全 文 ：牡丹江医学院学报　　 2010年　　第 31卷　　第 2期
8　刘建辉 , 翼凤云 ,王婷 , 等.三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤保护
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[ J] .中国动脉硬化杂志 , 1997, 5(4):314-317。
收稿日期:2010-02-28
HPLC法检测蛇莓中熊果酸的含量
张建平 1　张羽飞2　包海花2　袁晓环 2＊
(1.黑龙江省质量监督检测研究所　黑龙江　哈尔滨　150050;
2.牡丹江医学院抗纤维化生物治疗重点实验室　黑龙江　牡丹江　　157011)
【摘　要】　目的:探讨 HPLC测定蛇莓中熊果酸含量的方法。方法:采用 ThermoODS-2HYPERTILC18(250×4.6mm, 5μm)
色谱柱;柱温为室温(26℃);流动相:NaH2PO47.8g/ L-甲醇(14∶86);检测波长:210nm;流速:0.8mL/min。结果:熊果酸在
1.780～ 5.340μg范围内呈良好线性关系(r=0.9965);平均回收率 =98.7, RSD=0.92%(n=9)。结论:本测定方法简单 、准
确 、可靠 ,可以作为评价蛇莓质量的有效方法。
【关键词】　蛇莓;熊果酸;高效液相色谱
【中图分类号】　R91　　【文献标识码】　A
DETERMINATIONOFURSOLICACIDINTHEHERBADUCHESNEAINDICAEBYHPLCMETHODS
ZHANGJianpingetal
(HeilongjiangQualitySuperintendenceAcademy　Haerbin　Heilongjiang　　150050)
[ Abstract] 　Objective:InvestigatethemethodofthedeterminationofUrsolicacidintheHerbaDuchesneaIndicae.Thechromato-
graphicseparationwasperformedonaThermoODS-2HYPER-TILC18 (250×4.6mm, 5μm);Methods:Thecolumnwarmwas
25℃;themobilephaseconsistingofNaH2PO4 7.8g/L-Methylalcohol(14:86);Examinationwavelength210nm;Speedofflow:0.
8mL/min.Results:ThelinerrelationshipofUrsolicacidwasgoodwithintherangeof1.780 ～ 5.340μg(r=0.9965).Theaverage
recoverywas98.7% (n=9)andRSDwas0.92%.Conclusion:Themethodissimple, accurateandreliable, anditcanbeusedas
anefectivewaytoevaluatethequalityofDuchesnea.
[ Keywords] 　HerbaDuchesneaIndicae;Ursolicacid;HPLC
　　蛇莓为蔷薇科多年生草本植物蛇莓 Duchesneaindia
(Andr.)Focke的全草 , 为民间常用草药 , 别名有宝珠草 、三
点红 、三叶莓 、鸡冠果 、龙吐珠 、小叶莓等 , 史载于《别录》 [ 1] ,
其性味甘 、苦 、寒 , 具有清热凉血 、消肿解毒之功效 [ 2、3] , 蛇莓
临床应用历史悠久 , 用于治疗热病 、惊痫 、痢疾 、咽喉肿痛 、咳
嗽吐血 、蛇虫咬伤等 ,熊果酸是蛇莓的有效成分之一 ,具有抗
炎 、抗肿瘤 、提高免疫力之功效 , 因此建立快速 、稳定 、重现性
好的测定方法对蛇莓及其制剂的开发具有临床应用价值。
1　仪器与试药
G＆G-J2000A型电子天平(美国西特公司);RE-52型旋转
蒸发仪(上海安亭科学仪器厂);SF-300型塑料封口机(广
东佛山市依利达包装器材有限公司);LC-10AT高效液相
色谱仪(日本岛津公司);GZX-9070 MBE数显鼓风干燥箱
(上海博讯实业有限公司医疗设备厂);Synergy超纯滤水器
(MILLIPOER);FD-1C冷冻干燥机(北京德天佑)。
中药蛇莓饮片(批号 060103/05, 060305/06;哈尔滨市盛泰中
药饮片加工厂)
熊果酸对照品(批号 110709 -200505, 中国药品生物制品检
定所);甲醇(HPLC用色谱醇 , 天津市科密欧化学试剂开发
中心)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱:ThermoODS-2HYPERTILC18
(250×4.6mm, 5μm);流动相:NaH2PO47.8g/L-甲醇(14
∶86);流速:0.8mL/min;柱温:26℃;检测波长:210nm。
2.2 　标准曲线的制备　精密称取熊果酸标准品 4.45mg
置于 10mL的量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 ,
　[基金项目 ] 　黑龙江省卫生厅项目(2009-006)
　[作者简介 ] 　张建平(1969-),男 ,大学本科 ,高级工程师 ,主要从事分析测试工作。 　＊　通讯作者　袁晓环 , Email:yuanxiaohuan1969@
163.com。
25JOURNAL　OF　MUDANJIANG　MEDICAL　UNIVERSITY　Vol.31　NO.2　 2010
DOI :10.13799/j.cnki.mdjyxyxb.2010.02.014
牡丹江医学院学报　　 2010年　　第 31卷　　第 2期
得每 1ml含熊果酸 0.445mg的标准品溶液。吸取上述配制
好的熊果酸(1、4、8、10、 12)μL对照品溶液注入高效液相色
谱仪 , 结果见图 1。在上述色谱条件下测定峰面积(A), 以峰
面积为纵坐标(Y), 以对照品的量为横坐标(X),绘制标准曲
线 , 得出回归方程为:Y(熊果酸)=1.7259X+3.3803;相关
因子 r=0.9965。熊果酸在 1.780 ～ 5.340μg范围内峰面积
与浓度呈良好线性关系。
2.3　方法学考察
2.3.1　系统适用性试验　取 2.2项下对照品溶液 10μL,注
入高效液相色谱仪测试 ,理论塔板数以熊果酸峰计为 12467。
2.3.2　精密度试验　精密吸取同一蛇莓样品溶液 10μL,重
复进样 6次 , 按上述色谱条件测定其含量 , RSD为 1.99%。
表明本方法精密度良好。
2.3.3　稳定性试验　精密吸取同一蛇莓样品溶液 10μL,分
别于 0, 3, 6, 9, 24h注入高效液相色谱仪 , 测定峰面积 , 计算
熊果酸含量 , 其相对标准偏差 RSD为 1.29%, 表明本方法稳
定。
2.3.4　加样回收率试验　称量 9份已知含量的蛇莓粉碎品
(批号 060103/05, 含熊果酸 1.224μg/g)200.00g, 分别加入
0.445mg/mL熊果酸对照品溶液 0.5, 0.5, 0.5, 1, 1, 1, 2, 2, 2
mL, 按照 2.4项下方法制备供试品溶液 , 并测定含量 , 计算
加样回收率 , 结果见表 1。平均回收率为 98.7%, RSD(n=
9)为 0.92%。
表 1　回收率试验结果
序号 样品含量(mg)
加入量
/(mg)
测得量
/(mg)
回收率
/%
1 0.245 0.223 0.465 98.7
2 0.245 0.223 0.462 97.3
3 0.245 0.223 0.464 98.2
4 0.245 0.445 0.692 100.4
5 0.245 0.445 0.680 97.8
6 0.245 0.445 0.685 98.9
7 0.245 0.89 1.121 98.4
8 0.245 0.89 1.125 98.9
9 0.245 0.89 1.130 99.4
平均 98.7
2.4　测定方法
2.4.1　供试溶液的制备　蛇莓干燥全草 200g, 粉碎 , 按一定
料液比 , 加入 95%的乙醇溶液 300 mL,浸泡过夜 ,过滤 , 活性
炭脱色后抽虑 ,滤液减压浓缩至 50mL;然后用等体积石油醚
萃取 3次 , 保留萃取后的原料液 , 再减压浓缩至干 , 加少量醇
溶解即为预样品液。
将上述方法所得的预样品液分别和对照品做 TLC预分
离。在薄层板上 , 把与对照品显色部位所对齐的样品点抠
下;用少量甲醇溶解 , 再浓缩该甲醇液至 10mL, 即为供试品
溶液。
2.4.2样品测定 精密吸取 2.4.1项下制备好的蛇莓样品溶
液 10μL注入高效液相色谱仪 , 记录色谱图 , 见图 2;采用外
标法以峰面积计算各样品中熊果酸含量 ,结果见表 2。
　图 1　熊果酸对照品 HPLC图　　　　　　　　　　图 2　　蛇莓样品熊果酸 HPLC色谱图
表 2　蛇莓熊果酸的含量测定结果
药材批次 含量(μg/g) RSD(%)
060103/05 1.224 1.79
060305/06 1.208 1.65
3　讨　论
本实验以 95%的乙醇做溶剂 ,用浸泡法 、回流提取法对
其进行了提取并做了含量测定 ,结果表明回流法提取样品杂
质较少 , 但含量也低不易检测;浸泡法测定含量高 , 但杂质较
多 , 两法测定熊果酸的含量分别 0.19%, 1.224%。为了减少
杂质我们采用薄层层析预分离一次 ,含量基本没有损失而且
杂质大为减少。所以本实验采用乙醇浸泡加薄层层析进行
样品处理。
试验所用的高效液相色谱条件是在参考有关文献的基
础上 [ 4, 5] , 根据实际情况 , 经过多次优化 、筛选而确定的。熊
果酸中无共轭体系 , 紫外吸收波长较短 ,故色谱条件尤为重
要。实验表明选择 210nm做为检测波长时 , 基线稳定 , 分离
度也较好。流动相也是经过多次筛选最终确定 NaH2PO4 7.8
g/L-甲醇(14∶86);且该方法简单易行 ,重现性好 , 并且干
扰小 , 非常便于操作。
结果表明 ,蛇莓中的三萜类成分含量很低 , 尤其熊果酸
成分含量微少。本实验建立的蛇莓药材中熊果酸的 HPLC
含量测定方法 ,操作简便 、结果可靠 、重复性好 , 可为控制蛇
莓药材及其制剂的质量提供依据。
参考文献
1　国家中医药管理局《中华本草 》编委会.中华本草 [ M].上海:上
26 JOURNAL　OF　MUDANJIANG　MEDICAL　UNIVERSITY　Vol.31　NO.2　 2010
牡丹江医学院学报　　 2010年　　第 31卷　　第 2期
海科学出版社 , 1999:2628.
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1985:2115.
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含量 [ J] .牡丹江医学院学报 , 2006, 27(1):68-70.
收稿日期:2010-03-10
痉挛性膝关节畸形的手术治疗
金勋杰　李贵涛　陈锡然　陈造宏　罗狄鑫　陈为坚
(广东省第二人民医院骨科　广东　广州　　510317)
【摘　要】　目的:探讨手术治疗痉挛性脑瘫膝关节畸形的效果和注意事项。方法:采用腘绳肌延长术 、股直肌远端转位术治
疗痉挛性脑瘫膝关节屈曲挛缩畸形的患者共 19例 ,年龄在 3岁 ～ 21岁 , 随访 6个月 ～ 2.5年 ,平均 16个月 , 观察手术前后运
动功能 、满意度和复发情况。结果:术后膝关节被动活动范围增加 , 站立时伸膝关节角度增加 , 患儿行走功能改善 ,行走距离
延长。患儿和家长满意度为 89.5%。随访 1a, 3例患者不同程度复发。结论:腘绳肌延长术 、股直肌远端转位术治疗脑瘫膝
关节畸形有较好的效果。
【关键词】　脑性瘫痪;膝关节;手术治疗
【中图分类号】　R73.3　　【文献标识码】　A
SURGICALTREATMENTOFSPASTICKNASTICKNEEDEFORMITY
JinXunjieetal
(DepartmentofOrthopaedicstheSecondProvincialPeople sHospitalofGuangdong　Guangzhou　Guangdong　　510317)
[ Abstract] 　Objective:Todiscusstheefectandattentiveaffairsofsurgicaltreatmentonspastickneedeformity.Methods:19 pa-
tients(agefrom3 yearsto21 years)weretreatedwithhamstringlengtheninganddistalrectusfemoristransfer.Thefollow-upperiod
rangedfrom6 monthsto2.5 years.Themovementfunction, satisfactionratioandrecurrenceofpre-operationandpost-operation
wereobserved.Results:Afteroperation, activeextentofkneeincreased, straightenkneeanglewhenstandincreased, walkingfunction
developed, walkingdistanceincreased.Satisfactionratio89.5%.Follow-up1year, 3 patientsrecuredatdiferentdegrees.Conclu-
sion:Hamstringlengtheninganddistalrectusfemoristansferhavegoodefectonspatickneedeformity.
[ Keywords] 　cerebralpalsy;kneejoint;surgicaltreatment
　　膝关节屈曲畸形是脑瘫病人膝部畸形中最常见的形式 ,
常由腘绳肌紧张 、股四头肌肌力减弱 、髋屈曲挛缩 、踝关节马
蹄畸形等多种因素引起 ,发病机制复杂 , 治疗方案选择困难。
其手术治疗需要达到以下目的:(1)站立期尽量伸直关节;
(2)跨步早期应最大限度屈膝;(3)具有足够大的膝关节活
动范围;(4)正常范围的足行进角;(5)保持膝关节稳定
性 [ 1] 。 1998-01-01 ～ 2008 -01 -01, 我院对 19例膝关节
屈曲挛缩畸形的脑瘫病人进行腘绳肌延长术和股直肌远端
转位术治疗 , 取得了较好的效果 , 现总结如下。
1　临床资料
1.1　一般资料　本组男 11例 ,女 8例;年龄 3岁 ～ 21岁 ,平
均 10.6岁。随访 1a～ 2.5a平均 16个月。全部有膝关节屈
曲挛缩畸形 , 其中轻度固定性髋关节屈曲内收畸形 3例 , 合
并马蹄足畸形的 11例 , 均表现为不同程度的蹲伏步态。步
态摆动相中膝关节屈曲幅度小 、足自由活动空间降低 、Ely试
验证实股四头肌痉挛的病例 5例。运动功能情况评估按
Gerard标准。术前不能行走者有 1例 , 有外力支持可行走
3m者有 5例 , 有外力支持可行走 3m以上 90m以内者有 9
例 , 不用外力支持可行走 91m以上者有 4例。
1.2　手术方法　14例行腘绳肌延长术 , 5例行腘绳肌延长
+股直肌远端转位术 , 12例双侧手术 , 7例单侧手术。在以
上手术的同时 ,行跟腱延长术治疗马蹄足 11例 ,胫后肌腱转
位治疗足内翻 2例 ,三关节融合术 2例 ,股内收肌腱切断术
和闭孔神经前支切断术治疗髋内翻 3例。腘绳肌延长术采
用 Tachdjian的方法 ,取腘窝中线切口 , 对股二头肌 、半腱肌 、
半膜肌进行滑动延长 ,然后细致的缝合所有腱鞘 ,如延长后
　[作者简介 ] 　金勋杰(1972-),男 ,副主任医师 ,研究方向:脊柱外科 、创伤骨科
27JOURNAL　OF　MUDANJIANG　MEDICAL　UNIVERSITY　Vol.31　NO.2　 2010