全 文 ：蛇莓水提物对临床菌株质粒消除作用及生物膜形成的影响
林居纯１，２，舒 刚１，马 驰１，２，黄 玲１，２，文心田１＊ （１．四川农业大学 动物医学院，四川 雅安６２５０１４；２．动物
疫病与人类健康四川省重点实验室，四川 雅安６２５０１４）
摘要：采用肉汤稀释法和牛津杯法观察了蛇莓水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌标准菌和临床菌株体外抗
菌活性；影印培养法观察亚抑菌浓度作用下，水提物对以上３种临床菌株质粒的消除作用；用微量滴定板法检测不同
浓度水提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌临床菌株生物膜形成的影响。结果显示，蛇莓水提物对大肠杆菌等不同临
床菌株均有抑菌作用，当质量浓度≥１２５ｇ／Ｌ时对菌株累计抑菌率达１００％；蛇莓亚抑菌浓度作用大肠杆菌、沙门菌
和金黄色葡萄球菌２４ｈ后，质粒消除率分别为１．４％，５．１％，２．２％；不同浓度蛇莓水提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球
菌菌膜形成量均有影响，且存在浓度依赖关系。由此可见，蛇莓水提物对大肠杆菌等兽医临床常见病原菌有抗菌作
用，对质粒有消除作用，能抑制细菌生物膜形成。
关键词：蛇莓；水提物；细菌；质粒；生物膜；消除
中图分类号：Ｓ８５３．７４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００５－４５４５（２０１４）０２－０２６４－０５
Ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｄ ａｎｄ ａｎｔｉｂｉｏｆｉｌｍ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ ａ－
ｇａｉｎｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ
ＬＩＮ Ｊｕ－ｃｈｕｎ１，２，ＳＨＵ Ｇａｎｇ１，ＭＡ Ｃｈｉ １，２，ＨＵＡＮＧ Ｌｉｎｇ１，２，ＷＥＮ Ｘｉｎ－ｔｉａｎ１＊ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ′ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ
Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｈｅａｌｔｈ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｙａ′ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ，ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｄ ａｎｄ ａｎｔｉｂｉｏｆｉｌｍ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ
Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ ａｇａｉｎｓｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ，ｂｒｏｔｈ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ Ｏｘｆｏｒｄ ｃｕｐ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ
ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｓ．ａｕｒｅｓ，
Ｅ．ｃｏｌｉ ａｎｄ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ；ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ ａｇａｉｎｓｔ ３ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｔ ｓｕｂ－
ＭＩＣ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｐｌｉｃａ ｐｌａｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ；ａｎｔｉｂｉｏｆｉｌｍ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ ａｇａｉｎｓｔ Ｓ．ａｕｒｅｓ
ａｎｄ Ｅ．ｃｏｌｉ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ－ｐｌａｔｅ ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍＤｕ－
ｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ ｈａｄ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ．Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ
１００％ａｔ ａ ｃｏｎｃｅｒｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ １２５ｇ／Ｌ；Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｅ．ｃｏｌｉ
，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｎｄ Ｓ．ａｕｒｅｓ ｗｉｔｈ ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ １．４％，５．１％ａｎｄ ２．２％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｉｔｌｙ ａｔ ｓｕｂ－ＭＩＣ ａｆ－
ｔｅｒ ２４ｈ．Ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｉｏｆｉｌｍ ｆｏｒ－
ｍａｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ａｎｄ ｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ
ｔｈａｔ ｔｈｅ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍＤｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ ｈａｓ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ，ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｄ ａｎｄ ａｎｔｉｂｉｏｆｉｌｍ ａｃｔｉｖｉｔｙ
ａｇａｉｎｓｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ｃｌｉｎｃａｌ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ；ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔ；ｂａｃｔｅｒｉａ；ｐｌａｓｍｉｄ；ｂｉｏｆｉｌｍ；ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ
＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｎｔｉａｎ３２１１＠１２６．ｃｏｍ
收稿日期：２０１３－０１－１５
基金项目：四川省教育厅科研基金资助项目（１０ＺＡ０４６）；四川省优势产业发展急需紧缺专业博士后基金资助项目（２００７ＣＸ０１）
作者简介：林居纯（１９６８－），女，副教授，博士。
＊通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｎｔｉａｎ３２１１＠１２６．ｃｏｍ
４６２ 中 国 兽 医 学 报 ２０１４年２月 第３４卷 第２期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｖｅｔ Ｓｃｉ Ｆｅｂ． ２０１４ Ｖｏｌ．３４ Ｎｏ．２
随着抗菌药物广泛及不合理应用，细菌产生耐
药性日趋严重。已有研究显示，细菌生物膜形成与
耐药性密切相关［１］。耐药质粒是导致耐药基因水平
传播的重要机制［２］。为克服细菌对抗生素的耐药
性，近年来人们努力寻找各种方法，以克服或缓解耐
药性产生。其中寻找有效耐药质粒消除剂成为研究
重点。中药质粒消除剂以其天然、价格低廉等优点，
有着巨大潜力和广阔应用前景。本研究通过体外抑
菌试验观察了蛇莓水提物的体外抑菌活性，并对临
床菌株质粒消除作用及生物膜形成的影响进行了研
究，旨在为蛇莓用于临床抗感染提供依据。
１ 材料与方法
１．１ 药材及药品 蛇莓（Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ Ｉｎｄｉａ（Ａｎｄｒ．）
Ｆｏｃｋｅ）全草，夏秋季节采于四川雅安地区，经本试验
中心鉴定为正品，洗净阴干，贮藏于阴凉通风处。氨
苄西林（ＡＭＰ）、阿莫西林（ＡＭＯ）、链霉素（ＳＴＲ）、
庆大霉素（ＧＥＮ）、四环素（ＴＥＴ）、多西环素（ＤＯＸ）、
氟苯尼考 （ＦＬＯ）、恩诺沙星 （ＥＮＲ）、氧氟沙星
（ＯＦＬ）、磺胺异噁唑（ＳＩＡ）、复方新诺明（ＳＸＴ）由中
国农业大学兽医药理学教研室提供。
１．２ 菌株 大肠杆菌 ＡＴＣＣ２５９２２、金黄色葡萄球
菌 ＡＴＣＣ２５９２３购自杭州天和微生物试剂有限公
司；沙门菌Ｃ７９－１３由西南民族大学生命科学与技术
学院张焕容博士惠赠；已知耐药表型大肠杆菌临床
菌株３０株，金黄色葡萄球菌３０株，沙门菌２５株，由
本试验中心保存提供。
１．３ 主要仪器及试剂 冷冻离心机Ｊ－２６ＸＰ（Ｂｅｃｋ－
ｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ公司）；酶标仪 Ｍｏｄｅｌ ６８０（ＢＩＯ－ＲＡＤ
公司）；凝胶成相系统 ＧｅｌＤｏｃ２０００（Ｂｉｏ－ｒａｄ公司）。
质粒提取试剂盒购自 ＯＭＥＧＡ公司；ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ
１５０００购自天根生化科技（北京）有限公司；溶菌酶、
溶葡萄球菌素，购自上海生工生物工程技术服务有
限公司；胰蛋白胨、酵母提取物购自英国 Ｏｘｉｏｄ公
司；ＭＨ琼脂、ＭＨ肉汤等购自杭州微生物试剂有限
公司。
１．４ 供试药液制备 根据均匀设计试验结果，准确
称取２０ｇ蛇莓全草，加蒸馏水（料液比１∶３６）煮沸
３次，每次１ｈ，合并３次水煎液，真空减压浓缩得粗
提取物测质量后，于４℃冰箱备用。
１．５ 蛇莓水提物体外抑菌活性 采用肉汤二倍稀
释法测定蛇莓水提物的 ＭＩＣ［３］。采用牛津杯法检
测蛇莓水提物不同质量浓度（５００．０，２５０．０，１２５．０，
６２．５，３１．３ｇ／Ｌ）对临床菌株的抑菌作用。结果判
断，抑菌直径≥２０ｍｍ为高度敏感，１０～１９ｍｍ为
中度敏感，＜１０ｍｍ为不敏感［４］。把中敏和高敏菌
株统计为抑菌菌株数，计算累计抑菌率＝抑制菌株
数／总菌株数＊１００％［５］。
１．６ 质粒消除试验 随机选取１株大肠杆菌临床
菌（Ｅ１），１株沙门菌临床菌（Ｓ１）及１株金黄色葡萄
球菌临床菌（ＳＡ１）为质粒消除对象。用ＬＢ肉汤将
蛇莓提取物稀释至亚抑菌浓度（０．５＊ＭＩＣ），接种细
菌（５×１０５ ＣＦＵ／ｍＬ）后于３７℃培养２４ｈ。吸取
１００μＬ培养液接种至ＬＢ琼脂平板，３７℃培养２４ｈ，
同时设ＳＤＳ（１００ｍｇ／Ｌ）和不含药ＬＢ肉汤为阳性和
阴性对照。待长出单个菌落后挑取１ ０００个菌落，
以影印培养法，将大肠杆菌和沙门菌依次转种于含
氨苄西林（１００ｍｇ／Ｌ）、四环素（１０ｍｇ／Ｌ）药物平
板；金黄色葡萄球菌转种于含氨苄西林（１０ｍｇ／Ｌ）、
四环素（１０ｍｇ／Ｌ）药物平板；以上菌株同时接种于
不含药ＬＢ琼脂平板，３７℃培养２４ｈ观察耐药性消
除结果，并计算消除率＝含药平板不长菌落数／不含
药平板上生长菌落数［６］。肉汤稀释法检测消除前后
细菌对阿莫西林等１１种抗菌药物耐药表型的变化。
质粒提取试剂盒提取菌株质粒ＤＮＡ，以观察消除前
后质粒带丢失情况。随机选取部分消除子，在普通
营养平板上传３０代，每隔１０代进行药敏检测，以观
察消除子药敏稳定性。
１．７ 蛇莓水提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生
物膜形成的影响 采用刚果红平板法筛选生物膜形
成阳性菌［７］，其中１０株金黄色葡萄球菌和８株大肠
杆菌临床菌。将筛选出菌株接种于ＴＳＡ平板，３７℃
培养２４ｈ后挑取单菌落于３ｍＬ ＴＳＢ肉汤中，过夜
培养后做１∶５０倍稀释，取１００μＬ稀释菌液加到
９６孔板中；ＴＳＢ肉汤将蛇莓水提物稀释成不同浓
度，取１００μＬ药物稀释液分别加入到含有１００μＬ
菌液的９６孔板中，每个浓度平行做４个重复，并设
不含药物肉汤为阴性对照，金黄色葡萄球菌和大肠
杆菌分别选取红霉素（ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ ＥＭ）［８］，环丙
沙星（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ＣＩＰ）［９］为阳性对照；平板密封
后３７℃培养２４ｈ，弃去孔内未粘附浮游菌后，每孔
加入甲醇固定１５ｍｉｎ，用０．２％结晶紫染色５ｍｉｎ
后，加入３３％冰乙酸１６０μＬ，静置２０ｍｉｎ，酶标仪测
定各孔于波长５７０ｎｍ处吸光值，根据Ｄ５７０来衡量
菌膜形成量［１０－１１］。
１．８ 数据统计及处理 采用ＳＰＳＳ １６．０统计软件
对试验结果进行分析处理，不同处理间平均值比较
用ＬＳＤ和Ｄｕｎｃａｎ氏进行多重比较，结果以“平均值
±标准差”表示。
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２ 结果
２．１ 蛇莓水提物体外抑菌活性 蛇莓水提物对金
黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ２５９２３、大肠杆菌 ＡＴＣＣ２５９２２
和沙门菌 Ｃ７９－１３ 的 ＭＩＣ 分别为 １．５６，２５．００，
６．２５ｇ／Ｌ。牛津杯法检测结果显示，不同浓度蛇莓
水提物对临床菌株均有抑菌作用，累计抑菌率呈浓
度依赖性，当提取物质量浓度达１２５ｇ／Ｌ及以上时
对本次检测菌株累计抑菌率高达１００％（表１）。
表１ 不同质量浓度蛇莓水提物对不同临床菌株累计抑菌率 ％
菌 株
蛇莓水提物／（ｇ·Ｌ－１）
５００．０ ２５０．０ １２５．０ ６２．５ ３１．３
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（ｎ＝３０） １００ １００ １００ ５５ １０
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（ｎ＝２５） １００ １００ １００ ８０ ８０
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ｎ＝３０） １００ １００ １００ １００ １００
２．２ 质粒消除结果 ３株临床菌株（Ｅ１，Ｓ１，ＳＡ１）
在蛇莓亚抑菌浓度下作用２４ｈ后获得不同类型消
除子，其中Ｅ１和Ｓ１获得ＴＥＴ或ＡＭＰ单一耐药性
消除的消除子，ＳＡ１获得ＴＥＴ＋ＡＭＰ双重耐药性
消除的消除子（表２）。由表２可知，蛇莓处理后所
有菌株消除率均极显著高于阴性对照组（Ｐ＜
０．０１）；与ＳＤＳ组相比，蛇莓组Ｅ１、Ｓ１消除率与ＳＤＳ
组有显著或极显著差异（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），而蛇
莓组ＳＡ１消除率与 ＳＤＳ组无显著性差异（Ｐ＞
０．０５）。
表２ 蛇莓水提物对不同临床菌株质粒消除效果
菌 株 药 物 菌落数 ρ／（ｇ·Ｌ－１）
消除类型及菌落数
ＡＭＰ ＴＥＴ ＡＭＰ＋ＴＥＴ
消除率／％
Ｅ．ｃｏｌｉ
Ｅ１
蛇莓 １ ０００ ３１．３ ０ １４ ０ １．４ｂ
ＳＤＳ １ ０００ ０．１ ５ ２３ ０ ２．８ａＡ
阴性对照 １ ０００ ０．０ ０ ０ ０ ０．０Ｂ
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
Ｓ１
蛇莓 １ ０００ ７．８ １９ ３２ ０ ５．１Ｂ
ＳＤＳ １ ０００ ０．１ ７ １５ ０ ２．２Ａ
阴性对照 １ ０００ ０．０ ０ ０ ０ ０．０Ｂ
Ｓ．ａ ｕ ｒ ｅ ｓ
ＳＡ１
蛇莓 １ ０００ ３．９ ０ ０ ２２ ２．２ａ
ＳＤＳ １ ０００ ０．１ ０ ０ １２ １．２ａＡ
阴性对照 １ ０００ ０．０ ０ ０ ０ ０．０Ｂ
注：相对于ＳＤＳ组，同一列中右上角标有不同小写字母示差异显著（Ｐ＜０．０５）；不同大写字母示差异极显著（Ｐ＜０．０１）
菌株消除前后药敏结果显示，消除子恢复了对
部分抗菌药物的敏感性。其中大肠杆菌Ｅ１消除前
对所检测的１１种药物均耐药，耐药谱为 ＡＭＰ／
ＡＭＯ／ＳＴＲ／ＧＥＮ／ＴＥＴ／ＤＯＸ／ＦＬＯ／ＥＲＮ／ＯＦＬ／
ＳＩＡ／ＳＸＴ，经蛇莓水提物作用后的 ＴＥＴ型消除子
恢复了对四环素类敏感性，耐药谱为 ＡＭＰ／ＡＭＯ／
ＳＴＲ／ＧＥＮ／ＦＬＯ／ＥＲＮ／ＯＦＬ／ＳＩＡ／ＳＸＴ；Ｓ１ 消除
前呈耐１１种药物的多重耐药菌，消除后获得的
ＡＭＰ型消除子对β－内酰胺类、氨基糖苷类药物及氯
霉素类药物的 ＭＩＣ均出现降低，耐药谱为ＳＴＲ／
ＴＥＴ／ＤＯＸ／ＥＲＮ／ＯＦＬ／ＳＩＡ／ＳＸＴ。Ｓ１消除后获得
的ＴＥＴ型消除子恢复了对四环素类敏感性，谱型为
ＡＭＰ／ＡＭＯ／ＳＴＲ／ＧＥＮ／ＦＬＯ／ＥＲＮ／ＯＦＬ／ＳＩＡ／
ＳＸＴ；ＳＡ１ 消除前耐药谱为 ＡＭＰ／ＡＭＯ／ＳＴＲ／
ＧＥＮ／ＴＥＴ／ＥＲＹ／ＦＬＯ／ＳＩＡ／ＳＸＴ，ＡＭＰ＋ＴＥＴ型
消除子耐药谱为ＳＴＲ／ＦＬＯ／ＳＩＡ／ＳＸＴ。
消除前后菌株质粒提取电泳结果显示，Ｅ１含有
３条质粒带（２．３～２１．０ｋｂ），消除子均丢失了２条质
粒带；Ｓ１含有３条质粒带（２．０～２１．０ｋｂ），消除子丢
失了２条质粒带；ＳＡ１含有４条质粒带（１．５～２１．０
ｋｂ），消除子丢失了３条质粒带。
在无抗菌药物选择性压力作用下，以上３种菌
的消除子经３０次传代后，其 ＭＩＣ无显著改变，表明
消除子对抗菌药物的敏感性能稳定存在。
２．３ 蛇莓水提物对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌生
物被膜形成的影响 由表３可见，２．００ｍｇ／Ｌ ＣＩＰ
和蛇莓水提物不同质量浓度对８株大肠杆菌菌膜形
成量（Ｄ５７０）与阴性对照有极显著差异（Ｐ＜０．０１）；蛇
莓水提物（２５．００，５０．００ｇ／Ｌ）与ＣＩＰ对菌膜形成量无
显著性差异（Ｐ＞０．０５），蛇莓水提物较高质量浓度（２５．
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００，５０．００ｇ／Ｌ）与较低质量浓度（６．２５，１２．５０ｇ／Ｌ）对菌膜
形成量有显著或极显著差异（０．０５＜Ｐ＜０．０１或Ｐ＜
０．０１）；蛇莓水提物对８株大肠杆菌菌膜形成量的抑
制作用呈浓度依赖关系。
８．００ｍｇ／Ｌ ＥＭ 和蛇莓各浓度对１０株金黄色
葡萄球菌菌膜形成量与阴性对照有极显著差异
（Ｐ＜０．０１）；ＥＭ和蛇莓水提物（０．７８，１．５６，３．１３ｇ／Ｌ）对
菌膜形成量无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；蛇莓水提物较
高质量浓度（０．７８，１．５６，３．１３ｇ／Ｌ）与质量浓度０．３９ｇ／
Ｌ对菌膜形成量有极显著或显著差异（０．０５＜Ｐ＜０．
０１或Ｐ＜０．０１）；蛇莓水提物对１０株金黄色葡萄球
菌菌膜形成量的抑制作用呈浓度依赖关系。
表３ 蛇莓水提物对不同菌株生物膜形成量的影响
组 别 大肠杆菌菌膜形成量（ｎ＝８） 组 别 金黄色葡萄球菌菌膜形成量（ｎ＝１０）
阴性对照 ０．１７８±０．０２９Ｂ 阴性对照 ０．３３２±０．１３６Ｂ
ＣＩＰ ２．００ｍｇ／Ｌ ０．０９７±０．０２１ａＡ ＥＭ ８．００ｍｇ／Ｌ ０．０９６±０．０３９ａＡ
蛇莓５０．００ｇ／Ｌ ０．０８６±０．０１１ａ 蛇莓３．１３ｇ／Ｌ ０．０７５±０．０２８ａ
蛇莓２５．００ｇ／Ｌ ０．０９９±０．０１４ａ 蛇莓１．５６ｇ／Ｌ ０．０９３±０．０２８ａ
蛇莓１２．５０ｇ／Ｌ ０．１１８±０．０１１ｂ 蛇莓０．７８ｇ／Ｌ ０．１２４±０．０３９ａ
蛇莓６．２５ｇ／Ｌ ０．１３５±０．０１２Ｂ 蛇莓０．３９ｇ／Ｌ ０．１９１±０．０５２Ｂ
注：与ＣＩＰ或ＥＭ相比，同一列中右上角标不同小写字母示差异显著（Ｐ＜０．０５）；标有不同大写字母示差异极显著（Ｐ＜０．０１）
３ 讨论
蛇莓为蔷薇科多年生草本植物，具有清热凉血、
消肿解毒功效，临床上主要用于治疗热病、惊痫、咽
喉肿痛、蛇虫咬伤等。近年来对蛇莓体外抗菌作用
研究发现，蛇莓水煎剂对７种常见致病菌有不同程
度抑制作用，金黄色葡萄球菌 ＭＩＣ为１∶１ ０２４，肺
炎球菌１∶６４，痢疾杆菌１∶５１２，甲型副伤寒杆菌
１∶５１２，变形杆菌１∶１ ０２４，枯草杆菌１∶３２，绿脓
杆菌１∶５１２［１２］。本研究显示，蛇莓水提物对金黄色
葡萄球菌、大肠杆菌和沙门菌标准菌ＭＩＣ分别为１．５６，
２５．００和６．２５ｇ／Ｌ；蛇莓对不同临床菌株均有抗菌活
性，抗菌作用与浓度相关，当质量浓度达１２５ｇ／Ｌ对
临床菌株累计抑菌率为１００％。相对于大肠杆菌和
沙门菌，蛇莓对金黄色葡萄球菌抗菌活性更强。
质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单
位，可通过接合、转化及转导等在不同菌株间转移。
质粒编码所产生的细菌耐药性和毒力等问题，给临
床感染治疗带来很大困难［２］。消除耐药质粒，使耐
药菌恢复敏感性，对临床上治疗由耐药菌导致的感
染和阻断耐药性传播有重要意义。本研究表明不同
临床菌株在蛇莓水提物亚抑菌浓度作用２４ｈ后，质
粒消除率为１．４％～５．１％，极显著高于阴性对照；蛇
莓对不同菌株质粒消除效果不同，其中对大肠杆菌
消除（消除率１．４％）作用不及ＳＤＳ组（２．８％），对沙
门菌（５．１％）和金黄色葡萄球菌（２．２％）质粒消除效
果优于或与ＳＤＳ效果相当，这可能是不同耐药菌
株，耐药机制不相同，所以菌株质粒消除效果呈较大
差异。从耐药表型变化来看，经蛇莓水提物作用后
消除子恢复了对部分抗菌药物的敏感性，尤其对β－
内酰胺类和四环素类的敏感性，这与其有关报道各
种耐药质粒中以阿莫西林或四环素耐药质粒最易消
除结果一致［１３］。从质粒丢失情况来看，不同消除子
均丢失２～３条质粒带，说明消除子耐药性的丢失是
由于编码此种耐药性的质粒经蛇莓水提物作用而获
得。
细菌生物膜是附着于有生命或无生命物体表面
被细菌胞外大分子包裹的有组织细菌群体。能形成
生物膜的菌株对宿主免疫及抗生素有很强抵抗力，
从而导致严重临床问题，尤其是慢性和难治的慢性
感染［１］。从天然产物中寻找抑制细菌生物膜的研究
已受到重视［１４－１６］。本研究采用水煎法提取蛇莓有效
成分，结果显示蛇莓水提物不同浓度对检测的８株
大肠杆菌和１０株金黄色葡萄球菌生物膜形成有抑
制作用，且存在浓度依赖关系。水提物质量浓度为
２５，５０ｇ／Ｌ 对大肠杆菌菌膜形成的影响与 ＣＩＰ
（２ｍｇ／Ｌ）相当；水提物质量浓度为０．７８，１．５６，
３．１３ｇ／Ｌ对金黄色葡萄球菌菌膜形成的影响与ＥＭ
（８ｍｇ／Ｌ）相当。
以上可见，蛇莓水提物对兽医临床常见病原菌
有体外抗菌活性、质粒消除作用以及对菌膜形成有
抑制作用，但蛇莓哪种有效成分在起作用，以及作用
机制有待进一步研究。
参考文献：
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