全 文 ：100g/kg间。由于自身免疫性疾病均表现为免疫功能的紊乱 ,
而昆明山海棠所主治疾病又大多存在体液免疫的异常亢进 ,另
外 , 急性毒性在某种程度上是药物毒性的一种指标 , 因而据此
初步认为 , 以溶血素抗体生成及急性毒性作为此类药物生物学
活性评价的指标是基本合宜的。
3.2　 药物生物学活性的确切含义是指真正进入试验体系的该
药物样品的活性。作为中药 , 除基源外 , 从生长 、采收 、储存 、样
品制作直到进入试验体系整个过程的众多环节和因素都可十
分明显地影响试验结果。在本试验中 , 样品来源仅代表其生长
或出产地 , 除自采外 ,均难明确其具体的生长环境 、采收季节时
间 、产地加工及储存等条件 , 如从成都五块石药市及广州清平
药市获得的样品;作为样品制作 ,其粉碎状况 、水煎与浓缩的温
度 、时间等许多因素也都可大为影响生物活性研究结果。为此 ,
本文试验力求做到研究过程及研究方法的规范和结果的相对
代表性 , 但仍难排除多种因素影响下结果的偏移。不过 , 从实验
数据还是可以初步得出一个轮廓性的结果。十分明显的是 ,药
物质量的生物活性检定与评价是一种从药物的整体作用表现
进行药物质量控制的有效方法 , 但必须满足多种严格的条件 ,
这些条件我们正在探索中。显然 , 生物学检定与化学检定相结
合 ,方可使中药药物质量的评价与控制更臻于完善 , 有关这方
面的研究我们将另文报告。
　　需要说明的是本研究重在探索含有众多作用强烈 、效 -毒
相间 、且又往往微量且一时难以清楚阐明其生物活性成分的雷
公藤类药物是否有可能通过生物活性检定方法以评价与控制
药物质量的优劣 ,本文结果提示了这种可能性。但由于存在多
种现已明确和尚在探索的影响结果因素 , 因此 , 本文结果尚难
以作为相关样品质量评价的依据。
参考文献
1　邓文龙.创建中药质量的药理学评价体系.中药药理与临床 , 2001;17
(1)∶1 ～ 3
蛇莓抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生作用研究＊
许　扬 1 ,潘瑞乐 1 ,常　琪 1 ,唐劲天 2＊＊ ,刘　妍 3
(1中国医学科学院·中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京　100094;
2清华大学医学物理与工程研究所 , 100084;3北京中医药大学 , 100029)
　　摘　要　目的:研究蛇莓对血管新生的影响。方法:应用鸡胚绒毛尿囊膜(chickchorioallantoicmembrane, CAM)血管新生模
型 , 在鸡胚培养的第 7天 ,分别给予大 、中 、小三个剂量的蛇莓水提物 , 培养至第 9天收集数据进行评估。结果:蛇莓给药组血管新
生面积明显小于对照组(P<0.001), 载体下 CAM新生组织中新生血管数显著减少 ,并可见大血管结构破坏迹象 , 载体周围 CAM组
织中仅见少量新生血管。而对照组的载体下组织及周围 CAM中均见大量新生血管。结论:蛇莓可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管
新生。
　　关键词　蛇莓;血管新生;鸡胚绒毛尿囊膜
　　血管新生(angiogenesis)是在组织中原有血管的基础上 ,在
多种生理和病理因子的作用下 , 重新生长出新血管的过程 [ 1] 。
病理性血管新生是肿瘤浸润生长和转移的必要条件之一。 1971
年 Folkman提出肿瘤的生长和转移依赖于血管新生 [ 2]的观点 ,
对于抗肿瘤药物研究中新靶点的确立具有划时代的指导意义。
1976年 , Gulino指出 ,癌变前的组织需要具有血管新生能力 ,才
能发展成肿瘤组织 [ 3] , 他提出的肿瘤形成和进展的观点已被用
于指导癌症的临床治疗。近年来 , 以抑制血管内皮细胞生长因
子(VEGF)等作用于肿瘤新生血管为主的药物已进行了大量的
研究 , 10余种已用于临床试验之中 [ 4] , 抗肿瘤血管新生药物的
研制已经成为攻克肿瘤的重要手段之一。
　　蛇莓临床可用于抗肿瘤 、通月经等的治疗 [ 5] 。有报道蛇莓
水提物具有抗突变的作用 [ 6] , 水提浸膏对小鼠 S180、H22、S37
移植瘤有明显抑制作用 , 对 Eca-109、Ca7721、Ca7901瘤细胞体
外杀伤作用明显 [ 7] 。我们应用鸡胚绒毛尿囊膜(chickchorioal-
lantoicmembrane, CAM)血管生长模型 , 从鸡胚的血管新生状况
和 CAM的组织形态学等方面 ,观察了蛇莓对 CAM血管新生的
作用。
1　材料与方法
1.1　试验药物　蛇莓茎叶 100g沸水提取三次 , 每次用水 1 L,
30min,过滤 , 合并提取液 , 于水浴上蒸发浓缩至 40ml, 即得 2.
5g/ml蛇莓生药的提取液。给药时配制成 1.0g/ml、1.5g/ml、 2.
0g/ml浓度 ,离心除去沉淀 , 0.45μm微孔滤膜滤过除菌 , 4℃保
存备用。
　　以定性滤纸为样品载体 ,用打孔器制成 5mm直径大小的纸
片 ,灭菌冷却后于超净台内 , 将滤纸排列于无菌铝箔上 , 分别加
入 10μl(灭菌蒸馏水稀释 , 含生药 10mg、15mg、20mg)蛇莓药液
于滤纸片上 ,空白对照组只加入稀释用的蒸馏水。 滤纸样品均
在超净台内风干。
1.2 　受精种蛋　购于中国农业大学实验动物研究所 ,每只 55
65中药药理与临床 2008;24(3)
＊ 国际科技合作重点项目计划(973计划)中药方剂抗恶性肿瘤的作用机制研究(2004CB720301)　　　　＊＊通讯作者
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2008.03.026
～ 65g。
1.3 　仪器 　种蛋培养箱 , 上海跃进医疗器械厂;实验室用超
净工作台 , 苏州净化设备厂;SD102连续变倍体视显微镜 , 重庆
光学仪器厂。 Coolpix4500数码相机 ,日本尼康公司。
1.4　 方法
1.4.1　 CAM模型　CAM造模参考文献方法 [ 8]进行改良。鸡
胚 50只 ,在 37℃和 60%的相对湿度下孵化。孵化第 4天时照
蛋检查血管网生长情况 ,剔除未发育的种蛋 12只 , 继续培养至
第 7天。将其分为蛇莓大 、中 、小剂量组 ,蒸馏水对照组 ,每组 8
只。在超净台内 , 将种蛋表面用酒精消毒后 , 用镊子在蛋胚顶端
小心戳一小口 , 然后剥去周围的蛋壳和壳膜 , 使开口约为 1.5
cm×1.5cm大小。 小心地用尖手术镊子从气室与卵黄囊分隔
处挑破气室膜 , 轻轻去除上层气室薄膜 , 暴露下层的 CAM膜。
将吸附药物和等量蒸馏水的载样滤纸置于 CAM和卵黄囊膜处
血管较少的部位 , 然后用灭菌透明胶封口 , 继续孵育 48h。
1.4.2　血管新生面积统计　孵育完毕后 , 去除鸡胚气室端密
封的透明胶 , 小心地用镊子从气室端揭去周围的蛋壳 , 最大程
度暴露 CAM便于观察和拍照。体视显微镜接数字相机 , 在目
镜观察 CAM给药部位后 ,同时进行图像拍摄。将保存的图象文
件用图像处理软件 ImagePlus5.0图像处理软件读入 , 统计给药
组和对照组血管面积 ,计算两组血管面积占气室开窗总面积的
百分比。
1.4.3　给药部位组织的形态学观察　 将 CAM上的给药载体
下组织和周围组织剪开 , 分别固定于 10%等渗甲醛液中 , 24小
时换固定液一次 , 共换两次。 然后进行脱水 、透明和石蜡包埋 ,
制作 8μm切片 , HE染色 , 光镜下观察给药载体下组织和其周围
的 CAM血管结构及形态学变化。
1.4.4　统计学分析　所有数据输入计算机 , 利用 SPSS软件 ,
根据资料要求进行方差分析。
2　结果
2.1　 血管新生反应　对照组血管明显生长 , 可见尿囊膜血管
排列成车辐状 , 类似树叶的叶脉状分布 , 大血管和小血管都明
显发育(图 1B)。给药组含 10mg蛇莓生药时对血管新生具有
一定的抑制作用(P>0.05, 数据未显示),蛇莓 20mg组中的鸡
胚有一半死亡 , 表明因药量过大 , 导致鸡胚发育不良。蛇莓
15mg给药 48h后可见成形的胚胎活动 , CAM上的给药载体旁
边出现一个缺少血管的区域(图 1A)。定量分析表明 , 蛇莓给
药组血管新生面积为 8.78% ±1.15%(Mean±SE), 对照组血
管新生面积为 22.09%±2.23%(Mean±SE), 两组比较 P<0.
001。
图 1　蛇莓对CAM血管新生的抑制作用(×10)
给药组(A)血管生长明显抑制 ,对照组(B)血管呈放射状生长, 形成典
型的叶脉状血管网。
2.2　蛇莓对 CAM组织中血管新生的影响
2.2.1　对给药载体下 CAM组织中的血管新生的影响。肉眼
观察可见给药组载体下组织明显增生 , 组织周围血管分布稀疏
(图 2A),对照组载体下组织轻度增生 , 周围血管呈放射状生长
(图 2B)。载体下新生组织光镜下观察给药组细胞大量密集生
长 ,大中血管结构破坏 , 小血管虽有一定数量 , 但其结构并未形
成成熟血管的圆形状态(图 3A);对照组细胞密度小于给药组 ,
可见清晰结构的大中血管和数量众多的呈圆形的新生血管在
组织中生长(图 3B)。
2.2.2　对给药载体周围 CAM中血管新生的影响 。将 CAM组
织垂直包埋 ,切片 , HE染色 , 在光镜下观察对照组给药载体周
围CAM大量的新生血管分布(图 4B),而给药组 CAM中血管数
显著减少(图 4A)。
图 4　给药组及对照组载体周围 CAM中血管生长状况
组织常规脱水包埋后 , 制作纵向切片。 给药组(A)CAM中血管数明显
减少 ,对照组(B)CAM中血管密集。放大倍率:×200
3　讨论
　　病理性血管新生是癌症 、缺血性疾病和炎性疾病的特征之
一 [ 9] 。在肿瘤的形成和发展过程中 , 不仅局部肿瘤的生长与血
66 中药药理与临床 2008;24(3)
管新生关系密切 , 血管新生也是导致肿瘤向远处转移的关键因
素之一。以往的研究显示 , 鸡胚发育的第 8 ～ l2天 , 新生血管的
套叠生长是主要的生长方式 , 这一时期 CAM中的血管生长处
于高峰状态 [ 10] 。因此 , 本实验研究选择鸡胚培育的第 7天给
药 , 以观察蛇莓对血管生长的高峰期的影响。结果表明 , 给药部
位的 CAM血管生长受到明显抑制 , 而对照组却无相应作用。
　　本实验中对于鸡胚血管新生的定量 , 采用作者在以前的实
验研究中探索的新方法 [ 11] , 用 ImageProPlus5.0软件 , 统计各
组 CAM上的血管新生面积 ,除以 CAM总面积 ,以所得结果表示
血管新生的状况。
　　以往的研究表明 ,细胞毒性的化学治疗中血管的内皮细胞
凋亡先于肿瘤细胞产生;不直接针对肿瘤细胞毒性的血管新生
抑制剂可抑制血管内皮细胞的增生 、转移 , 并引起内皮细胞凋
亡 [ 12] 。蛇莓给药组药物载体下组织大中血管结构破坏 , 并可见
未成形的血管 , 组织周围的 CAM血管数较对照组明显减少 ,表
明蛇莓抑制血管新生的机制可能在于抑制内皮细胞的增殖和
导致血管内皮细胞的凋亡 ,具体的机制有待于进一步研究。
　　本实验还发现 , 蛇莓给药组载体下组织明显增生 , 而添加
蒸馏水的相同载体下组织则仅见轻微增生。这种现象是否与
血管新生有相关关系 ,或是仅仅是蛇莓中的某种成分刺激纤维
结缔组织或其他细胞增殖 ,还有待于深入研究。
参考文献
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12　FolkmanJ.Angiogenesisandapoptosis.SeminCancerBiol, 2003;13
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InhibitoryefectsofDuchesneaindica(andr)Fockeonangiogenesisinchickchorioalantoicmembrane
XuYang1 , PanRile1 , ChangQi1 , TangJintian2 , LiuYan3
(1 InstituteofMedicinalPlantDevelopment, ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalColege, Beijing100094;2 In-
stituteofMedicalPhysics＆Engineering, 100084;3 BeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine, 100029)
　　Objective:TostudytheinhibitoryeffectofDuchesneaindica(andr)Fockeonangiogenesis.Methods:WeexaminedtheefectsofDu-
chesneaindica(andr)Fockeonangiogenesisinthechickchorioalantoicmembrane(CAM)model.Onday7 ofchickembryoincubation,
threeconcentrationsofDuchesneaindica(andr)FockeaqueousextractsareappliedtoCAMs, andtheireffectswereevaluatedonday9.Re-
sults:TheangiogenesisareaissignificantlysmalerintheCAMtreatedwithDuchesneaindicathanthatinthecontrolgroup(P<0.001).
PathologyanalysisindicatedthatlessangiogenesisoccurredunderthefilterpapertreatedwithDuchesneaindica(andr)Fockeandthestruc-
tureoflargearteriesweredestroyed.ThesurroundingCAMshowedafewangiogenesisformation.Incontrast, anumberofangiogenesisob-
servedinthecontrolgroup.Conclusion:Duchesneaindica(andr)fockecaninhibittheangiogenesisofthechickembryoCAMmodel.
Keywords　 Duchesneaindica(andr)Focke;angiogenesis;chickchorioalantoicmembrane.
蜘蛛香对焦虑模型大鼠行为学及脑组织神经递质含量的影响＊
闫智勇 1 ,张天娥 2 ,彭　佳 1 ,张占平 1 ,秦晋之 1 ,陈　畅 1
(1西南交通大学生命科学与工程学院 ,成都　610031;2成都中医药大学 ,成都 　610075)
　　摘　要　目的:观察蜘蛛香乙醇提取物对焦虑模型大鼠抗焦虑作用 , 并探讨其药理学机制。 方法:采用高架十字谜宫大鼠焦
虑模型 , 用蜘蛛香乙醇提取物进行抗焦虑治疗 , 同时与艾司唑仑进行对比。观察蜘蛛香提取物对焦虑大鼠的行为学 , 及脑组织神经
递质 5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的影响。结果:高架十字迷宫(EPM)行为学观察表明 , 蜘蛛香乙醇提取物
67中药药理与临床 2008;24(3)
＊ 四川省中医药管理局项目(No.200674);西南交通大学科学基金(No.2006A10)