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菜头肾脂溶性成分研究



全 文 :— 376—
第 4 1 卷 第 4 期温 州 医 学 院 学 报
·临床经验·
菜头肾脂溶性成分研究
谢自新1,张园1,蔡进章2,林观样3,董建勇1
(1.温州医学院 药学院,浙江 温州 325035;2.温州医学院附属第二医院 药剂科,浙江 温州
325000;3.温州医学院附属第一医院 药剂科,浙江 温州 325000)
[摘 要]目的:对菜头肾的脂溶性成分进行分析。方法:应用气 -质联用技术对菜头肾的石油醚部位进
行化学成分分析,通过质谱分析及Nist谱库进行检索确定化合物结构。结果:从菜头肾的石油醚部位鉴
定了63种成分,主要成分为:2,2,6三甲基 -1-(3-甲基 -1,3-布他酮)-5-亚甲基 -7-氧杂三环[4,1,0]
庚烷(55.05%)、4,7,7-三甲基 -双环[2,2,1]庚 -2-酮(34.60%)、2-甲基 -3-(3-甲基 -丁二烯基)-2-
(4-甲基 -3-戊烯基)环氧丁烷(1.40%)、4,8α -二甲基 -6-(1-甲基乙烯基)-3,5,6,7,8,8α六氢
化萘(0.85%)、癸烷(0.73%)、萘(0.67%)、3-乙氧基 -(3,β)-胆甾 -5-烯(0.52%)、角鲨烯(0.40%)、
3-甲基 -1-乙基苯酚(0.36%)、2-辛基 -邻苯二甲酸酯(0.33%)、(3,β)-豆甾 -5,22双烯 -3-醇醋酸盐
(0.29%)、2-甲基烯丙基邻苯二甲酸乙酯(0.27%)、4-甲基 -3-环己烯 -1-甲醛(0.27%)、9-羟基 -9-硼杂双
环[3,3,1]壬烷(0.22%)、4-羟基环己酮(0.20%)、2-甲基 -十四烷基亚硫酸酯(0.20%)等。结论:在
该植物中发现以上化合物,相关报道鲜见。
[关键词] 菜头肾;脂溶性成分;气 -质联用技术
[中图分类号] R284.1[文献标识码] B [文章编号] 1000-2138(2011)04-0376-04
菜头肾(Championella sarcorrhizus)又名肉
根马蓝,土太子参,为爵床科黄掠草属的多年生草
本植物,为浙江特有种,其名最早见于《植物分类
学报》[1]。该植物是浙南、浙西南地区广为流传的一
味民间草药,为浙南地区常用补肾方剂“七肾汤”的
君药。性味微甘,凉。块状肉质根养阴补肾,用于
肾虚腰痛,阴虚牙痛,迁延型或慢性肝炎,肾炎或
肾盂肾炎等。茎、叶清热解毒,用于急性传染性肝
炎,外用治疔疮疖肿,肌腱扭伤。目前已实现了人
工栽培。至今菜头肾的化学成分研究鲜见文献报道。
为了更好的利用这一资源,进一步研究其作用机制,
我们对其脂溶性成分进行了分离鉴定,确定主要成
分63种。现报告如下。
1 仪器和试药
Agilent6890N-5975B气相色谱-质谱联用仪(美
国惠普公司);石油醚(沸程60~90 ℃)为国产分
析纯(上海试剂总厂)。
植物于2007年9月采自浙江省温州市平阳县,
由温州医学院附属第二医院药剂科蔡进章副主任药
师和温州医学院附属第一医院药剂科林观样副主任
药师鉴定为菜头肾C.sarcorrhizus。块状肉质根,
自然干燥,粉碎。
2 GC-MS分析条件
2.1色谱条件 HP-5MS石英弹性毛细管柱(30 m×
250μm×0.25μm)。载气He,流量1 mL·min-1。进
样口温度250 ℃。色谱柱初始温度70 ℃,保持3
min,以8 ℃每分钟程序升温至280 ℃,保留20
min。进样量1μL,不分流进样。
2.2质谱条件 离子源EI70eV。离子源温度230 ℃。
四极杆温度150 ℃。质量范围50~500 m/z全程扫
描。Nist谱库检索对照。
3 分析样品的制备
溶剂为石油醚常压精馏收集的60~70 ℃的馏
分。菜头肾粗粉75 g,石油醚200 mL室温浸提2
次,每次48 h,合并浸液,过滤去渣,常压、70 ℃
回收溶剂,得乳白色石油醚提取物,移入10 mL量
瓶中,加石油醚至刻度,摇匀,过0.45μm滤膜,作
为供试品溶液。另取等量精馏石油醚,常压、70 ℃
回收溶剂,残留液移入10 mL量瓶中,加石油醚至
刻度,过0.45μm滤膜,作空白对照品溶液。
收稿日期:2011-01-13
作者简介:谢自新(1 9 6 6 -),男,甘肃甘谷人,主管药师。
通讯作者:董建勇,教授,Email:jianyd163@163.com。
第 4 1 卷第 4 期
2011 年 7 月
温 州 医 学 院 学 报
Journal of Wenzhou Medical College
Vol.41 No.4
Jul.2011
— 377—
第 4 1 卷 第 4 期
4 结果和讨论
采用Agilent6890N-5975B 按上述条件对菜头肾
脂溶性成分进行分析,得总离子流图和分析表,对
总离子流图中的主要条峰经质谱扫描得质谱图,经
质谱计算机数据库检索,按各色谱峰的质谱裂片与
数据库文献核对,并根据空白对照品溶液扣除石油
醚溶剂残留峰。确定主要脂溶性成分63种,并对色
谱峰用面积归一化法确定各组分得质量分数。分析
结果见表1。
表1 菜头肾脂溶性63种主要化学成分总结表
NO.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
tR min-1
5.28
5.58
5.75
5.89
6.18
6.47
7.12
7.49
7.60
7.73
8.34
8.54
8.88
9.08
9.21
9.45
9.72
9.81
9.97
10.29
10.42
10.77
11.29
11.49
11.60
11.69
11.84
12.33
12.47
12.79
13.19
13.41
13.53
14.84
15.74
15.93
17.09
17.46
17.93
分子式
C10H22
C9H12
C9H12
C9H12
C10H20
C10H22
C10H12
C11H22
C9H10O
C8H15BO
C10H14
C11H24
C14H29Cl
C10H16O
C9H16
C10H12
C16H15NO2
C12H26
C10H10
C12H24O
C10H8
C13H28
C10H20
C9H16BrNO
C9H16O
C15H32O3S
C12H26
C13H28
C11H10
C11H10
C12H26O
C44H90
C54H108Br2
C19H34O4
C15H20O
C15H24O
C16H34
C12H22
C12H24Br2
分子质量
142.1
120.2
120.3
120.1
140.1
142.1
132.1
154.2
134.1
138.1
134.1
156.2
232.2
152.1
124.1
132.2
253.1
172.2
130.1
184.2
128.1
184.1
140.2
233.2
140.1
292.2
170.2
184.2
142.2
142.1
186.2
618.7
914.7
326.2
216.2
220.2
226.3
166.2
326.0
相对含量(%)
0.04
0.05
0.36
0.25
0.13
0.73
0.55
0.05
0.04
0.22
0.16
0.23
0.04
0.02
0.02
0.02
0.07
0.04
0.01
0.02
0.67
0.03
0.01
0.02
0.05
0.02
0.06
0.03
0.04
0.03
0.03
0.02
0.06
0.02
0.03
0.03
0.04
0.03
0.04
拟合度(%)
96
95
95
95
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
97
96
96
96
96
96
96
96
化合物
2-甲基 -3-乙基庚烷 2-methyl-3-ethyl-Heptane
丙基苯酚 propyl-Benzene
3-甲基 -1-乙基苯酚 3-methyl-1-ethyl-Benzene
4-甲基 -1-乙基苯酚 4-methyl-1-ethyl-Benzene
4-丙基 -3-庚烯 4-propyl-3-Heptene
癸烷Decane
3a,4,7,7a,-四氢 -4,7-亚甲基 -1H-茚
3a,4,7,7a-tetrahydro-4,7-Methano-1H-indene
己基环戊烷 hexyl-Cyclopentane
2-茚满醇 2-Indanol
9-羟基 -9-硼杂双环[3,3,1]壬烷
9-hydroxy-9-Borabicyclo[3.3.1]nonane
1-甲基 -3-(1- 甲基乙基)苯酚
1-methyl-3-(1-methylethyl)-Benzene
十一烷 Undecane
1-氯十四烷 1-chloro-Tetradecane
(E)-2,3-环氧蒈烷 (E)-2,3-Epoxycarane
2-甲基 -双环[2,2,2]辛烷 2-methyl-Bicyclo[2.2.2]octane
1,4-二甲基 -2-乙基苯酚 1,4-dimethyl-2-ethenyl-Benzene
桂皮酰基苯氨基甲酸 Cinnamyl carbanilate
1,3-二甲基癸烷 2,3-dimethyldecane
1,4-二氢化萘 1,4-dihydronaphthalene
十二醛 Dodecanal
萘 Naphthalene
2,6-二甲基十一烷 2,6-dimethyl-undecane
2-甲基丙基环己烷 (2-methylpropyl)-Cyc ohexane
N[4-溴代 -n-丁基]-2-哌啶酮
N-[4-bromo-n-butyl]-2-Piperidinone
1-(2,2- 二甲基环戊基)乙炔酮
1-(2,2-dimethylcyclopentyl)-Ethanone
2- 丙基十一烷亚硫酸酯
Sulfurous acid,dodecyl 2-propyl ester
3,4-二甲基癸烷 3,4-dimethyl-Decane
十三烷 Tridecane
1-甲基萘 1-methyl-Naphthalene
2-甲基萘 2-methyl-Naphthalene
2-乙基癸醇 2-ethyl-1-Decanol
四十四烷 Tetratetracontane
1,54-二溴五十四烷 Tetrapentacontane,1,54-dibromo-
环丁基十三烷草酸酯
Oxalic acid,cyclobutyl tridecyl ester
反 -3,6-二甲基 -6-乙基 -5-异丙烯基 -4,5,6,7四氢苯并呋喃
trans-3,6-dimethyl-6-ethenyl-5-isopropenyl-4,5,6,7-
tetrahydro-Benzofuran
苯甲酸丁酯 Butylated Hydroxytoluene
十六烷 Hexadecane
2,2-二甲基十氢化萘 2,2-dimethyl-decahydro-naphthalene
2-甲基 -1,2-二溴十一烷 2-methyl-1,2-dibromo-undecane
谢自新,等:菜头肾脂溶性成分研究
— 378—
第 4 1 卷 第 4 期温 州 医 学 院 学 报
菜头肾脂溶性成分主要为:2,2,6三甲基 -1-
(3-甲基 -1,3-布他酮)-5-亚甲基 -7-氧杂三环[4,
1,0]庚烷(55.05%)、4,7,7-三甲基 -双环[2,2,
1]庚 -2-酮(34.60%)、2-甲基 -3-(3-甲基 -丁二烯
基)-2-(4-甲基 -3-戊烯基)环氧丁烷(1.40%)、4,
8α -二甲基 -6-(1-甲基乙烯基)-3,5,6,7,8,
8α六氢化萘(0.85%)、癸烷(0.73%)、萘(0.67%)、
3-乙氧基 -(3,β)-胆甾 -5-烯(0.52%)、角鲨烯
(0.40%)、3-甲基 -1-乙基苯酚(0.36%)、2-辛基 -
邻苯二甲酸酯(0.33%)、(3,β)-豆甾 -5,22双烯 -
3-醇醋酸盐(0.29%)、2-甲基烯丙基邻苯二甲酸乙
酯(0.27%)、4-甲基 -3-环己烯 -1-甲醛(0.27%)、
9-羟基 -9-硼杂双环[3,3,1]壬烷(0.22%)、4-
羟基环己酮(0.20%)、2-甲基-十四烷基亚硫酸酯
接表1
NO.tR min-1 分子式 分子质量 相对含量(%)拟合度(%)化合物
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
18.24
18.50
18.58
19.05
20.47
20.88
21.70
22.05
22.94
25.73
26.55
26.76
28.34
30.69
31.12
31.88
38.34
39.17
40.96
41.82
42.54
44.75
45.24
45.84
十六醇 1-Hexadecanol
2,6,10,15-四甲基十七烷
2,6,10,15-tetramethyl-heptadecane
2,6,10,14-四甲基十六烷
2,6,10,14-tetramethyl-hexadecane
1,10-二氯癸烷 1,10-dichlorodecane
(Z)-3,7-二甲基 -2,6-辛二烯
(Z)-3,7-dimethyl-2,6-octadienal
2- 甲基烯丙基邻苯二甲酸乙酯
Phthalic acid,ethyl 2-methylallyl ester
3S,4R,5R,6R-3,6-二甲基 -4,5-二羟甲基环戊烯
(3S,4R,5R,6R)-4,5-bis(hydroxymethyl)-3,6-
dimethylcyclohexene
2- 甲基丙基 -1,2苯二羧酸丁酯
1,2-Benzenedicarboxylic acid,butyl 2-methylpropyl ester
烯丙基十八烷基草酸酯 Oxalic acid, llyl octadecyl ester
2- 丁基 - 十四烷基亚硫酸酯
Sulfurous acid,butyl tetradecyl ester
4-羟基环己酮 4-hydroxy-cyclohexanone
1-氯 -二十七烷 1-chloro-heptacosane
2-辛基 -邻苯二甲酸酯 Di-n-octyl phthalate
2- 甲基 - 十四烷基亚硫酸酯
Sulfurous acid,2-propyl tetradecyl ester
角鲨烯 Squalene
2- 丙基 - 十三烷基亚硫酸酯
Sulfurous acid,2-propyl tridecyl ester
2-辛炔 -1-醇 2-Octyn-1-ol
(3,β)-豆甾 -5,22双烯 -3-醇醋酸盐
Stigmasta-5,22-dien-3-ol,acetate,(3.beta.)-
3-乙氧基 -(3,β)- 胆甾 -5- 烯,
3-ethoxy-(3.beta.)-Cholest-5-ene
4,8α -二甲基 -6-(1-甲基乙烯基)-3,5,6,7,8,8α六氢化萘
4,8a-dimethyl-6-(1-methylethenyl)-3,5,6,7,8,8a-
hexahydro-2(1H)Naphthalenone,
2-甲基 -3-(3-甲基 -丁二烯基)-2-(4-甲基 -3-戊烯基)环氧丁烷
2-Methyl-3-(3-methyl-but-2-enyl)-2-(4-methyl-pent-3-
enyl)-oxetane
2,2,6-三甲基 -1-(3-甲基 -1,3-布他酮)-5-亚甲基 -7-氧
杂三环[4,1,0]庚烷
2,2,6-trimethyl-1-(3-methyl-1,3-butadienyl)-5-
methylene-7-Oxabicyclo[4.1.0]heptane
4,7,7-三甲基 -双环[2,2,1]庚 -2-酮
4,7,7-Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one
4-甲基 -3-环己烯 -1-甲醛
3-Cyclohexene-1-carboxaldehyde,4-methyl-
C16H34O
C21H44
C21H42
C10H20Cl2
C10H16O
C14H16O4
C10H18O2
C16H22O4
C23H42O4
C18H38O3S
C6H10O2
C27H55Cl
C24H38O4
C17H36O3S
C30H50
C16H34O3S
C8H10O
C29H4204
C29H50O
C15H22O
C15H26O
C15H22O
C13H21NO
C8H12O
242.3
296.3
282.3
210.1
152.1
248.1
170.1
278.2
382.3
334.3
114.1
414.4
390.3
320.2
410.4
306.2
126.1
454.3
414.4
218.2
222.2
218.1
207.2
124.1
0.03
0.08
0.08
0.01
0.04
0.27
0.08
0.06
0.03
0.04
0.20
0.04
0.33
0.20
0.40
0.04
0.10
0.29
0.52
0.85
1.40
55.05
34.60
0.27
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
96
95
98
96
96
96
96
95
95
98
96
96
— 379—
第 4 1 卷 第 4 期
(0.20%)等。
参考文献:
[1] 林泉. 浙南药用植物中得一新种——菜头肾[J].植物分类学
报,1975,13(2):93-94.
[2] 《浙南本草新编》编写组.浙南本草新编[M].杭州:浙江人
民出版社,1976:324-326.
[3] 浙江药用植物志编写委员会.浙江药用植物志(下册)[M].杭
州:浙江科学技术出版社,1994:1189-1 90.
(本文编辑:吴健敏)
·临床经验·
GDNF在先天性肺囊性腺瘤样畸形中的表达及其意义
周玲玲1,王宗敏1,赵志光1,王利群2
(1.温州医学院附属第二医院 病理科,浙江 温州 325027;2.西安市第四医院 病理科,陕西 西安
710000)
[摘 要]目的:研究胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line derived neutrotrophic factor,
GDNF)和细胞增殖指数(Ki-67)在先天性肺囊性腺瘤样畸形(congenital cysticadenomatoid malfor-
mation of lung,CCAM)中的表达,探讨其在CCAM病理分型及发病机制中的意义。方法:选择CCAM(CCAM
组)58例,儿童正常肺组织(CG1组)10例和囊肿周围相对正常肺组织(CG2组)10例,用免疫组化法检
测Ki-67和GDNF的表达,用原位杂交法检测GDNF mRNA的表达,用FFPET PCR提取GDNF DNA进行基因测
序。结果:GDNF在CCAM中的表达CCAMⅠ型强于CCAMⅡ和Ⅲ型(P<0.01),CCAMⅡ型强于CCAMⅢ型(P
<0.01);CCAM组高于CG1组和CG2组(P<0.01)。CCAM组未发现有GDNF基因表达的异常。CCAM组Ki-67表
达较CG1组和CG2组明显升高(P<0.01);Ki-67在CCAMⅠ组中明显较CCAMⅡ、Ⅲ组高(P<0.01)。直线
相关分析结果:GDNF与Ki-67在CCAM中表达的关系,R=0.559,P<0.01,呈显著正相关。结论:CCAM和
细胞增殖失调有关。GDNF可能是通过影响细胞增殖和凋亡活动来参与CCAM的形成,但CCAM形成和GDNF基
因表达异常可能无关。
[关键词] GDNF;CCAM;PCR;免疫组化;原位杂交
[中图分类号] R725.6[文献标识码] B [文章编号] 1000-2138(2011)04-0379-03
先天性肺囊性腺瘤样畸形(congenital cysti-
cadenomatoid malformation of lung,CCAM)是
一种较少见但严重影响儿童肺组织发育的先天性肺
组织畸形。CCAM的确切病因尚不完全清楚,目前国
际国内对其临床和影像诊断的报道比较多,而对于
其发病机制的研究鲜见报道。本研究通过观察CCAM
组织中胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell
line derived neutrotrophic factor,GDNF)和
细胞增殖指数(Ki-67)的表达,从临床病理学和分
子生物学角度讨论其在CCAM病理诊断、病理分型及
发生、发展过程中的作用及其相关机制。
1 材料和方法
1.1 材料 CCAM组标本为2000-2008年我院及浙江
省儿童医院年龄≤15岁CCAM患者(CCAM组)手术
切除标本的存档蜡块58例(CCAMI型35例,CCAMI
型15例,CCAMII型8例)。同时取同期我院因其他
疾病尸检的儿童肺组织10例作为对照组1(CG1组),
CCAM囊肿周围相对正常肺组织10例作为对照组2
(CG2组)。切片均由主任医师复诊确认。
1.2试剂 标本用10%中性甲醛固定,常规脱水、
石蜡包埋,切片厚度为4μm。浓缩型兔抗GDNF多
克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术公司;免疫
组化EliVision法检测试剂盒和DAB显色剂购自福
州迈新生物技术开发公司;GDNF原位杂交检测试剂
收稿日期:2010-10-25
基金项目:温州市科技局科研基金资助项目(Y20080233)。
作者简介:周玲玲(1 9 8 3 -),女,浙江衢州人,住院医师,
硕士。
通讯作者:赵志光,副主任医师,Email:zhiguang1973@163.
com。
第 4 1 卷第 4 期
20 1 年 7 月
温 州 医 学 院 学 报
Journal of Wenzhou Medical College
Vol.41 No.4
Jul.2011