全 文 ：大孔吸附树脂分离纯化齿叶白鹃梅叶中的总黄酮
王灵芝，刘玉强，才　谦＊
（辽宁中医药大学，辽宁 大连１１６６００）
摘　要：目的：筛选用来富集齿叶白鹃梅叶总黄酮的树脂型号，并确定最佳纯化工艺。方法：通过考察各
种树脂对总黄酮的吸附和解吸附情况确定最佳树脂型号，对上样浓度、洗脱溶剂等因素的考察，确定最
佳工艺参数。结果：最适宜树脂为Ｄ１０１型大孔树脂，上样溶液中总黄酮的浓度以２．５ｍｇ·ｍＬ－１为宜，最
大上样量为１．５倍树脂床体积，洗脱溶剂为９０％乙醇，洗脱剂用量为４．５倍树脂床体积。结论：采用此
工艺纯化后的总黄酮的含量可达到５９．１％。
关键词：齿叶白鹃梅叶；黄酮类化合物；大孔吸附树脂
中图分类号：Ｒ２８４　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１２）０１－００１５－０２
收稿日期：２０１１－１０－１９
作者简介：王灵芝（１９８６－ ），女，辽宁中医药大学硕士研究生，研究方向为中药化学；才谦（１９７２－），女，博士，辽宁中医药大
学副教授，研究方向为中药及天然药物化学。
　　齿叶白鹃梅（Ｅｘｏｃｈｏｒｄａ　ｓｅｒｒａｔｉｆｏｌｉａ　Ｓ．Ｍｏｏｒｅ．）是蔷
薇科绣线菊亚科白鹃梅属植物［１］。白鹃梅属分为白鹃梅和
齿叶白鹃梅两个种，其中白鹃梅主要生长在我国的江苏、浙
江、安徽一带，以其根皮、树皮入药，用于腰膝酸痛的治
疗［２］；齿叶白鹃梅主要生长在辽宁凌源、喀左等地区及河北
一带，其花蕾和幼叶可食用，并且作为民间偏方来预防和治
疗糖尿病。本课题组从齿叶白鹃梅叶中分离得到多个黄酮
化合物［３］，为进一步研究，对总黄酮进行富集。本文采用静
态吸附法及吸附动力学试验对７种大孔吸附树脂进行筛
选，并优选纯化工艺。
１　仪器与试药
１．１　仪器
ＵＶ－３０１０型紫外分光光度计（日本岛津）；ＡＲ２１４０电子
分析天平（上海奥豪斯公司）；ｓａｒｔｏｒｉｕｓ　ＣＰ２２５Ｄ型电子天平
（十万分之一，德国ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司）；恒温水浴锅（巩义市英
峪予华仪器厂）；ＤＦＴ型药用万能粉碎机（温岭市大得中药
机械有限公司生产）。
１．２　试药
乙醇（分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司）；大孔树
脂 ＨＰＤ６００，ＨＰＤ１００，ＤＭ１３０，ＨＰＤ８２６，ＡＢ－８，Ｄ１０１，
ＨＰＤ４００（沧州宝恩大孔树脂有限公司）。实验用齿叶白鹃
梅叶：采于辽宁省朝阳市凌源县，由辽宁中医药大学王冰教
授鉴定为齿叶白鹃梅（Ｅｘｏｃｈｏｒｄａ　ｓｅｒｒａｔｉｆｏｌｉａ　Ｓ．Ｍｏｏｒｅ．）
叶；芦丁对照品（自制，纯度为９８％以上）。
２　方法与结果
２．１　树脂型号的考查
２．１．１　树脂的预处理
无水乙醇充分浸泡２４ｈ后用乙醇洗至洗出液加适量水
时无白色混浊现象，然后用去离子水洗尽醇，再用５％的盐
酸浸泡３ｈ后用去离子水洗至中性后５％氢化钠溶液浸泡
３ｈ，同样洗至中性，滤去水溶液，烘干备用。
２．１．２　树脂静态吸附筛选实验
（１）静态吸附量及吸附率的测定。
将７种不同型号的树脂分别按上述方法预处理，各取
３ｇ精密称定，分别置于带磨口塞的三角瓶中，精密加入齿叶
白鹃梅叶的提取液１５ｍＬ（总黄酮浓度为２．７ｍｇ·ｍＬ－１），充
分振摇，静置２４ｈ后，抽滤，测定滤液中总黄酮浓度。计算
各树脂室温下的吸附量及吸附率：
Ｅ＝（Ｃ０－Ｃｒ）／Ｃ０×１００％ Ｑ＝（Ｃ０－Ｃｒ）Ｖ／Ｗ
其中：Ｅ为吸附率，Ｃ０起始浓度（ｍｇ·ｍＬ－１），Ｃｒ为滤液
浓度（ｍｇ·ｍＬ－１），Ｑ 为吸附量（ｍｇ·ｇ－１），Ｖ 为溶液体积
（ｍＬ），Ｗ为树脂重量（ｇ）。
（２）静态解吸率的测定。
收集（１）中滤出滤液的饱和树脂，精密加入９５％乙醇
２０ｍＬ进行解吸，充分振摇，静置２４ｈ，滤过得解吸液，测定
总黄酮浓度。计算解吸率（％）：
解吸率（％）＝（解吸液浓度×解吸液体积）／树脂的饱
和吸附量×１００％
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　　结果见表１。
根据上述吸附率和解析率结果可以看出Ｄ１０１树脂对
齿叶白鹃梅叶总黄酮的吸附量和解吸率适中。因此，选择
Ｄ１０１树脂进行总黄酮的富集纯化。
表１　７种树脂对齿叶白鹃梅叶总黄酮的静态吸附
－解吸附考察结果 （ｎ＝３）
树脂型号
吸附量
（ｍｇ·ｇ－１）
吸附率
（％）
解吸量
（ｍｇ）
解吸率
（％）
ＨＰＤ６００　 ６．８　 ５０．３７　 １４．３３　 ６９．９４
ＨＰＤ１００　 ６．０７　 ４４．９６　 １４．８０　 ８０．７３
ＨＰＤ８２６　 ６．５７　 ４８．６７　 １５．６　 ７８．１５
ＨＰＤ４００　 ６．４５　 ４７．７８　 １７．８　 ９１．０３
ＤＭ１３０　 ４．５９　 ３４．００　 １２．５８　 ９０．６１
ＡＢ－８　 ５．３１　 ３９．３３　 １５．４３　 ９４．４９
Ｄ１０１　 ６．２４　 ４６．２２　 １７．２１　 ９１．５８
２．２　Ｄ１０１型大孔吸附树脂纯化齿叶白鹃梅叶总黄酮的
工艺参数优选
２．２．１　最佳上样浓度的确定
将不同浓度的齿叶白鹃梅叶样品溶液（总黄酮的上样
量一致），分别通过装有相同量 Ｄ１０１型大孔树脂的层析柱
（１ＢＶ＝２０ｍＬ）进行动态吸附［４］。考察树脂对不同浓度上样
液中总黄酮吸附差别。待吸附完全后以３ＢＶ水洗脱，３．５
ＢＶ　９５％乙醇解吸，收集解吸液，测定总黄酮回收率，确定最
佳上样浓度。从结果可知，大孔树脂对齿叶白鹃梅叶总黄
酮的吸附随浓度的变化而变化，齿叶白鹃梅叶总黄酮的回
收率在上样浓度为２ｍｇ·ｍＬ－１时最高。因此，确定齿叶白
鹃梅叶提取物上样液总黄酮的浓度为２．０ｍｇ·ｍＬ－１＼。
２．２．２　泄漏曲线的绘制
将不同体积总黄酮的浓度为２．０ｍｇ·ｍＬ－１的齿叶白鹃
梅叶样品液通过Ｄ１０１大孔树脂的玻璃柱（１ＢＶ＝２０ｍＬ）进
行动态吸附，分部收集洗脱液，测定每份收集液总黄酮含
量，计算未吸附率，为了总黄酮保留完全，设定未吸附率
１５％为泄漏点，从结果可知，上样量为３０ｍＬ时，未吸附率开
始明显增大，说明树脂柱此时不能完全吸附样品液中的总
黄酮。据此确定３０ｍＬ（１．５ＢＶ）作为最大上样量。
２．２．３　洗脱溶剂的筛选
按上述确定的吸附条件进行动态吸附后，用３ＢＶ水洗
去未吸附成分后，分别用３．５ＢＶ的３０％，５０％，７０％，９０％
的乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，测定洗脱液中总黄酮的
含量，计算总黄酮回收率。结果见表２。
表２　不同浓度乙醇洗脱剂洗脱结果 （ｎ＝３）
乙醇浓度（％） 平均回收率（％） ＲＳＤ（％）
３０　 ５５．４８　 １．９３
５０　 ７１．１７　 １．８７
７０　 ９３．６９　 １．８４
９０　 ９７．６４　 ２．１
　　由表２可知，９０％乙醇洗脱的总黄酮的回收率最高，因
此选择９０％乙醇为齿叶白鹃梅叶总黄酮的洗脱剂。
２．２．４　洗脱曲线的绘制
按上述确定的吸附条件和洗脱条件，取齿叶白鹃梅叶
样品液进行上柱、吸附和洗脱，分段收集洗脱液。每５ｍＬ收
集１份，共收集２７份，计算每份洗脱液中总黄酮浓度，从结
果得知，当洗脱液用量为９０ｍＬ（４．５ＢＶ）时，洗脱液中总黄
酮含量几乎为零，说明树脂柱上吸附的总黄酮已基本洗脱
完全。因此，洗脱剂用量为４．５倍树脂床体积。
２．３　Ｄ１０１大孔吸附树脂纯化齿叶白鹃梅叶总黄酮工艺
的验证
　　取三批齿叶白鹃梅叶样品液各３０ｍＬ分别按上述确定
的吸附、洗脱条件进行上柱、吸附和洗脱，收集洗脱液，测定
总黄酮含量，计算总黄酮回收率及纯度。结果见表３。
表３　Ｄ１０１树脂纯化齿叶白鹃梅叶总黄酮的工艺验证结果
次数 总黄酮回收率（％）总黄酮纯度（％） ＲＳＤ（％）
１　 ９５．３３　 ５８．４２
２　 ９６．６７　 ５９．２３
３　 ９６．９９　 ５９．６６　 １．９１
平均 ９６．３３　 ５９．１０
　　由表３看出，经Ｄ１０１大孔树脂处理后的齿叶白鹃梅叶
总黄酮回收率大于９５％，平均纯度为５９．４４％，ＲＳＤ＝
１．９１％，具有良好的重现性。
３　结论
通过静态吸附－解吸试验，从７种大孔吸附树脂中筛
选出Ｄ１０１型大孔树脂最适合齿叶白鹃梅叶总黄酮的富集。
通过动态吸附－洗脱试验，Ｄ１０１型大孔树脂富集齿叶白鹃
梅叶总黄酮的工艺条件为：上样溶液中总黄酮的浓度以２．５
ｍｇ·ｍＬ－１为宜，最大上样量为１．５倍树脂床体积，洗脱溶剂
为９０％乙醇，洗脱剂用量为４．５倍树脂床体积，可得总黄酮
质量分数为５９．１０％的齿叶白鹃梅叶提取物粉末。
参考文献：
［１］　傅沛云．东北植物检索表［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９５：２８３－
２８４．
［２］　中国药材公司．中国中药资源志要［Ｍ］．北京：科学出版社，
１９９４：５０８．
［３］　才谦，王聪，刘玉强．齿叶白鹃梅叶中黄酮类成分的分离与结
构鉴定［Ｊ］．沈阳药科大学学报，２０１１，２８（３）：１９０－１９１．
［４］　才谦，刘涛，付玉芹，等．大孔吸附树脂法富集龙胆中裂环烯
醚萜苷类成分的实验研究［Ｊ］．中成药，２００３，２５（４）：２７１－１７２．
（责任编辑：姜付平）
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