全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20130110(011)
［基金项目］ 河北省自然科学基金项目(C2010001354)
［第一作者］ 罗赛赛，硕士，从事中草药有效成分提取分离研究，Tel:13398671073，E-mail:515277424@ qq． com
［通讯作者］ * 赵桂琴，博士，副教授，从事天然抗病毒活性产物研究与开发，Tel:0314-2291908，E-mail:zhaoguiqin1971@ sina． com． cn
素馨花总环烯醚萜苷的大孔树脂富集纯化工艺优选
罗赛赛，郝婷，赵桂琴*
( 承德医学院中药研究所，河北省中药研究与开发重点实验室，河北 承德 067000)
［摘要］ 目的:优选大孔树脂富集纯化素馨花总环烯醚萜苷的工艺条件。方法:采用 HPLC测定橄榄苦苷含量。以橄榄
苦苷为指标成分，通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号，通过单因素试验和正交试验考察大孔树脂富集纯化工艺。结
果:XDA-16 型大孔树脂吸附洗脱性能最好，最佳纯化工艺条件为上样液生药质量浓度 0. 08 g·mL －1，上样量 0. 7 g·g －1，树脂柱
径高比 1∶ 3，吸附流速 2 BV·h －1，加 8 BV水洗除杂，用 70%乙醇 4 BV于 2 BV·h －1流速洗脱，收集洗脱液。结论:该工艺条件
稳定可行，XDA-16 型大孔树脂可有效地富集纯化素馨花总环烯醚萜苷。
［关键词］ 素馨花;总环烯醚萜苷;大孔树脂;正交试验;橄榄苦苷
［中图分类号］ R283. 6，R284. 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)15-0013-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013150013
Optimization of Enrichment and Purification Technology for
Total Iridoid Glycosides from Jasminum officinale by Macroporous Resin
LUO Sai-sai，HAO Ting，ZHAO Gui-qin*
(Institute of Chinese Traditional Medicine，Chengde Medical University，Hebei Provincal Key Laboratory
of Research and Development of Chinese Medicine，Chengde 067000，China)
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Aug．，2013
［Abstract］ Objective:To optimize enrichment and purification technology of total iridoid glycosides from
Jasminum officinale by macroporous resin． Method:With oleuropein as index， its content was determined by
HPLC． Types of macroporous resin were optimized by static adsorption-elution test，enrichment and purification
technology was investigated by orthogonal test and single-factor tests． Result:XDA-16 macroporous resin showed
better effect than others，optimum purification technology was as following: the concentration of sample liquid
0. 08 g·mL －1，height-diameter ratio of 1∶ 3，absorption velocity 2 BV·h －1，dosage of sample liquid of 0. 7 g·
g －1，washed impurity with 8 BV water，then eluted wtih 4 BV 70% ethanol at 2 BV·h －1，collected eluent．
Conclusion:This optimized technology was stable and feasible． XDA-16 macroporous resin had a good enrichment
and purification effect on total iridoid glycosides from J． officinale．
［Key words］ Jasminum officinale; total iridoid glycosides; macroporous resin; orthogonal
test;oleuropein
素馨花又名素馨针、耶悉茗花，具有疏肝解郁、
行气止痛之功效，民间用于治疗消化不良、十二指肠
球部溃疡及慢性肝炎、肝硬化等症［1］。赵桂琴等［2］
研究表明素馨花中环烯醚萜苷类及三萜皂苷类成分
为其抗 HBV活性的主要物质基础。郝婷等［3］对素
馨花中总环烯醚萜苷提取工艺进行研究，结果表明
乙醇冷浸提取法可使总环烯醚萜苷纯度 ＞ 40%。为
进一步提高醇冷浸提取物中总环烯醚萜苷纯度，本
实验采用大孔吸附树脂技术对其进行富集纯化，以
橄榄苦苷含量为跟踪指标，通过比较 8 种大孔树脂
的吸附与解吸附性能，筛选最佳大孔树脂型号，并优
选其富集纯化工艺，为素馨花中环烯醚萜苷类成分
的深入研究提供依据。
1 材料
LC-10AS型高效液相色谱仪(CTO-10A 型柱温
箱，DGU-3A型脱气机，SPD-10A 型紫外检测器，LC-
10AS型二元泵，TL9900 色谱工作站，日本岛津) ，
Hp-8453 型紫外分光光度计(美国安捷伦公司) ，
AG245 型分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司) ，
RZ-6 型 冷 冻 干 燥 机 (德 国 MARTIN CHRIST
公司)。
D-101，AB-8 型大孔树脂(天津兴南允能高分子
技术有限公司) ，XDA-1，XDA-16 型大孔树脂(西安
蓝晓科技新材料股份有限公司) ，HPD-100，HPD-
400 型大孔树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公
司) ，ME-1，ME-2 型大孔树脂(天津欧瑞生物科技有
限公司) ，素馨花(购自亳州药材交易中心，经军事
医学科学院放射与辐射医学研究所李彬博士鉴定为
木犀科茉莉属植物素馨花 Jasminum officinale L． var．
grandiflorum的干燥花蕾) ，橄榄苦苷对照品(实验
室自制，纯度 99. 5%) ，乙腈为色谱纯，其余试剂为
市售分析纯。
2 方法与结果
2. 1 橄榄苦苷的含量测定
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精密称取橄榄苦苷对
照品 20. 2 mg，置 50 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻
度，摇匀，即得。
2. 1. 2 色谱条件 ZORBAX SB-C18色谱柱(4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ，流速 1. 0 mL·min －1，柱温
25 ℃，检测波长 232 nm，流动相乙腈-水(22∶ 78) ，见
图 1。
A．对照品;B．供试品;1. 橄榄苦苷
图 1 素馨花 HPLC
2. 1. 3 线性关系考察 精密吸取橄榄苦苷对照品
溶液 0. 5，1，2，4，6 mL，分别置于 10 mL 量瓶中，加
甲醇定容，按上述色谱条件进样，以质量浓度为横坐
标，峰面积为纵坐标，得回归方程 Y = 4. 868 ×
105X － 3. 578 × 106(r = 0. 999 9) ，表明橄榄苦苷在
20. 2 ～ 242. 4 mg·L －1呈良好线性。
2. 1. 4 乙醇提取物的制备［3］ 称取素馨花药材
1 kg，加 12 倍量 60%乙醇冷浸提取 3 次，每次 48 h，
合并提取液，高速离心(9 000 r·min －1，10 min) ，回
收乙醇，冷冻干燥得浅黄色粉末 400 g，备用。
2. 1. 5 上样液的制备 取乙醇提取物适量，加水制
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Vol． 19，No． 15
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成 0. 04 g·mL －1的药液，高速离心，取离心液，即得
(橄榄苦苷质量浓度 2. 7 g·L －1)。
2. 2 大孔树脂筛选
2. 2. 1 大孔树脂的预处理 称取不同型号的大孔
吸附树脂适量，用 95%乙醇浸泡 24 h，湿法装柱，加
95%乙醇洗脱，至流出液与水混合不呈白色浑浊，用
水洗至无醇味，备用。
2. 2. 2 树脂型号的选择 将预处理好的 8 种
(D-101，AB-8，XDA-1，XDA-16，HPD-100，HPD-400，
ME-1，ME-2)大孔树脂各 2 g 分别置于具塞锥形瓶
中，分别加入上样液 50 mL 静态吸附，室温放置
18 h，每 2 h 振摇 1 次。取上清液，测定橄榄苦苷质
量浓度，计算树脂的比吸附量分别为 44. 52，20. 08，
53. 00，57. 35，53. 30，47. 32，50. 37，50. 75 mg·g －1。
将吸附饱和的不同树脂置于具塞锥形瓶中，各加入
95%乙醇 50 mL静态洗脱，室温放置 18 h，每 2 h 振
摇 1 次，测定洗脱液中橄榄苦苷质量浓度，计算洗脱
率依次为 85. 72%，85. 06%，87. 59%，91. 10%，
88. 60%，84. 58%，86. 39%，88. 07%，说明 XDA-16
型大孔树脂的吸附和洗脱能力最好。
比吸附量 =(吸附前上样液中橄榄苦苷质量 －吸附后
样品液中橄榄苦苷质量)/树脂量;
洗脱率 =洗脱液中橄榄苦苷质量 /吸附量。
2. 3 XDA-16 型大孔树脂富集纯化工艺优选
2. 3. 1 正交试验考察［4-6］ 选取上样液质量浓度、
树脂柱径高比、吸附流速为考察因素，树脂用量 17 g
(柱床体积 30 mL) ，上样液 250 mL(生药质量浓度
0. 04 g·mL －1) ，加 10 BV水洗除杂，用 5 BV 75%乙
醇洗脱，测定洗脱液中橄榄苦苷含量，以回收率为指
标，按 L9(3
4)正交表进行试验，因素水平见表 1，试
验安排及结果见表 2，方差分析见表 3。
回收率 =(洗脱液中橄榄苦苷质量 /上样液中橄榄苦苷
质量)× 100%
表 1 素馨花总环烯醚萜苷的
大孔树脂富集纯化工艺优选正交试验因素水平
水平
A上样液质量
浓度 / g·mL －1
B 径
高比
C吸附流速
/BV·h －1
D(空白)
1 0. 04 1∶ 3 1 1
2 0. 06 1∶ 6 2 2
3 0. 08 1∶ 10 3 3
由直观分析可知，各因素对纯化工艺的影响顺
序为 C ＞ A ＞ B。方差分析表明，A，B，C 因素均无显
著性差异。结合工业生产实际，确定优化方案为
表 2 素馨花总环烯醚萜苷的
大孔树脂富集纯化工艺优选正交试验安排
No． A B C D(空白)
总环烯醚
萜苷提出率
/%
1 1 1 1 1 94. 12
2 1 2 2 2 88. 66
3 1 3 3 3 87. 47
4 2 1 2 3 94. 32
5 2 2 3 1 88. 39
6 2 3 1 2 94. 38
7 3 1 3 2 89. 29
8 3 2 1 3 95. 47
9 3 3 2 1 90. 80
K1 270. 25 277. 73 283. 97 273. 31
K2 277. 03 272. 52 273. 78 272. 33
K3 275. 56 272. 65 265. 15 277. 26
R 5. 31 5. 08 18. 82 4. 93
表 3 提出率方差分析
方差来源 SS f MS F P
A 8. 591 2 4. 293 1. 892 ＞ 0. 05
B 5. 885 2 2. 943 1. 296 ＞ 0. 05
C 59. 167 2 29. 584 13. 03 ＞ 0. 05
D(误差) 4. 541 2 2. 27 1. 0
注:F0. 05(2，2)= 19. 0;F0. 01(2，2)= 99. 0。
A3B1C2，即上样液生药质量浓度 0. 08 g·mL
－1，径高
比 1∶ 3，吸附流速 2 BV·h －1。
2. 3. 2 上样量考察 称取经预处理的 XDA-16 型
大孔树脂 17 g(径高比 1∶ 3，柱床体积 30 mL) ，上样
液 350 mL(橄榄苦苷质量浓度 5. 2 g·L －1，生药质量
浓度 0. 08 g·mL －1) ，以 2 BV·h －1流速上柱，每
10 mL收集 1 份，测定流出液中橄榄苦苷质量浓度。
以流份编号为横坐标，橄榄苦苷质量浓度为纵坐标，
绘制泄露曲线，结果见图 2。结果显示流份 1 ～ 15
未检测到橄榄苦苷，流份 16 开始橄榄苦苷有少量泄
露，为保证药液吸附完全，确定上样液 150 mL 时为
最佳上样量，即 XDA-16 型大孔树脂的最佳吸附量
0. 7 g·g －1。
2. 3. 3 水洗体积考察 量取上样液 150 mL，按优
化的工艺条件上样，加水以 2 BV·h －1流速除杂，每
1 BV(30 mL)收集 1 份，共 8 份，测得每份中橄榄苦
苷含量极少，固含物累计质量分别为 0. 348，0. 434，
0. 484，0. 521，0. 549，0. 574，0. 593，0. 598 g，故选取
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罗赛赛，等:素馨花总环烯醚萜苷的大孔树脂富集纯化工艺优选
图 2 橄榄苦苷泄露曲线
加水用量 8 BV。
2. 3. 4 洗脱剂考察 量取上样液 150 mL，按优化
工艺条件上样，加 8 BV 水冲洗，依次用体积分数
10%，30%，50%，70%，95%的乙醇洗脱，洗脱流速
2 BV·h －1，每 5 BV收集 1 份，共 5 份，测得每份洗脱
液中橄榄苦苷质量分别为 31. 16，279. 5，369. 07，
40. 74，0 mg，计算累计回收率分别为 3. 99%，
39. 83%，87. 14%，92. 37%，92. 37%，故选取洗脱溶
剂为 70%乙醇。
2. 3. 5 洗脱剂用量考察 量取上样液 150 mL，按
优化工艺上样，加 8 BV 水冲洗，用 70%乙醇以 2
BV·h －1流速洗脱，每 1 BV 收集 1 份，共 6 份，结果
每份洗脱液中橄榄苦苷质量分别为 461，264，15. 6，
0. 55，0. 36，0 mg，故洗脱剂用量 4 BV。
2. 3. 6 洗脱流速考察 分别取 3 份上样液，每份
150 mL，按优化条件分别上样，加 8 BV 水冲洗，用
70%乙醇 4 BV 洗脱，洗脱流速分别为 2，4，6
BV·h －1，测定洗脱液中橄榄苦苷质量浓度，计算每
份中橄榄苦苷回收率分别为 92. 2%，85. 0%，
83. 1%，故确定洗脱流速 2 BV·h －1。
综上所述，XDA-16 型大孔树脂富集纯化素馨花
总环烯醚萜苷的最佳工艺条件为上样液生药质量浓
度 0. 08 g·mL －1，径高比 1∶ 3，吸附流速 2 BV·h －1，上
样量 0. 7 g·g －1，加 8 BV 水洗除杂，用 70% 乙醇
4 BV于 2 BV·h －1流速洗脱，收集洗脱液。
2. 4 验证试验 量取上柱液 150 mL，按优化的工
艺条件进行 3 次验证试验，结果橄榄苦苷回收率分
别为 89. 29%，90. 80%，92. 23%，洗脱所得冷冻干
燥粉末中橄榄苦苷纯度分别为 31. 97%，32. 80%，
33. 7%。采用 UV测得醇冷浸提取物中总环烯醚萜
苷纯度分别为 47. 11%，47. 33%，48. 78% (RSD
1. 90%) ，而冷冻干燥粉末中则分别为 78. 80%，
81. 10%，81. 32%，表明 XDA-16 型大孔树脂对素馨
花中总环烯醚萜苷富集纯化效果良好，且该工艺稳
定可靠。
3 讨论
橄榄苦苷在素馨花总环烯醚萜苷中所占比重较
大，且结构与素馨花中其他环烯醚萜苷类成分的基
本结构相似，故选择橄榄苦苷为指标成分。大孔吸
附树脂是一类新型非离子型具有大孔结构的高分子
化合物，用于萜类纯化，能有效除去水溶性色素、多
糖和无机盐等水溶性杂质［7］。采用大孔吸附树脂
法对素馨花总环烯醚萜苷进行富集纯化，上柱前后，
总环烯醚萜苷纯度提高了 1. 68 倍，且优选的纯化工
艺稳定可行。
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