全 文 ：［收稿日期］ 20120313(022)
［基金项目］ 吉林省教育厅“十二五”规划项目(2011126)
［第一作者］ 熊蔚蔚，在读硕士，从事抗炎免疫药理学研究，
Tel:13843250846，E-mail:admini@ 126． com
［通讯作者］ * 陈曦，副教授，博士，硕士生导师，从事病原生物
学研究，Tel:18604498405，E-mail:chenxixinyue@
yahoo． com． cn
毛樱桃总黄酮超声提取工艺优选
熊蔚蔚，徐铭键，刘健，李生，张成义，陈曦*
(北华大学医学部，吉林 吉林 132013)
［摘要］ 目的:优选毛樱桃总黄酮的超声提取工艺。方法:以总黄酮得率为评价指标，紫外分光光度法测定总黄酮含量，
采用正交试验法考察提取时间、料液比、乙醇体积分数、超声功率等对毛樱桃总黄酮超声提取工艺的影响，响应曲面法优选提
取条件。结果:最佳提取工艺为 20 倍量 95%乙醇于 400 W功率下提取 45 min。此工艺条件下，总黄酮平均得率 1. 135%。结
论:乙醇超声提取法经济实用、方便快捷，可在中药材提取领域推广使用。
［关键词］ 毛樱桃总黄酮;超声提取;响应曲面法;正交试验
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)15-0029-03
Optimization of Ultrasonic Extraction Technology for
Total Flavones from Prunus tomentosa
XIONG Wei-wei，XU Ming-jian，LIU Jian，LI Sheng，ZHANG Cheng-yi，CEHN Xi*
(Faculty of Medicine，Beihua University，Jilin 132013，China)
［Abstract］ Objective:To optimize ultrasonic extraction technology of total flavones from Prunus
tomentosa． Method:Taking yield of total flavones as evaluation index，the content of total flavones was determined
by UV，orthogonal test method was used to optimize ultrasonic extraction technology with extraction time，ratio of
solid-liquid，the concentration of ethanol and ultrasonic power as factors，extraction condition of total flavones was
optimized by response surface method． Result:The best extraction condition was:the concentration of ethanol
95%，ratio of solid-liquid 1∶ 20，ultrasonic power 400 W，extractive time 45 min，under this condition，average
yield of total flavones could be up to 1. 135% ． Conclusion:Ethanol ultrasonic extraction was low consumption，
common used and convenient，it could be widely used in extraction technology of Chinese herbal medicine．
［Key words］ total flavones from Prunus tomentosa;ultrasonic extraction;response surface method;
orthogonal experiment
毛樱桃泡酒用于治疗冻伤，是我国北方地区一
直流传着的民间验方［1］。本课题组以民间验方为
基础，结合现代药学技术手段，经多年研究发现，长
白山毛樱桃提取物中总黄酮成分具有明确的抗冻
伤、抗炎作用［2］。研究毛樱桃总黄酮的提取方法，
以提高毛樱桃总黄酮得率，对下一步实验继续开展
具有重要意义。目前，天然药材中总黄酮的提取方
法主要有浸渍法、乙醇回流提取法和超声波法
等［3］，其中浸渍法提取效率较低，乙醇回流法由于
加热可能会破坏总黄酮类物质的生物活性结构［4］，
超声提取法用于提取毛樱桃总黄酮的研究未见报
道。本试验通过正交试验法探索超声提取法中各因
素对毛樱桃总黄酮提取率的影响，通过紫外分光光
度法确定其含量，应用响应曲面法进行分析，得出最
佳提取条件。
1 材料
UV-2550 型紫外分光光度计(日本岛津) ，JY98-
3D型超声细胞破碎仪(宁波新芝生物科技股份有
限公司) ，AL204-IC型电子分析天平(瑞士梅特勒)。
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第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.15.021
毛樱桃购于长白山毛樱桃主产区，经长白山资源
研究所李凤丽副教授鉴定为长白山产野生毛樱桃
Cerasus tomentosa，芦丁对照品(中国药品生物制品检
定所，批号 0080-9705) ，试剂均为国产分析纯。
图 1 总黄酮得率效应面
2 方法与结果
2. 1 原料处理 毛樱桃全果去核，取果肉在 40 ℃
烘箱中烘干水分，置于阴凉干燥处，备用。
2. 2 对照品溶液制备 精密称取芦丁 15. 01 mg，
加乙醇溶解并定容至 100 mL 量瓶中，配制成 150
mg·L －1的芦丁对照品溶液，即得。
2. 3 标准曲线 分别精密吸取芦丁对照品溶液
0. 0，1. 0，2. 0，3. 0，4. 0，5. 0 mL置于 25 mL比色管中，
加 30%乙醇补至 5 mL，加 5%亚硝酸钠溶液 0. 30
mL，摇匀，放置 5 min，加 10%硝酸铝溶液 0. 3 mL，摇
匀，放置 6 min，加 1. 0 mol·L －1NaOH溶液 2. 0 mL，用
30%乙醇定容至刻度，摇匀，放置 15 min，以零管为空
白。于 510 nm 波长处测定吸光度(A) ，以 A 为纵坐
标，芦丁质量浓度为横坐标，得回归方程 A = 7. 19 ×
10 －4C －3. 31 ×10 －2(r =0. 999 3)。结果表明，芦丁在
150 ～750 μg具良好的线性关系。
2. 4 正交试验设计 准确称取一定量经过预处理
的毛樱桃果肉，加入一定量乙醇，置超声细胞破碎仪
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第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
中在密闭环境中进行提取，回收乙醇，得毛樱桃总黄
酮提取液。选取提取时间、料液比、乙醇体积分数、
超声功率为考察因素，按 L9(3
4)正交表设计试验，
因素水平见表 1，正交试验安排及结果见表 2，方差
分析见表 3。
由表 2 结果可知，各因素对总黄酮提取率影响
顺序为 B ＞ A ＞ C ＞ D，以极差最小的 D 因素为误差
项进行方差分析，确定最佳组合为 A3B3C2D1，即 20
倍量 95%于 400 W超声频率下提取 45 min。
表 1 毛樱桃总黄酮超声提取工艺正交试验因素水平
水平
A提取时间
/min
B乙醇体积
分数 /%
C乙醇
用量 /倍
D超声
功率 /W
1 15 75 10 400
2 30 85 20 600
3 45 95 30 800
正交试验数据用响应曲面法进行处理，结果见
图 1。
2. 5 验证试验 按以上优选工艺进行 3 次验证试
验，由于超声提取 45 min时总黄酮提取率上升已不
明显且溶液温度接近 60 ℃，从保护总黄酮活性和节
约成本角度考虑，结果总黄酮得率分别为 1. 164%，
1. 095%，1. 147%，说明优选工艺稳定可行。
表 2 毛樱桃总黄酮超声提取工艺正交试验安排
No． A B C D 总黄酮得率 /%
1 1 1 1 1 0. 691
2 1 2 2 2 0. 659
3 1 3 3 3 0. 874
4 2 1 2 3 0. 792
5 2 2 3 1 0. 913
6 2 3 1 2 1. 093
7 3 1 3 2 1. 087
8 3 2 1 3 1. 086
9 3 3 2 1 1. 113
K1 0. 741 0. 857 0. 957 0. 906
K2 0. 933 0. 886 0. 855 0. 946
K3 1. 095 1. 027 0. 958 0. 917
R 0. 354 0. 170 0. 103 0. 041
注:黄酮得率为折合去核鲜樱桃的质量比。
表 3 总黄酮得率方差分析
方差来源 SS f MS F P
A 0. 188 2 0． 094 71． 61 ＜ 0． 05
B 0． 047 2 0． 025 18． 83
C 0． 021 2 0． 011 8． 01
D(误差) 0． 003 2 0． 001
注:F0. 05(2，2)= 19. 00。
3 讨论
超声提取法是利用超声波增大物质分子运动频
率和速度，增加溶剂穿透力，提高药物溶出速度和溶
出次数，缩短提取时间的浸提方法。与传统乙醇回
流提取法相比，该方法利用了超声波产生的强烈振
动、高加速度、空化现象等效应，加速目标物进入萃
取溶剂，缩短萃取时间并有效的节省了有机溶
剂［5］。由于超声提取法优势明显、经济实用、操作
简便，现已广泛用于天然产物中总黄酮、萜类、多糖
等物质的提取［6］。
响应曲面法是一种优化生物过程的统计学回归
分析方法，主要以建立连续变量曲面模型为根据，对
影响生物过程的因子及其交互作用进行评价，确定
最佳水平范围［7］。响应曲面法所建立的曲面模型
是融合统计学、数学和计算机科学的结果，建立的多
维空间曲面较接近实际情况［8］。
［参考文献］
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［责任编辑 仝燕］
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熊蔚蔚，等:毛樱桃总黄酮超声提取工艺优选