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尖嘴林檎叶的化学成分



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尖嘴林檎叶的化学成分
卢 静, 杨丰庆, 夏之宁*
(重庆大学 化学化工学院,重庆 400044)
收稿日期:2013-12-26
基金项目:科技部国际合作 (2010DFA32680)
作者简介:卢 静 (1988—) ,女,硕士生,研究方向:分析化学。Tel:18696674884,E-mail:lujing0827@ aliyun. com
* 通信作者:夏之宁 (1961—) ,男,教授,博士生导师,研究方向:分析化学。Tel: (023)65106615,E-mail:znxia@ cqu. edu. cn
摘要:目的 对尖嘴林檎干燥叶的抗氧化化学成分进行研究。方法 运用硅胶、Sephadex LH-20 柱色谱及重结晶等方
法进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据及参考文献鉴定单体成分结构。结果 从尖嘴林檎干燥叶乙酸乙酯部位分
离得到 9 个化合物,分别鉴定为 β-谷甾醇 (1)、胡萝卜苷 (2)、齐墩果酸 (3)、熊果酸 (4)、阿江酸 (5)、白杨素
(6)、根皮苷 (7)、三叶苷 (8)和 isoetin 5-glucoside (9)。结论 以上化合物均为首次从该植物中分离得到,化合
物 5 首次从苹果属植物中分离得到,化合物 9 为首次从蔷薇科植物中分离得到。
关键词:尖嘴林檎叶;化学成分;萜类;黄酮;阿江酸;isoetin 5-glucoside
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)08-1692-05
doi:10. 3969 / j. issn. 1001-1528. 2014. 08. 028
Chemical constituents from leaves of Malus melliana
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LU Jing, YANG Feng-qing, XIA Zhi-ning*
(College of Chemistry and Chemical Engineering,Chongqing University,Chongqing 400030,China)
ABSTRACT:AIM To study the chemical constituents from the dried leaves of Malus melliana for antioxidation.
METHODS The constituents were separated and purified by column chromatography with Sephadex LH-20.
Their structures were identified on the basis of physiochemical properties,spectral methods (1H-NMR,13C-NMR)
and references. RESULTS Nine compounds were isolated from ethyl acetate extract of leaves of Malus melliana
and identified as β-sitosterol (1) ,daucosterol (2) ,oleanolic acid (3) ,ursolic acid (4) ,arjunolic acid (5) ,
chrysin (6) ,phlorizin (7) ,trilobatin (8)and isoetin 5-glucoside (9). CONCLUSION All the compounds
are isolated from leaves of Malus Melliana and compound 5 from Malus genus and compound 9 from the family of
Rosaceae for the first time.
KEY WORDS:Malus melliana;leaf;chemical constituents;terpenes;flavonoids;arjunolic acid;isoetin 5-glu-
coside
林檎,属于蔷薇科苹果属植物。据 《中国植
物志》[1]的分类,目前我国分布的有尖嘴林檎 Ma-
lus melliana (Hana-Mazz)Rehd 和台湾林檎 Malus
formosana (Kawak,Kooidz)Kawak,主要分布于我
国江西、湖南、福建、广西、云南、贵州及台湾等
地区。广西所谓的“大果山楂”、“广山楂”、湖南
江华俗称的“冬梨子”和兰山俗称的 “花红”均
属台湾林檎[2]。
林檎叶中含有许多有益人体健康的营养成分
(蛋氨酸,苏氨酸,维生素 C 及维生素 E 等)[3],
以及黄酮类、甾醇类、萜类、皂苷和有机酸等多种
化学成分[4],具有防癌、降压、抗氧化、保肝[5]、
提高免疫[6]等多种功效,并对一些细菌、霉菌和
酵母有抑制作用[7]。在我国广西、湖南等省 (区)
地区和少数民族地区群众有利用林檎叶作茶饮的习
惯,从 1988 年起,就已有多个科研项目对其进行
过研究,并加工制作了林檎保健茶、东力神保健茶
和林檎保健茶系列饮料产品[8],但产品仍未得到
广泛的推广和利用。我国林檎叶资源广阔,价格
低,但利用率不高。目前国内对林檎叶进行的相关
研究也主要集中在开发其保健功能方面,对其植物
化学方面的研究较少,不清楚其主要化学成分,且
不明确发挥活性作用的化学物质,未能得到很好的
推广和应用。
本课题组已经通过过氧化物酶体增殖物激活受
体 (PPARS)模型测定了林檎叶石油醚、乙酸乙
酯、正丁醇、水提醇沉及水提物去多糖这 5 个粗提
物部位的 PPARS 活性,实验结果表明林檎叶乙酸
乙酯部位的 PPARβ 与 PPARγ 活性约为阳性药 0. 9
倍,有较好的抗糖尿病作用。另外,本课题组还利
用 AB-8 大孔吸附树脂富集纯化林檎叶总黄酮,结
合 DPPH自由基清除法和铁离子还原能力法测定了
总黄酮的抗氧化能力,实验结果表明林檎叶总黄酮
与维生素 c相比有明显的抗氧化活性。因此为寻找
林檎叶的活性成分,本实验对广西柳州市售的尖嘴
林檎干燥叶进行了化学成分的研究,从乙酸乙酯部
位分离得到 9 个化合物,其中有 2 个甾醇类化合
物,3 个五环三萜类化合物和 4 个黄酮类化合物。
9 个化合物均为首次从该植物中分离得到,并根据
实际分离得到的单体化合物的量计算 (化合物的
质量 /干燥叶的质量) ,推测根皮苷 (约 5. 3‰)与
三叶苷 (约 3. 3‰)为尖嘴林檎叶的主要化学
成分。
1 仪器和材料
X-4 型显微熔点仪 (上海精密科学仪器有限公
司) ;川仪 LC-900B型高效液相色谱仪;薄层硅胶
(GF254,青岛海洋化工有限公司) ;Sephadex LH-
20 凝胶 (德国 merk) ;柱色谱用硅胶均购至青岛
裕民源硅胶试剂厂;Bruker Avance 500 型核磁共振
(1H-NMR和13 C-NMR)谱仪,TMS 为内标;试剂
均为分析纯。
尖嘴林檎干燥叶于 2010 年 10 月购于广西柳州
市融水县市场,经重庆市中药研究院生药室秦松云
副研究员鉴定为尖嘴林檎 Malus melliana (Hana-
Mazz)Rehd. 的干燥叶。
2 提取与分离
剪碎的干燥林檎叶 750 g,石油醚 60 ℃回流提
取 3 次 (每次 1 h) ,料液比 1 ∶ 8。残渣用 70%乙
醇水溶液 80 ℃回流提取 3 次 (每次 1 h)。合并提
取液,减压浓缩得浸膏 200 g,浸膏再用乙酸乙酯
萃取 4 次。各部分经减压浓缩,得石油醚部分
10. 0 g,乙酸乙酯部分 150. 0 g。取乙酸乙酯部分
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浸膏 140. 0 g,经硅胶柱色谱分离,以石油醚-乙酸
乙酯-甲醇梯度洗脱,按照 TLC特征合并相似成分,
共得 12 个馏分 (Fr. 1-Fr. 12)。Fr. 3 静置一段时间
后析出白色针状结晶,多次结晶得化合物 1
(50 mg) ,剩余部分经过重复硅胶柱分离得到化合
物 2 (15 mg) ;Fr. 4 经热甲醇溶解后,分为可溶部
分和沉淀部分,再分别对这两部分进行硅胶柱分离
及用 95%乙醇反复结晶得到化合物 3 (70 mg)和
4 (200 mg) ,化合物 3、4 为同分异构体;Fr. 6 经
重复硅胶柱层析,以石油醚-乙酸乙酯洗脱
(7 ∶ 3) ,得到化合物 5 (20 mg) ;Fr. 7 经硅胶柱色
谱分离后得到 Fr. 7 (A-E)5 个部分,其中 Fr. 7D
经 Sephadex LH-20 凝胶柱色谱分离,以二氯甲烷-
甲醇 (1 ∶ 1)洗脱得化合物 6 (30 mg) ;Fr. 9 采用
硅胶柱分离,以石油醚-乙酸乙酯 (1 ∶ 1)到
100%乙酸乙酯梯度洗脱,得 6 个馏分 Fr. 9 (A-
F) ,Fr. 9B经重复硅胶柱色谱分离得化合物 7 (约
4. 0 g) ,Fr. 9E经重复硅胶柱色谱分离得化合物 8
(约 2. 5 g) ,化合物 7、8 为同分异构体;Fr. 10 经
多次 Sephadex LH-20 凝胶柱色谱分离,二氯甲烷-
甲醇 (1 ∶ 1)洗脱得化合物 9 (25 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:白色粉末,mp 139 ~ 141 ℃。13 C-
NMR (125 Hz,CDCl3)δ:37. 4 (C-1) ,26. 2 (C-
2) ,72. 0 (C-3) ,42. 4 (C-4) ,140. 9 (C-5) ,121. 9
(C-6) ,33. 9 (C-7) ,31. 8 (C-8) ,50. 3 (C-9) ,
36. 7 (C-10) ,21. 3 (C-11) ,40. 0 (C-12) ,42. 5
(C-13) ,56. 9 (C-14) ,24. 5 (C-15) ,29. 3 (C-
16) ,56. 2 (C-17) ,19. 2 (C-18) ,12. 0 (C-19) ,
36. 3 (C-20) ,18. 4 (C-21) ,32. 1 (C-22) ,28. 4
(C-23) ,46. 0 (C-24) ,29. 3 (C-25) ,12. 2 (C-
26) ,19. 6 (C-27) ,23. 2 (C-28) ,19. 0 (C-29)。
以上数据与文献 [9]报道的基本一致,故确定化
合物 1 为 β-谷甾醇.
化合物 2:白色粉末,mp 276 ~ 278 ℃。1H-
NMR (500 Hz,DMSO-d6)δ:5. 32 (1H,s,H-6)
为烯氢质子,4. 21 (1H,d,J = 7. 5 Hz,H-1)为糖
上端基质子,3. 11 (1H,q,J = 4. 7 Hz,H-4) ,
3. 04 (2H,q,J = 5. 0 Hz,H-3,2) ,2. 88 (1H,
m,H-5)分别为葡萄糖环上质子,3. 42 (1H,dd,
J = 5. 2,10. 8 Hz,H-6) ,3. 41 (2H,m,H-6)为
葡萄糖 C-6上质子信号,3. 63 (1H,m,H-3α) ;
0. 64,0. 95 分别为两个甲基单峰。13C-NMR (125
Hz,DMSO-d6)δ:36. 8 (C-1) ,29. 3 (C-2) ,76. 9
(C-3,C-5) ,41. 8 (C-4,C-13) ,140. 4 (C-5) ,
121. 2 (C-6) ,31. 4 (C-7,8) ,49. 6 (C-9) ,36. 2
(C-10) ,20. 6 (C-11) ,38. 3 (C-12) ,56. 2 (C-
14) ,23. 9 (C-15) ,27. 8 (C-16) ,55. 4 (C-17) ,
11. 7 (C-18) ,19. 1 (C-19) ,35. 5 (C-20) ,18. 6
(C-21) ,33. 3 (C-22) ,25. 4 (C-23) ,45. 1 (C-
24) ,28. 7 (C-25) ,19. 7 (C-26) ,18. 9 (C-27) ,
22. 6 (C-28) ,11. 8 (C-29) ,100. 8 (C-1) ,73. 4
(C-2) ,76. 7 (C-3) ,70. 0 (C-4) ,76. 9 (C-5) ,
61. 0 (C-6)。以上数据与文献 [10-11]报道的基
本一致,故确定化合物 2 为胡萝卜苷。
化合物 3:白色粉末,mp 308 ~ 310 ℃,香草
醛-浓硫酸显红色。1H-NMR (500 Hz,DMSO-d6)δ:
5. 12 (1H,br s,H-12)为一个三取代烯键信号,
2. 99 (1H,t,J = 4. 5 Hz,H-3) ,2. 10 (1H,d,J =
11. 5 Hz,H-18) ,1. 03 (3H,s,H-27) ,0. 91 (3H,
d,J = 7. 5 Hz,H-30) ,0. 89 (3H,s,H-23) ,0. 86
(3H,s,H-25) ,0. 81 (3H,d,J = 6. 5 Hz,H-29) ,
0. 74 (3H,s,H-26) ,0. 67 (3H,s,H-24)为 7 个
甲基氢信号。13C-NMR (125 Hz,DMSO-d6)δ:38. 4
(C-1) ,27. 0 (C-2) ,76. 8 (C-3) ,38. 5 (C-4,-8) ,
54. 8 (C-5) ,17. 0 (C-6) ,36. 3 (C-7) ,52. 4 (C-
9) ,38. 3 (C-10) ,18. 0 (C-11) ,124. 6 (C-12) ,
138. 2 (C-13) ,41. 6 (C-14) ,27. 6 (C-15) ,21. 1
(C-16) ,47. 0 (C-17) ,39. 1 (C-18) ,46. 8 (C-
19) ,36. 5 (C-21) ,30. 2 (C-22) ,28. 3 (C-23) ,
16. 1 (C-24) ,15. 2 (C-25) ,16. 9 (C-26) ,23. 8
(C-27) ,178. 3 (C-28) ,32. 7 (C-29) ,23. 3 (C-
30)。以上数据与文献 [12]报道的基本一致,故
确定化合物 3 为齐墩果酸。
化合物 4:白色粉末,mp 287 ~ 288 ℃,香草
醛-浓硫酸显红色。1H-NMR (500 Hz,DMSO-d6)δ:
5. 12 (1H,br s,H-12)为一个三取代烯键信号,
2. 99 (1H,t,J = 4. 5 Hz,H-3) ,2. 10 (1H,d,J =
11. 5 Hz,H-18) ,1. 03 (3H,s,H-27) ,0. 91 (3H,
d,J = 7. 5 Hz,H-30) ,0. 89 (3H,s,H-23) ,0. 86
(3H,s,H-25) ,0. 80 (3H,d,J = 6. 5 Hz,H-29) ,
0. 74 (3H,s,H-26) ,0. 67 (3H,s,H-24)为 7 个
甲基氢信号。13C-NMR (125 Hz,DMSO-d6)δ:38. 3
(C-1 ) ,27. 0 (C-2) ,76. 9 (C-3) ,38. 4 (C-4) ,
54. 8 (C-5) ,18. 0 (C-6) ,30. 2 (C-7 ) ,39. 1 (C-
8) ,47. 0 (C-9) ,36. 6 (C-10) ,23. 8 (C-11) ,
124. 6 (C-12) ,138. 2 (C-13) ,41. 6 (C-14) ,32. 7
(C-15) ,22. 9 (C-16) ,46. 8 (C-17) ,52. 4 (C-
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18) ,38. 5 (C-19) ,39. 0 (C-20) ,27. 6 (C-21) ,
36. 3 (C-22) ,28. 3 (C-23) ,16. 9 (C-24) ,16. 1
(C-25) ,15. 2 (C-26) ,23. 3 (C-27) ,178. 3 (C-
28) ,17. 0 (C-29) ,21. 1 (C-30)。以上数据与文献
[13]报道的基本一致,故确定化合物 4 为熊果酸。
化合物 5:白色粉末 (CH2Cl2-MeOH) ,mp 175
~ 176 ℃,香草醛-浓硫酸显红色。1H-NMR (500
Hz,DMSO-d6)δ:5. 23 (1H,br s,H-12)为一个
三取代烯键信号,3. 12 (1H,t,J = 4. 5 Hz,H-3) ,
2. 17 ~ 2. 23 (1H,m,H-18) ,0. 67 (3H,s,H-24) ,
0. 71 (3H,s,H-26) ,0. 88 (3H,s,H-25) ,0. 90
(3H,s,H-23) ,0. 92 (3H,d,J = 7. 5 Hz,H-30) ,
1. 24 (3H,s,H-27) ,0. 84 (3H,d,J = 12. 0 Hz,
H-29)为 7 个甲基氢信号。13C-NMR (125 Hz,DM-
SO-d6)δ:44. 7 (C-1) ,67. 1 (C-2) ,82. 2 (C-3) ,
37. 8 (C-4) ,54. 9 (C-5) ,18. 2 (C-6) ,32. 4 (C-
7) ,41. 2 (C-8) ,47. 3 (C-9) ,37. 8 (C-10) ,23. 2
(C-11) ,122. 2 (C-12) ,143. 5 (C-13) ,41. 2 (C-
14) ,28. 4 (C-15) ,23. 2 (C-16) ,46. 7 (C-17) ,
43. 2 (C-18) ,80. 1 (C-19) ,34. 9 (C-20) ,28. 8
(C-21) ,32. 3 (C-22) ,24. 4 (C-23) ,24. 1 (C-
24) ,16. 2 (C-25) ,17. 0 (C-26) ,27. 2 (C-27) ,
179. 2 (C-28) ,24. 5 (C-29) ,24. 1 (C-30)。以上
数据与文献 [14]报道的基本一致,故确定化合物
5 为阿江酸。
化合物 6:淡黄色棱柱行结晶 (甲醇) ,mp
285 ~ 286 ℃。1H-NMR (500 Hz,DMSO-d6)δ:8. 06
(2H,d,J = 7. 5 Hz,H-2,H-6 ) ,7. 55 ~ 7. 62
(3H,m,H-3,H-4,H-5) ,6. 96 (1H,s,H-3) ,
6. 52 (1H,s,H-8) ,6. 22 (1H,s,H-6)。13 C-NMR
(125 Hz,DMSO-d6)δ:163. 2 (C-1) ,105. 2 (C-
3) ,181. 9 (C-4) ,161. 5 (C-5) ,99. 0 (C-6) ,
164. 5 (C-7) ,94. 1 (C-8) ,157. 5 (C-9) ,104. 0
(C-10) ,130. 7 (C-1 ) ,126. 4 (C-2 ,C-6 ) ,129. 2
(C-3 ,C-5 ) ,132. 0 (C-4 )。以上数据与文献
[15]报道的基本一致,故确定化合物 6 为白杨素。
化合物 7:淡黄色针状结晶,mp 113 ~ 114 ℃。
1H-NMR (500 Hz,DMSO-d6)δ:2. 80 (2H,t,J =
7. 5Hz,H-β) ,3. 19-3. 74 (8H,m,glucose H and
H-α) ,4. 95 (1H,d,J = 7. 5 Hz,anomeric H) ,
4. 62 (1H,t,J = 6. 0 Hz,carbohydrate OH) ,5. 07
(1H,d,J = 5. 5 Hz,carbohydrate OH) ,5. 17 (1H,
d,J = 4. 0 Hz,carbohydrate OH) ,5. 31 (1H,d,
J = 5. 0 Hz,carbohydrate OH) ,5. 95 (1H,d,J =
2. 0 Hz,H-5) ,6. 15 (1H,d,J = 2. 0 Hz,H-3) ,
6. 66 (2H,d,J = 8. 0 Hz,H-3,H-5) ,7. 05 (2H,
d,J = 8. 5 Hz,H-2,H-6,9. 11,10. 59 (2 br s,phe-
nolic OH ) ,13. 53 (s,6-OH)。13 C-NMR (125 Hz,
DMSO-d6)δ:131. 6 (C-1) ,129. 3 (C-2,C-6) ,
115. 1 (C-3,C-5) ,155. 3 (C-4) ,45. 1 (C-α) ,
29. 1 (C-β) ,105. 2 (C-1) ,160. 9 (C-2) ,96. 9
(C-3) ,165. 5 (C-4) ,94. 4 (C-5) ,164. 5 (C-
6) ,204. 8 (CC = O) ,100. 9 (CG-1) ,73. 3 (CG-
2) ,76. 8 (CG-3) ,69. 5 (CG-4) ,77. 3 (CG-5) ,
60. 6 (CG-6)。以上数据与文献 [16]报道的基本
一致,故确定化合物 7 为根皮苷。
化合物 8:白色针状结晶,mp 168 ~ 169 ℃。
1H-NMR (500 Hz,DMSO-d6)δ:6. 97 (2H,d,J =
8. 5 Hz,H-2,H-6) ,6. 62 (2H,d,J = 8. 5 Hz,H-
3,H-5 ) ,6. 10,5. 92 (2H,2s,H-3,H-5) ,4. 96
(1H,d,J = 7 Hz,anomeric H) ,3. 16 ~ 3. 73 (8H,
m,glucose H and H-α) ,3. 92,3. 94,3. 95,3. 96
(4H,4s,carbohydrate OH) ,2. 74 (2H,t,J = 7. 0
Hz,H-β)。13 C-NMR (125 Hz,DMSO-d6)δ:133. 3
(C-1) ,130. 5 (C-2,C-6) ,155. 6 (C-4) ,116. 6
(C-3,C-5) ,46. 0 (C-α) ,30. 1 (C-β) ,206. 5
(CC = O) ,106. 6 (C-1) ,166. 2 (C-2,C-6) ,
95. 5 (C-3,C-5) ,165. 1 (C-4) ,101. 2 (CG-1) ,
74. 1 (CG-2) ,77. 4 (CG-3) ,70. 5 (CG-4) ,77. 6
(CG-5) ,62. 7 (CG- 6)。以上数据与文献 [17]
报道的基本一致,故确定化合物 8 为三叶苷。
化合物 9:黄色粉末,没有确定的熔点,260 ℃
以上变黑。1H-NMR (500 Hz,DMSO-d6)δ:11. 23
(1H,br s,5-OH) ;9. 68 (1H,br s,7-OH) ,9. 30
(2H,br s,2-OH,4-OH) ,7. 41 (1H,s,H-6) ,
7. 20 (1H,d,J = 7. 5 Hz,H-3) ,6. 82 (1H,d,J =
8. 0 Hz,H-3) ,6. 51 (1H,s,H-8) ,6. 39 (1H,s,
H-6) ,4. 63 (1H,s,H-1″) ,3. 16 ~ 3. 67 之间的多
重峰为葡萄糖上的质子信号。13 C-NMR (125 Hz,
DMSO-d6)δ:167. 4 (C-2) ,116. 1 (C-3) ,178. 8
(C-4) ,157. 0 (C-5) ,97. 6 (C-6) ,167. 5 (C-7) ,
92. 4 (C-8) ,147. 8 (C-9) ,103. 7 (C-10) ,117. 8
(C-1) ,145. 6 (C-2) ,110. 8 (C-3) ,145. 7 (C-
4) ,124. 4 (C-5) ,123. 5 (C-6) ,99. 7 (CG-1) ,
73. 0 (CG-2) ,76. 6 (CG-3) ,69. 4 (CG-4) ,77. 2
(CG-5) ,60. 5 (CG- 6)。以上数据与文献 [18]
报道的基本一致,故确定化合物 9 为 isoetin 5-glu-
coside.
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2014 年 8 月
第 36 卷 第 8 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
August 2014
Vol. 36 No. 8
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硝酸钯基体改进剂在原子吸收石墨炉法测定黄芪中铅的应用
吴晓平, 杨华剑
(浙江省临海市食品药品检验检测中心,浙江 临海 317000)
收稿日期:2013-12-23
作者简介:吴晓平 (1968—) ,男,主管技师,主要从事食品药品检验与分析。Tel: (0576)85306113,E-mail:wuxiaoping5569@
163. com
摘要:目的 选择合适的基体改进剂改进原子吸收石墨炉法测定黄芪中痕量铅。方法 比较硝酸钯、硝酸镁、磷酸二
氢铵、乙酸铵、抗坏血酸及其组合在原子吸收法测定黄芪中铅残留量时基体改进剂用量、灰化温度和原子化温度。结
果 硝酸钯能有效提高灰化温度和原子化温度。最佳硝酸钯用量为 5 μg、灰化温度 1 300 ℃、原子化温度 1 900 ℃。
线性相关系数在 6 ~ 100 μg /L 内是 0. 999 6,加样回收率为 91. 5% ~ 103. 9%,方法检出限是 0. 086 mg /kg,RSD 为
2. 4%。结论 硝酸钯优于其他基体改进剂,本方法的仪器检测限和方法检出限均优于《中国药典》。
关键词:黄芪;铅;原子吸收石墨炉法;硝酸钯;基体改进剂
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)08-1696-05
doi:10. 3969 / j. issn. 1001-1528. 2014. 08. 029
Determination of lead in Astragali Radix by graphite furnace atomic absorption
spectrometry with palladium nitrate as a modifier
WU Xiao-ping, YANG Hua-jian
(Linhai Center for Food and Drug Control,Linhai 317000,China)
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第 36 卷 第 8 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
August 2014
Vol. 36 No. 8