全 文 ：上 海 第 二 医 科 大 学 学 报
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em一门 o u r nal o f S ha ng hai So e e nd M edi c al U ni r v s ei r y · 3 2 2·
[文章编号 ] 0 2 58一 9 5 8 8( 20 0 5 )0 3一 0 3 2 2一 0 5
· 专题报道 ·
蟾肠水溶性部位的化学和药理研究
杨韵若 , 聂宝明 , 邓克敏 , 陈泽乃 , 陆
(上海第二医科大学基础医学 院化学教研室 , 上海
阳
2 0 0 0 2 5 )
[摘 要 】 目的 研究鳍肠属植物鳗肠水溶性部位的化学成分及其药理活性 。 方 挂 通过溶剂提取法和色谱技术分离化学成分 ,
运用光谱手段进 行结构鉴定 ,利用 C 6 细胞和 P cl Z 细胞观察鳗肠 水溶性成分对细胞增殖活性的抑制作用 。 祛果 从该部位分离
得到 3 个三菇皂昔 , 分别为 3 一 0 一日一 D 一毗喃葡糖刺囊酸 ( I ) 、 3 一0 一p 一 D 一毗喃葡糖刺囊酸 一2 8 一仆卜 D 一毗喃葡糖昔 ( n )和 3 一o 一 ( 2 一 0 -
硫酞基 , p 一 D 一毗喃葡糖 )刺囊酸 ( l ) , 还分离得 到了豆街醇 ( W )和蜂蟆菊内醋 ( V ) ;化合物 l 具有抑制 6C 细胞 和 P1C 2 细胞增
殖 的活性 。 祛伦 化合物 I 是鳗肠水溶性部位抑制细胞增殖的活性成分 。
【关键词 】鳗肠 ; 三菇 皂昔 ; 胶质瘤 6C 细胞 ; 抑制增殖
【中图分类号 j R 2 84 ; R 2 8 5 【文献标识码 】A
S t u d i e s o n t h e C h e m i c a l C o n s t i t u e n t s fr o m H y d r o P h i l i c F r a c t i o n s o f E e ilP at
尸r 口 s t r a at L . a n d T h e i r P h a r m a c o l o g i c a l E fe c t s
Y A N G Y u n
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D E N G K e
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C H E N Z e
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L U Y a n g
( D印 a rt m e n t of hC e m i s t理 , oC l l箔e of B a s i e Me d i e i n e , Sh a n g h a i S e e o n d Me d ie a l nU ive sr i yt , S h a 刀君h a i hC i n a )
A b s t r a c t : O bje
e it v e T o i n v e s t i g a t e t h e e h e m i e a l e o n s t i tu e n t s fr o m h y d r o p h i l i e afr
e t i o n s o f E e liP ta 尸or s t r a ta L .
a n d th e i r v h a r m a e o l o g i e a l e fe
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.
M e ht o ds C o n s t i tu
e n t s w e r e i s o l a t e d b y n l e a n s o f e x t r a e t i o n a n d
e h or m a t o g
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r a t io n s
,
id e n t iif e d b y s p e e t r a l a n a l y s i s
, a n d t h e i r b i o a e t i v i t y w a s e v a l u a t e d o n g l i o m a C 6 e e ll s a n d P C 1 2 e e l l s
.
R e s u lst F i
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, s t i g m a s t e or l ( Vl ) a n d w e d e l o la e t o n e ( V ) : e o m p
o u n d 1 e o u l d i
n h i b i t t h e p r o l i fe
r a t io n o f C6
e e l l s a n d PC 12 e e l l s
.
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n c lu s io n C o m p o u n d 1 1
5 t h e a e t i v e e o n s t i t u e n t i n h y d r o p h i l i e fr a e t i o n s o f E
.
P r o s t r a ra
fo r t h e i n h i b i t
o 叮 e fe e t t o e e l l p or l ife r a ti o n
.
K e y w o r d s : E e l iP t a 尸r o s t r a t a L ; t r i t e甲 e n o i d g l y e o s i d e s ; g li o m a C6 e e ll s ; i n h i b i t i o n o f e e ll p or li fe r a t i o n
菊科鳄肠属植物鲤肠 ( E e l iP t a 尸 r o s t ar t a L . )为常
用中药 ,其干燥地上部分称墨旱莲 。 鲤肠主要分布
于热带和亚热带地 区 , 我国主产于江苏 、 浙江和广东
等省 。 药典记载墨旱莲具有滋肝补肾 、 凉血止血之
功 〔’ 〕。 鲤肠具有保肝 、 抗蛇毒 、 免疫调节 、 抗诱 变等
多种药理活性 ,在临床上可用于治疗菌痢 、 生殖泌尿
系统炎症和肝硬化等症 , 鲤肠与其它药材合用还 可
以对抗链霉素毒性反应 、 治疗脂溢性脱发和多种出
血症 。 化学成分研究表明 , 鲤肠 除含有特征的化学
成分多联噬吩和香豆草醚类外 , 还含有三菇皂贰 、 生
物碱及黄酮等类型化合物 。 我们在预实验中发现鲤
肠的极性部位具有影响细胞增殖的活性 。 作为嫂肠
系统研究的一部分 ,本 文重 点研究鲤肠水溶性部位
的化学成分及其药理活性 。
材料与方法
【基金项 目】上海市卫生局中医药科研基金 ( 2 0 02 YO04 ) 和上海第二医
科大学 自然科学基金 ( O3 X Y 1Z 01 3 ) 资助项 目二
【作者简介 ]杨韵若 ( 19 80 一 ) ,女 ,湖北武汉人 , 硕士生 .
仪器材料 熔点用 K o fle r 熔 点仪测定 ( 温度计
未经校 正 ) ;紫外光谱用岛津 U V 一 10 紫外 可见分
光光度计测定 ; 质谱用 I o n s p e e ( 4 . 7 T e s l a ) F T 一M S 和
H p 59 8 9 A 质谱仪测定 ; 红外光谱用 N ie o l e t M a g n a IR
·
4 2 2
· 上 海 第 二 医 科 大 学 学 报 Vo l _ 2 5
7 50傅 里叶变换红 外光谱仪测 定 ;核磁 共振谱 用
Br u kr e A M
一
3 0 0核磁共振仪和 Va r i a nU ni ty一 I o nva 0 0 5
核磁共振 仪测定 ;全 自动酶标 仪为美 国产 i Bo 一 R ad
5 50型 ;荧光倒置 显微镜为 日本产 Ol y m pl slx 一 51 型 。
柱层析所用硅胶为 卜海杜园精细化工有限公司的硅
胶 (粒度1 0 0一 0 0 2目 ) ;薄层层析板购 自烟台汇友硅
胶开发有限公司 ;大孔树脂 l s P一1 4 0系 上海医 药工
业研究院产品 ;胎牛血清购自杭州四季青生物 E程材
料有限公 司 ;多聚赖氨酸和 甲基曝哇基四哇 ( m et hyl
t hi a go l yl t e tra go l i u m
,
M T )购自 S i g m a 公司 ; D M E M 培
养基 、 胰蛋 白酶和马 血清 由 iG b co 公司提供 ; 二 甲亚
飒 ( D M S o )由上海生物工程技术服务有限公司提供 ;
大鼠脑胶质瘤 C 6 细胞购 自中科院上海分院细胞库 ;
P C 12 细胞 由上海第二医科大学神经生物学教研室惠
赠 。 实验所用生药购于 上海药房股份有限公司徐重
道中药饮片厂 ,经上 海第二医科大学药物所张敏老
师鉴定为鲤肠 。
提取分离 干燥鲤肠药材 s k g ,用 80 % 乙醇 回
流提取 3 次 , 合并提取液 ,减压浓缩得浸膏 9 0 8 9 。 浸
膏用水溶 解 , 用石油醚 、 二氯 甲烷和正 丁醇依 次萃
取 。 正丁醇部位 ( 5 6 . 7 9 ) 经大孔树脂柱分离 , 水 -
乙醇梯度洗脱 (水一 95 % 乙醇 ) 。 95 % 乙醇洗脱部位
( 1 0
.
4 9 )经硅胶柱 、反相 C , 。 F l a s h 柱反复层析 ,得化
合物 I ( 3 9 8 . 3 m g ) 、 1 ( 9 1 . 7 m g ) 。 5 0 % 乙 醇部位
( 1 0
.
9 9 )进一步经大孔树脂柱层析得 F r 、 ( 4 5% 乙醇
洗脱 ) 、 F几 ( 9 5% 乙醇洗脱 ) 。 rF , ( 1 . 2 5 9 )硅胶柱层
析 ,二氯甲烷 一 甲醇 一 水 ( 5 : 1 : 0 . 1) 洗脱部位 , 通过
反相 C l 。 lF as h 柱层析 , 40 % 甲醇洗脱 , 分离得化合物
1 ( 1 6
.
8 m g )
。
F r , ( 0
.
8 9 9 )经硅胶柱层析 , 正己烷 -
乙酸乙酷 ( 8 0 : l) 洗脱 , 分离得化合物 W ( 10 . 2 m g ) 。
70 % 乙醇部位 ( 1 . 43 9 )经硅胶柱层析 , 二氯甲烷 一 甲
醇 ( 8 : l) 洗脱 , 分离得化合物 V ( 4 3 m g ) 。
C 6 细胞增 殖抑制实验 取对数 生长期 C6 细
胞 ,用 0 . 25 % 胰蛋白酶消化 , 吹打 , 10 % 胎牛血清和
D M E M 培养基 配制成单细胞 悬液 ( 10 , / m L ) , 每 孔
10 卜L 加人 % 孔板中 , 分为实验组 (药物浓度为 2 、
10
、
5 0
、
10 0 卜m o l」 / I · )和空 白对照组 。 细胞置于 5%
C O Z培养箱中 37 ℃ 培养 , 观察细胞生长状况 。 培养
2 4 h 后 ,分别用于形态观察和 M T T 实验 。 形态观察
用荧光倒置显微镜观察药物作用组与对照组细胞形
态 。 M T T 实验分别加人 M T T 10 卜L / 孔 ( 5 m g / m L ) ,
继续培养 4 h ,吸去培养液 ,加人 1 00 卜L D M S o ,培养
板振荡 5 m in ,显微镜下着色颗粒消失 , 2 0 m in 内以
5 7 0 n m 为测试 波长 , 6 30 n m 为参考波长 , 在全 自动
酶标仪上读取各孔吸光度 ( A 值 ) , 每组 6 孔 。 空 白
对照组 o D 值为 10 0% , 各实验组 占其百分 比即为各
组细胞存活率 。
P C 12 细胞增殖抑制实验 取对数生长期 P 1C 2
细胞 , 吹打 , 5 % 胎牛血清 、 10 % 马血清和 D M E M 培
养基配制成单细胞悬液 ( 1 0 ’ / m L ) , 细胞悬液按每孔
10 林 L 加人多聚赖氨酸包被的 % 孔板中 ,实验的其
余操作同 “ C6 细胞增殖抑制实验 ” )
诱导 P C 12 细胞分化实验 取对数生 长期 PC 12
细胞 , 吹打 , 5% 胎牛血清 、 10 % 马血清和 D M E M 培
养基配制成 10 4 / m l 单细胞悬液 , 按每孔 l ml 加入
多聚赖氨酸包被的 24 孔板 中 , 分为实验组 (药物浓
度为 2 、 10 、 50 、 10 0 林m o l / L )和空 白对照组 , 培养 2 4 h
后荧光倒置显微镜观察细胞生长状况 。
今士 里芬目 门、
化合物 I 结构鉴定 白色 晶型 粉末 , m p 2 3 ℃
一 2 34 ℃ ; IR ( K B r ) C m 一 ` : 3 4乃 ( OH ) , 1 69 5 ( e 0 0 H ) ,
1 6 2 5 ( e = e )
。 ’ H 一 N M R ( 30 0 M H
z
v y
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一
d 、 ) 6 :
0
.
8 5
,
0
.
9 6
,
0
.
9 9
,
1
.
0 3
,
1
.
1 7
,
1
.
2 5
,
1
.
8 3 (各 3 H , S , 7
x C H 3 )
,
3
.
3 8 ( I H
,
d
,
J = 7
.
6 H z
,
l
’ 一
H )
,
5
.
2 5 ( I H
,
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,
16
一
H )
,
5
.
6 1 ( I H
,
b r s
,
12
一
H ) ; ” C
一
N M R ( 7 5 M H
z
p y r i d i n e
一
d 、 ) 6 : 15
.
7 ( C
一
2 5 )
,
17
.
2 ( C
一
24 )
,
17
.
6 ( C
-
2 6 )
,
18
.
7 ( C
一
6 )
,
24
.
0 ( C
一
1 1 )
,
24
.
9 ( C
一
3 0 )
,
26
.
8 ( C
一
2 )
,
2 7
.
4 ( C
一
2 7 )
,
2 8
.
4 ( C
一
2 3 )
,
3 1
.
2 ( C
一
20 )
,
3 3
.
0 ( C
一
2 2 )
,
3 3
.
5 ( C
一
2 9 )
,
33
.
7 ( C一 ) , 36 , 3 ( C 一 15 ) , 36 . 3 ( C 一2 1 ) ,
3 7
.
2 ( C
一
10 )
,
3 8
.
9 ( C
一
l )
,
3 9
.
7 ( C 4 )
,
4 0
.
1 ( C
一
8 )
,
4 1
.
6
( C
一
18 )
,
4 2
.
3 ( C
一
14 )
,
4 7
.
3 ( C
一
9 )
,
4 7
.
4 ( C
一
19 )
,
4 9
.
0 ( C
-
] 7 )
,
5 6
.
1 ( C一 ) , 6 3 . 2 ( C石 ’ ) , 7 2 . 0 ( C 4 ’ ) , 74 9 ( C -
16 )
,
7 6
.
0 ( C
一
2
’
)
,
7 8
.
4 ( C
一
5
’
)
,
7 8
.
9 ( C
一
3
’
)
,
8 8
.
9 ( C
-
3 )
,
10 7
.
0 ( C
一
l
’
)
,
122
.
5 ( C
一
12 )
,
14 5
.
3 ( C
一
13 )
,
18 0
.
1
( e
一
2 8 )
。 化合物 I 的 ’ H 一 N M R 、 ” e 一 N M n 、 IR 数据
与文献 { ’服道的 3 一。 一p 一D 一毗喃葡糖刺囊酸的数据一
致 ( 图 l ) 。
化合物 n 结构 鉴定 白色粉末 , m p 2 5 0 ℃ 一
2 5 2 ℃ ; IR ( K B r ) C m 一 ’ : 3 4 30 ( O H ) , 一 7 3 5 ( C o 0 R ) ,
1 6 25 ( C 二 C )
,
1 0 8 0
,
1 0 2 5 ( C
一 。 ) ; ’ H 一N M R ( 5X() M H z
p y
r
i d i n e
一
d , ) 5
: 0
.
9 7
,
1
.
0 9
,
1
.
0 9
,
1
.
13
,
1
.
2 2
,
1
.
3 7
,
1
.
9 3 (各 3 H , s , 7 x C H , ) , 3 . 3 7 ( I H , m , 1 8 一 H ) ,
3
.
4 8 ( I H
,
b
r d
,
3
一
H )
,
5
.
0 3 ( I H
,
d
,
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.
7 H z
,
l
’ -
H )
,
5
.
3 4 ( I H
,
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,
1 6
一
H )
,
5
.
5 8 ( I H
,
b r s
,
12
一
H )
,
6
.
3 0 ( I H
,
d
,
J = 5
.
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,
2 5
一。 一 G IC I 一H ) 。 ” e 一 N M R
( 12 5 M H
z
p y r id i n e
一
d
s
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: 15
.
8 ( C
一
2 5 )
,
17
.
2 ( C
一
2 4 )
,
杨韵若 , 等 : 鳍肠水溶性部位的化学 和药理研究 2 2 5
17
.
7 ( C
一
2 6 )
,
1 8
,
7 ( C
一
6 )
,
2 4
.
0 ( C
一
1 1 )
,
2 4
.
7 ( C
一
3 0 )
2 6
.
8 ( C
一
2 )
,
2 7
.
4 ( C
一
2 7 )
,
2 8
.
4 ( C
一
2 3 )
,
3 1
.
0 ( C 2 0 )
3 2
.
4 ( C
一
2 2 )
,
3 3
.
3 ( C
一
2 9 )
,
3 3
.
6 ( C
一
7 )
,
3 6
.
1 ( C
一
2 1 )
36
.
3 ( C
一
15 )
,
3 7
.
2 ( C
一
10 )
,
3 9
.
0 ( C
一
l )
,
3 9
.
7 ( C 4 )
4 0
.
3 ( C
一
8 )
,
4 1
.
5 ( C
一
1 8 )
,
4 2
.
2 ( C
一
14 )
,
4 7
.
3 ( C
一
9 )
I H
,
d
,
J = 1 1
.
3 H z
,
H
一
6
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一
6
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,
3
.
7 1 ( I H
, t , J 二
8
.
Z H z
,
H
一
2
’
)
,
4
.
2 6 ( I H
,
d
,
J = 7
.
7 H z
,
H
一
l
’
)
,
4
.
30
( I H
,
b r s
,
H
一
16 )
,
5
.
17 ( I H
,
b r s
,
H
一
12 ) :
” e 一 N M R
4 7
.
3 ( C
一
19 )
,
4 9
.
3 ( C
一
17 )
,
5 6
.
1 ( C
一
5 )
,
6 2
.
4 ( 2 8
一
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C le
一
6 )
,
6 3
.
2 ( C
一
6
’
)
,
7 1
.
3 ( 2 8
一
O
一
G le 碑 ) , 7 2 . 0 ( C -
4
’
)
,
74
.
3 ( 2 8
一
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一
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,
74
.
6 ( C
一
16 )
,
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.
9 ( C
一
2
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,
7 8
.
4 ( 2 8
一
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一
G l e
一
5 )
,
7 8
.
9 ( C
一
5
’
)
,
7 9
.
0 ( 2 8
一
0
一
G le
一
3 )
,
7 9
.
5 ( C
一
3
’
)
,
8 9
.
0 ( C
一
3 )
,
9 6
.
0 ( 2 8
一
O
一
G l e
一
I )
,
10 7
.
0
( C
一
l
’
)
,
1 2 2
.
9 ( C
一
12 )
,
14 4
.
6 ( C
一
13 )
,
17 6
.
1 ( C
一
2 8 )
。
化合物 1 的 ’ H 一 N M R 、 ` , C 一 N M R 、 IR 数据 与文献 l ’ 〕报
道的 3 一 O 一日一 D 一毗 喃葡糖 刺囊酸 一 28 一 O 一 p一 D 一毗喃葡糖
昔数据一致 ( 图 1 ) 。
2 9 3 0
笋O O R Z
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O R I
图 I 化 合物 卜 1 的结构式
F i g 1 S t r u e t u r e Of e o m P o u n d s l
·
1
化合物 1 结构鉴定 白色无定形粉末 , m p 235 ℃
一 2 37 ℃ ; IR ( K B r ) e m 一 ’ : 3 4 3 0 ( O H ) , 2 69 5 ( e o o H ) ,
1 6 30 ( C 二 C )
,
1 0 80
,
1 0 3 0 ( C
一。 ) 。 ’ H 一 N M R ( s o 0 M H z
D M S O
一
d 6 ) 6
: 0
.
7 2 ( 3 H
, s , H
一
2 6 )
,
0
.
7 3 ( 3 H
, s , H
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2 4 )
,
0
.
8 2 ( 3 H
, s , H
一
2 9 )
,
0
.
8 6 ( 3 H
, s , H
一
2 5 )
,
0
,
9 0
( 3 H
, s , H
一
3 0 )
,
0
.
9 7 ( 3 H
, s , H
一
2 3 )
,
1
.
2 9 ( 3 H
, s , H
-
2 7 )
,
2
.
9 5 ( I H
,
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,
H
一
18 )
,
3
.
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,
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,
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.
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,
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.
2 H z
,
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3 )
,
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一
4
’ ,
5
’
)
,
3
.
4 5
,
3
.
64 (各
( 12 5 M H z D M S O
一 〔f。 ) 6
: 15
,
I ( C
一
2 5 )
,
16
.
3 ( C
一
2 4 )
,
17
.
3
( C
一
2 6 )
,
17
.
8 ( C
一
6 )
,
2 2
.
9 ( C
一
1 1 )
,
24
.
7 ( C
一
30 )
,
2 5
.
4 ( C
-
2 )
,
2 6
.
5 ( C
一
2 7 )
,
2 7
.
6 ( C
一
2 3 )
,
30
.
2 ( C
一
2 0 )
,
3 1
.
0 ( C
-
2 2 )
,
3 2
.
7 ( C
一
7 )
,
3 2
.
9 ( C
一
2 9 )
,
34
.
7 ( C
一
15 )
,
3 5
.
2 ( C
-
2 1 )
,
3 6
.
3 ( C
一
10 )
,
3 8
.
1 ( C
一
l )
,
38
.
7 ( C礴 ) , 3 9 . 2 ( C 一8 ) ,
4 0
.
5 ( C
一
18 )
,
4 1
.
2 ( C
一
14 )
,
4 6
.
3 ( C
一
9 )
,
4 6
.
6 ( C
一
19 )
,
4 7
.
7 ( C
一
17 )
,
55
.
1 ( C
一
5 )
,
6 1
.
0 ( C
一
6
’
)
,
70
.
0 ( C礴 ’ ) ,
7 3
.
1 ( C
一
16 )
,
7 6
.
2 ( C
一
5
’
)
,
7 6
.
4 ( C
一
3
’
)
,
79
.
2 ( C
一
2
’
)
,
8 8
.
6 ( C
一
3 )
,
10 2
.
7 ( C
一
l
’
)
,
12 0
.
7 ( C
一
12 )
,
14 4
.
5 ( C
-
13 )
,
17 9
.
5 ( C
一
2 8 )
。 该化 合物 L i e b e r m a n n 一 B u r 。 h a r d
和 M ol ihs 反应均呈 阳性 , 表明其中含有糖结构 。 从
, , c
一
N M R谱数据 中该化合物所含各个基团的数 目及
其位移值可推断出其为五环三菇类化合物 。 H M B c
谱上可观察 到 H 一2 9 与 C一 19 、 C 一 2 0 、 C一 2 1 和 C一 3 0 相
关 , H 一 30 与 C 一 19 、 C一 2 0 、 C 一2 1 和 C 一 2 9 相关 , 说明 C 一 20
连有两个甲基 。 由此可知该化合物为齐墩果烷型三
砧化合物 。 H M B C 谱上还可观察到 H 一3 与糖的 C 一 1 ’
相关 ,糖的 H 一 l ’ 与 C 一 3 相关 ,说明化合物 1 是在 C 一3
接糖 。 E S I一M S 负离子谱图显示 m / z : 7 13 〔M 一 H 〕 一 ,
7 15 [ M + 2 一 H」一 峰 ,其 分子量为 7 24 ( M S ’ 和 M S Z见
图 2 ) 。 以 m / z : 7 13 为母离子进 一步做一级 串联质
谱 ,其 M S / M S 谱 中出现 2 4 1 [ 16 2 + 8 0 一 H 〕 一 峰 , 说明
葡萄糖上的一个经基与硫酸成醋 。 从 ` , C一N M R 谱 中
知道 C 一 2 ’ 和 C 一 3 ’ 的 6 C 值明显向低场移动 , 且 C 一 2 ’
的 6 c 值更高 ,根据已知规律 [ ’ 川 , 可 以推断出硫酞基
是位于葡萄糖的 C 一 2 ’ 上 。 C 谱数据 中 6 C 1 79 . 5 应为
C
一
2 8 (梭基碳 ) ; 6 e l 2 2 . 9 、 14 4 . 6 应为 C 一 12 和 C 一 1 3 (双
键 ) 。 因此化合物 1 的结构推断为 3 一 0 一 ( 2 一 O 一硫酸基 -
任D 一毗喃葡糖 )刺囊酸 ( 图 2 ) 。
10 0 %
7】3 . 18 T ( ) F M S E S一 3 3
7 13
.
06
3 2 5
.
12
、
3 5 6 .0 9 70 1
`
2 1
7 14
.
1 9
7 15
.
18
0
10 0 %
2 4 0月7 T O F M SM S 7 13
.
OOE S
·
2
.
1 3e 3
7 1 3 0 3
13 8 9 7
16 6
.
9 5卜24 1 . 9 8 4 4 9力5 6 5 1 2 一6 8气13
7 14
,
0 3
7 15刃9
图 2 化合物 1 的 E sl 一M S 图和
F ig 2 E S I
一
M S a n d M S / M S n g u r e s
M S / M S 图
o f e o m P o u n d l
上 海 第 二 医 科 大 学 学 报 Vo l. 2 5
化合物 I V结构鉴定 白色粉末 , m p 16 8 ℃ 一
一7 0 ℃ 。 E x一M s m / : : 4 12 ( M ` ) 。 化 合 物 Vl 的 ’ H -
NM R
, ” c 一N M R 和 M s 数据与文献 [5 1报道豆角醇数
据一致 。
化合物 V 结构 鉴定 灰 白色粉末 , m p 31 5 ℃ 。
化合物 V 的 ’ H 一N M R , ” e 一N M R 和 u v 数据与文献 七6」
报道的蜂蟆菊内醋数据均一致 。
抑制细胞增殖 采用 M T 法进行体外大鼠脑胶
质瘤 C6 细胞 和大 鼠肾上腺髓质嗜铬细胞 ( PC 12 细
胞 )增殖抑制实验 ,结果表明 50 卜m ol / L 和 10 林m ol /
L 的化合物 I 明显抑制 C 6 细胞与 P1C 2 细胞 增殖
( p < 0
.
0 1 ) (图 3 ) 。 5 0 林m o l / L 和 10 林m o l / L 的化合
物 I 对 C 6 细胞增殖的抑制率高于 90 % 。
细胞形态的观察 细胞形态的观察结果显示 : 6C
细胞与化合物 I 共孵育 24 h 后 , 2 、 10 林m ol / L 给药组
与对照组 比较 , C6 细胞的数量和形态无明显差别 , 而
50 林m ol / L 和 10 卜m 0 F L 化合物 I , 给药组可观察到
6C 细胞明显死亡 (图 4) ; P1C 2 细胞与化合物 I共孵育
24 h 后 , 50 、 10 林m ol / L 化合物 I 给药组可观察到部
分存活的 P C 12 细胞长出轴索 , 出现分化现象 (结果
未显示 ) 。
图 3 化合物 I 对 P C 12 细胞和 C` 细胞增殖的影 响
F ig 3 E爪 ct o f e o m Po叻 d 1 o n th e Por n fe ar d o n o f I, C 12 a n d 6C C e l l s
圈 4 对照组和化合物 l 给药组 的 C` 细胞形态
F ig 4
讨
M o r的 0 10 9盛e a l o b朋 r v a t i o n ` o f 6C e e l l` w i th o u t c o m P o u d a n d w i th e o m P o u n d
论
以前 日本 学者 3[ 」研究 化合 物 班 的结构 , 通 过
F A B
一
M s 分子量和碎片峰质量 的差异确定其结构 中
含有硫酞基 , 通过糖分子 中 C 化学位移的变化确定
硫酞基位置 。 本文则采用了更为可靠的结构分析方
法 ,我们利用串联质谱方便地证明了化合物 uI 的糖
分子中存在 着硫酞基 。 两套方法得到 的结论一致 ,
可互相映证 。 本文对化 合物 uI 的结构分析 中 , 还通
过 H M Bc 和 H MQC 确定了其 ’ H 一N M R 中七个角甲基
信号的归属 , 补充了其波谱数据 。 文献 中提供的化
合物 uI 的波谱数据均在 yP ir id n e 一 d s中所测 ,本文进一
步提供 了化合物 l 在 DM S O 一 d 。 中测定 的波谱数据 ,
由于化合物 nI 中含有 天然产物中不常见的硫酞基 ,
提供较完整的波谱数据有利于对此类化合物开展深
入的结构分析 。
赵越平等 I’ 〕在利用稻瘟霉 菌筛选具有抗有丝分
裂 、抗真菌活性 的化合物过程 中发现化合物 I 能诱
导稻瘟霉菌丝 变形 , 其最低菌丝变形浓度 ( M M D C )
为 197 卜m ol / L ,提示化合物 I 可能具有抗肿瘤活性 。
本文我们以大鼠脑胶质瘤 c 6 细胞 为模型对该化合
物抗肿瘤活性进一步研究 。 C6 细胞能以纯的单种细
胞培养 ,又保持了星型胶质细胞的多种特性 , 是用于
研究抑制胶质瘤细胞增殖的理想模型 。 我们发现化
合物 I 在 5 0 、 10 0 林m ol / L 浓度水平上能明显抑制大
鼠脑胶质瘤 C6 细胞增殖 (抑制率大于 90 % ) , 可 以
诱导 C 6 细胞死亡 , MT 法检测结果和流式细胞术检
测结果 (结果未显示 )基本相符 。 由于胶质瘤多呈侵
袭性生长 ,与脑组织无明显的界限 ,手术难于彻底切
除 , 术后需化疗以巩 固疗效 ; 另一方 面 , 神经 系统肿
瘤存在不同程度细胞 凋亡减少的现象 I’ i , 因此 ,寻找
有效的治疗药物具有重要意义 。 细胞增殖与分化是
细胞两个重要的生命过程 , 5 0 、 10 0 林m ol / L 的化合物
I 在明显抑制 PC 12 细胞增殖的同时 ,还可以诱导其
( 下转第 2 3 1 页 )
N0
.
3 谢一凡 ,等 : HP L C 法直接拆分包甲素类似物对 映异构体 2 3 1
分离碱性物质时 , 加 人少许二 乙胺可 以减 轻拖
尾 〔’ 。 〕 ,这是因为二乙胺的加人可抑制硅胶表面残存
的硅轻基 的非立体选择性吸附而增加固定相手性识
别能力 。 包 甲素类 似物 为碱性物质 , 加入适量 二乙
胺可使其对映体完全分离 。
对映体的分离度 R 由 k ’ 、 a 、 N 等参数决定 , 分别
增大 N 、 k ’ 、 a 都可以提高分离度 [川 。 温度降低 时 ,
虽然 N 值变小 ,但 k ’ 、 a 值变大 ,故分离度仍增大 ; 流
速减小 , 虽然 k ` 、 。 值变化不大 ,但 N 变大 ,故分离度
R 增大 。 低温 、 低速有利于对映体分离 , 其原因是手
性 固定相与溶质有充分的时间形成非对映异构结合
物 。 可 以选择不同条件 (流动相 的组成 、 流动相中二
乙胺 的量 、 流速 、 柱温 )调节对映体 的出峰时间及分
离度 。 例如 , 在线产 品质量控制 , 需分 析时间短 , 可
选择较高的流速 、 温度及较大的极性组分为流动相 。
要进行对映体 的光学纯度分析 , 需要对 映体分离度
较大 ,可以采取减小流速 、 降低柱温及较少 的极性组
分为流动相来实现 。 本方法拆分了四个包 甲素类似
物 ,均得到满 意的分离效果 , 表明该方法稳定可靠 ,
可用于包 甲素类似物对映体的光学纯度鉴定 。
【参考文献】
【l 」姚天荣 , 陈泽乃 . 包公藤的化学研究 I ,缩瞳有效成分包甲素的
分离和初步研究 〔J 〕. 药学学报 , 19 7 9 , 1 4 ( 12 ) : 7 3 1 一 7 3 5 .
【2 」姚天荣 , 陈泽 乃 ,易大年 , 等 . 包公藤 的化学研究 n ,新缩瞳药 -
包公藤 甲素 的结构 【J 〕. 药学学报 , 19 81 , 16( 8 ) : 5 82 一 5 8 8 .
[ 3 〕王丽平 , 姚天荣 . 新缩瞳药包公藤 甲素类似物 的研究 [ J ] . 上海
化工 , 19 9 2 , 1 7 ( 4 ) : 2 4 一 2 7 .
[ 4 〕 丁维功 , 杨丽敏 , 于月梅 . 拟胆碱蓑若烷生物碱的合成及其生物
活性【J ] . 药学学报 , 19 93 , 2 8 ( 4 ) : 3 0 2 一 30 6 .
【5 ] 杨清华 , 谢 晶曦 . 包公 藤 甲素类 似物 的合 成 【J ] . 药 学学 报 ,
19 9 1
,
2 6 ( 12 )
: 9 4 8 一 9 52
.
「6 〕 宋晓宏 , 王惠宁 ,姚 天荣 . 包公藤 甲素类 似物的研究 「J〕 . 中国
药学杂志 , 19 9 5 , 3 0 ( 3 ) : 16 8 一 1 7 1 .
「7 ] 冯菊妹 , 张佩瑾 , 俞蔼瑶 , 等 . 包 甲素合成 类 似物 的过 筛试 验
【J ] . 上海第二医科大学学报 , 19 9 0 , 10 ( 4 ) : 3 24 一 3 2 5
【8 〕 杨丽敏 , 王惠宁 . 手性包 甲素类 似物的制备及 其生物活性 【J ] .
药学学报 , 19 9 8 , 3 5 ( 1 1 ) : 5 3 2 一 5 3 5 ,
【9 〕 危 凤 , 杨亦文 , 任其龙 . 等 . 纤维素三苯基氨基甲酸醋涂敷型
固定相 的制备及其对奥美拉噢的拆分【J〕 . 分析化学 , 20 3 , 31
( 6 )
: 73 5 一 7 38 .
「1 0 ] 邵保海 ,徐 秀珠 , 吕建德 , 等 . 纤维素衍生物手性 固定相用 于高
效 液相色谱对映体分 离〔J] . 分析化 学 , 2 0 03 , 31 ( 2 ) : 2 39 -
2 4 4
.
【1 1] 金恒 亮 , 主编 . 高效 液 相色 谱法 〔M 〕 . 北 京 : 原子 能 出版社 ,
19 8 7
.
3 7 一 4 1 .
[收稿 日期 ] 2 00 4 一 0 4 一 0 1 [修回 日期 ] 2 0 0 4 一 0 9 一 2 8
份启 匕必吕 昌店飞产 份瘩妞户叼砂份腐吧必朴恻公召砂卿而卜任尹朴恻盈归声任必朴恻舟吧尸昭产公份海卜份腐妙台吩砂沙分叼冷恻称吩泞诊帝恻分 岁 令召产任 补吩而匀尹舒卿稼守分份母吩份召分 少 行 健声 匕声吧尹子卜份启 归虎 、 分卿裔归声入 , 分咬夕虎 ; 咬洲沂争
(上接第 2 2 6 页 )
细胞长出轴索 , 提示化合物 I 可能有诱导癌细胞分
化的作用 。 化合物 I 的抗肿瘤药理活性及其机制研
究正在进行中 。
化合物 I 一 l 为三菇皂昔 , 其结构母核相 同 。
化合物 n 和 uI 均为 I ( 3 一 O 一 p 一D 一毗喃葡糖刺囊酸 )的
衍生物 ,其结构差异分别表现在 C一 8 和 C一 ’ 的取代
基上 。 我们发 现化合 物 I 一 1 的生 物活 性不 同 ,
2 一 10 卜m ol / L的化合物 n 和 nI 对细胞增殖无明显
的抑制作用 。 此类化合物及其抗肿瘤活性 的构效关
系有待于进一步深入研究 。
墨旱莲为 中国药典收录的药材 , 其植物来源 于
鲤肠 ,药源广泛 , 药理活性众多 「“ } 。 对鲤肠开展系统
的植物化学和药理研究 有助于 指导合理使 用墨旱
莲 ,并可能发现新的先导化合物 。
【参考文献】
仁1 ] 国家药典 委员 会 . 中 国药典 【M 〕 . 北 京 : 化 学 工业 出 版社 ,
2 0 0 0
.
3 0 6
.
【2 〕 赵越平 ,王忠壮 , 易杨华 ,等 . 中药墨旱莲中的三枯皂贰 〔J」. 药
学学报 , 20 0 1 , 36 ( 9 ) : 6 6 0 一 6 6 5 .
[ 3 〕 Y a h a r a S , Di n g N , N o h a ra T . o l e a n a n e G ly e o s id e s fr o m E e l ip t a a l -
b
a 仁J 〕. C h e m P h a rm B u l l , 19 9 4 , 4 2 ( 6 ) : 23 3 6 一 13 3 8 .
「4 ] Y a h a r a S , D i n g N , N o h a ra T . T a z a x a s t a n e G ly o o s id e s fro m E e l i p t a
a lb a 〔J ] . p h y t o e he m i s t口 , 19 9 7 , 4 4 ( l ) : 1 3 1 一 13 5 .
【5 」邹建平 ,中山充 . 墨旱莲化学成 分的研究 【J 〕. 中草药 , 19 9 3 ,
2 4 ( 4 )
: 1 74 一 17 6 .
[ 6 〕张 金 生 , 郭倩 明 . 旱 莲 草化学 成分 的研 究 【J ] . 药学 学 报 ,
2 0 0 1
,
3 6 ( l )
: 3 4 一 3 7 .
[ 7 」s e h i fe r D , C a v a l l a p , M i g h e l i A , e t a l . A p o p t o s i s a n d e e l l p ro l i fe r -
a t i o n i n 卜u m a n n e u ro e p i t h e l i a l t u m o r s [ J 〕. N e u ro s e i L e t t , 199 5 ,
19 5 ( 2 )
: 8 1 一 8 4 .
[ 8 〕 杨韵若 , 陆 阳 . 鲤肠 属植物 的化学成分 和药理作 用【J l 国外
医药 一 植物药分册 , 2 00 5 , 2 0 ( l ) : 10 一 13 .
[收稿 日期 ] 2 00 4 一 12 一 10 [修回 日期 12 00 5 一 0 1 一 2 0