全 文 ：北方园艺２０１５（０８）：１１７～１２０ ·生物技术·
第一作者简介：郭臣臣（１９８８－），男，硕士研究生，研究方向为观赏
园林植物。
责任作者：张黎（１９６２－），女，硕士，教授，研究方向为园林植物与观
赏园艺。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇ＿ｌｉ９９８８＠１６３．ｃｏｍ．
收稿日期：２０１４－１１－１０
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５０８０３１
豆瓣绿愈伤组织诱导及再生体系的建立
郭 臣 臣１，雷 亚 珍１，刘 春２，张 黎１
（１．宁夏大学 农学院，宁夏 银川７５００２１；２．中国农业科学院 蔬菜花卉研究所，北京１０００８１）
摘 要：以豆瓣绿的叶片、叶柄及带芽茎段为试材，筛选最佳外植体类型；使用激素６－ＢＡ与
ＩＢＡ，选出适宜诱导愈伤组织与芽增殖的培养基；研究活性炭对瓶苗生根的影响，选出适合的生根
培养基。结果表明：带芽茎段是诱导愈伤组织的最佳外植体，褐化率仅为６．７％，而叶片和叶柄褐化
严重，二者褐化率均超过６０％；最佳诱导愈伤组织培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，
出愈率１００．００％；最佳不定芽增殖培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，增殖系数为
１３．８；最佳生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋活性炭１．００ｇ／Ｌ。
关键词：豆瓣绿；外植体；再生体系；愈伤组织；诱导
中图分类号：Ｓ ６８２．３６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）０８－０１１７－０４
豆瓣绿（Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ）属胡椒科豆瓣绿属
多年生常绿草本植物，又名青叶碧玉、翡翠椒草，分布在
热带与亚热带地区，约有１ ０００余种［１］。豆瓣绿作为观
叶植物，可用于室内装饰，它的蔓性种类也是理想的吊
盆植物［２］，不仅具有较高的观赏价值，还可以吸收二氧
化硫等有害气体，起到净化室内空气的作用［３］。豆瓣绿
很难获得种子，以无性繁殖为主，繁殖周期长，成苗率
低，难以满足市场的需求。组织培养繁殖速度快、量大、
性状稳定是豆瓣绿快速繁殖的主要手段。以豆瓣绿不
同类型外植体为试材，研究不同激素配比以及不同活性
炭浓度对豆瓣绿愈伤诱导、芽增殖及生根影响，以期为
豆瓣绿再生体系的建立提供依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
选取无病害、生长健壮的豆瓣绿植株，剪取带芽茎
段、叶柄、叶片作为外植体。
１．２ 试验方法
１．２．１ 不同灭菌时间对外植体成活率的影响 用洗洁
精清洗外植体表面，流水冲洗４～５ｈ后，放入超净工作
台上。用７５％的酒精浸泡约３０ｓ后转入０．１％ＨｇＣｌ２灭
菌６、８、１０、１２、１５ｍｉｎ，最后用无菌水漂洗５～６次。灭菌
后的外植体用剪刀将叶片切成面积大小约为１ｃｍ２左右
的方块，分别剪取长度为１ｃｍ左右的带芽茎段和叶柄
放入ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ培养基中，
经过２０ｄ后观察，统计不同灭菌时间下各外植体的污
染率、死亡率和成活率。培养温度２２～２６℃，光照时间
１２ｈ／ｄ，光照强度为２ ０００～２ ５００ｌｘ。
１．２．２ 不同外植体类型对愈伤组织诱导的影响 将灭菌
后的外植体叶片、叶柄、带芽茎段，接种于诱导培养基ＭＳ＋
６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ上，４５ｄ后观察统计。
１．２．３ 豆瓣绿愈伤组织及不定芽诱导 ＭＳ为基本培
养基，分别为添加激素６－ＢＡ（１．０、２．０、３．０ｍｇ／Ｌ）和ＩＢＡ
（０．１、０．５ｍｇ／Ｌ），共６种组合（Ａ１～Ａ６），具体配比见表
３。统计出现愈伤组织的时间、出愈率和出芽率，观察愈
伤组织及不定芽的生长情况，从中筛选出最佳诱导培养
基。每个处理１０瓶，每瓶接种３个，３次重复。
１．２．４ 豆瓣绿不定芽的增殖 ＭＳ为基本培养基，分别
添加激素６－ＢＡ（０．５、１．０ｍｇ／Ｌ）和ＩＢＡ（０．１、０．３ｍｇ／Ｌ），
共４种组合（Ｂ１～Ｂ４），具体配比见表４。３０ｄ后将茎段
产生的丛芽切下，接种到增殖培养基进行增殖培养，记
录增殖的丛芽数，丛芽的生长情况。每个处理５瓶，每
瓶接种３个，３次重复。
１．２．５ 豆瓣绿丛芽生根培养 １／２ＭＳ为基本培养
基，分别为添加激素ＩＢＡ（０．１、０．２ｍｇ／Ｌ）和活性炭
（０、１．０、２．０ｇ／Ｌ），共６种组合（Ｃ１～Ｃ６），具体配比
见表５。待分化的不定芽长至２ｃｍ左右时接种至生
根培养基中，２０ｄ后统计生根数和生根率，平均根
长，筛选出最佳生根培养基。每个处理接种１０瓶，每
瓶接种３株，３次重复。
１．３ 项目测定
污染率（％）＝污染的外植体数／接种外植体总数×
１００％；死亡率（％）＝褐化死亡数／外植体接种总数×
７１１
·生物技术· 北方园艺２０１５（０８）：１１７～１２０
１００％；出愈率（％）＝产生愈伤组织的外植体数／接种的外
植体总数×１００％；出芽率（％）＝愈伤组织的出芽数／出愈
数×１００％；增殖系数＝增殖丛芽数／接种外植体数；平均
根长＝生根总长／分化出的总根数；平均根数＝生根总
数／分化出根的幼苗数。
１．４ 数据分析
试验数据采用Ｅｘｃｅｌ和ＳＰＳＳ软件进行分析。
２ 结果与分析
２．１ 不同灭菌时间对外植体成活率的影响
从表１可以看出，不同灭菌时间下各外植体成活率
不同。叶片用０．１％ ＨｇＣｌ２ 灭菌８ｍｉｎ时，成活率最高
为２１．０％；叶柄用０．１％ ＨｇＣｌ２ 灭菌１０ｍｉｎ时，成活率
最高为１６．７％；而带芽茎段用０．１％ ＨｇＣｌ２ 灭菌１２ｍｉｎ
时，成活率最高为５２．０％。
表１ 灭菌时间对各外植体的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔｓ
灭菌时间
Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｎ ｔｉｍｅ
／ｍｉｎ
叶片Ｌｅａｆ 叶柄Ｐｅｔｉｏｌｅ 带芽茎段Ｓｔｅｍ ｗｉｔｈ ｂｕｄ
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
／％
死亡率
Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
／％
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
／％
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
／％
死亡率
Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
／％
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
／％
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
／％
死亡率
Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ
／％
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ
／％
６ ２４．１ ６３．５ １２．４ ９４．４ ２．１ ３．５ ８４．１ １．３ １４．６
８ ８．２ ７０．８ ２１．０ ７０．２ ２０．６ ９．２ ６６．４ ４．５ ２９．２
１０ ０ １００ ０ ３９．０ ４４．３ １６．７ ４２．６ １５．８ ４１．６
１２ ０ １００ ０ ２９．３ ６０．４ １０．３ ２７．１ ２０．９ ５２．０
１５ ０ １００ ０ １０．５ ７８．７ ６．８ ２３．６ ３２．４ ４４．０
２．２ 不同外植体类型对愈伤组织诱导的影响
由表２可以看出，各外植体的出愈率、褐化率及出
芽率差异显著，带芽茎段出愈率和出芽率最高、褐化率
最低，诱导效果最好。叶片与叶柄在诱导培养中，褐化
严重，褐化率均超过６０．０％。豆瓣绿的最佳外植体为
表２ 不同外植体类型对愈伤诱导的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔ ｔｙｐｅｓ ｏｎ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
外植体类型 出愈率 褐化率 出芽率 分化时间
Ｅｘｐｌａｎｔ
ｔｙｐｅ
Ｒａｔｅ ｏｆ ｃａｌｕｓ
／％
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ
／％
Ｂｕｄｓ ｒａｔｅ
／％
Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ
／ｄ
叶片Ｌｅａｆ ３６．７ ６３．３ ２３．３ ３５
叶柄Ｐｅｔｉｏｌｅ ２３．３ ７６．７ １７．７ ３０
带芽茎段Ｓｔｅｍ ｗｉｔｈ ｂｕｄ ９３．３ ６．７ ９０．０ ３５
带芽茎段。
２．３ 不同激素配比对不定芽诱导的影响
由表３可知，将灭菌后的带芽茎段接入到不定芽诱
导培养基中，不同激素配比出愈率、出芽率差异显著。
在Ａ１和Ａ２低浓度的６－ＢＡ中，出愈率与出芽率随ＩＢＡ
的浓度升高而变大，而Ａ３～Ａ６之间高浓度的６－ＢＡ，出
愈率与出芽率随ＩＢＡ的浓度升高而减小。当６－ＢＡ浓度
为１．０、２．０、３．０ｍｇ／Ｌ时最大出愈率分别为８０．００％、
１００．００％、８６．７０％。Ａ３处理的愈伤组织紧密，丛芽健壮，
叶展开，生长情况良好，表明２种生长调节剂的配比达到
最好的效果。豆瓣绿最佳的诱导培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ。
表３ 不同激素配比对不定芽诱导的影响
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
６－ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
出愈数
Ｃａｌｕｓ ｎｕｍｂｅｒ／个
愈伤组织出芽数
Ｂｕｄｄｉｎｇ ｃａｌｕｓ ｎｕｍｂｅｒ／个
出愈率
Ｒａｔｅ ｏｆ ｃａｌｕｓ／％
出芽率
Ｂｕｄｓ ｒａｔｅ／％
生长状况Ｇｒｏｗｔｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
愈伤组织Ｃａｌｕｓ 丛芽Ｃｌｕｍｐｙ ｂｕｄｓ
Ａ１ １．０ ０．１ １９ １１ ６３．３０ ５７．９０ 疏松，黄绿色 叶展开，瘦弱
Ａ２ １．０ ０．５ ２４ １７ ８０．００ ７０．８３ 紧密，褐色 叶卷曲，瘦弱
Ａ３ ２．０ ０．１ ３０ ２６ １００．００ ８６．６７ 紧密，黄绿 叶展开，健壮
Ａ４ ２．０ ０．５ ２５ １９ ８３．３０ ７６．００ 紧松，淡黄 叶展开，瘦弱
Ａ５ ３．０ ０．１ ２６ ２１ ８６．７０ ８０．７７ 紧密，黄色 叶卷曲，瘦弱
Ａ６ ３．０ ０．５ ２２ １６ ７３．３０ ７２．７３ 紧密，深褐 叶卷曲，瘦弱
２．４ 不同激素配比对不定芽增殖的影响
从表４可以看出，４种处理之间增殖系数差异显著。
当６－ＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ时，ＩＢＡ浓度０．１ｍｇ／Ｌ时出
芽数最多，增殖系数为１３．８。当６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ
时，ＩＢＡ浓度０．３ｍｇ／Ｌ增殖系数为１０．８．故豆瓣绿不定
芽增殖的最佳培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ
０．１ｍｇ／Ｌ。
２．５ 不同培养基对生根的影响
接种１０ｄ后，各处理的瓶苗陆续有根产生，起初为
白色，１５ｄ后白根逐渐变为黄褐色。２０ｄ后对生根的外
植体数、生根数、平均根数、平均根长进行统计。
由表５可以看出，当ＩＢＡ浓度为０．１ｍｇ／Ｌ时，活性
炭浓度为１．０ｇ／Ｌ时，Ｃ２生根数最多，平均根数与平均
根长均显著高于Ｃ１和Ｃ３。当ＩＢＡ浓度为０．２ｍｇ／Ｌ
时，活性炭浓度为１．０ｇ／Ｌ时，Ｃ５生根数最多，平均根
数与平均根长均显著高于Ｃ４和Ｃ６。而Ｃ５的平均根
数与平均根长显著高于Ｃ２，所以，最适宜生根培养基
是１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋活性炭１．０ｇ／Ｌ。
８１１
北方园艺２０１５（０８）：１１７～１２０ ·生物技术·
表４ 不同激素配比对豆瓣绿不定芽增殖的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
６－ＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
ＩＢＡ
／（ｍｇ·Ｌ－１）
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ／个
出芽数
Ｂｕｄｄｉｎｇ ｎｕｍｂｅｒ／个
增殖系数
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ
生长状况
Ｇｒｏｗｔｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
Ｂ１ ０．５ ０．１ １５ ２０７ｄ １３．８ｄ 丛芽密，叶片深绿，展开
Ｂ２ ０．５ ０．３ １５ １７４ｃ １１．６ｃ 丛芽较密，叶片绿，展开
Ｂ３ １．０ ０．１ １５ １２０ａ ８．０ａ 丛芽稀，叶片黄色，有畸形
Ｂ４ １．０ ０．３ １５ １６２ｂ １０．８ｂ 丛芽较稀，叶片黄绿色，卷曲
注：同列不同小写字母表示Ｐ＝０．０５水平差异显著，下同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｓｈｏｗ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ＝０．０５ｌｅｖｅｌ，ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
表５ ＩＢＡ和活性炭对瓶苗生根的影响
Ｔａｂｌｅ ５ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ＩＢＡ ａｎｄ ＡＣ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｏｏｔｉｎｇ
处理 ＩＢＡ 活性炭 接种数 生根数 平均根数 平均根长 生根率
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ／（ｍｇ·Ｌ－１）Ａｃｔｉｖｅ ｃａｒｂｏｎ／（ｇ·Ｌ－１）Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ／个 Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｒｏｏｔｉｎｇ Ａｖｅｒａｇｅ ｒｏｏｔ ｎｕｍｂｅｒ／个 Ａｖｅｒａｇｅ ｒｏｏｔ ｌｅｎｇｔｈ／ｃｍ Ｒｏｏｔｉｎｇ ｒａｔｅ／％
Ｃ１ ０．１ ０ ３０ ７２ ２．４ａ １．８ａ １００
Ｃ２ ０．１ １．０ ３０ １２０ ４．０ｂ ２．３ｂ １００
Ｃ３ ０．１ ２．０ ３０ １０５ ３．５ａ １．５ａ １００
Ｃ４ ０．２ ０ ３０ １０８ ３．６ｂ ２．４ｂ １００
Ｃ５ ０．２ １．０ ３０ １８０ ６．０ｃ ３．９ｄ １００
Ｃ６ ０．２ ２．０ ３０ １２６ ４．２ｂ １．２ｃ １００
３ 结论与讨论
带芽茎段为豆瓣绿组织培养的最佳外植体，褐化率
为６．７％；叶片和叶柄超过６０．０％。豆瓣绿最佳诱导培
养基为ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，出愈率达
１００％，出芽率为８６．６７％。不定芽增殖最佳培养基为
ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ，增殖系数达
１３．８。生根最佳培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋活
性炭１．０ｇ／Ｌ，平均根长为３．９ｃｍ，平均根数为６．０个。
不同外植体因分化程度不同，组织结构不同，故而
对灭菌处理敏感程度有所差异。同时，各组织、各器官
的细胞恢复能力和愈伤组织再分化能力也存在着差异。
因此，选择好外植体的类型对植株再生体系的建立非常
重要。该试验筛选出的最佳外植体类型为带芽茎段，结
果与王涛等［４］的研究结果一致。而与黄靖［５］研究的花
叶豆瓣绿的最佳外植体为叶柄有所差异，与品种有关。
植物激素是植物体形态建成过程的关键因子，适当
的激素配比，才能诱导细胞分裂，启动愈伤组织的形成
和生长以及根、芽的分化等变化［６］。该试验使用６－ＢＡ
与ＩＢＡ ２种激素，一般认为６－ＢＡ／ＩＢＡ比值大有利于长
芽，比值小则有利于生根，该试验结果在不定芽增殖培
养过程中，随着６－ＢＡ／ＩＢＡ比值增大，Ｂ１～Ｂ３增殖逐渐
增大，而６－ＢＡ为１．０ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ时，增殖系数
最小为８．０，说明并非比值越大越利于不定芽增殖。
活性炭在培养基中不仅能吸附有毒物质，也能提供
一个暗环境，避免强光对根生长的抑制［７］，也能吸附外
源激素。因此，添加活性炭的量要恰当。试验表明，活
性炭含量为１．０ｇ／Ｌ时，能显著促进豆瓣绿瓶苗分化出
生根，经练苗移栽后成活率达到１００％，再生瓶苗长势良
好。该方法完善了豆瓣绿的快繁体系，能更好的大规模
发展和推广豆瓣绿组培苗的生产。
参考文献
［１］ 高家春．最佳观叶植物—豆瓣绿［Ｊ］．园林科技信息，２００３（１）：３０．
［２］ 高尚士．观叶植物—豆瓣绿［Ｊ］．新农业，２００８（１）：５３．
［３］ 林大为，韩月琴．红边朱蕉茎尖的离体培养和快速繁殖［Ｊ］．植物生
理学通讯，１９９１，２７（３）：２１１－２１２．
［４］ 王涛，彭立新．豆瓣绿（Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ）的组织培养与快速繁
殖研究［Ｊ］．天津农学院学报，２０１１（２）：１－５．
［５］ 黄靖．花叶豆瓣绿组培技术研究［Ｊ］．安徽农学通报，２０１４，２０（６）：３６．
［６］ 姜黎，张翼，邢梅．红肉猕猴桃离体快速繁殖技术研究［Ｊ］．华中农业
大学学报，２００８，２７（１）：１０１－１０４．
［７］ 刘根林，梁海珍，朱军．活性炭在植物组织培养中的作用概述［Ｊ］．江
苏林业科技，２００１，２８（５）：４６－４８．
Ｃａｌｕｓ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ
ＧＵＯ Ｃｈｅｎ－ｃｈｅｎ１，ＬＥＩ ＹＡ－ｚｈｅｎ１，ＬＩＵ Ｃｈｕｎ２，ＺＨＡＮＧ Ｌｉ １
（１．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｎｉｎｇｘｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ，Ｎｉｎｇｘｉａ ７５００２１；２．Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ ａｎｄ Ｆｌｏｗｅｒｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ，ｐｅｔｉｏｌｅｓ ａｎｄ ｓｔｅｍｓ ｗｉｔｈ ｂｕｄｓ ｏｆ Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ ｗｅｒｅ ｃｈｏｓｅｎ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ
ｅｘｐｌａｎｔ ｔｙｐｅｓ，ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ６－ＢＡ ａｎｄ ＩＢＡ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｕｄ
９１１
·植物保护· 北方园艺２０１５（０８）：１２０～１２３
第一作者简介：霍建飞（１９８１－），男，河北承德人，硕士，助理研究
员，研究方向为植物真菌及线虫病害。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｊｆ２２０３＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：天津市农科院院长基金资助项目（０９０４０１）。
收稿日期：２０１５－０１－２０
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１５０８０３２
蔬菜根结线虫生防细菌的筛选及
菌株ＨＪＴ２－１种类的初步鉴定
霍 建 飞１，任 文 来２，郝 永 娟１，刘 春 艳１，王 勇１，王 万 立１
（１．天津市植物保护研究所，天津３００３８１；２．廊坊市文安县农业局，河北 廊坊０６５８００）
摘 要：以天津地区７个区县的蔬菜大棚土壤中分离出的３０６株细菌菌株为试材，采用亚甲
基蓝染色法，研究３０６株细菌菌株发酵液对南方根结线虫２龄幼虫的影响。结果表明：细菌菌株
ＨＪＴ２－１发酵液对南方根结线虫２龄幼虫的校正死亡率较高为８１．３％，其温室盆栽防效为
５５．６％，略低于阿维菌素防效。采用对细菌核糖体ＤＮＡ的内转录间隔区进行分析的方法将菌株
ＨＪＴ２－１初步鉴定为假单胞菌属细菌。该试验获得了对根结线虫２龄幼虫具有较高致死率的细
菌菌株ＨＪＴ２－１，为开发防治根结线虫的生防制剂奠定了基础。
关键词：蔬菜根结线虫；生防细菌；筛选；鉴定
中图分类号：Ｓ ４３６．４４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１５）０８－０１２０－０４
根结线虫（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ．）是一类在蔬菜上为害
极大的植物病原线虫，能侵染的植物超过３ ０００种［１］，尤
其以茄科、葫芦科和十字花科等蔬菜受害最重［２］。根结
线虫不仅在蔬菜大棚、温室中为害，近几年有逐步向露
地栽培蔬菜为害的趋势［３－４］。目前天津市设施蔬菜发展
迅速，至２０１３年，设施蔬菜面积已超过４０ ０００ｈｍ２，
２００９、２０１０年对天津市各区县根结线虫病发生情况调
查，发现西青、北辰、津南、东丽、静海、武青、宝坻、蓟县等
８区县的蔬菜大棚中均有不同程度的根结线虫病为害，
其中一般发病地块蔬菜减产２０％～３０％，严重地块减产
达５０％以上。生产上主要应用化学农药对蔬菜根结线
虫病进行防治，而化学杀线剂一般毒性较高，不仅污染
环境、对人体有伤害，且容易产生抗药性［５］，防治效果也
并不理想。因此，人们的视线逐渐转移到生物防治上
来。生防菌株具有不污染环境、不产生抗药性、防治效
果稳定、对人畜安全等优点，因此筛选出高效的防治线
虫的生防菌株成为众多学者研究的目标。目前杀线虫
微生物种类较多，包括细菌、真菌、放线菌等。而细菌由
于容易定植、培养，且对根结线虫的防治效果较稳定，具
有广阔的市场前景和开发力。该研究旨从天津各区县
蔬菜大棚土壤中分离的细菌菌株中筛选出对根结线虫
二龄幼虫具有较高致死率的菌株，以期为开发研制高效
的杀线虫生物制剂奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
供试菌株为从天津西青、北辰、东丽、武清、静海、宝
坻、蓟县等区县的蔬菜大棚土壤根际分离的３０６株细菌
菌株。供试番茄品种为“白果强丰”。供试根结线虫均
为南方根结线虫。
１．２ 试验方法
１．２．１ 根际细菌的采集与分离 在天津各区县的蔬菜
大棚地块采集根际土壤样品，采用稀释分离法，于ＮＡ
培养基（牛肉膏３ｇ，蛋白胨５ｇ，氯化钠１０ｇ，琼脂１７ｇ，
水１ ０００ｍＬ，ｐＨ ７．２）平板上进行分离，所分离细菌纯化
后保存、备用
。
ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ；ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃａｒｂｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｃｒｅｅｎ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ
ｗｉｔｈ ｂｕｄｓ ｗａｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｃａｌｕｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ ｗａｓ ｏｎｌｙ ６．７％，ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅａｆ ａｎｄ ｐｅｔｉｏｌｅ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ
ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ６０％．Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ
ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｗａｓ １００．００％；ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｓｈｏｏｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．１ｍｇ／Ｌ ａｎｄ ｔｈｅ
ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ １３．８；ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｒｏｏｔ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ １／２ＭＳ＋ＩＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＡＣ １．０ｇ／Ｌ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｅｐｅｒｏｍｉａ ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ；ｅｘｐｌａｎｔ；ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ；ｃａｌｕｓ；ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
０２１