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薄层色谱法鉴别东方草莓药材中儿茶素



全 文 :书云南民族大学学报:自然科学版,2014,23(2) :79 - 81 CN 53 - 1192 /N ISSN 1672 - 8513
doi:10. 3969 / j. issn. 1672 - 8513. 2014. 02. 001 http:/ / xb. ynni. edu. cn
收稿日期:2013 - 10 - 30.
基金项目:国家自然科学基金(21262047) ;国家药典委员会项目(M11).
作者简介:杨春涛(1988 -) ,男,硕士研究生.主要研究方向:天然产物化学.
通信作者:黄相中(1974 -) ,男,博士,教授,硕士生导师. 主要研究方向:天然药物化学.
薄层色谱法鉴别东方草莓药材中儿茶素
杨春涛1,刘海青2,李 蓉1,江志勇1,骆桂法2,孙静贤1,黄相中1
(1.云南民族大学 民族药资源化学国家民委 -教育部重点实验室,云南 昆明 650500;
2.青海省食品药品检验所,青海 西宁 810016)
摘要:参照《中国药典(一部)》(2010 版)对薄层色谱鉴别法的规定,以东方草莓药材中的一特
征性成分(+)-儿茶素为对照品,分别采用薄层色谱法对 7 个产地的 10 批东方草莓药材进行
检测,建立了东方草莓药材的薄层色谱鉴别方法. 该方法操作简便、准确、可靠.
关键词:东方草莓;(+)-儿茶素;薄层色谱法
中图分类号:O657. 7 文献标志码:A 文章编号:1672 - 8513(2014)02 - 0079 - 03
Identification of catechin in Fragaria Orientalis Lozinsk by TLC
YANG Chun-tao1,LIU Hai-qing2,LI Rong1,JIANG Zhi-yong1,
LUO Gui-fa2,SUN Jing-xian1,HUANG Xiang-zhong1
(1. Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Resources,State Ethnic Affairs Commission
and Ministry of Education of China,Yunnan University of Nationalities,Kunming 650500,China;
2. Qinghai Provincial Institute for Food and Drug Control,Xining 810016,China)
Abstract:Using TLC with (+)-catechin as the reference substance,with reference to ChP. 2010,Vol 1,the cat-
echin of 10 batches of Fragaria Orientalis Lozinsk from 7 sources has been determined. A TLC identification method
of Fragaria Orientalis Lozinsk has been established. The method is simple,accurate and reliable.
Key words:Fragaria Orientalis Lozinsk;(+)-catechin;TLC
东方草莓(Fragaria Orientalis Lozinsk)为蔷薇科
(Rosaceae)草莓属(Fragaria)植物[1 - 3]. 我国从南
到北蕴藏着种类和数量丰富的野生草莓[3 - 7],主要
分布于青海、甘肃、陕西、山西、四川以及华中各省,
朝鲜、蒙古及俄罗斯远东地区也有分布,生于山坡草
地或林下,海拔在 400 ~ 6 000 m[1]. 东方草莓藏药
名为“志达萨增”,以其干燥全草入药,花期采收,除
去杂质及根须,晾干. 本品茎细弱,柔软,气微,味
酸、涩,有引吐肺痰,托引脑腔脓血之功效.用于血热
性化浓症,肺胃瘀血,黄水病脓疡[8],为藏药经典验
方“藏药七十味珍珠丸 (然钠桑培)”、“二十五味
珍珠丸”、“骨质增生乙组合(压迫神经引起疼痛)”、
“八味秦皮丸”等的重要成分. 目前尚未见有关东方
草莓化学成分研究的报道. 我们对东方草莓药材进
行了提取分离,发现(+)-儿茶素是其中的一个主
要化学成分. 查阅 2010 版《中国药典》,并未发现有
关东方草莓药材质量标准的内容,而药理研究表明,
(+)-儿茶素具有止泻、解毒、止血、降血糖作用,
也具有维生素 P样作用,还可用于治疗各种肝脏疾
病,特别是急性肝炎. 此外,尚可抗病毒、杀真菌、抗
癌及预防胃溃疡等作用[9]. 因此,可将(+)-儿茶
素作为东方草莓中的特征性成分. 为丰富 2015 版
《中国药典》的内容,提高我国传统药材的质量标
准,我们在国家药典委员会的统一部署和协调下,对
东方草莓药材的质量进行了深入研究,建立东方草
莓中(+)-儿茶素的薄层色谱指纹图谱.
1 实验材料
1. 1 药材样品
10 批东方草莓药材为青海省食品药品检验所
提供,采自西藏及成都和青海(见表 1).
表 1 10 份东方草莓完整药材
实验编号 产地
1 西藏 1
2 西藏 2
3 成都荷花池药材市场 1
4 成都荷花池药材市场 2
5 青海八路 1
6 青海八路 2
7 青海海北(蛇莓)
8 西藏自治区藏药厂
9 青海藏医院
10 青海互助北山(蛇莓)
1. 2 对照品
(+)-儿茶素对照品由中国药品生物制品鉴
定所提供,批号:11877 - 201203,纯度为 97. 20%.
1. 3 仪器与试剂
硅胶(200 ~ 300 目) ,硅胶 G254薄层板,反相硅
胶,定量毛细管(1 μL) ,磷钼酸显色剂(25%磷钼酸
乙醇溶液) ,三氯化铁显色剂(1% FeCl3 和 50%乙
醇水溶液)、硫酸显色剂(10% 硫浓酸乙醇溶液) ,
所用试剂均为分析纯 .
2 方法与结果
2. 1 方法
2. 1. 1 提取与分离
取东方草莓药材(西藏 2)粗粉 150 g,用 95%
乙醇浸泡、超声提取 3 次,减压回收溶剂后,将提取
物(14. 5 g)进行反相硅胶柱层析,依次用 V(甲醇) :
V(水)= 1∶ 9、1∶ 4、1∶ 1、1∶ 0 进行洗脱,得到 3 个组
分,将第 1 个组分(750 mg)进行正相硅胶柱层析,依
次用 V(氯仿)∶ V(甲醇)= 20∶ 1、15∶ 1、10∶ 1、5∶ 1、
1∶ 1、0∶ 1 进行洗脱,得到化合物Ⅰ.
2. 1. 2 结构鉴定
化合物Ⅰ 白色粉末,分子式为 C15H14O6,ESI -
MS(m/z)289. 1[M - H]-,1H NMR (400 MHz,
MeOD)δ:2. 53 (1H,dd,J = 8,8. 4 Hz,H -4) ,
2. 87 (1H,dd,J = 5. 6,5. 6 Hz,H - 4) ,4. 00
(1H,m,H - 3) ,4. 58 (1H,d,J = 7. 2 Hz,H -
2) ,5. 88 (1H,d,J = 2. 4 Hz,H -6) ,5. 95 (1H,
d,J = 2 Hz,H - 8) ,6. 74 (1H,dd,J = 1. 6,2
Hz,H - 6) ,6. 79 (1H,d,J = 8 Hz,H - 5) ,
6. 86 (1H,d,J = 8 Hz,H - 2). 13C NMR (400
MHz,MeOD)δ:82. 9(C - 2) ,68. 8(C - 3) ,28. 5
(C -4) ,156. 9(C - 5) ,96. 3(C - 6) ,157. 6(C -
7) ,95. 6(C - 8) ,157. 8(C - 9) ,100. 9(C - 10) ,
132. 2(C - 1) ,115. 3(C - 2) ,146. 3(C - 3) ,
146. 2(C -4) ,116. 1(C - 5) ,120. 1(C - 6). 以
上数据与文献[10]对照基本一致,鉴定该化合物为
(+)-儿茶素,从而确定东方草莓药材(西藏 2)中
含(+)-儿茶素成分 .
2. 1. 3 对照品溶液的制备
取(+ )- 儿茶素对照品,加甲醇制成 0. 25
mg /mL的对照品溶液 .
2. 1. 4 供试品溶液的制备
取药材粉末 4. 0 g 于具塞锥形瓶中,加 50 mL
V(甲醇)∶ V(水)= 1∶ 1,浸泡 30 min 后,超声提取
20 min,过滤,滤液减压浓缩,用甲醇 15 mL 分 2 次
溶解残渣,静置,过滤,滤液浓缩至 2 mL作供试品溶
液 . 同样的方法处理另外 9 批药材,得 10 批供试品
溶液 .
2. 1. 5 薄层色谱
吸取供试品溶液 3 μL,对照品溶液 2 μL,分别
点于硅胶 G薄层板上,以 V(甲苯)∶ V(乙酸乙酯)∶ V
(甲醇)∶V(甲酸)= 1 ∶ 2 ∶ 0. 2 ∶ 0. 1 为展开剂,展开
缸用展开剂预平衡 15 min,上行展开,展距 8 cm,取
出,平置晾干,喷以 25% 磷钼酸乙醇溶液,在 110 ℃
加热至斑点显色清晰[11](如图 1) ,图中 a 代表(+)
-儿茶素、1 ~ 10 见表 1 实验编号.
由图 1 可见,不同产地东方草莓完整药材均含
有(+)-儿茶素成分,其 R f 值为 0. 42,它们的色谱
08 云南民族大学学报(自然科学版) 第 23 卷
图也十分相似.
3 讨论
3. 1 供试品溶液制备
曾用甲醇超声提取,但由于此条件下杂质提取
率较大,影响薄层色谱法对(+)-儿茶素的鉴别,
所以采用 V(甲醇)∶ V(水)= 1∶ 1 提取方法,可排除
其它成分干扰,得到了良好的提取效果[12 - 13].
3. 2 展开剂选择
曾经选用 V(氯仿)∶ V(甲醇)∶ V(甲酸)= 5∶ 1
∶ 0. 02、V(正丁醇)∶ V(乙酸)∶ V(水)= 10 ∶
0. 1∶ 0. 1、V(丙酮)∶ V(水)= 10 ∶ 0. 1、V(氯仿)∶
V(乙酸乙酯)= 8∶ 2 等,但均不能将儿茶素和其他化
合物斑点分开或斑点拖尾,后参考薄层色谱法
(2010 版药典一部) ,选用 V(甲苯)∶ V(乙酸乙酯)
∶ V(甲醇)∶ V(甲酸)= 1∶ 2∶ 0. 2∶ 0. 1 为展开剂,得
到较好的分离效果,且斑点清晰,无杂质成分干扰.
3. 3 显色剂选择
曾选用三氯化铁显色剂(1% FeCl3 + 50% 乙醇
水溶液)、硫酸显色剂(10% 硫浓酸乙醇溶液) ,但
显色效果均不理想,硅胶板背景颜色较深,斑点模
糊,影响观测,后采用磷钼酸显色剂(25% 磷钼酸乙
醇溶液) ,斑点清晰,显色效果很好.
4 结语
东方草莓供试液以及对照品溶液宜新鲜制备,
并于低温冰箱中贮存备用. 显色剂用前再配置,久
置颜色会变黄,显色效果不好. 本文选用(+)-儿
茶素作为对照品是合理的,不同产地的东方草莓药
材薄层色谱结果证明了该鉴别方法的可行性和专属
性.该方法操作简便,为新版《药典》中东方草莓质
量标准的建立提供了参考资料.
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(责任编辑 王 琳)
18第 2 期 杨春涛,刘海青,李 蓉,等:薄层色谱法鉴别东方草莓药材中儿茶素