％。
2.9 试验条件的优化
2.9.1 单因素分析试验 （1）提取时间对狗肝菜多糖得率的
影响：以料液比 1 ∶ 15、温度 90℃，提取 2次，用 85％的乙醇沉
淀，不同的提取时间（1、1.5、2.0、2.5 h）多糖得率分别为2.30％、
2.62、2.86％、2.87％。可见提取2.0 h多糖得率相对较高，随着
时间的延长，多糖得率不再增加，考虑其狗肝菜中多糖的含量是
一定的，在其它条件不变下延长时间狗肝菜药材中一些其它的
成分会被提取出来，干扰多糖的检测结果。（2）提取次数对狗肝
菜多糖得率的影响：选择不同提取次数（1、2、3），以1 ∶15的料液
比，在90℃下提取2.0 h，用85％的乙醇沉淀，多糖得率分别为
2.70％、2.98％、3.01％。可见，提取3次多糖的得率相对较高，
但提取2次和3次得率相差不多，从工艺及操作上考虑选择提
取2次。（3）提取温度对多糖得率的影响：以料液比1 ∶ 15，提取
2次，每次 2.0 h，用 85％的乙醇沉淀，不同的提取温度（80、85、
90、95℃）多糖得率分别为 2.80％、2.83％、2.85％、2.86％。可
见提取温度90℃多糖得率相对较高，随着温度升高，多糖得率
不再增加。（4）料液比对狗肝菜多糖得率的影响：选择不同
的料液比（1 ∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25），温度为 90℃，提取2次，每
次 2.0 h，用 85％的乙醇沉淀，结果多糖得率分别为 2.72％、
2.81％、2.84％、2.86％。可见随着料液比增大，多糖得率不断
增加，在料液比1 ∶20以上时，多糖得率增加缓慢。（5）醇沉浓度
对狗肝菜多糖得率的影响：以1 ∶20的料液比，在90℃下提取2
次，每次2 h，选择不同醇沉浓度（80％、85％、90％），结果多糖
得率分别为 3.08％、3.10％、3.10％。可见 80％以上乙醇对狗
肝菜多糖沉淀度影响不大。考虑节省原料，在工艺中选择
80％的乙醇沉淀即可。
2.9.2 正交试验 通过对提取时间、温度、次数、料液比和醇
沉浓度这 5个因素进行分析，根据单因素分析结果，从中选取
提取时间（A）、提取次数（B）、提取温度（C）、料液比（D）4个因
素，采用L9（34）表进行正交试验，以狗肝菜多糖得率为指标确
定最佳提取工艺。因素水平见表1；正交试验结果见表2；方差
分析结果见表3。
表1 因素水平
Tab 1 Factors and levels
水平
1
2
3
因素
A /h
1
1.5
2
B
1
2
3
C /℃
85
90
95
D/r
10
15
20
表2 正交试验结果
Tab 2 Results of orthogonal test
试验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
T1
T2
T3
R
因素
A/h
1
1
1
2
2
2
3
3
3
6.95
8.02
9.40
0.82
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
7.85
8.27
8.25
0.14
C/℃
1
2
3
2
3
1
3
1
2
8.12
8.15
8.10
0.02
D/r
1
2
3
3
1
2
2
3
1
8.11
7.90
8.36
0.15
多糖得率/％
2.22
2.30
2.43
2.67
2.71
2.64
2.96
3.26
3.18
表3 方差分析结果
Tab 3 Results of variance analysis
方差来源
A
B
C
D
误差
离差平方和
1.005 7
0.037 4
0.000 5
0.035 4
0.000 9
自由度
2
2
2
2
2
均方
0.502 9
0.018 7
0.000 3
0.017 7
0.000 45
F
1 117
42
0.3
20
P
＜0.05
＜0.05
＜0.05
注：F0.05（2，2）＝19.00，F0.01（2，2）＝99.00
note：F0.05（2，2）＝19.00，F0.01（2，2）＝99.00
由表2、表3可知，影响因素的主次顺序为A＞D＞B＞C，C
为非主要因素，考虑能源，选择提取温度为85℃，故狗肝菜多
糖最佳提取工艺为A3B2C1D3，即提取时间 2 h，提取 2次，温度
85℃，料液比1 ∶20。
2.9.3 验证试验 按正交试验的优化条件对 3批狗肝菜药材
进行提取工艺验证，结果多糖含量和得率的平均值分别为
（5.12±0.11）％和（3.26±0.3）％。3次差异较小，工艺稳定。
3 讨论
本文测定多糖含量方法的原理是先用无水乙醇除去单糖、
低聚糖及其它干扰性成分，再用水提醇沉法得到多糖。多糖在
浓硫酸的作用下水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然
后和苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，该化合物颜色深
浅与糖的浓度成正比。因狗肝菜采收产地、季节等因素，其多
糖含量会有差异，但多糖含量可作为其质量控制的指标之一。
此外，今后应加强以多糖为活性成分的药理实验研究。
由于多糖在空气中易氧化使颜色加深，故在过滤过程中
分别依次用乙醚、无水乙醇、丙酮多次洗涤，消除了这种变化，
而后真空干燥可得狗肝菜多糖。
参考文献
[ 1 ] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版
社，1977：1 424.
[ 2 ] 李海燕，王旭深.狗肝菜多糖保肝作用研究[J].中药材，
2006，29（8）：833.
[ 3 ] 侯剑萍，王春霞.牛膝多糖的提取纯化工艺研究[J].中国
药房，2008，19（36）：2 822.
（收稿日期：2009- 02- 03 修回日期：2009- 06- 25）
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