全 文 ：书药理药化
收稿日期:2012-07-02; 修订日期:2012-11-14
基金项目:国家自然科学基金 ( No． 81102760) ;
内蒙古自治区高等科学技术研究项目( No． NJ10185)
作者简介:石松利( 1981-) ，女( 汉族) ，河南洛阳人，现任包头医学院副教
授，博士学位，主要从事中蒙药成分及资源开发利用研究工作．
蒙古扁桃药材中多糖的提取及含量测定
石松利，白迎春，周红兵，钮树芳
(内蒙古科技大学包头医学院，内蒙古 包头 014040)
摘要:目的 从蒙古扁桃药材中提取多糖并测定多糖含量。方法 经脱脂、醇提后，采用水提醇沉法制备蒙古扁桃多糖，
Savage法脱蛋白;以蒙古扁桃精制多糖测得蒙古扁桃多糖对葡萄糖的换算因子，采用苯酚 －硫酸法测定多糖含量。结果
平均加样回收率为 97． 39%，RSD = 1． 18% ( n = 6) ; 蒙古扁桃药材中多糖的含量为 7． 78%。结论 该法简便、快速、准确、
重现性好，为蒙古扁桃药材的质量控制和资源开发利用提供理论依据。
关键词:蒙古扁桃; 多糖; 提取; 含量测定
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 02． 001
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 02-0257-02
Extraction and Determination of Content of Polysaccharides in Amygdalus mongolica
SHI Song-li，BAI Ying-chun，ZHOU Hong-bing，NIU Shu-fang
( Baotou Medical College，Inner Mongolia University of Science ＆ Technology，Inner Mongolia，Baotou 014040，
China )
Abstract: Objective To extract the polysaccharide and measure the content in Amygdalus mongolica． Methods A． mongolica
polysaccharides were prepared by water extraction － alcohol precipitation method，and then deproteinized to obtain refined A． mon-
golica polysaccharides． After the conversion coefficient of refined A． mongolica polysaccharides to glucose was obtained，the con-
tent of A． mongolica polysaccharides was determined by phenol － sulfuric acid method． Results The polysaccharide content in A．
mongolica was 7． 78%，the rate of recovery was 97． 39%，and RSD was 1． 18% ( n = 6) ． Conclusion This method is fast，sim-
ple and accurate． It is the role for the comprehensive utilization of resources to provide a scientific basis．
Key words: Amygdalus mongolica; Polysaccharide; Extracion; Content determination
蒙古扁桃(Amygdalus mongolica)蒙名乌兰 －布衣勒斯，属蔷
薇科扁桃属旱生落叶灌木，为蒙古高原特有的阿拉善荒漠
种［1，2］，是集食用、药用、饲用、工业用、生态、经济、社会效益为一
体的优良的木本油料树种，为传统的中药材，以种仁入药，性苦，
味平，主治咽喉干燥、干咳及支气管炎、阴虚便秘［3］。
多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖通过糖苷键连接在
一起的聚合物，是一切有生命的有机体必不可少的成分，同维持
生物机能密切相关。研究表明植物多糖类成分在免疫调节、抗肿
瘤、抗炎、抗溃疡、降血糖、降血脂、抗辐射等多方面具有广泛的药
理活性［4 ～ 6］。有关蒙古扁桃多糖方面的研究未见报道。本课题
组研究发现蒙古扁桃药材具有新的药理作用———降血脂作
用［7］。为了研究蒙古扁桃药材中多糖与药效的内在联系和更好
地开发利用蒙古扁桃资源，本研究采用苯酚 －硫酸对蒙古扁桃药
材中多糖进行测定，以葡萄糖为对照品，绘制标准曲线，并采用
换算因子来提高方法的准确度［8 ～ 10］，也为蒙古扁桃多糖后续的
分离纯化及及药理作用的深入研究研究提供理论依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器与试剂 石油醚、乙醇、丙酮、氯仿、正丁醇、浓硫酸、苯
酚、葡萄糖等均为分析纯。紫外光分光光度计 TU － 1810(北京普
析通用仪器有限公司)、LXJ64 － 01 离心机(河北省吴桥电器厂)、
G2X － 9023MBE 数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗
器械厂)、RE － 52C 旋转蒸发器(巩义市予华仪器有限责任公
司)。
1． 2 药材 蒙古扁桃种子，采自九峰山，经内蒙古大学生命科学
王迎春教授鉴定。
2 方法和结果
2． 1 溶液的配制
2． 1． 1 葡萄糖标准溶液的配制 称取 500 mg 葡萄糖于称量皿
中，105℃干燥 4 h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取 100 mg干燥后的葡萄糖加适量水溶解，定容至 100 ml，
葡萄糖标准液的浓度为 1 mg /ml。准确移取 10 ml上述葡萄糖标
准液，置于 100 ml容量中，加水至刻度，既得 0． 1 mg /ml葡萄糖标
准溶液。
2． 1． 2 5%苯酚溶液的配置 称取苯酚 100 g，加铝片 0． 1 g和碳
酸氢钠 0． 05 g常压蒸馏，收集 182℃馏分，精密称取该留分12． 5
g，至 250 ml棕色容量瓶中，加水定容至刻度，置棕色瓶内放入冰
箱中备用。
2． 2 蒙古扁桃多糖的提取与精制 将蒙古扁桃种子去壳，种仁置
105℃的烘箱中烘 4h，取出冷却、研成细粉，放干燥器中备用。精
确称取粉末 25g，滤纸包好置于索氏提取器中，加入 10 倍量石油
醚回流提取 2 次，2h /次，回流结束后，挥干石油醚，再加 10 倍量
80%乙醇回流提取 2 次，2h /次。经脱脂、醇提后的滤渣干燥后，
用 100ml蒸馏水继续改用电热套(电压 100V)加热回流提取 2
次，2h /次，合并提取液，既得蒙古扁桃种仁粗多糖溶液。提取液
用 Servage法除蛋白，每 100 ml 加入试剂(氯仿 －正丁醇，4∶ 1)
30ml，剧烈震荡 30min，用离心机以 4 000 r /min离心 15 min，去除
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL． 24 NO． 2 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 2 期
下层氯仿及中层变性蛋白，取上部水层再重复去蛋白操作，至无
明显中层为止。分别吸取上层清液，在 200 ～ 300 nm处检测其吸
光度，上层清液无吸收峰，证明蛋白除净［11］。收集去蛋白后的上
部水层，减压浓缩至原体积的 1 /3，加无水乙醇至溶液含醇量达
80%，静置过夜。对醇沉的白色絮状多糖沉淀进行离心，收集沉
淀物，再依次用 95%乙醇、无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤各 2 次，在
水浴锅中蒸干后，放入 60℃烘箱中烘干，得白色粉末状蒙古扁桃
种仁精制多糖 0． 5486g，得率为 2． 19%。
2． 3 供试品溶液的制备 精密称取 5 g 经 105℃烘干至恒重的蒙
古扁桃种仁 3 份，滤纸包好置于索氏提取器中，加入 150ml 石油
醚回流 2 次，2h /次，回流结束后，挥干石油醚，再加 150ml 80%乙
醇回流提取 2 次，2h /次。经脱脂、醇提后的滤渣干燥后，用 100
ml蒸馏水继续改用电热套(电压 100V)加热回流提取 2 次，2h /
次，合并提取液，转移至 250 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度。
分别精密吸取 3 份上述备用的样品溶液 20 ml 移至 100 ml 容量
瓶中，并加水稀释至刻度，摇匀。为供试品溶液。
2． 4 最大吸收波长的选择 精密量取供试品和葡萄糖标准溶液
各 1 ml定容至 2 ml加 5%苯酚溶液 1． 0 ml，混匀，再在冷水浴中
缓慢加入浓硫酸 4ml，冷水浴中放置 5 min，摇匀后放入沸水浴锅
中煮沸 10 min，放入冷水中冷却 5min，然后用紫外分光在 200 ～
600 nm扫描最大吸收波长，确定最大吸收波长为 490nm。
2． 5 标准曲线的绘制 精密吸取葡萄糖标准溶液 0． 2，0． 4，0． 6，
0． 8，1． 0，1． 2 ml 分别置于具塞刻度试管中，分别加水至 2ml，各
加入 5% 苯酚溶液 1． 0 ml，混匀，再在冷水浴中缓慢加入浓硫酸
4 ml，冷却 5 min，取出充分摇匀，另取 2． 0 ml 的蒸馏水同上操作
制得空白溶液。置沸水浴中反应 10 min，取出迅速冷却 5 min，在
490 nm处测定吸光度值，以葡萄糖浓度 C为横坐标，吸光度 A为
纵坐标，制作标准曲线，得线性回归方程:Y = 0． 007X － 0． 0045，R
= 0． 998 5。结果表明葡萄糖浓度在 10 ～ 60 μg /ml 范围内，吸光
度与浓度具有良好的线性关系。
2． 6 换算因子的测定 精密称取干燥至恒重的精制蒙古扁桃种
仁多糖 10 mg置 100 ml容量瓶中加蒸馏水定容至刻度，作为多糖
储备液。精密吸取 1 ml 多糖储备液 3 份，按标准曲线制作方法
测定其吸光度。从回归方程中求出多糖液中折合葡萄糖的浓度，
按下式计算换算因子:F = W/C·D。式中 W 为蒙古扁桃叶多糖
的质量(μg) ，C为多糖液中折合葡萄糖的浓度(μg /ml) ，D 为
蒙古扁桃多糖的稀释因数，即得 F = 1． 429。
2． 7 精密度实验 精密量取葡萄糖标准溶液 1ml，按标准曲线制
作方法显色并测定其吸光度，平行制备 6 份，结果 RSD = 0． 93%，
表明精密度良好。
2． 8 稳定性实验 精密量取 1 ml 蒙古扁桃种仁多糖样品溶液，
置于干燥具塞试管中，按标准曲线制作方法，每隔 15 min 测定一
次，连续测 2 h，测定吸光度的 RSD为 1． 39%，表明供试品溶液在
2 h内显色稳定。
2． 9 重复性实验 按照“2． 3”项下平行制备 6 份供试品溶液。
精密量取供试品溶液 1 ml，按照“2． 5”项下方法显色并测定其吸
光度，结果 RSD值为 2． 74%，表明该方法重复性良好。
2． 10 加样回收率实验 分别精密量取 1 ml 蒙古扁桃种仁多糖
样品溶液 6 份，至具塞试管中，分别加入葡萄糖标准溶液 0． 1，
0． 2，0． 3ml，每个浓度平行两份，按“2． 5”项下方法测定吸光度，
根据葡萄糖的检出率计算回收率。
回收率(% )=(实验测值 －供试品液多糖量)/葡萄糖加入
量 × 100%。测得平均回收率为 97． 39%，RSD = 1． 18% (n = 6)。
2． 11 含量测定 精密吸取供试品溶液 1ml，按“2． 5”项方法测定
其吸光度，重复测定 6 次。按下式计算蒙古扁桃叶多糖的含量:
多糖含量(% ) = (C × D × F /W) × 100%。C为样品溶液
中折合葡萄糖的浓度(μg /ml) ，D为样品溶液的稀释因素，F为换
算因子，W为样品质量(μg)。计算蒙古扁桃种仁中多糖含量为
7． 78%，RSD值为 2． 74%(n = 6)。
3 讨论
多糖含量测定的经典方法是 Dubois 等［12］提出的苯酚 －硫
酸比色法。其原理是依据多糖经浓硫酸处理后脱水产生的糠醛
或其衍生物，再与苯酚缩合生成橙黄色物质于 490 nm 处比色。
对于匀多糖，可直接以其组成糖作标准曲线。但植物多糖大多为
杂多糖，对于这些由不同糖残基构成的杂多糖，如使用某一种单
糖作标准曲线，则会造成很大误差，因为不同单糖的标准曲线的
斜率不同［12，13］。本研究利用精制蒙古扁桃多糖测得蒙古扁桃多
糖对葡萄糖的换算因子，可以消除单纯以葡萄糖为标准计算蒙古
扁桃多糖含量带来的误差，且操作简便、快速。
本实验通过脱脂，以 80%乙醇提取以除去单糖、寡聚糖、苷
类及生物碱等醇溶成分，再用水提醇沉法分离多糖成分，采用换
算因子校正的苯酚 －硫酸法测得蒙古扁桃药材中多糖的含量为
7． 78%。通过精密度、重复性、回收率实验和稳定性实验可知，该
法简便可靠、重复性好、显色稳定，为蒙古扁桃药材的质量控制和
资源的开发利用提供了理论依据。
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