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494 生态科学 25卷
1．2试验方法
1．2．1抗生素敏感性试验：链霉素、青霉素、硫酸庆大
霉素、．硫酸卡那霉素和氯霉素均为sigma分装。配制
抗生素母液，用0．22lam的滤膜过滤除菌。5种抗生
素浓度分别为50肛g·mL～、100肛g·mL一、200pg·mL。
和400pg·mL～，同时以不加抗生素为对照。选取对微
藻生长无显著抑制作用的抗生素浓度进行抗生素除菌
试验。
1．2．2抗生素除菌试验：根据1．2．1的试验结果，选取
链霉素、青霉素、硫酸庆大霉素和硫酸卡那霉素4种
抗生素的合适浓度分别加入处于指数生长后期的藻培
养液。
1．3眼点拟微绿球藻的细菌检验
取0．2mL藻液涂布于2216E固体培养型12】，于
35℃生化培养箱(广东医疗器械厂，LRH．250．A型)中
培养，观察细菌的生长情况。
1．4细胞密度
采用细胞颗粒计数仪进行细胞计数。
抑制率(％)=(对照组平均细胞数．试验组平均
细胞数)／对照组平均细胞数
·--}—一o
—g-50
O 2 4 6 8
培养天数Time(d)
图1链霉素对眼点拟微绿球藻生长的影响
Fig．1EffectsofstreptomycinonthegrowthofN．ocutala
0 2 4 6 8
培养天数Time(d)
图3硫酸卡那霉素对眼点拟微绿球藻生长的影响
Fig．3EffectsofkanamycinsulfateonthegrowthofN．ocutala
1．5数据处理
用SPSSl3．0对处理组和对照组数据进行组间差
异性分析。
2结果与分析
2．1眼点拟微绿球藻对5种抗生素的敏感性
抗生素敏感性试验中，5种抗生素对眼点拟微绿
球藻的生长具有普遍的抑制作用，随着抗生素浓度的
提高，抗生素对眼点拟微绿球藻生长的抑制作用越强
(图1．5)。其中，氯霉素对眼点拟微绿球藻生长的抑
制作用最强，4个浓度处理的抑制作用与对照相比均
达极显著水平(P．<0．01)，除浓度为50I．tg·mL。处理
外，其它3个浓度处理在2d、4d和6d的抑制率均
在50％以上，2d和4d的Ic50分别为293．64pg·mL。1
和67．69¨g·mL～，在观测的第8d最高抑制率达
85．30％，藻液出现“黄化”现象。浓度为50“g·mL_时，
链霉素对眼点拟微绿球藻生长的抑制作用最弱，处理
组在2d、4d和6d的抑制率均在3％左右；青霉素、
硫酸庆大霉素和硫酸卡那霉素在4d的抑制率分别为
8．95％、7．62％和3．84％，其中硫酸庆大霉素2d的Ic50
—-_I—一o
—日_50
O 2 4 6 8
培养天数Time(d)
图2青霉素对眼点拟微绿球藻生长的影响
Fig．2EffectsofpenicillinonthegrowthofN．ocutala
培养天数Time(d)
图4硫酸庆大霉素对眼点拟微绿球藻生长的影响
Fig．4EffectsofgentamycinisulfateonthegrowthofN．ocutala
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万方数据
6期 刘晓娟，等：眼点拟微绿球藻对抗生素的敏感性及其无菌藻株的培养
70．
——卜一0
O 2 4 6 8
培养天数Time(d)
图5氯霉素对眼点拟微绿球藻生长的影响
Fig．5Effectsofchloramphenicolonthegr wthof31．ocutala
为316．40lxg·mL～，其它处理组的抑制率均远远低于
50％。浓度为400嵋·mLd时，链霉素、青霉素、硫酸
庆大霉素和硫酸卡那霉素的抑制率与对照相比均达显
著水平(尸<0．05)，2d的抑制率分别为29．62％、
18．20％、61．85％和29．81％，其中硫酸卡那霉素在浓度
为200嵋·mL卅时的抑制率与对照相比也达显著水平，
2d、4d和6d的抑制率分别为35．17％、41．19％和
38．80％。
2．2分批加入抗生素
根据抗生素敏感性试验，去除对眼点拟微绿球藻
生长抑制作用最强的氯霉素。然后按照抗生素对眼点
拟微绿球藻生长抑制作用由强至弱依次加入，首先往
藻液中加入青霉素(浓度为50lxg·mLl)，其次加入硫
酸庆大霉素(浓度为50Pg·mL。1)，再次加入硫酸卡那
霉素(浓度为100肛g·mL。)，最后加入链霉素(浓度
为50肛g·mLd)，加入每种抗生素培养2天。每种抗生
素添加完后进行细菌检验，细菌数目逐渐减少，分批
添加4种抗生素后，用2216E固体培养基检验无细菌
存在，显微镜检眼点拟微绿球藻生长基本不受影响。
3讨论
不同藻类对抗生素的敏感性不同。藻类普遍对氯
霉素敏感，浓度为10肚g·mL‘1即可对藻细胞生长产生
明显抑制作用【913】，本文50肛g·mL。氯霉素在第8d的抑
制率高达85．30％。藻类普遍对链霉素和卡那霉素不敏
感，浓度高达l600lag·mLd对藻细胞生长的影响不
大【l0’14】，本文链霉素对眼点拟微绿球藻的抑制作用最
轻，卡那霉素浓度达到200~400嵋·mL。1时抑制作用显
著。但也有例外，席藻(Phormidiuman malis)对氯
霉素的敏感性低于链霉烈巧】，颤藻(Oscillatoriasp．)
对链霉素比较敏感，致死剂量为50I．tg·mL‘1【l31。同一
属不同种藻细胞对抗生素的敏感性也不同。Divan和
Schnoes观测了膝沟藻(Gonyaulax)4个种对7种抗生
素的敏感性试验，Gcatenella和Gexcavata对链霉
素、新霉素和青霉素的耐受能力强，而G tamarensis
subsp．excavata和GtamarensisPlymouth对试验所用
的抗生素都敏感。氯霉素严重抑制所有种藻细胞的生
长【91。
通过抗生素敏感性试验确定添加抗生素的顺序和
合适浓度，首先加入对藻细胞生长抑制作用相对较强
的抗生素，最后加入对藻细胞生长抑制作用相对较弱
的抗生素，这种单种抗生素逐个添加的方式不仅优化
了抗生素除菌效果，同时与抗生素混合加入相比降低
了由于抗生素问存在的拮抗或者协同作用对藻细胞的
伤害程度【1516】。Cottreli和Suttle使用抗生素技术获得寄
生藻(MicromonaspusilIa)无菌藻株，根据抗生素敏
感性试验依次加入青霉素(1000Pg·mL。1)、新霉素
(250lag·mL。)、庆大霉素(1000嵋·mLd)和卡那
霉素(1000¨g·mL。1)【l。1。Martinez等获得席藻无菌藻
株，去除明显抑制藻生长的红霉素，加入抗生素的顺
序 浓度依次为羧苄青霉素(100肛g·mL。1)、链霉素
(100H,g·mL。1)、氯霉素(100肛g·mL"1)和卡那霉素
(150I．tg·mL。)【l51。单独一种抗生素不能除菌彻底，
两种抗生素联合使用提高除菌率，三种及其三种以上
抗生素联合使用可以有效的除菌。不同抗生组合的除
菌效果也不同，链霉素、青霉素和新霉素对膝沟藻除
菌效果最好，既不影响藻生长和活动性，又不对藻细
胞产生任何毒性【9】。
参考文献
11】 ChenF．1996．Highcelldensitycultureofmicroalgaein
heterotrophicgrowth[J]．Trendsin Biotechnology，14：
42l-426．
12lMarkagerS，JensenKS．1990．Heterotrophicg wthof
Ulvalactuca(Chlorophyceae)[J]．JournalofPhycology,26：
670．673．
【31 KitanoM，MatsukawaR，KarubeI．1997．Changesin
eicosapentaenoicacidc ntentofNaviculasaprophila，
RhodomonassalinaandNitzschiasp．undermixotrophic
conditions[J]．JournalofAppliedPhycology．9：559—563．
【4l XieJL，ZhangYX，LiYG．2001．Mixotrophiccultivation
ofPlatymonassubcordiformis[J]．JournalofApplied
Phycology，13：343-347．
【515 潘欣，李建宏，戴传超，等．2002．小球藻异养培养的
研究[J】．食品科学，4(23)：28．33．
16l ImaiI，YamaguchiM．1994．Asimplet chniquefor
establishingaxe icculturesofphytoflagellates[J]．Bull印甩
SocMicrobEcol,9：15-17．
．。 (下转第500页)
∞
如
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万方数据
500 生态科学 25卷
所处海滩面的高度是影响其生长和成活的重要因素，
本结果对适宜红树植物生长的滩面高度进行了量化，
可为沿海红树林的规划与造林提供重要参考和依据。
(2)随生长期的增长，无瓣海桑、海桑和秋茄幼
树的保存率有逐渐降低的趋势。当生长期在1年之内
时，各树种幼树生长和成活极不稳定，保存率急剧降
低；而当生长期超过1年后，无瓣海桑和海桑的保存
率趋于稳定，秋茄的保存率则有进一步减低的趋势，
极难长期保存和成功定居。由此可见，在进行红树林
种植成效评价时，须经过1～2年的观测才能作出客观
的判断，同时，树种的选择也是决定红树林种植成功
的关键因素。
(3)无瓣海桑能够忍耐海水淹浸的限度是滩面高
度最低为10cm，海桑是滩面高度最低为6．5cm，秋
茄则是滩面高度在24cm以上，低于此滩面高度则各
树种极难长期保存和成功定居。为了保证红树植物的
长期保存和定居，种植红树林要选择高于其所能忍耐
的最低滩面高度的区域。无瓣海桑和海桑对淹浸的忍
耐限度比秋茄低，说明无瓣海桑和海桑具有更强的忍
耐海水淹浸的能力。因此在海水淹浸程度较高的区域
(滩面高度在24cm以下)，选择造林树种时可以考虑
海桑和无瓣海桑，而不宜种植红树植物秋茄。
(4)该淹浸适应性研究是在野外海滩进行，未排
除其它因素如风浪、垃圾及人为活动的影响等，需要
(上接第495页)
17l 张士璀，马军英，范晓．1997．海洋生物技术原理与应
用[M】．海洋出版社．90．91．
『8l DroopMR．1967．Aprocedurefo outinepurificationof
algalcultureswithantibiotics[J]．BrPhycolBu l．3：295—297．
19l DivanCL，SchnoesHK．1982．ProductionofAxenie
GonyaulaxCulturesbyTreatmentwithAntibiotics[J]．
Appl耙dandenvironmentalmicrobiology，l(44)：250-254．
110lCottrellMT，SuttleCA．1993．Productionofaxenic
culturesofMicromonaspusilla(Pracinophyceae)using
antibiotics[J】．JournalofPhycology，29：385-387．
【l11YimJH，LeeHK．2004．AxenicCultureofGyrodinium
impudicumStrainKG03．aM rineRed-tideMicroalgathat
ProducesExopolysaccharide[J]．TheJournalofMicrobiology,
4(42)：305—314．
一步加强如何在无干扰的情况下红树植物对滩面高度
的生长适应性研究。
参考文献
⋯ 刘治平．1991．秋茄和木榄的海上育苗研究【J】．生态科
学，10(1)：72—76．
121 何斌源，范航清，梁士楚．1995．红海榄海上育苗和移栽
实验及其受害因子初探[A】．见：范航清，梁士楚．中国红
树林研究与管理[C】．北京：科学出版社．153．159．
【3】3 廖宝文，郑德璋，郑松发，等．1997．海桑育苗技术及其
幼苗生长规律的研究[J】．林业科学研究，10(3)：296．302．
【4】4 莫竹承，梁士楚，范航清．1995．广西红树林造林技术的
初步研究[A】．中国红树林研究与管理[C】．北京：科学出版
社．164．172．
【5l LuChangyi，LinPeng．1993．Thetechniquesofafforestation
themangroveanditsroleincoastlineprotection[A]．Island
environmentandcoastdevelopment[C]．Nanjing：Nanjing
Universitypress．321-328．
16l 廖宝文，郑德璋，郑松发，等．1996．红树植物秋茄造林
技术的研究[J】．林业科学研究，9(6)：586．592．
171 郑松发，郑德璋，廖宝文，等．1996．直接引进的乔术种
群对原灌木群落及其种群的扰动效应[J】．林业科学研究，
9(3)：246-254．
18l 郑松发，郑德璋，廖宝文，等．1998．不疏伐的灌木环境
对乔木种群的适宜度及群落改造决策【J】．林业科学研究，
11(3)：62·67．
1919 张宏达，陈桂珠，张社尧，等．1998．深圳福田红树林湿
地生态系统研究【M】．广州：广东科技出版社．1．14．
【12l陈绍铭，郑福寿．1985．水生微生物实验法【M】．海洋出版
社．35，139．
113】尚迅，戴继勋，韩宝芹，等．2000．颤藻对6种抗生素敏
感性的研究[J】．海洋学报，22(6)：131-135．
114】郑合明，薛乐勋．2002．抗生素及草酊磷对盐藻生长的影
响[J】．郑州大学学报，37(6)：790．793．
【151MartinezGV，RodriguezcMH，HemfindezdFH，eta1．
2004．Strategytoobminaxenicculturesfromfield—collected
samplesofthecyanobacteriumPhormidiuman malis[J]．
JournalofMicrobiologicalMethods．57：l15-121．
116l林伟．2000．几种海洋微藻的无菌化培养【J】．海洋科
学，24(10)：4-6．
万方数据
眼点拟微绿球藻对抗生素的敏感性及其无菌藻株的培养
作者： 刘晓娟， 段舜山， LIU Xiao-juan， DUAN Shun-shan
作者单位： 暨南大学水生生物研究所,广州,510632
刊名： 生态科学
英文刊名： ECOLOGIC SCIENCE
年，卷(期)： 2006,25(6)
被引用次数： 3次

参考文献(16条)
1.Cottrell M T;Suttle C A Production of axenic cultures of Micromonas pusilla (Pracinophyceae) using
antibiotics[外文期刊] 1993
2.Chen F High cell density culture of microalgae in heterotrophic growth[外文期刊] 1996(11)
3.Divan C L;Schnoes H K Production of Axenic Gonyaulax Cultures by Treatment with Antibiotics
1982(44)
4.Droop M R A procedure for routine purification of algal cultures with antibiotics[外文期刊] 1967
5.张士璀;马军英;范晓 海洋生物技术原理与应用 1997
6.Imai I;Yamaguchi M A simple technique for establishing axenic cultures of phytoflagellates 1994
7.潘欣;李建宏;戴传超 小球藻异养培养的研究[期刊论文]-食品科学 2002(04)
8.Xie J L;Zhang Y X;Li Y G Mixotrophic cultivation of Platymonas subcordiformis[外文期刊] 2001
9.Kitano M;Matsukawa R;Karube I Changes in eicosapentaenoic acid content of Navicula
saprophila,Rhodomonas salina and Nitzschia sp.under mixotrophic conditions 1997
10.Markager S;Jensen K S Heterotrophic growth of Ulvalactuca (Chlorophyceae)[外文期刊] 1990
11.林伟 几种海洋微藻的无菌化培养[期刊论文]-海洋科学 2000(10)
12.Martínez G V;Rodriguezc M H;Hernándezd F H Strategy to obtain axenic cultures from field-
collected samples of the cyanobacterium Phormidium animalis[外文期刊] 2004(1)
13.郑合明;薛乐勋 抗生素及草酊磷对盐藻生长的影响[期刊论文]-郑州大学学报 2002(06)
14.尚迅;戴继勋;韩宝芹 颤藻对6种抗生素敏感性的研究[期刊论文]-海洋学报 2000(06)
15.陈绍铭;郑福寿 水生微生物实验法 1985
16.Yim J H;Lee H K Axenic Culture of Gyrodinium impudicum Strain KG03.a Marine Red-tide Microalga
that Produces Exopolysaccharide 2004(42)

引证文献(3条)
1.李静红.黄翔鹄.刘慧玲 波吉卵囊藻对抗生素的敏感性及其无菌化培养[期刊论文]-广东海洋大学学报 2009(3)
2.张国海.庄惠如.赵圣炜.翁金兰 一株饵料微藻与益生菌混合固定化培养条件的优化[期刊论文]-生物技术
2008(6)
3.黄振华.刘晓娟.胡章喜.段舜山 湛江等鞭金藻对抗生素的反应及无菌化培养[期刊论文]-生态科学 2007(2)


本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_stkx200606004.aspx