全 文 ：HPLC法同时测定齿叶白鹃梅叶子中芹菜素 － 7 － O － β － D －
新橙皮糖苷和芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖苷的含量
才谦1，王聪2，刘玉强1
第一作者 Tel:(0411)87586318;E － mail:caiqianmail@ sina． com
(1．辽宁中医药大学，大连 116600;2．铁岭卫生职业学院，铁岭 112008)
摘要 目的:建立同时测定齿叶白鹃梅叶子中芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷和芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖苷含量的
HPLC法。方法:采用 Topsil C18(5 μm，4. 6 mm × 250 mm)色谱柱，流动相为乙腈 － 2%醋酸水溶液(23∶ 77) ，流速 1. 0 mL·
min －1，检测波长 267 nm。结果:芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷和芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖苷的线性范围分别为
1. 424 ～ 8. 544 μg(r = 0. 9996)和 0. 17 ～ 1. 02 μg(r = 0. 9995) ;平均回收率(n = 6)分别为 103. 0%(RSD = 2. 2%)和 100. 4%
(RSD = 2. 1%)。结论:该方法准确、可靠，可用于齿叶白鹃梅叶子的质量控制。
关键词:齿叶白鹃梅;高效液相色谱法;黄酮成分;芹菜素新橙皮糖苷;芹菜素葡萄糖苷
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2011)10 － 1899 － 03
HPLC determination of apigenin － 7 － O － β － D － neospheroside
and apigenin － 7 － O － β － D － glucopyranoside in the leaves of
Exochorda serratifolia S． Moore
CAI Qian1，WANG Cong2，LIU Yu － qiang1
(1． Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China;2． Tieling health college，Tieling 112008，China)
Abstract Objective:To develop an HPLC method for determination of the contents of apigenin － 7 － O － β － D －
neospheroside and apigenin － 7 － O － β － D － glucopyranoside in the leaves of Exochorda serratifolia S． Moore．
Methods:Topsil C18(5 μm，4. 6 mm ×250 mm)column was adopted with a mobile phase of acetonitrile － 2% ace-
tic acid(23∶ 77) ，at the flow rate of 1. 0 mL·min －1 ． The UV detection was set at 267 nm． Results:The linear ran-
ges of apigenin － 7 － O － β － D － neospheroside and apigenin － 7 － O － β － D － glucopyranoside were 1. 424 －
8. 544 μg(r = 0. 9996)和 0. 17 － 1. 02 μg(r = 0. 9995) ，respectively;The average recoveries of apigenin － 7 － O －
β － D － neospheroside and apigenin － 7 － O － β － D － glucopyranoside were 103. 0%(RSD = 2. 2%)and 100. 4%
(RSD =2. 1%)． Conclusion:The method is accurate and reliable，and can be used to the quality control of leaves
of Exochorda serratifolia．
Key words:Exochorda serratifolia S． Moore;HPLC;flavorroids;apigenin neospheroside;apigenin glucopyranoside
齿叶白鹃梅(Exochorda serratifolia S． Moore) ，为
蔷薇科绣线菊亚科白鹃梅属的植物［1］，生长在辽宁
省朝阳、凌源、喀左等地区和河北一带。白鹃梅属的
另一个种白鹃梅主要生长在我国的江苏、浙江、安徽
一带，以其根皮、树皮入药，用于腰骨酸痛的治
疗［2］;齿叶白鹃梅的药用价值还不是很明确。但在
朝阳市凌源县，当地居民把齿叶白鹃梅的嫩叶作为
一种野菜食用，并且民间流传其具有治疗和预防糖
尿病的功效。笔者通过对其化学成分进行系统分
离，从中分离得到多个黄酮类化合物［3，4］。本论文
以芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷和芹菜素 － 7
－ O － β － D －葡萄糖苷这 2 个含量较高的黄酮类化
合物为指标进行了含量测定方法的研究［5 ～ 7］，为齿
叶白鹃梅叶子的深入开发奠定基础。
1 仪器与试药
Agilent 1100 series高效液相色谱仪，包括真空
脱气机、四元泵、柱温箱、VWD、HP 1100 化学工作
站，美国安捷伦科技有限公司;UV － 3010 型紫外可
—9981—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(10)
DOI:10.16155/j.0254-1793.2011.10.009
见分光光度计，日本东芝公司;CP225D 型电子天
平，北京赛多利斯仪器系统有限公司;KH － 300B 型
超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司。
实验用齿叶白鹃梅叶子:采于辽宁省朝阳市凌源
县，经辽宁中医药大学植物教研室王冰教授鉴定为齿
叶白鹃梅(Exochorda serratifolia S． Moore．)的叶子。
对照品芹菜素 － 7 － O － β － D － 新橙皮糖苷
(apigenin － 7 － O － β － D － neospheroside)和芹菜素
－7 － O － β － D －葡萄糖苷(apigenin － 7 － O － β － D
－ glucopyranoside)为自制(采用波谱数据对化合物
进行结构鉴定［3］) ，采用 HPLC 法测定纯度达到
98%以上;乙腈为色谱纯(天津市科密殴化学试剂
有限公司) ，冰醋酸为分析纯(天津市凯信化学工业
有限公司) ，三级水(娃哈哈有限公司)。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取对照品芹菜素
－ 7 － O － β － D －新橙皮糖苷及芹菜素 － 7 － O － β
－ D －葡萄糖苷适量，分别用甲醇配制成每 1 mL 含
芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷 0. 7 mg 的对照
品溶液和每 1 mL含芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖
苷 0. 1 mg的对照品溶液，即得。
2. 2 供试品溶液的制备 精密称取齿叶白鹃梅叶
子粉末(40 目)2. 5 g，加入甲醇约 50 mL，索氏提取
4 h，加压回收溶剂，以甲醇定容至 50 mL量瓶中，过
0. 45 μm微孔滤膜，即得。
2. 3 色谱条件 采用 Topsil C18(5 μm，4. 6 mm ×
250 mm)色谱柱［月旭材料科技(上海)有限公司］，
流动相为乙腈 － 2%醋酸水溶液(23 ∶ 77) ，流速 1. 0
mL·min －1，检测波长 267 nm，进样量 5 μL。在上
述色谱条件下，芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷
的理论塔板数为 11998，分离度为 1. 8;芹菜素 － 7 －
O － β － D －葡萄糖苷的理论塔板数为 9993，分离度
为 2. 43。样品及对照品色谱图见图 1。
2. 4 线性关系考察
精密吸取浓度为 0. 712 mg·mL －1的芹菜素 － 7
－O － β －D －新橙皮糖苷对照品溶液 2，4，6，8，10，12
μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量为横坐
标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为:
Y = 1. 308 × 103X + 512. 3 r = 0. 9996
表明芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷进样量在
1. 424 ～ 8. 544 μg范围内线性关系良好。
另精密吸取浓度为 0. 085 mg·mL －1的芹菜素 －
7 －O － β － D －葡萄糖苷对照品溶液 2，4，6，8，10，12
μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量为横坐
图 1 样品(A)及对照品(B，C)HPLC色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of sample(A)and reference subatances(B，
C)
1．芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷(apigenin － 7 － O － β － D －
neospheroside) 2．芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖苷(apigenin － 7 －
O － β － D － glucopyranoside)
标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为:
Y = 1. 984 × 103X － 103. 1 r = 0. 9995
表明芹菜素 － 7 － O － β － D － 葡萄糖苷进样量在
0. 17 ～ 1. 02 μg范围内线性关系良好。
2. 5 精密度试验 取同一供试品溶液连续进样 6
次，测定峰面积，计算芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙
皮糖苷、芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖苷的 RSD(n
= 6)分别为 2. 1%和 2. 7%。结果表明，该方法精密
度符合要求。
2. 6 稳定性试验 配制供试品溶液后分别在 0，2，
4，6，8，10，12 h进样，测定峰面积，计算芹菜素 － 7 －
O － β － D －新橙皮糖苷和芹菜素 － 7 － O － β － D －
葡萄糖苷 RSD(n = 7)均为 2. 7%。结果表明，供试
品溶液在 12 h内稳定。
2. 7 重复性试验 取同一样品 6 份，按“2. 2”项下
方法制备供试品溶液，进样测定峰面积，计算芹菜素
－ 7 － O － β － D －新橙皮糖苷和芹菜素 － 7 － O － β
－ D －葡萄糖苷的平均含量(n = 6)分别为 15. 13 mg
—0091— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(10)
·g －1和 1. 83 mg·g －1，RSD分别为 2. 3%和 2. 2%。
表明该方法重复性好。
2. 8 回收率试验 取“2. 7”项下已测知含量的样
品 6 份，每份 1. 25 g，精密称定，分别加入芹菜素 － 7
－ O － β － D －新橙皮糖苷对照品溶液(浓度为 1. 89
mg·mL －1)10 mL 和芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄
糖苷对照品溶液(浓度为 0. 229 mg·mL －1)10 mL，
按“2. 2”项下方法制备供试溶液，进样测定。结果
芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷和芹菜素 － 7 －
O － β － D － 葡萄糖苷平均回收率(n = 6)分别为
103. 0%和 100. 4%，RSD分别为 2. 2%和 2. 1%。
2. 9 样品测定 取4批样品各3份，分别按“2. 2”项
下方法制备供试品溶液，进样测定，采用外标两点法
计算样品中芹菜素 －7 －O － β － D －新橙皮糖苷和芹
菜素 －7 －O － β －D －葡萄糖苷含量，结果见表 1。
表 1 样品中芹菜素 －7 －O － β －D －新橙皮糖苷及
芹菜素 －7 －O － β －D －葡萄糖苷的含量(n =3)
Tab 1 Contents of apigenin －7 －O － β －D －
neospheroside and apigenin －7 －O － β －D －
glucopyranoside in the samples
样品号
(sample
No．)
芹菜素 －7 － O － β － D －新橙皮
糖苷(apigenin － 7 － O － β －
D － neospheroside)
芹菜素 －7 － O － β － D －葡萄
糖苷(apigenin － 7 － O － β －
D － glucopyranoside)
含量
(content)/%
RSD
/%
含量
(content)/%
RSD
/%
20100504 1. 86 2. 1 0. 208 1. 9
20100506 1. 74 2. 0 0. 170 2. 0
20100508 1. 25 2. 1 0. 103 2. 0
20100511 1. 61 2. 0 0. 190 2. 0
3 讨论
3. 1 试验中考察了甲醇、乙醇、水 3 种提取溶剂，结
果表明甲醇提取 2 种黄酮的含量最高，故选定甲醇
为该试验的提取溶剂。同时考察了超声提取、回流
提取、索氏提取 3 种方法，提取时间分别考察了超声
提取 30 min、回流提取 30 min、回流提取 1 h、回流提
取 2 h、索氏提取 4 h。结果选定索氏提取 4 h，芹菜
素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖苷及芹菜素 － 7 － O －
β － D －葡萄糖苷的含量明显高于其他方法。．
3. 2 试验中尝试采用流动相甲醇 － 0. 03%磷酸水
溶液、甲醇 － 0. 05%醋酸水溶液、甲醇 － 2%醋酸水
溶液、乙腈 － 2%醋酸水溶液。结果采用乙腈 － 2%
醋酸水溶液系统，芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖
苷及芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖苷的分离度及
对称性均良好，所以选择该系统。通过对乙腈 － 2%
醋酸水溶液不同比例的选择，确定乙腈 － 2%醋酸水
溶液比例为 23 ∶ 77，分离效果最好，保留时间适中;
试验中检测波长的选择是通过紫外 200 ～ 400 nm扫
描，在 267 nm处芹菜素 － 7 － O － β － D －新橙皮糖
苷和芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖苷均有最大吸
收，所以确定检测波长为 267 nm。
3. 3 小结 笔者对齿叶白鹃梅叶子进行了系统分
离，在分离得到的化合物中黄酮类化合物居多，并且
对分得的所有化合物与齿叶白鹃梅叶子的 HPLC 色
谱峰进行对比标定，得知芹菜素 － 7 － O － β － D －新
橙皮糖苷和芹菜素 － 7 － O － β － D －葡萄糖苷为齿
叶白鹃梅叶子中 2 种含量较高的成分，所以对二者
进行了含量测定。通过实验首次建立了齿叶白鹃梅
叶子的含量测定方法，为齿叶白鹃梅的深入研究奠
定了基础。
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(本文于 2010 年 10 月 27 日收到)
—1091—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(10)