全 文 ：中图分类号：Ｓ　８５３．７４　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７３－４６９６（２０１３）０６－０６４５－０５
蛇莓水提物的体外抗菌活性及抗菌机制
林居纯ａ，ｂ，黄　玲ａ，ｂ，刘　丹ａ，杨绍林ａ，文心田ａ＊
（四川农业大学ａ．动物医学院；ｂ．动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 雅安　６２５０１４）
　　摘要：为研究蛇莓水提物的体外抗菌活性及其作用机制，采用牛津杯法和肉汤稀释法检测了蛇莓水提
物对不同菌株的体外抗菌活性；利用光学显微镜和透射电镜观察了亚抑菌浓度（０．５ＭＩＣ）作用下，蛇莓水提
物对金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３和大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２形态和超微结构的影响。结果显示，蛇莓水提物
（４００ｍｇ／ｍＬ）对金黄色葡萄球菌等５种标准菌株和不同临床菌株均有显著的抗菌活性；蛇莓水提物对金黄
色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３，大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２，沙门菌Ｃ７９－１３，藤黄微球菌ＣＭＣＣ２８００１和铜绿假单胞菌
ＡＴＣＣ９０２７的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）分别是１．５６，２５，６．２５，３．１３和２５ｍｇ／ｍＬ，最低杀菌浓度值是 ＭＩＣ的２
倍；在亚抑菌浓度（０．５ＭＩＣ）作用１２ｈ后，金黄色葡萄球菌集聚成团，大肠杆菌呈长菌丝；药物作用后菌体超
微结构发生了明显改变，金黄色葡萄球菌细胞质壁严重分离，胞质空腔化。大肠杆菌表面粗糙，质壁分离和
胞质空腔化不及金黄色葡萄球菌严重。结果提示，蛇莓水提物对不同菌种有较强的抑菌活性，主要作用于细
菌细胞壁或细胞膜发挥抗菌活性。
关键词：蛇莓；水提物；细菌；作用；作用机制
Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ
Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ
ＬＩＮ　Ｊｕ－ｃｈｕｎａ，ｂ，ＨＵＡＮＧ　Ｌｉｎｇａ，ｂ，ＬＩＵ　Ｄａｎａ，ＹＡＮＧ　Ｓｈａｏ－ｌｉｎａ，ＷＥＮ　Ｘｉｎ－ｔｉａｎａ
（ａ．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ｂ．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｈｅａｌｔｈ　ｏｆ
Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ’ａｎ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｄｕｃ－
ｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ，Ｏｘｆｏｒｄ　ｃｕｐ　ａｎｄ　ｂｒｏｔｈ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｄ．
ｉｎｄｉｃａ．Ｌｉｇｈｔ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ
ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ２５９２３ａｎｄ　ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＡＴＣＣ２５９２２，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａ－
ｔｅｄ　ｂｙ　０．５ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ｏｆ　Ｄ．ｉｎｄｉｃａ　ｅｘｔｒａｃｔ．Ｄ．ｉｎｄｉｃａ　ｅｘｔｒａｃｔ（４００ｍｇ／ｍＬ）
ｈａｄ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　５ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ｄ．ｉｎｄｉｃａｅｘｔｒａｃｔ
ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ＭＩＣ　ｏｆ　１．５６，２５，６．２５，３．１３ａｎｄ　２５ｍｇ／ｍＬ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ２５９２３，Ｅ．ｃｏｌｉ
ＡＴＣＣ２５９２２，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｃ７９－１３， Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ　ＣＭＣＣ２８００１ ａｎｄ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
ＡＴＣＣ９０２７，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｓ　ｍｕｃｈ　ｔｗｉｃｅ　ａｓ　ｔｈａｔ　ｏｆ
ＭＩＣ．Ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｔ　０．５ＭＩＣ　ｆｏｒ　１２ｈ，ｃｏｎｇｌｏｍｅｒａｔｅ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ａｎｄ　ｌｏｎｇ
ｈｙｐｈｏｓｔｒｏｍａ　ｏｆ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｃｅｌ　ｍｅｍ－
ｂｒａｎｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃｅｌ　ｗａｌ，ｃａｖｉｔｙ　ｅｍｅｒｇｅｄ　ｉｎ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｕｎｅｖｅｎ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｏｆ　ｃｅｌ，ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ
ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ａｎｄ　Ｅ．ｃｏｌｉ．Ｉｎ　ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｔｈｅ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｄ．ｉｎｄｉｃａ　ｈａｓ　ｐｏｔｅｎｔ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉ－
ｖｉｔｙ　ａｇａｉｎｓｔ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ａｎｄ　ａｃｔｉｏｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　Ｄ．ｉｎｄｉｃａ　ｍａｙ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｃｅｌ　ｗａｌ
ａｎｄ　ｃｅｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ；ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ；ｂａｃｔｅｒｉｕｍ；ａｃｔｉｏｎ；ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
收稿日期：２０１２－１１－１７；修回日期：２０１３－０２－１８
基金项目：四川省教育厅科研项目（１０ＺＡ０４６）；四川省优势产业发展急需紧缺专业博士后项目（２００７ＣＸ０１）
作者简介：林居纯（１９６８－），女，四川隆昌人，副教授，博士。＊通信作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｎｔｉａｎ３２１１＠１２６．ｃｏｍ
中国兽医科学　２０１３，４３（０６）：６４５－６４９
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ
　　蛇莓［Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ（Ａｎｄｒ．）Ｆｏｃｋｅ］是蔷薇
科植物蛇莓的全草，为民间常用草药，始载于《别
录》。味甘、苦、寒，有小毒，入肺、肝、大肠经，具有清
热解毒、凉血止血、消肿及解毒之功效，主要治疗热
病、痢疾、咽喉肿痛、蛇虫咬伤等。现代药理学研究
表明，蛇莓具有抗癌、抗病毒及免疫调节等作用［１－２］。
为进一步研究蛇莓的抗菌活性及机制，本研究以大
肠杆菌等兽医临床常见细菌为对象，观察了蛇莓水
提物对受试菌的体外抗菌活性和超微结构的影响。
１　材料与方法
１．１　药材
　　蛇莓全草，夏秋季节采于四川省雅安地区，经动
物疫病与人类健康四川省重点实验室鉴定为正品。
洗净阴干，贮藏于阴凉通风处。
１．２　菌株
　 　 藤黄 微球菌 ＣＭＣＣ２８００１、铜绿假单胞菌
ＡＴＣＣ９０２７购自国家兽医微生物菌种保藏中心；大
肠杆菌 ＡＴＣＣ２５９２２、金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ２５９２３
购自杭州天和微生物试剂有限公司；沙门菌Ｃ７９－１３
由西南民族大学生命科学与技术学院张焕容博士惠
赠。大肠杆菌临床分离菌（１０株）、金黄色葡萄球菌
临床分离菌（１０株）及沙门菌临床分离菌（１０株），均
由动物疫病与人类健康四川省重点实验室保存提供。
１．３　主要仪器及培养基
　　双人单面超净工作台：苏净集团安泰公司生产；
隔水式电热恒温培养箱：上海跃进医疗器械厂生产；
光学显微镜：Ｏｌｙｍｐｕｓ公司生产；高速冷冻离心机：
德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司生产；ＳＯＲＶＡＬＬ　ＦＲＥＳＣＯ透
射电镜 Ｈ－６００：日立公司生产。营养琼脂、麦康凯
琼脂、伊红美蓝琼脂、ＭＨ琼脂、ＭＨ 液体培养基等
均为杭州天和微生物试剂有限公司产品。
１．４　供试药液的制备
　　根据均匀设计试验结果，准确称取２０ｇ蛇莓全
草，加蒸馏水（料液比１∶３６）煮沸３次，每次１ｈ，合
并３次水煎液，真空减压浓缩得粗提取物称重后，于
４℃冰箱保存备用。对照药物黄连水提物参考文献
［３］制备。临用时分别精密称取以上粗提物，加蒸馏
水配成４００ｍｇ／ｍＬ药液。
１．５　蛇莓水提物体外抗菌活性的检测
　　采用牛津杯法检测蛇莓水提物（４００ｍｇ／ｍＬ）对
大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２等５种标准菌株和３种临床
菌株的体外抗菌活性。将０．１ｍＬ菌液（５×１０５～
１×１０６　ＣＦＵ／ｍＬ）均匀涂布于 ＭＨ 琼脂平板上，将
灭菌牛津杯均匀摆放于平板上，静置１０～１５ｍｉｎ后
将药液加入牛津杯中，置于３７℃培养１８～２４ｈ后，
测量抑菌圈大小，共做３次重复。分别以黄连水提
物（４００ｍｇ／ｍＬ）和蒸馏水作为阳性和阴性对照。结
果判断：抑菌圈直径≥２０ｍｍ为高度敏感，１０～１９
ｍｍ为中度敏感，＜１０ｍｍ为不敏感［４－５］。
１．６　蛇莓水提物最低抑菌浓度（ＭＩＣ）和最低杀菌
浓度（ＭＢＣ）的测定
　　采用肉汤二倍稀释法测定蛇莓水提物对大肠杆
菌等５种标准菌的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ［５］。
１．７　蛇莓水提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌形
态的影响
　　将蛇莓水提物加至对数生长期的金黄色葡萄球
菌ＡＴＣＣ２５９２３和大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２（５×１０５～
１×１０６　ＣＦＵ／ｍＬ）培养基中，使药物浓度为０．５
ＭＩＣ，设不加药含菌肉汤为空白对照组，于３７℃培
养１２ｈ后，取适量培养物于洁净载玻片上，用盖玻
片盖在培养物上，油镜下观察菌体形态［５］。
１．８　蛇莓水提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌超
微结构的影响
　　将１．７中０．５ＭＩＣ蛇莓含菌肉汤和不加药含
菌肉汤培养１２ｈ后，３　０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ收集菌
体，将菌体沉淀物用磷酸盐缓冲液洗涤３次后，按透
射电镜样品制备方法进行样品制备［６］，于透射电镜
下观察。
１．９　数据处理与分析
　　采用ＳＰＳＳ１６．０统计软件进行数据统计分析，
用单因素方差分析法比较蛇莓水提物组与对照组间
的差异显著性。
２　结果
２．１　蛇莓水提物的体外抗菌活性
　　体外抗菌活性检测结果显示，除蒸馏水对照无
抗菌活性外，蛇莓和黄连水提物对不同细菌均有抗
菌活性。其中，蛇莓与黄连水提物对大肠杆菌
ＡＴＣＣ２５９２２及临床菌株抑菌圈大小无显著性差异
（Ｐ＞０．０５），对其他菌株有显著或极显著差异（Ｐ＜
０．０５或Ｐ＜０．０１）（见表１）。但按牛津杯法结果判
断标准［４］，这２种水提物除对大肠杆菌，黄连对沙门
氏菌临床菌株呈中度活性外，对其余菌株均为高活
性作用。
２．２　蛇莓水提物对５种标准菌的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ值
　　用肉汤稀释法测定蛇莓水提物对５种标准菌株
的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ可见，蛇莓水提物 ＭＢＣ等于２倍
ＭＩＣ，说明蛇莓在体外是起抑菌而不是杀菌作用（见
表２）。
６４６ 中国兽医科学 第４３卷
表１　蛇莓水提物对不同标准菌株和临床菌株的抑菌圈
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｚｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｇａｉｎｓｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　ｉｓｏｌａｔｅｓ
菌株
Ｓｔｒａｉｎｓ
抑菌圈直径／ｍｍ　Ｔｈｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｚｏｎｅ
蛇莓（４００ｍｇ／ｍＬ）Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ 黄连（４００ｍｇ／ｍＬ）Ｃｏｐｔｉｃ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ２５９２３ ２５．５３±０．１６
Ａ ３２．９１±０．５９Ｂ
大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＡＴＣＣ２５９２２ １８．２８±０．２２
ａ １８．７３±０．１６ａ
沙门菌Ｃ７９－１３
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｃ７９－１３ ２３．６９±０．６２
ａ ２１．３３±０．６４ｂ
藤黄微球菌ＣＭＣＣ２８００１
Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ　ＣＭＣＣ２８００１ ２３．４３±０．５４
Ａ ３５．４８±０．４０Ｂ
铜绿假单胞菌ＡＴＣＣ９０２７
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＡＴＣＣ９０２７ ２１．６２±０．１３
ａ ２０．８２±０．３３ｂ
金黄色葡萄球菌临床菌株
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｉｓｏｌａｔｅｓ ２０．２９±０．９０
ａ ２４．９０±５．１５ｂ
大肠杆菌临床菌株
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ｉｓｏｌａｔｅｓ １７．３４±１．５０
ａ １７．６２±２．５８ａ
沙门菌临床菌株
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｉｓｏｌａｔｅｓ ２０．７７±３．１３
ａ １７．２７±２．６２ｂ
同一行肩标不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），不同大写字母表示差异极显著（Ｐ＜０．０１）
Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄａｔａ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｍａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ａ　ｒｏｗ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄａｔａ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｉｆ－
ｆｅｒｅｎｔ　ｃａｐｉｔａｌ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｓ　ｖｅｒｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０１）
表２　蛇莓水提物对５种标准菌株的 ＭＩＣ和 ＭＢＣ值
Ｔａｂｌｅ　２　ＭＩＣ　ａｎｄ　ＭＢＣ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｇａｉｎｓｔ　５ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｔｒａｉｎｓ
菌株
Ｓｔｒａｉｎｓ
最低抑菌浓度／（ｍｇ·ｍＬ－１）
ＭＩＣ
最低杀菌浓度／（ｍｇ·ｍＬ－１）
ＭＢＣ
金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ２５９２３ １．５６　 ３．１３
大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＡＴＣＣ２５９２２ ２５．００　 ５０．００
沙门菌Ｃ７９－１３
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　Ｃ７９－１３ ６．２５　 １２．５０
藤黄微球菌ＣＭＣＣ２８００１
Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ　ＣＭＣＣ２８００１ ３．１３　 ６．２５
铜绿假单胞菌ＡＴＣＣ９０２７
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ　ＡＴＣＣ９０２７ ２５．００　 ５０．００
２．３　蛇莓水提物在亚抑菌浓度下对金黄色葡萄球
菌和大肠杆菌形态的影响
　　不含药对照组金黄色葡萄球菌菌体形态清晰、
分散均匀；经０．５ＭＩＣ蛇莓水提物作用后菌体除少
量细菌呈运动状态外，多数呈静止状态，菌体聚集成
界限模糊不清的菌团。不含药对照组大肠杆菌菌体
形态清晰，呈短杆菌状、分散均匀；药物作用组菌体
聚集成团，菌体呈长菌丝状。
２．４　蛇莓水提物在亚抑菌浓度下对金黄色葡萄球
菌和大肠杆菌超微结构的影响
　　透射电镜下，对照组金黄色葡萄球菌细胞壁和
细胞膜完整光滑，结构紧密，细胞膜紧贴细胞壁，细
胞结构清晰，细胞质均匀，具有清晰的二分裂期分裂
缢痕（见图１Ａ）；蛇莓水提物组菌体细胞膜与细胞壁
间空隙明显增宽，质壁严重分离，细胞质不均匀，菌
体出现空泡（见图１Ｂ），有的细胞质溶解出现大面积
空腔，完全失去其应有的正常结构，细胞死亡。
　　对照组大肠杆菌呈棒状，表面光滑，细胞壁完
整、边缘清晰、平整、无缺陷，无裂痕，无质壁分离现
象，细胞质、细胞核致密均匀（见图１Ｃ）；蛇莓水提物
组大肠杆菌细胞表面粗糙呈皱褶状，出现质壁分离，
细胞质稀薄，甚至解体，有的菌体形成小空泡（见图
１Ｄ），但质壁分离及胞质空腔化不及金黄色葡萄球
菌严重。
３　讨论与结论
　　蛇莓作为清热解毒类中草药，人医领域对其研
究主要在于抑制肿瘤的作用，其抗菌作用研究报道
较少［７－８］，兽医领域更是未见报道。本研究采用牛津
杯法检测蛇莓水提物（４００ｍｇ／ｍＬ）的体外抗菌活
性，结果显示，对所检测菌株（标准菌、临床菌）均有
明显的抗菌活性，其中除对大肠杆菌呈中度抗菌活
７４６第６期　　　　　　　　　　　 　　林居纯等：蛇莓水提物的体外抗菌活性及抗菌机制
图１　不同组金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的超微结构
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ａｎｄ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ
Ａ：对照组金黄色葡萄球菌　３５　０００×；Ｂ：药物作用后金黄色葡萄球菌　３０　０００×；Ｃ：对照组大肠杆菌　２５　０００×；Ｄ：药物作用后大肠杆菌　
１７　０００×
Ａ：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ｕｎｔｒｅａｔｅｄ；Ｂ：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ；Ｃ：Ｅ．ｃｏｌｉ　ｕｎｔｒｅａｔｅｄ；Ｄ：Ｅ．ｃｏｌｉ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ
性外，对其余菌株呈高度抗菌活性，与对照组黄连水
提物的抗菌活性相当。肉汤稀释法检测结果显示，
蛇莓水提物在体外起抑菌作用，其抑菌活性强于文
献报道的其他中药对相关细菌的抗菌活性［９－１１］，说
明蛇莓水提物具有较强的体外抑菌活性，有研究开
发的价值。
　　本研究采用光学显微镜和透射电镜观察了蛇莓
水提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌形态和超微结
构的影响。光学显微镜观察发现，在０．５ＭＩＣ下，
菌株发生明显的形态改变，金黄色葡萄球菌多数菌
体不运动，集聚成界限不清的菌团；大肠杆菌也同样
集聚成团，有的形成长菌丝。
　　透射电镜观察发现，金黄色葡萄球菌经０．５
ＭＩＣ蛇莓水提物作用后，细胞壁与细胞膜间空隙明
显增宽，质壁严重分离，细胞质溶解形成空腔。可能
是由于蛇莓水提物含有皂甙等活性物质［１，８］，与细
胞膜上固醇类物质结合，导致细胞膜受损，细胞膜内
陷造成质壁分离，细胞质固缩形成空腔，细菌死亡。
蛇莓水提物作用后，大肠杆菌超微结构的变化主要
表现为菌体表面粗糙呈皱褶状，菌体质壁分离和细
胞质空腔化不及金黄色葡萄球菌严重，说明蛇莓对
大肠杆菌的作用可能是影响细菌细胞壁或细胞外膜
结构，导致细菌生长受抑制或菌体形态变异呈长菌
丝。从抑菌试验结果可知，蛇莓水提物对金黄色葡
萄球菌的抗菌活性大于对大肠杆菌，这似乎显示蛇
莓通过作用于细胞膜，引起质壁分离和细胞质空腔
化而呈现的抗菌活性，比通过作用于细菌细胞壁的
强。以上结果说明蛇莓水提物对不同细菌，其作用
机制有差异性，或通过作用于细菌细胞壁，或作用于
细胞膜引起质壁分离，细胞质空腔化发挥达到抑制
或杀灭细菌作用。
参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）
［１］　徐智勇．中药蛇莓的化学成分与药理学研究进展［Ｊ］．中医药导
报，２００６，１２（１１）：８０－８２．
ＸＵ　Ｚｈｉ－ｙｏｎｇ．Ｓｔｕｄｙ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｉｎｄｉａｎ　ｍｏｃｋｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ　ｈｅｒｂ［Ｊ］．Ｇｕｉｄｉｎｇ
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＴＣＭ，２００６，１２（１１）：８０－８２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２］　袁晓环，夏清平，贾艳梅．中药蛇莓的研究及应用进展［Ｊ］．中国
林副特产，２００８，９６（５）：９２－９３．
ＹＵＡＮ　Ｘｉａｏ－ｈｕａｎ，ＸＩＡ　Ｑｉｎｇ－ｐｉｎｇ，ＪＩＡ　Ｙａｎ－ｍｅｉ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ
ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｎｄｉａｎ　ｍｏｃｋｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ　ｈｅｒｂ［Ｊ］．
Ｆｏｒｅｓｔ　Ｂｙ－Ｐｒｏｄｕｃｔ　ａｎｄ　Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ，２００８，９６（５）：９２－
９３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［３］　王志华，陈碧，陈新玉．黄连提取方法的试验研究［Ｊ］．实用药物
与临床，２００８，１１（３）：１９１－１９２．
８４６ 中国兽医科学 第４３卷
ＷＡＮＧ　Ｚｈｉ－ｈｕａ，ＣＨＥＮ　Ｂｉ，ＣＨＥＮ　Ｘｉｎ－ｙｕ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔ
ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｒｈｉｚｏｍａ　Ｃｏｐｔｉｄｉｓ［Ｊ］．Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　ａｎｄ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅｍｅｄｉｅｓ，２００８，１１（３）：１９１－１９２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［４］　杜锐，韩文瑜，雷连成．金黄色葡萄球菌中草药抑菌剂的筛选研
究［Ｊ］．中国兽药杂志，２００６，４０（９）：１０－１３．
ＤＵ　Ｒｕｉ，ＨＡＮ　Ｗｅｎ－ｙｕ，ＬＥＩ　Ｌｉａｎ－ｃｈｅｎｇ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　ｈｅｒｂａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｎ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｄｒｕｇ，２００６，４０（９）：
１０－１３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［５］　陈奇．中药药理研究方法学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９９３：
２５９－２６４．
ＣＨＥＮ　Ｑｉ．Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｈｅｒｂａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｈｏｕｓｅ，１９９３：２５９－２６４．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［６］　陶翠，魏琴，殷中琼，等．油樟叶挥发油对三种真菌的抗菌效果
［Ｊ］．中国兽医科学，２０１１，４１（１）：８９－９３．
ＴＡＯ　Ｃｕｉ，ＷＥＩ　Ｑｉｎ，ＹＩＮ　Ｚｈｏｎｇ－ｑｉｏｎｇ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ａｃｔｉｖｉ－
ｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ　ｆｒｏｍ　Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ　ｌｏｎｇｅｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ
ｌｅａｖｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｒｅｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１，４１（１）：８９－９３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［７］　梁薇，梁莹，应惠芳．蛇莓抗菌作用的实验研究［Ｊ］．咸宁学院学
报：医学版，２００５，１９（３）：１６７－１６８．
ＬＩＡＮＧ　Ｗｅｉ，ＬＩＡＮＧ　Ｙｉｎｇ，ＹＩＮＧ　Ｈｕｉ－ｆａｎｇ．Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉａｎｎｉｎｇ
Ｃｏｌｌｅｇｅ：Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，１９（３）：１６７－１６８．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［８］　朱玉兰，刘惠萍，谢大斌．蛇莓有效成分的提取及抑菌试验［Ｊ］．
总装备部医学院学报，１９９９，１（２）：８２－８４．
ＺＨＵ　Ｙｕ－ｌａｎ，ＬＩＵ　Ｈｕｉ－ｐｉｎｇ，ＸＩＥ　Ｄａ－ｂｉｎ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｆｆｅｃ－
ｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ａｎｄ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ
Ｆｏｃｋｅ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｒａｌ　Ａｒｍａｍｅｎｔ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９９，１（２）：８２－８４．（ｉｎ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ）
［９］　曾晓黎．绞股蓝的体外抗菌活性试验［Ｊ］．中成药，１９９９，２１（６）：
３０８－３１０．
ＺＥＮＧ　Ｘｉａｏ－ｌｉ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ
ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌａ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｐａｔｅｎｔ　Ｍｅｄｉ－
ｃｉｎｅ，１９９９，２１（６）：３０８－３１０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１０］　罗庆华，卢成英，李立君．１０种中草药的体外抑菌试验［Ｊ］．中
国兽医科技，２００２，３２（３）：３８－３９．
ＬＵＯ　Ｑｉｎｇ－ｈｕａ，ＬＵ　Ｃｈｅｎｇ－ｙｉｎｇ，ＬＩ　Ｌｉ－ｊｕｎ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ　ｔｅｓｔ
ｏｆ　ｔｅｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉ－
ｎａｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２，３２（３）：３８－３９．（ｉｎ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ）
［１１］　张霞，艾启俊，孙忠宝，等．中草药提取物对沙门菌的抑菌效果
研究［Ｊ］．食品工业科技，２０１０，３１（１）：８８－９０．
ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａ，ＡＩ　Ｑｉ－ｊｕｎ，ＳＵＮ　Ｚｈｏｎｇ－ｂａｏ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ａｎｔｉ－
ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂｓ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ［Ｊ］．
Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，２０１０，３１（１）：８８－
９０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
（编辑　胡志敏）　
９４６第６期　　　　　　　　　　　 　　林居纯等：蛇莓水提物的体外抗菌活性及抗菌机制