全 文 ：现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2015, Vol.31, No.12
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山莓叶中有效成分的分离鉴定及其生物活性研究

陈雪香 1，欧阳文 2，李俊 1，王群 1，杨媛 1，曹庸 1
（1.华南农业大学食品学院，广东广州 510642）（2.湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208）
摘要：本文以山莓叶乙醇提取物为研究对象，通过溶剂萃取、硅胶柱层析、结晶等方法进行分离纯化。采用核磁共振（NMR），
质谱（MS）、红外光谱法（IR）及与文献对比的方法对其分离的单体进行结构鉴定。利用刃天青 96 孔板微量稀释法、MTT 法研究单
体化合物的抑菌及抗肿瘤活性。研究结果表明：从山莓叶中分离纯化物经结构鉴定分别为：三萜化合物类 2α、3β、23α-三羟基-12-
烯-28-乌苏酸（1）和黄酮类化合物山奈酚-3-O-β-D-（6’’-对羟基桂皮酰基）-葡萄糖苷（2）；抑菌实验表明化合物 1 对供试的大肠杆菌、
痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌最低抑菌浓度分别为：15.6 μg/mL、15.6 μg/mL、31.25 μg/mL、15.6 μg/mL，化合物 2 的
最低抑菌浓度分别为：31.25 μg/mL、62.5 μg/mL、62.5 μg/mL、62.5 μg/mL。化合物 1 对 HepG2、MCF-7、OVCAR3 的半数抑制率（IC50）
分别为：34.2 µM、60.43 µM、62.3 µM。化合物 1 具有很好的抑菌和较好的抗肿瘤活性。而化合物 2 对 HepG2、MCF-7、OVCAR3
细胞的抑制作用不明显。
关键词：山莓；分离；结构鉴定；抑菌；细胞毒性
文章篇号：1673-9078(2015)12-56-62 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.12.009
Isolation and Identification of Active Ingredients in Rubus corchorifolia L.f.
Leaves and Their Bioactivities
CHEN Xue-xiang1, OU Yang-wen2, LI Jun1, WANG Qun1, YANG Yuan1, CAO Yong1
(1.College of Food Science, South China Agriculture University, Guangzhou 510642, China)
(2.School of Pharmacy, Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha 410208, China)
Abstract: The ethanol extract of Rubus corchorifolia leaves was used in this study, and its active compounds were isolated and purified
using solvent extraction, silica gel column chromatography, and crystallization methods. The structures of the isolated monomeric compounds
were identified using nuclear magnetic resonance (NMR), mass spectrometry (MS), infrared (IR) spectroscopy, and comparisons with literature
data. The antibacterial and antitumor activities of the monomeric compounds were studied by resazurin microdilution (96-well plate) assay and
MTT assay. The two compounds isolated and purified from Rubus corchorifolia leaves were identified as 2α,3β,23α-trihydroxy-12-en-28-ursolic
acid (1) and flavonoid compound kaempferol-3-O-β-D-6′′-p-hydroxycoumaroyl-glucoside (2). The minimum inhibitory concentrations (MICs)
of compound 1/compound 2 on Escherichia coli, Shigella dysenteriae, Staphylococcus aureus, and Salmonella were 15.6 μg/mL/31.25 μg/mL,
15.6 μg/mL/62.5 μg/mL, 31.25 μg/mL/62.5 μg/mL, and 15.6 μg/mL/62.5 μg/mL, respectively. The half inhibitory concentration (IC50) of
compound 1 on HepG2, MCF-7, and OVCAR3 cells was 34.2 µM, 60.43 µM, and 62.3 µM, respectively. Compound 1 showed good
antibacterial and antitumor activities, while the inhibitory effects of compound 2 on HepG2, MCF-7, and OVCAR3 cell lines were not
significant.
Key words: Rubus corchorifolia L.f.; isolation; structure identification; bacteriostasis; cytotoxicity

山莓（Rubus corchorifolius L.f）属蔷薇科(Rosaceae)
科悬钩子属植物(Rubus.L)中的一种落叶灌木[1]。又名
悬钩子、三月泡,除冬北、甘肃青海、新疆外，广布于
收稿日期：2015-03-12
基金项目：广东省科技计划农业公关项目（2012A020602038)；广州市科技
计划重点项目(11C32100704)；广东省中医药局科研课题（2010276)
作者简介：陈雪香（1981-），女，在读博士研究生，研究方向为食品化学与
营养
通讯作者：曹庸（1966-），男，博士，教授，研究方向为食品化学与营养
全国各地，长江流域的野生资源最为丰富，野生资源
蕴藏量相当大[2]。我国利用山莓的历史悠久[3]，在古书
《本草纲目》、《本草拾遗》、《食疗本草》、《名医别录》
中就有山莓药用价值的详细记载，其药用已有上千年
历史。山莓的果、根及叶均可入药，果以未成熟果入
药，民间常作为覆盆子代用品。山莓具有抗氧化能力、
降血脂、抗菌、镇痛、抗炎、祛痰、平喘、抗病毒、
抗腹泻、抗炎，防治癌症等多种功效[4~6]。根据现有的
文献报道，山莓叶中含有香豆素、茶多酚、鞣质、生
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物碱、黄酮、二萜等化合物[7~9]，从山莓叶中乙醇提取
物中已分离到 8 个新的二萜化合物和化合物。目前对
山莓的研究，虽然有报道其具抗氧化能力、降血脂、
有抗菌、镇痛、抗炎、祛痰、平喘、抗病 毒、抗炎，
防治癌症等多种的功能、但大多集中在粗提物的效果
的评价，并未对其起主要作用的单体化合物进行分离
纯化及结构鉴定和系统的活性研究。我们通过前期研
究发现，山莓的乙醇提取物具有抗菌和抗肿瘤活性，
因此为了更深入地了解其抗菌和抗肿瘤的物质基础，
本文对山莓的乙醇提取物进行分离纯化和行结构鉴
定，并采用当前国际通用的抑菌方法—刃天青 96 孔
板微量稀释和细胞毒性方法—MTT 法对其抑菌和抗
肿瘤活性进行研。为旨在为更好的开发山莓利用的食
药用价值提供有力的参考价值。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 山莓叶
2013 年 7 月采于吉首大学张家界校区后山，经廖
博儒教授鉴定为蔷薇科悬钩子属植物山莓(Rubus
corchorifolius L.f)。将采集的山莓叶阴干，粉碎过 60
目筛，备用。
1.1.2 供试菌种
大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureus），痢疾志贺氏菌（Shigella
dysenteroae），沙门氏菌（Salmonella）均购于广东省
微生物研究。
1.1.3 供试细胞
肝癌细胞（HepG2），人乳腺癌细胞（MCF-7），
人卵巢癌细胞（OVCAR3）均购于中山大学实验动物
中心细胞库。
1.1.4 培养基
牛肉膏蛋白胨培养基：
牛肉膏 0.3 g；蛋白胨 1.0 g；氯化钠 0.5 g；琼脂
2.0 g；蒸馏水 100 mL；pH 7.0~7.2；灭菌 121 ℃；22
min。
1.1.5 试剂
MTT（MP Biomedicals LLC），台盼蓝（SIGMA
公司），胰酶（吉诺生物医药技术有限公司），青-链霉
素（GIBCO 公司），DEME 培养基（GIBCO 公司）,
胎牛清血（THERMO 公司）。硅胶 G、柱层析硅胶
（200-300 目）、薄层硅胶均为青岛海洋化工厂生产
95%乙醇，氯仿，乙酸乙酯，氯化钠，无水乙醚，无
水硫酸钠，石油醚，碳酸钠，亚硝酸钠，氢氧化钠，
甲醇，正丁醇，二甲基亚砜等，正丁醇，香兰素，硫
酸，所用试剂均为分析纯。
1.1.6 主要仪器设备
TC-2323二氧化碳培养箱，美国SHELDON公司；
Ac2-4s1 生物安全柜,新加坡艺思高科技有限公司;多
功能酶标仪，珀金埃尔默股份有限公司；400 MHZ 核
磁 ，BRUKZR 公司；INOVA-600 核磁共振仪器，美
国 Varian；LCQ DECA XP 液相色谱质谱联用仪态，
美国 Thermo Finnigae 公司)；移液器，美国伯乐公司；
LEO 场发式扫描电子显微镜，德国里奥公司，96 孔培
养板，美国 Corning 公司；IL-62 培养箱，日本雅马哈
公司；CCV-1311 超净工作台，日本日立公司 ；MD-41
磁力搅拌器，日本雅马哈公司；旋转蒸发仪，上海申
生科技有限公司；DHG-9070 烘箱，上海东欣科学仪
器有限公司；电热高压蒸汽灭菌锅，江阴滨江医疗设
备厂；FD-1PF 冷冻干燥机，北京德天佑科技发展有限
公司；KQ-500B 超声波清洗器，昆山市超声仪器有限
公司；AL104 电子天平，上海梅特勒托科多仪器有限
公司；W2-100 恒温水浴锅，上海申生科技有限公司；
TDL-5 离心机，上海安亭科技仪器厂；LC-62 培养箱，
日本雅马哈公司；血球计数板，上海医乐医用光学仪
器厂。
1.2 实验方法
1.2.1 山莓叶乙醇粗提物的制备
称取粉碎的山莓叶 3500 g，加入 10 倍体积 80%
的乙醇，搅匀，先超声提取 30 min，然后于室温下浸
提 48 h，过滤，滤渣再重复提取一次，合并滤液，浓
宿冻干备用。
1.2.2 液液萃取分离纯化
将浸膏液用依次用石油醚，氯仿、乙酸乙酯、正
丁醇反复多次萃取，将萃取液分别浓缩，冷冻干燥。
分别得石油醚，氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取物,乙酯
乙酸乙酯萃取物进行脱柔质处理。
1.2.3 乙酸乙酯萃取物脱鞣质试验
将乙酸乙酯萃取物和正丁醇用水溶解，样品水溶
液加 4%明胶水溶液，至沉淀完全，过滤，滤液减压
浓缩至小体积，加 3~5 倍酒精，使过量明胶沉淀，然
后滤去沉淀。浓缩后冷冻干燥。
1.2.4 乙酸乙酯萃取物分离纯化
将脱鞣质后的组份行进行硅胶柱层析。上样量为
15 g，用氯仿与甲醇进行梯度（80:1、60:1、40:1、20:1、
10:1）洗脱，每个梯度的洗脱体积是 1300 mL，每 50 mL
馏份收集为一个样，其收集 150 个馏分。每瓶取 1 mL
每10瓶取得的样进行合并，分别表示为：Fr.1.1，Fr.1.2，
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Fr.1.3, Fr.1.4，Fr.1.5，Fr.1.6，Fr.1.7，Fr.1.8，Fr1.9，
Fr.1.10，Fr.1.11，Fr.1.12，Fr.1.13,Fr.1.14 ,Fr.1.15，浓
缩冷冻干燥，用于抑菌实验，每个馏分剩余样进行
TLC 展开，用 1%的硫酸香草醛进行显色，合并相同
组份。经 TLC 检测合并相同组份，其中组份 Fr.1.6-7
经甲醇重结晶得化合物 1 (20 mg)，Fr.1.12 经甲醇重结
晶后得化合物 2（40 mg）。
1.2.5 化合物结构鉴定
采用薄层硅胶 G 板，展开剂为环己烷：丙酮=1：
1 进行薄层分析。用 LCQ DECA XP 液相色谱质谱联
用仪态，大气压力化学电离源对其分子量进行分析。
用 Vector 33 傅里叶变换红外谱仪扫描分析，扫描范围
4000 cm-1~400 cm-1。化合物 1H 和 13C 核磁谱采用核磁
共振波谱仪测定，样品用 CD3OD-d4 溶解,并与文献对
比分析。
1.2.6 抑菌活性测定试验
本实验运用 96 孔板微量稀释法进行化合物的抑
菌活性的测定,该抑菌试验使用 96 孔板(8 行×12 列),
可以在短时间内确定样品最低抑菌浓度(MIC)[10]。在
检测前,分别将供试化合物和硫酸卡那霉素(阳性对照)
溶于甲醇中，制成 1.0 mg/mL 的浓度，并将刃天青溶
于蒸馏水中，配成 100 μg/mL 溶液。实验时分别将刃
天青指示剂(100 μg/mL) 到加 100 μL 到 96 孔板的第
11 列的每孔中。然后将 7.5 mL 的指示剂溶液和 5 mL
测试菌溶液(108 cfu/mL)混匀，转移混合液到 96 孔板
上其余 11 列的孔中(1~10 列和 12 列)，每孔转移 100
μL。转移待测化合物溶液 100 μL 到其中一行的第一
个的孔中，混匀后从此孔转移 100 μL 到同一行的第二
个孔中，再混匀后又从第二个孔转移 100 μL 到第三个
孔中……以此类推，使每个孔中的待测化合物的浓度
依次稀释成前一个孔的二分之一，直到第十个孔为止，
第十个孔的液体混匀后抽取 100 μL 扔掉。阳性对照为
硫酸卡那霉素（1.0 mg/mL)，阴性对照为纯甲醇。最
后将培养板放在 37 ℃下培养 5~6 h，有活性的标志为
从蓝色到粉红色；发生颜色变化的的最低稀释浓度即
为待测化合物的最低抑菌浓度(MIC)，三次独立实验
的 MIC 值作为最终的 MIC 值[11]。
1.2.7 扫描电镜观察化合物 1 作用大肠杆菌形
态的影响
将培养至对数生长期的供试菌菌加入到浓度为
含化合物 1 的浓度为：512 μg/mL,使每毫升药基含菌
体 107 cfu/mL，于摇床中培养(37 ℃，130 r/min )，从
加药培养开始计时，于 4.5 h 取样，4000 r/min 离心 4
min 收集菌体。菌体沉淀后用生理盐水冲液洗涤，再
离心，重复 4 次。洗涤后的菌体沉淀，按照扫描电镜
生物样品制备方法，涂到金属箔片上,真空干燥固定、
喷金，于扫描电镜上观察菌体形态和结构变化。正常
未加药的供试菌同上制备，于扫描电镜上观察，作为
对照。
1.2.8 MTT 法检测化合物的细胞毒性
参考方法[12]稍作改动，收集对数期的细胞，调整
细胞悬液浓度，肝癌细胞（HepG2, 2000 个/孔)，卵巢
癌（OVCAR3, 1200 个/孔），乳腺癌细胞（MCF-7, 2000
个/孔），每孔加入 200 µL 铺板，边缘孔用无菌 PBS
填充，然后在 5% CO2，37 ℃孵育培养箱中培养 24
小时，弃掉上清液，加入含 100 µM、75 µM、50 µM、
25 µM、12,5 µM、6.25 µM 样品浓度的完全培养基，5
个浓度梯度,每孔加样品溶液 200 µL，设 5 个复孔。作
用72 h上后，弃掉上清,加入100 µL含0.5 mg/mL MTT
溶液，继续培养 4 h，终止培养，小心吸去孔内培养液。
每孔加入 150 µL 二甲基亚砜,置摇床上低速振荡 10
min，使结晶物充分溶解。然后在酶联免疫检测仪 570
nm 处测量各孔的吸光值。注意同时设置调零孔（培
养基、MTT、二甲基亚砜）,对照孔（细胞、相同浓度
的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）,实验
共重复三次。
1.2.9 数据分析
使用软件 GraphPad Prism 5.0 进行数据处理，算
出受试化合物的抑制率和 IC 50。
2 结果与讨论
2.1 化合物 1 的结构鉴定

Fig.1 化合物1的 13C- NMR
Fig.1 13C-NMR spectrum of compound 1
白色晶体，M.p. 230~132 ℃，旋光度: 149.18°:
全波段扫描 λmax =211 nm(甲醇)，环己烷：丙酮=1：1，
Rf=0.375，1%香草醛硫酸溶液显为单一紫色斑点。分
子式为：C30H48O5。化合物 1H-NMR 信号为(CD3OD,
600 MHZ): δ 5.26 (1 H, t, J = 3.6 Hz, H-12), 3.68 (1 H, m,
H-2), 3.48, 3.25 (each 1 H, d, J = 10.8 Hz, H-23), 3.35 (1
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H, d, J = 9.6 Hz, H-3), 1.13, 1.03, 0.96, 0.69 (each 3 H, s),
0.88 (3 H, s), 0.84 (3 H, d, J = 6.6 Hz)。化合物 13C-NMR
信号为 (CD3OD, 150 MHz):Δ181.6 (C-28), 139.9
(C-13), 126.7 (C-12), 78.2 (C-3), 69.7 (C-2), 66.3 (C-23),
54.4 (C-18), 49.0 (C-17), 48.9 (C-5), 48.2 (C-9), 48.7
(C-17), 44.1 (C-2), 43.4 (C-4), 40.84 (C-14), 40.45 (C-8),
39.0 (C-19), 38.1 (C-10), 33.9 (C-22), 31.8 (C-7), 29.2
(C-21), 28.8 (C-15), 24.5 (C-16), 24.1 (C-11), 24.1
(C-27), 21.9 (C-30), 19.1 (C-6), 17.9 (C-26), 17.7 (C-25),
17.7 (C-29), 13.9 (C-24). 其碳谱和氢谱的数据与文献
[13] 中的 2α、3β、23α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸数据相
一致。因些化合物 1 被命名为 2α、3β、23α-三羟基-12-
烯-28-乌苏酸。

图2 化合物1的 1H-NMR
Fig.2 1H-NMR spectrum of compound 1

图 3 化合物1的结构
Fig.3 Chemical structure of compound 1
2.2 化合物 2 的结构鉴定
黄色粉末状，盐酸镁粉试验显紫红色，证明该化
合物为一黄酮类衍生物。M.p. 206~208 °C，旋光度：
58.82.0°:全波段扫描 λmax =315 nm(甲醇)，环己烷：
丙酮=1：1，Rf=0.23，1%香草醛硫酸溶液显为单一黄
色斑点。化合物 1H-NMR 信号为（CD3OD，400 MHZ）：
7.99（t，1h）；7.97（t，1h）；7.398（d，1h，J=20 HZ）；
7.31（brs，1h）；7.29（brs，1h）；6.7-6.9（m，4h，overlaped）；
6.30（d，1h，J=2.5HZ）；6.13（d，1h，J=2.5HZ）；
6.06（d，1h，J=20 HZ）；5.24（d，1h，J=9.5 HZ）；
4.32，4.29（dd，1h，J=15 HZ，3HZ）；4.20，4.17（dd，
1h，J=8.5 HZ，15HZ）；3.51-3.42 (m，3h，overlaped）；
3.33 (m，1h)。化合物 13C-NMR 信号为（CD3OD，400
MHZ）：179.4（s），168.8（s），165.9（s），162.9（s），
161.5（s），161.1（s），159.4（s），158.4（s），146.5
（d），136.2（s），132.2（d），131.2（d），127.1（s），
122.7（s），116.8（d），116.0（d），114.7（d），105.6
（s），104.0（d），100 .0（d），94.8（d），78.0（d），
75.8（d），75.7（d），71.7（d），64.3（t）。IR 数据（溴
化钾压片，cm-1）：3461，3160，2924，2855，1685，
1657，1607，1546，1503，1461，1419，1358，1296，
1255，1180，1090，1066，1031，824。

图4 化合物2 的 13C- NMR
Fig.4 13C-NMR spectrum of compound 2

图5 化合物2的1H-NMR
Fig.5 1H-NMR spectrum of compound 2

图 6 化合物2 APCI-MS图
Fig.6 APCI-MS spectrum of compound 2
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APCI-MS：中有 594（M+，基峰）,分子式为
C30H26O13，分子量为 594，与 APCI 中一致。从碳谱
中，可见到一 β-D-葡萄糖结构片段，与 β-D-葡萄糖甲
苷数据比较，知 104.0（d）,78.0（d）,75.8（d）,75.7
（d）,71.7（d），64.3（t）为六个糖环上碳信号,从化
学位移上分析,明显为一黄酮类化合物。从 132.2（d），
116.0（d）该两个碳信号强度明显高，且碳谱信号中
还出现了 100 .0（d）,94.8（d）这两个高场信号，说
明该化合物具有 5，7，4，羟基取代特征（溶剂为氘代
甲醇,未见所有羟基活泼质子）。氢 6.30（d，1h，J=2.5HZ）
连在碳 94.8（d）和氢 6.13（d，1h，J=2.5HZ）连在碳
100.0（d）,该两氢为一间位耦合,进一步证实上述推段。
HMBC 中,可见糖环端基质子与碳 135.2（s）相关,说
明黄酮苷元在 3 位成苷，因此化合物 2 的分子式为
C30H26O13，分子量为 594，与 APCI 中一致。化合物 2
命名为:山奈酚-3-O-β-D-（6’’-对羟基桂皮酰基)-葡萄糖
苷（kampfreol-3-O-β-D-6’’-P-hydroxycoumaroyl-
glucosie）。

图7 化合物2的结构图
Fig.7 Chemical structure of compound 2
2.3 抑菌活性研究
2.3.1 两个化合物的最低抑菌浓度的研究
本文采用微量稀释法对两个化合物抑制 1个革兰
氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）和 3 个革兰氏阴性菌菌
株（大肠杆菌，沙门氏菌和痢疾杆菌）抑菌活性进行
了检测，结果表明：化合物 1 对大肠杆菌，沙门氏菌，
志贺氏痢疾杆菌的最低抑菌浓度 (MIC)为：15.6
μg/mL，而对金黄色葡萄球菌的 MIC 是 31.25 μg/mL；
化合物 2 对大肠杆菌的最低抑菌浓度（MIC）是 31.25
μg/mL，而对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌,志贺氏痢疾
杆菌的最低抑菌浓度（MIC）均为 62.5 μg/mL。最低
抑菌可以评价抑菌活性的强弱，最低抑菌浓度越低,
说明其抑菌能力越强。由表 1 可知，化合物对供试的
4种菌的最低抑菌浓度是15.60~31.25 μg/mL,化合物的
对四种供试菌的最低抑菌浓是：31.25~62.5 μg/mL，阳
性对照硫酸卡那霉素最低抑菌浓度是：1.95-3.90
μg/mL，由以上结果可知，化合物 1 的抑菌效果优于
化合物 2。化合物 1 的抑菌效果虽然比硫酸卡那霉素
稍弱些，但因化合物 1 来自于植物，属于天然来源的
抗菌活性物质,天然的抗菌物质对人体、动物和食品的
危害小，可以较高剂量的使用，所以化合物 1 是一种
潜在的天然抑菌活性物，具有重要的研究价值。本文
首次报道了化合物 1 的抑菌活性，对山莓综合开发利
用，提高其利用价值具有重要的意义。
表1 两个化合物的最低抑菌浓度（μg/mL）
Table 1 Minimum inhibitory concentrations of compounds 1 and 2
(μg/mL)
样品名
大肠
杆菌
沙门
氏菌
金黄色葡
萄球菌
志贺氏痢
疾杆菌
化合物 1 15.6 15.6 31.25 15.6
化合物 2 31.25 62.5 62.5 62.5
硫酸卡那霉素 3.9 1.95 3.9 3.9
2.3.2 化合物 1 对大肠杆菌形态结构的影响

处理组（5000×） 对照组（5000×）

处理组（10000×） 对照组（10000×）

处理组(20000×） 对照组（20000×）
图8 扫描电镜下正常大肠杆菌与提取物作用大肠杆菌的形态
结构
Fig.8 Morphology of normal E. coli and extract-treated E. coli
under scanning electron microscope
为了进一步了解化合物 1 的抑菌机理，我们选用
化合物1为研究材料,大肠杆菌为研究对象,将化合物1
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作用4.5 h的大肠杆菌和未经化合物1作用大肠杆菌制
片后,在扫描电镜下观察菌体的形态结构的变化。
由图 8 可知：正常的大肠杆菌培养 4.5 h 后，其
细胞表面光滑，菌体饱满,呈两端钝圆的杆状，菌体长
大约为 2.64 μm。经化合物 1 作用 4.5 h 后的大肠杆菌
菌体明显变短,菌体表面变粗糙,皱缩,其生长和分裂受
到抑制，其菌体表形态发生了的变。由此我们可以初
步推测化合物 1 的抑菌作用可能通过抑菌大肠杆菌的
生长速度,破坏菌体结构达到抑菌效果。在今后的研究
中我们可以研究化合物1作用菌体后的基因,蛋白质的
变化来进行更深入的抑菌机理研究。
2.4 细胞毒性研究
表2 两个化合物的细胞毒性(IC50 µM)
Table 2 Cytotoxicity of compounds 1 and 2 (IC50 µM)
化合物
细胞
HepG2 MCF-7 OVCAR3
化合物 1 34.2±1.05 60.43±1.2 62.23±2.30
化合物 2 >100 >100 >100
阿霉素 0.37±0.04 3.5±0.02 0.55±0.87
采用 MTT 法研究了两个化合物对 HepG2、
MCF-7、OVCAR 3 三种供试癌细胞的毒性。由表 2
可知：化合物 1 对 HepG2、MCF-7、OVCAR 3 均有
抑制作用，且化合物 1 对 HepG2、MCF-7、OVCAR 3
细胞表现出明显的剂量依赖性的细胞毒效果，对这 3
种癌细胞的半数抑率（IC50）为分别为 34.2 µM、60.43
µM、62.3 µM，其中对 HepG2 细胞毒性最强，其半数
抑率(IC50)34.2 µM，对 MCF-7、OVCAR 3 两种癌细
胞的毒性较弱，其半数抑率(IC50)分别为 60.43 µM、
62.23 µM。有关化合物 1 的对癌细胞的抑制作用研究，
林娜[14]采用 MTT 法的研究化合物 1 对 HepG2 的 IC50
为 27 µM，而本文研究化合物 1 对 HepG2 的 IC50为
34.2 µM,比林娜报道的结果偏高一点。化合物 2 对
HepG2、MCF-7、OVCAR 3 三种癌细胞的半数抑率
（IC50）均大于 100 µM，说明其对这三种癌细胞没有
细胞毒性，不具有抑制细胞增殖的作用。基于本研究
的结果，在今后研究中，我们可以深入地开展化合物
1 对 HepG2 细胞的抗肿瘤分子机制研究。
3 结论
本文对山莓叶中乙醇提取物有效成分进行了分
离鉴定、抑菌及细胞毒性研究：通过研究发现，乙醇
提取物分离纯化获得的两个化合物经结构鉴定分别是
三萜化合物和黄酮化合物，即 2α、3β、23α-三羟基-12-
烯-28-乌苏酸（1）和山奈酚-3-O-β-D-（6’’-对羟基桂
皮酰基）-葡萄糖苷（2)；抑菌活性表明化合物三萜类
化合物 2α、3β、23α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸的对 4
种供试菌具有很好的抑制效果，其抑菌效果优于黄酮
类化合物山奈酚-3-O-β-D-（6’’-对羟基桂皮酰基）-葡
萄糖苷。细胞毒性研究表明，三萜化类合物 2α、3β、
23α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸对 HepG2、MCF-7、
OVCAR 3 三种癌细胞的均有抑制作用，且对 HepG2
细胞的抑制作用最好 ,而黄酮类化合物山奈酚
-3-O-β-D-(6’’-对羟基桂皮酰基)-葡萄糖苷对这 3 种供
试的癌细胞没有明显的抑制作用。本文首次报道了化
合物 1 的抑菌活性，这对丰富山莓叶的化学成分及生
物活物具有重要的意义，为化合物 1 的抑菌机理及抗
HepG2 细胞机理方面提供重要的理论根据。为开发高
效,低毒的新型抗菌剂和肿瘤保健品奠定基础。
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