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中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 33 No． 12
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DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2015． 12． 037
紫外可见分光光度法测定鲫鱼胆中总黄酮的含量
周倩，滕建北
(广西中医药大学，广西 南宁 530001)
摘 要:目的:测定鲫鱼胆中总黄酮的含量。方法:以芦丁为对照品，NaNO2 － Al(NO3)3为显色剂，采用紫外
可见分光光度法测定，检测波长为 507 nm。结果:样品中总黄酮在浓度 7． 08 ～ 141． 6 mg·L －1范围内呈良好线性
关系，回归方程为 Y =11． 223X － 0． 001 (r = 0． 999 3) ，线性良好，加样回收率为 101． 73%，ＲSD为 2． 67%。结论:
该方法简便、灵敏、准确，可用于鲫鱼胆中总黄酮的含量测定。
关键词:鲫鱼胆;总黄酮;含量测定;紫外 －可见分光光度法
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2015)12-2951-04
Determination of Total Flavone in Jasminum nervosum Lour． by UV － VIS Spectrophotometry
ZHOU Qian，TENG Jianbei
(Guangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanning 530001，Guangxi，China)
Abstract:Objective:To determine the content of total flavone in Jasminum nervosum Lour． Methods:Ｒutin and
NaNO2 － Al(NO3)3 system were employed as reference substance and chromogenic reagent，respectively． The total
flavonoids of Jasminum nervosum Lour ． were measured by UV － VIS spectrophotometry at the 507 nm ． Ｒesults :Linear
收稿日期:2015 － 07 － 20
基金项目:广西自然科学基金创新研究团队项目(2011GXNSFF018006)
作者简介:周倩(1990 －) ，女，浙江嘉兴人，硕士研究生，研究方向:中药制剂的分析与检验。
通讯作者:滕建北(1972 －) ，男，广西玉林人，副教授，硕士研究生导师，博士，研究方向:中药民族药品种、品质与资源开发。
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relation of the method was good． The regression equation was Y = 11． 223X － 0． 001(r = 0． 999 3)and the average recov-
ery rate was 101． 73% and ＲSD was 2． 67% ． Conclusion:This method is simple，sensitive and accurate and can be used
for determination the content of flavonoids in Jasminum nervosum Lour．
Key words:Jasminum nervosum Lour．;flavonoids;content determination;UV － VIS spectrophotometry
壮药鲫鱼胆为木犀科植物青藤仔 Jasminum nervosum
Lour．的茎、叶或花［1］。又名侧鱼胆、蟹角胆藤，产于广西壮
族自治区宜山、河池、都安、巴马、东兰、南丹、南宁、武鸣等
地［2］。鲫鱼胆始载于《中国高等植物图鉴》，生阳处疏林或
灌丛中;在海南岛入药［3］。《广西本草选编》中记载，“其味
微苦，性凉。具有清湿热，拔脓生肌。主治痢疾，劳伤腰痛，
疮疡溃烂。”［4］此外，《中华药海》《中国植物志》等相关本草
中收载，关于其原植物、功效、主治都有描述［5 － 6］。经文献
检索发现，其化学成分主要含有黄酮类，三萜及其苷类成
分、挥发油［7］等。现代临床药理作用研究表明，鲫鱼胆用
于治疗菌痢［8］。有关鲫鱼胆质量控制中有效部分的含量
测定方法研究较少，现对鲫鱼胆中总黄酮含量进行测定。
1 材料
1． 1 仪器
HH － S6数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂) ;电热鼓
风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司) ;8453 型紫外—可
见分光光度计(美国安捷伦科技有限公司生产) ;KQ5200B
型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1． 2 试药
芦丁对照品(批号 100080 － 200707，中国药品生物制
品检定研究院) ;乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂
均为分析纯。药材采自广西各地，经广西中医药大学药用
植物园高级园艺师朱意麟老师鉴定为木犀科植物青藤仔
Jasminum nervosum Lour． 的茎、叶或花。阴干后粉碎(过 4
号筛)备用。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液制备
精密称取干燥至恒重的芦丁对照品适量(17． 70 mg) ，
置 50 mL容量瓶中，加乙醇溶解，并定容至刻度，摇匀，即得
浓度为 0． 3540 mg·mL －1的芦丁对照品溶液。
2． 2 供试品溶液制备
取鲫鱼胆粉末 0． 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石
油醚(60 ～ 90℃)50 mL，超声处理 30 min，取出，静置后过
滤，除去石油醚液，精密加入 75%乙醇 65 mL，回流提取 3
次，每次 1 h，滤过，滤液合并，加 75%乙醇定容至 200 mL，
即得供试品溶液。
2． 3 显色系统的筛选［9］
2． 3． 1 直接测定法 分别取芦丁对照品溶液和供试品溶
液各 1 mL，置 10 mL 量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，放置
10 min，以相应溶剂为空白。于 200 ～ 800 nm 波长处测定，
记录最大吸收波长及吸光度。见图 1。
2． 3． 2 AlCl3显色方法 分别取芦丁对照品溶液和供试品
溶液各 1 mL，置 10 mL量瓶中，加 10% AlCl3溶液 1 mL，用
水定容至刻度，摇匀，放置 15 min，以相应溶剂为空白。于
200 ～ 800 nm 波长处测定，记录最大吸收波长及吸光度。
见图 2。
2． 3． 3 硝酸铝显色法 分别取芦丁对照品溶液和供试品
溶液各 1 mL，置 10 mL量瓶中，加 5% NaNO2溶液 1 mL，摇
匀，放置 6 min，加 10% Al(NO3)3溶液 1 mL，摇匀，放置 6
min，加 4% NaOH 溶液 4 mL，用水定容至刻度，摇匀，放置
15 min，以相应溶剂为空白。于 200 ～ 800 nm 波长处测定，
记录最大吸收波长及吸光度。见图 3。
结果显示，硝酸铝显色法测定鲫鱼胆总黄酮时，芦丁对
照品溶液及鲫鱼胆供试品溶液均在 507 nm有最大吸收，故
选择硝酸铝显色方法测定鲫鱼胆中总黄酮的含量。实验结
果见表 1。
表 1 鲫鱼胆总黄酮测定方法考察
测试液 项目 芦丁对照品 鲫鱼胆供试液
直接测定法 Peaks(nm) 359 671
Abs(AU) 0． 797 16 0． 111 41
AlCl3 显色方法 Peaks(nm) 409 329
Abs(AU) 0． 919 13 0． 786 86
硝酸铝显色法 Peaks(nm) 507 507
Abs(AU) 0． 505 64 0． 432 59
芦丁对照品溶液 鲫鱼胆供试液
图 1 直接测定法紫外光谱图
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芦丁对照品溶液 鲫鱼胆供试液
图 2 AlCl3显色方法紫外光谱图
2． 4 标准曲线的制备
精密量取芦丁对照品溶液(0． 3540 mg·mL －1)0． 5、1、
2、4、8、10 mL 分别置 25 mL 量瓶中，加 5% NaNO2溶液 1
mL，摇匀，放置 6 min，加 10% Al(NO3)31 mL，摇匀，放置 6
min，加 4% NaOH溶液 4 mL，加水定容至刻度，摇匀，放置
15 min，以相应溶剂为空白，于 507 nm波长处测定，记录吸
芦丁对照品溶液
鲫鱼胆供试液
图 3 硝酸铝显色法紫外光谱图
光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
计算回归方程为 Y = 11． 223X － 0． 001(r = 0． 999 3) ，表明
芦丁在 7． 08 ～ 141． 6 mg·L －1范围内呈良好线性关系。标
准曲线见图 4。
图 4 芦丁标准曲线
2． 5 精密度实验
精密量取对照品溶液(0． 056 64 mg·mL －1)4 mL，按
标准曲线项下的方法自“置 25 mL容量瓶中”起，依法测定
吸光度，重复测定 6 次，记录吸光度值，ＲSD为 0． 096%。
2． 6 稳定性实验
取同一供试品溶液(南宁老虎岭 20140321) ，照标准曲
线项下的方法，自“置 25 mL 容量瓶中”起，依法测定吸光
度，每隔 10 min测定 1 次，记录 120 min内供试品溶液的吸
光度值，结果供试品溶液在 75 min 内保持稳定，ＲSD 为
1． 24%(n = 7)。
2． 7 重复性实验
取同一批样品粉末 6 份，各 0． 5 g，精密称定，照“2． 2”
项下的方法制备供试品溶液，照标准曲线制备项下的方法，
自“置 25 mL容量瓶中”起，依法测定，记录吸光度值，并计
算含量。实验结果表明该方法重复性良好，ＲSD 为 2． 70%
(n = 6)。
2． 8 加样回收率实验
取同一批(南宁老虎岭 20140321)已知含量的样品
粉末(含无水芦丁 150． 53 mg·g － 1)6 份，各 0． 125 0 g，
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精密称定，分别精密加入芦丁对照品 19． 3 mg，照“2． 2”
项下的方法制备供试品溶液，照标准曲线制备项下的方
法，自“置 25 mL 容量瓶中”起，依法测定，记录吸光度
值，结果平均回收率为 101． 73%，ＲSD 为 2． 67%。实验
结果见表 2。
表 2 加样回收率实验结果
编号
取样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
1 0． 124 9 18． 80 19． 3 38． 87 103． 99 101． 73 2． 67
2 0． 125 1 18． 83 19． 3 37． 74 97． 98
3 0． 125 2 18． 85 19． 3 38． 07 99． 60
4 0． 124 9 18． 80 19． 3 38． 20 100． 50
5 0． 125 2 18． 85 19． 3 38． 89 103． 85
6 0． 125 0 18． 82 19． 3 38． 97 104． 42
2． 9 样品测定
取不同产地，不同采收时间的鲫鱼胆药材 8 批，按
“2． 2”项下方法制成供试品溶液。精密移取供试品溶液
1 mL，照标准曲线项下的方法，自“置 25 mL 容量瓶中”
起依法测定吸光度，对广西不同产地及不同采收时间采
集的 8 批鲫鱼胆药材中的总黄酮进行测定。结果见表
3。
表 3 鲫鱼胆中总黄酮含量层结果(n = 3)
编号
总黄酮含量
(%)
ＲSD
(%)
采集地点 采集时间
1 14． 84 1． 02 南宁市老虎岭 2014． 03． 21
2 17． 31 2． 33 武鸣县三里镇山西村衡山庄 2013． 12． 27
3 16． 79 0． 10 南宁市小高峰 2014． 04． 17
4 18． 24 0． 33 忻城县城关镇上才村休岭 2014． 04． 27
5 13． 46 0． 54 南宁市老虎岭 2014． 06． 26
6 10． 53 1． 99 广西河池大化县岩滩镇 2014． 07． 04
7 18． 46 0． 66 武鸣县锣圩镇十六弄保护区 2014． 07． 04
8 21． 80 1． 19 上林县三里镇石塘村 2014． 07． 09
3 讨论
历版《中华人民共和国药典》总黄酮的含量多以芦丁
为标准，应用 NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH 显色体系进行比
色测定，硝酸铝显色法的测定原理是基于黄酮成分 B 环具
有邻二羟基结构［10］，可与该显色体系显色，能够较准确地反
映植物总黄酮的含量。本文亦对直接测定法，AlCl3显色方
法及硝酸铝显色法进行了比较，结果显示，硝酸铝显色法测
定鲫鱼胆总黄酮时，芦丁对照品溶液及鲫鱼胆供试品溶液均
在 507 nm有最大吸收，故采用硝酸铝显色法进行考察。
“鲫鱼胆”为广西壮族常用药材，但由于历史原因，各
地“鲫鱼胆”药材来源不一，其中以紫金牛科植物空心花
(Maesa perlarius (Lour．)Merr．) (和木犀科植物青藤仔
(Jasminum nervosum Lour．)为主流［11］。本文主要探讨的是
木犀科植物青藤仔(Jasminum nervosum Lour．)。由于不同
产地的鲫鱼胆品种不同，生长的周围环境不同，导致其鲫鱼
胆总黄酮含量有所差异。8 批鲫鱼胆样品中总黄酮含量在
10． 53% ～ 21． 80%，不同批次的鲫鱼胆总黄酮含量差别较
大，以上林县三里镇石塘村的鲫鱼胆总黄酮含量最高。因
此，有必要对不同产地的鲫鱼胆总黄酮进行研究，为其质量
标准的进一步研究提供参考。
据《云南中药资源名录》记载，鲫鱼胆的效用为“消炎、
接骨、解毒、消肿、拔脓、清湿热。治热痢、跌打、化脓性皮肤
病、疔疮、劳伤腰痛。”［12］可见其在外伤治疗上有一定的抗
炎疗效。此外，《中国中药资源志要》也记载了，“全株(青
藤子) :微苦，凉。清湿热，拔毒生肌，接骨。用于痢疾，劳
伤腰痛，疮疡溃烂。分布于台湾、广东、海南、广西、贵州、云
南。生于海拔 300 ～ 1700 米的阳坡疏林中。”［13］使鲫鱼胆
的功效在本草考证上具有一定依据。黄酮类化合物以其广
泛的药理作用备受青睐，该类化合物能防治心脑血管系统
疾病和呼吸系统疾病，具有抗菌抗炎、抗病毒、抗癌、抗氧
化、抗衰老和增强免疫力等药理作用。另据文献记载黄酮
类化合物具有抗炎镇痛作用，在临床可用于治疗脓肿溃疡
以及病原微生物引起的炎症疾病等［14 － 15］。由此可推知鲫
鱼胆的药理作用与黄酮类的成分的功效相符。因而本文所
探讨的总黄酮的含量测定具有一定的实际意义，为后期生
药学鉴别、进一步的化学成分研究以及进一步的药理研究
提供参考，也为进一步完善其质量标准，更好地开发利用资
源提供理论依据。
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