全 文 ：中国药房 2008年第 19卷第 30期 China Pharm acy 2008 Vol.19 No.30 · 2345·
*高级实验师 , 硕士。研究方向:药物分析与研究。电话:0538-
6229757。 E-mail:sdyrx @163.com。
·中药工艺与制剂 ·
翻白草中槲皮素的提取工艺优化及含量测定
张 颖 *,巩学勇 ,冀海伟 ,付晓秀 ,齐永秀 ,高允生(泰山医学院药学院 ,泰安市 271000 )
中图分类号 R284.2;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)30-2345-03
摘 要 目的:优选翻白草中槲皮素的最佳提取工艺 ,建立以高效液相色谱法测定其含量的方法 。方法:采用超声波提取法 ,以槲皮
素的提取含量为评价指标 ,以提取时间 、料液比 、乙醇浓度和提取次数为考察因素 ,通过正交试验筛选出最佳提取工艺;采用高效液
相色谱法测定槲皮素的含量 。结果:翻白草中槲皮素的最佳提取工艺为每次提取 40 min 、料液比 1∶15 、80%的乙醇 、提取 3次;槲
皮素检测浓度在 0.004 ～ 0.020 mg ·mL -1(r =0.999 6)范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系 , 平均加样回收率为
100.17%, RSD =2.27%(n=6)。结论:本方法简便 、迅速 ,可为翻白草的进一步开发利用和有效性研究提供理论依据 。
关键词 翻白草;槲皮素;超声波提取法;高效液相色谱法;正交试验
Optimization of the Extract Technology of the Quercetin from Potenti l la discolor and the Content Deter-
mination of Quercetin
ZHANG Ying , GONG Xue-yong , JI Hai-wei , F U Xiao-xiu , Q I Yong -x iu , GAO Yun-sheng(Dept.of
Pharmaceutical Science ,Taishan Medical Colleg e ,T aian 271000 , China)
ABSTRACT OBJECTIVE:T o optimize the ex t ract process o f Querce tin f rom Potenti lla d iscolor and to dete rmine the con-
tent of Querce tin by H PLC.METHODS :The ex trac tion o f Quercetin w as per formed using ultrasonic ex traction technology
with content of Quercetin as index f or evaluation and with the ex trac tion time ,ratio of solid to liquid , concent ration o f alcohol
and the times o f ex traction as fac tor s , and the optim al technology of ex traction w as obtained by carrying out or thogonal ex-
periment.The content o f Querce tin w as de termiend by HPLC.RESU LTS:The best technical condition w as as follow s:the ex-
tr action w as lasted fo r 40 min/time(3 times in tot al)with 90%alcohol ,and the ra tio of solid to so lution w as 1∶15.The linear
range o f Quercetin w as 0.004 ～ 0.020 mg ·mL -1(r =0.999 6)and the average recovery rate w as 100.17%(R SD =2.27%,
n =6).CONCLUS ION :The method is simple and rapid , and it provides scientific basis f or the sa fety and ef fectiveness of
Potenti lla discolor in its clinical use.
KEY WORDS Potentilla discolor ;Quercetin;Ultrasonic ex traction techno logy ;HPLC;Orthogonal experiment
翻白草 ,为蔷薇科委陵菜属植物翻白草的带根全草 。性平 、
味甘、微苦 。清热解毒 ,消肿止血 [ 1 ]。可治疗痢疾 、疟疾 、肺痈 、疥
痈 、咳血 、崩漏 、疥癣[ 2 ]。现代医学证明 ,翻白草有抗菌 、止泻 、抗
肿瘤和免疫抑制作用 [3 ] 。近几年研究发现 ,翻白草具有降血糖
作用 [4 ] 。已有文献报道 ,翻白草中的成分有石竹皂苷元 、d-儿
茶素 [5 ] ,5种可水解鞣质 [6 ] ,没食子酸 、原儿茶酸 、槲皮黄素和熊
果酸 [7 ]等 。为了阐明其药效理论基础 ,本研究对翻白草中槲皮
素的提取工艺进行优化并测定其含量。
1 材料
1.1 仪器
LC5500系列高效液相色谱(HPLC)仪(北京东西电子科
技研究所);KQ -600D 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);FA -1004型分析天平(上海精密科学仪器有限公
司);SHB-B95A 型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有
限公司);RE-52A 型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂);
TDL -16G 型离心机(上海安亭科学仪器有限公司)。
1.2 试药
翻白草 (采于泰山 , 经泰山医学院药学院中药学教研室李
同德教授鉴定为真品);槲皮素对照品(中国药品生物制品检定
所 , 批号:100081-9905);甲醇为色谱纯 ,水为双重蒸馏水 , 其
它试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 含量测定
2.1.1 供试品溶液的制备:取翻白草粗粉 5.0 g ,加 80%乙醇
浸泡 24 h ,超声提取 3次 ,每次 40 min ,放冷抽滤 ,滤液合并 ,浓
缩至 100 mL ,得供试品溶液 。移取适量溶液 ,离心 ,微孔滤膜过
滤 ,备用 。
2.1.2 对照品溶液的制备:称取适量槲皮素对照品 , 50%乙
醇溶解 ,得 0.2 mg ·mL -1的对照品溶液 。精密移取对照品溶
液 0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、1.0mL ,置于 10 mL 容量瓶中 , 50%乙醇
稀释定容 ,摇匀 ,备用 。
2.1.3 阴性对照溶液的制备:取无水乙醇适量 , 微孔滤膜过
滤 ,去离子水稀释至 50%(体积比),作为阴性对照溶液 。
2.1.4 色谱条件与系统适应性试验:色谱柱为 C 18(250 mm ×
4.6 mm , 5μm), 流动相为甲醇-0.4%磷酸(60∶40), 流速为
1 mL ·min -1 ,检测波长为 370 nm ,进样量为 10μL ,柱温为室
温 。在上述色谱条件下 ,取对照品溶液 、供试品溶液及阴性对照
溶液各 10μL 进样 ,测定 。结果表明 ,阴性对照无干扰 。色谱见
图 1。
2.1.5 线性关系考察:精密称取槲皮素对照品 2.0 mg , 置于
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表 3 方差分析结果
Tab 3 Analysis of var iance
因素 离差平方和 n 方差 F P
A 0.000 5 2 0.000 2 0.353 >0.05
B 0.007 1 2 0.002 4 0.667 >0.05
C 0.017 6 2 0.005 9 2.000 >0.05
D 0.011 9 2 0.004 0 1.333 >0.05
误差 0.010 0 8
注:F0.05(2 , 2)=19.00
note:F0.0 5(2, 2)=19.00
表 2 正交试验结果
Tab 2 Results of orthogonal test
试验号 因素 提取含量/mg· g -1A B C D
1 1 1 1 1 0.065 8
2 1 2 2 2 0.126 6
3 1 3 3 3 0.218 3
4 2 1 2 3 0.145 8
5 2 2 3 1 0.145 7
6 2 3 1 2 0.132 3
7 3 1 3 2 0.144 4
8 3 2 1 3 0.124 3
9 3 3 2 1 0.122 8
X 1 0.410 7 0.356 0 0.322 4 0.334 3 ΢΢x ij=K=K 1=
K 2=K 3=1.226 0X 2 0.423 8 0.396 6 0.395 2 0.403 3
X 3 0.391 5 0.473 4 0.508 4 0.488 4
K 1 0.136 9 0.118 7 0.107 5 0.111 4 1/ pr×(΢΢xi j)2=
0.125 3K 2 0.141 3 0.132 2 0.131 7 0.134 4
K 3 0.130 5 0.157 8 0.169 5 0.162 8
R 0.010 8 0.039 1 0.062 0 0.051 4
1/ r×΢(k i)2 0.167 2 0.169 4 0.172 9 0.171 0
差方和Q 0.041 9 0.044 1 0.047 6 0.045 7
均方Q/ f 0.014 0 0.014 7 0.015 9 0.015 2
10 mL 容量瓶中 , 50%乙醇溶解并稀释定容至刻度 ,摇匀 ,制得
0.2 mg ·mL -1的对照品溶液 。精密移取对照品溶液 0.2 、0.4 、
0.6 、0.8 、1.0 mL , 置于 10 mL 容量瓶中 , 50%乙醇稀释定容 ,
摇匀 ,配制成 0.004 、0.008 、0.012 、0.016 、0.020 mg ·mL -1的
溶液 , 分别进样 10 μL , 按上述色谱条件测定 。以槲皮素浓度
(C)为横坐标 , 峰面积积分值(Y)为纵坐标绘制标准曲线 , 得
回归方程为 Y =13 880 625.00C —2 245.10(r =0.999 6)。结
果表明 , 槲皮素检测浓度在 0.004 ～ 0.020 mg ·mL -1范围内
与其峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.1.6 精密度试验:精密吸取对照品溶液 10μL ,按上述色谱
条件测定 ,重复进样 5次 。结果 , RSD=2.91%,表明仪器精密
度良好 。
2.1.7 稳定性试验:取同一供试品溶液 ,分别在 0 、2 、4 、6 、8 、
10 h内按上述色谱条件测定其峰面积 。结果 , RSD =1.87%,
表明供试品溶液在 10 h内稳定 。
2.1.8 加样回收率试验:取已知含量的翻白草适量 , 精密称
定 ,加入槲皮素对照品适量 ,按上述色谱条件测定 ,计算槲皮素
的加样回收率 。结果 , 平均加样回收率为 100.17%, RSD =
2.27%(n =6)。
2.2 提取工艺研究
2.2.1 正交试验安排:选择提取时间(A)、料液比(B)、乙醇浓
度(C)、提取次数(D)作为考察因素 , 以 L 9(34)正交表进行试
验 。因素水平见表 1。
表 1 因素水平
Tab 1 Levels and factors
水平 因素
A/m in B/ g· v -1 C/ % D/次
1 20 1∶8 30 1
2 40 1∶10 50 2
3 60 1∶15 80 3
2.2.2 翻白草中槲皮素的提取工艺流程图:
2.2.3 最佳提取条件的确定:以翻白草提取液中槲皮素的提
取含量为考察指标 , 按 “ 2.2.2”项下工艺流程和正交试验条件
进行考察 。正交试验结果见表 2 ,方差分析见表 3。
由表 2、表 3可知 ,影响因素主次顺序为乙醇浓度>提取次
数>料液比>提取时间;分别比较不同因素的产率 , 结合 K
值 , 80%的乙醇、料液比 1∶15 、提取 3次 、每次提取 40 min时 ,
提取翻白草中槲皮素的含量最高 。尽管 F0.05(8 , 2)= 4.46 , P >
0.05 ,无显著性差异 ,但综合分析以上结果 ,结合工业生产的可
行性 ,确定提取翻白草中槲皮素的最佳工艺为:A 2B 3C3D 3 。
2.2.4 验证试验:称取翻白草粗品(根)各 5.00 g , 在最佳提
取工艺条件下提取 ,按“2.2.2”项下测定槲皮素含量 。结果 ,翻
白草根中槲皮素的含量为 0.202 3 mg ·g -1(n =3), 茎 、叶中
槲皮素的含量为 0.301 4 mg ·g -1。
3 讨论
本法提取槲皮素含量较高 , 可节省大量的时间和溶剂 , 降
低生产成本 ,提高经济效益 ,为开发新药 ,充分利用和保护野生
资源提供参考依据 。通常情况下 ,翻白草茎 、叶作为常用药材 。
试验证明 ,翻白草根中槲皮素的含量仅次于茎 、叶中含量 ,因此
本研究可为进一步开发翻白草根和临床用药提供数据资料 。
参考文献
[ 1] 青岛中草药手册编写组.青岛中草药手册[ M ] .济南:山
东科学技术出版社 ,1975:263.
[ 2] 江苏新医学院编 .中药大词典(上册)[ M ] .上海:上海科
学技术出版社 ,1977:5 674.
[ 3] 孟令云 , 孔一杰 , 徐文弟 , 等 .翻白草微量元素的含量分
析[ J] .微量元素与健康研究 ,2001 , 18(2):41.
[ 4] 苏 力 ,孟令云 ,葛艳梅 ,等.翻白草 14种微量元素的测
中国药房 2008年第 19卷第 30期 China Pharm acy 2008 Vol.19 No.30 · 2347·
*主管药师。研究方向:临床药学。电话:0516-85802195。E-
mail:hanqiang 1144@163.com
正交试验优选淫羊藿总黄酮的提取工艺
韩 强 *,吕冬梅 ,王来成(徐州医学院附属医院药剂科 ,徐州市 221002)
中图分类号 R284.2;R943 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)3347-02
摘 要 目的:优选淫羊藿总黄酮的提取工艺 。方法:以淫羊藿总黄酮的含量为评价指标 ,以浸提温度 、浸提时间 、固液比和乙醇浓
度为考察因素 ,采用正交试验优化淫羊藿总黄酮的提取工艺 。结果:优化的提取条件为 60%乙醇 ,固液比为 1∶10 , 80 ℃回流提取 2
次 ,每次 1 h 。结论:优化的提取工艺简便 、合理 ,可为淫羊藿总黄酮工业化提取提供参考 。
关键词 正交试验;淫羊藿;总黄酮;工艺优化
Optimization of the Extract Technology of the Total Flavonoids from Herba Epimedi i by Orthogonal Ex-
periment
HAN Qiang , LV Dong -mei , WANG Lai-cheng(Dept.o f Pharmacy , The Aff iliated Hospital of Xuzhou
Medical College ,Xuzhou 221002 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE :To optimize the ex t racting process of the to tal flavonoids f rom Herba Epimedii.METHODS:The
ex tract techno logy of the to tal flavonoids from Herba Epimedii w as optim ized by or thogonal experim ent w ith the yield of to tal
flavono ids from Herba Epimedii as index and w ith the ex t raction tempera ture , ex traction time , the ratio of solid to liquid and
the concent ration of e thanol as factor s.RESULTS:T he optim um extracting conditions fo r the to tal flavono ids from Herba
Epimedii w ere as f ollow s:the re flux ex t raction w as conducted tw ice (1 hour/time)at 80 ℃with 60%et hanol as solvent , and
the ratio of solid to solution w as 1∶10.CONCLUS ION :The optim um extracting technology is simple and reasonable , and it
se rves as a good reference fo r the ex tracting process of the to tal f lavonoids f rom Herba Epimedii.
KEY WORDS Orthogonal experim ent;Herba Epim edii;T otal flavonoids;Technology optimization
定与分析[ J] .微量元素与研究 , 2004 , 21(1):36.
[ 5] 陈芳群.委陵菜化学成分的研究 [ J] .华西药学杂志 ,
1989 , 4(1):6.
[ 6] 冯卫生 .翻白草根中可水解单宁的研究 [ J] .天然产物
研究与开发 , 1996 ,8(3):26.
[ 7] 刘艳南 ,苏世文 ,朱延儒 ,等.翻白草化学成分的研究[ J] .
中草药 , 1984 ,15(7):149.
(收稿日期:2007-11-23 修回日期:2008-02-27)
淫羊藿 , 又名仙灵脾 , 是小蘖科植物淫羊藿(Epimedium
brev icornum M axin.)、箭叶淫羊藿 、柔毛淫羊藿 、巫山淫羊藿
或朝鲜淫羊藿的干燥地上部分 [1 ] 。味辛甘 、性温 ,入肾经 。具有
温补肾阳 ,祛风除湿之功效 。《本草纲目》中称其有“益精气 ,坚
筋骨 ,补腰膝 ,强心力”之功效 。现代化学成分研究显示[ 2 ] ,淫羊
藿的主要有效成分是淫羊藿总黄酮(T FE)。淫羊藿总黄酮是从
淫羊藿植物的茎叶中提取的总黄酮类成分 , 主要含有淫羊藿苷
和淫羊藿次苷等 [3 ]。药理研究发现 ,淫羊藿总黄酮是淫羊藿参
与抗心肌缺血 、降血压 、改善微循环 、抗骨质疏松 、抗肿瘤 、促进
免疫功能的主要有效成分 [4 ] 。近年来 ,国内对茎叶中有效成分
的研究较多 , 本文在前期研究的基础上 , 利用正交试验法对茎
叶中总黄酮的分离工艺进行优化 , 为进一步开发利用这一植物
资源提供参考 。
1 材料
1.1 仪器
R-201B型旋转蒸发器(上海申科机械研究所);1100型
紫外/可见光分光光度计(北京瑞利分析仪器公司);500 mL 水
浴恒温浸提系统(自组装)。
1.2 试药
淫羊藿苷对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号 :
07379508);淫羊藿药材(上海市练塘中药厂 , 经徐州医学院汤
道权教授鉴定为真品);聚酰胺粉 (100目 , 北京恒业中远化工
有限公司);其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 淫羊藿总黄酮的含量测定
2.1.1 提取方法:准确称取适量淫羊藿药材于蒸馏瓶中 , 加
入 10倍量体积的 60%乙醇溶液 ,80 ℃下回流提取 2次 ,每次 1
h ,合并得淫羊藿提取液 。
2.1.2 对照品溶液的制备:精密称取 105 ℃下干燥至恒重的
淫羊藿苷对照品 5.00 mg ,置于 10 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解 ,并
稀释至刻度 ,摇匀作为母液 。然后从母液中精密吸取 5.0mL 至
100 mL 量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得(淫羊藿苷 25
μg ·mL -1)。
2.1.3 供试品溶液的制备:取一定体积的淫羊藿提取液 , 3 000
r ·min -1离心 10 min , 上清液进行双层滤纸抽滤 , 减压浓缩 ,
过聚酰胺柱 。先用蒸馏水洗脱 ,直至洗脱液接近无色 ,再用甲醇
洗脱 ,用聚酰胺薄层层析跟踪 ,收集合并含黄酮的馏分 ,减压浓
缩 ,并用甲醇定容至原体积 。