全 文 ：翻白草中黄酮类化合物的 HPLC指纹图谱研究
李胜华 , 伍贤进 , 郭文康
(怀化学院生命科学系 ,湖南怀化 418008)
　　摘要:本研究对 5个产地的翻白草利用高效液相色谱仪进行有关黄酮类化合物的谱图分析 , 色谱条件流动相为
甲醇 -0.5%磷酸二氢钠(体积比 60∶40)、检测波长 368 nm、流动相流速 1.0 ml/min、柱温 25 ℃。各材料的黄酮类化
合物在此条件下有较好分离。通过对各材料的黄酮类化合物的谱图进行分析 , 发现有 10个共有指纹峰 , 比较 10个共
有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积值 , 发现都具有一定的差异 ,由此可知 , 不同的生长环境对翻白草黄酮类化合
物的积累有一定的影响。
　　关键词:翻白草;黄酮类化合物;高效液相色谱;指纹图谱
　　中图分类号:R282.71　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2009)04-0175-02
收稿日期:2009-02-11
基金项目:国家科技基础条件平台项目(编号:2005DKA30430)。
作者简介:李胜华(1978—),男 ,湖南攸县人 ,硕士 ,讲师 ,主要从事生
物活性成分的检测与分离工作。
通讯作者:伍贤进 ,博士 ,教授。 E-mail:hhuxianjin@163.com。
　　翻白草(PotentilladiscolorBunge)为蔷薇科(Rosaceae)委
陵菜属植物 ,又名鸡腿儿 、反白蒿子、叶下白 、白背叶 ,始载于
《救荒本草 》。根多分枝 ,下端肥厚成纺锤状 。茎上升向外倾
斜 ,多分枝 ,表面具白色卷绒毛 。生长于丘陵山地 、路旁和畦
埂上 。性平味甘微苦 ,清热解毒 ,消肿止血 ,主治吐血 、咳血 、
下血 、妇女血崩 、痢疾 、疟疾、疔疮肿毒等 [ 1 ] 。现代医学研究
表明 ,翻白草具有抗菌 、止泻和免疫抑制作用 [ 2] 。
翻白草中所含的黄酮主要是芹菜素 -6-C-阿拉伯吡
喃糖基 -8-C-葡萄吡喃糖苷 、芹菜素 -7-O-B-D-葡
萄糖醛酸苷 、木樨草素 -7-O-B-D-葡萄糖醛酸苷 、柯伊
利素 、槲皮素 、蒺藜黄酮苷 、金丝桃苷 、金合欢素 -7-O-A-
L-吡喃鼠李糖基 -(1′′-6′′)-B-D-吡喃葡萄糖苷 、山
奈酚 -3 -O-B-D-(对羟基桂皮酰基)-吡喃葡萄糖
苷 [ 3 ] 。翻白草的降血糖等功能多与这一类化合物有关 。
按照国家药典委员会关于 “中药指纹图谱研究的技术要
求 ”和补充规定 ,笔者对翻白草中黄酮类成分的指纹图谱进
行研究 。本研究建立的方法 ,可操作性强 ,重现性好 ,可作为
翻白草中黄酮苷类成分的指纹图谱研究的基础 。
1　材料与方法
1.1　材料
翻白草材料编号 1、2、3、4、5 ,分别来源于湖北省孝感市 、
湖南省新宁县 、湖南省通道县 、湖南省溆浦县 、湖南省攸县 。
1.2　仪器与试剂
半制备高效液相色谱仪(北京凯奥生物仪器有限公司 );
CXTH -3000色谱数据处理系统;旋转蒸发器(上海亚荣生
化仪器厂);循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂);鼓风干燥
箱(长沙仪器仪表厂);双列式电热恒温水浴锅 (琴台医疗器
械厂);电子天平 [梅特勒 -托利多仪器(上海)有限公司 ] ;索
氏提取器;色谱甲醇和分析甲醇 (天津科密欧试剂开发中
心);双蒸水;其余试剂均为分析纯 。
1.3　试验方法
1.3.1　色谱条件的确立　在相同的色谱柱 AtlantisC18(250
mm×4.6 mm, 5μm)、检测波长为 368nm、柱温为 25℃、流速
为 1.0 ml/min、进样量 20 μl下 ,分别用不同的流动相:甲醇
-水 -甲酸(体积比 50 ∶48 ∶2)、甲醇 -0.5%磷酸二氢钠 -
甲酸(体积比 50∶48 ∶2)、甲醇 -0.5%磷酸二氢钠(体积比
70 ∶30)、甲醇 -0.5%磷酸二氢钠(体积比 60 ∶40)、甲醇 -
0.5%磷酸二氢钠(体积比 55 ∶45)、甲醇 -0.5%磷酸二氢钠
(体积比 40 ∶60)、甲醇 -0.5%磷酸二氢钠 (体积比 70 ∶
30)、甲醇 -0.5%磷酸二氢钠(体积比 60 ∶40)、甲醇 -0.5%
磷酸二氢钠(体积比 55 ∶45)、甲醇 -0.5%磷酸二氢钠(体积
比 45∶55)、甲醇 -0.5%磷酸二氢钠 (体积比 40 ∶60)进行
了试验 ,结果表明流动相为甲醇 -0.5%磷酸二氢钠(体积比
60 ∶40)时 ,样品能较好地分离 。
1.3.2　色谱条件　色谱柱为 C18(250mm×4.6mm, 5μm)、
流动相为甲醇 -水(0.5%磷酸二氢钠)(体积比 60 ∶40)、体
积流量 1.00 ml/min、进样量 20 μl、柱温 25 ℃、检测波长 368
nm、灵敏度 0.2000AUFS。
1.3.3　对照品溶液的制备　精密称取适量芦丁对照品 ,加入
甲醇后制成 0.1g/L的对照品溶液 。
1.3.4　供试品溶液的制备 [ 4] 　将供试样品干燥后粉碎混匀 ,
准确称取 5.0g,用 70%的乙醇 200ml索氏回流提取 8h至回
流液无色 ,将提取液减压浓缩 ,最后将其转移至 100 ml容量
瓶中 ,用 70%的乙醇稀释至刻度 。
1.3.5　系统适用性试验 [ 5] 　为考察分析方法的可靠性 ,以第
三批为供试品 ,对仪器精密度 、方法重复性进行相应考察 。
1.3.6　精密度试验　取同一批次供试品溶液 ,按 1.3.2色谱
条件连续进样 5次 ,分别对共有峰的相对保留时间和峰面积
比值进行考察 [ 6] 。
1.3.7　重复性试验　取同一批次供试品药材粉末 5份 ,按
1.3.4制备供试品溶液 ,按 1.3.2色谱条件进行分析 ,分别对
共有峰的相对保留时间和峰面积比值进行考察 。
1.3.8　稳定性试验 　取供试品溶液按 1.3.2色谱条件 ,每
1 h进样 1次 ,共 6次 ,考察共有峰的相对保留时间和峰面
积比 。
—175—江苏农业科学　2009年第 4期DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2009.04.145
2　结果与分析
2.1　HPLC指纹图谱的分析
按上述条件 ,对 5种材料进行 HPLC指纹图谱分析 。吸
取 5种供试品溶液各 20 μl,分别注入高效液相色谱仪 ,记录
25 min的色谱图 ,以芦丁作为对照 ,见图 1至图 5。对照品芦
丁保留时间 tR为 4 min左右 ,峰分离度好 ,峰形对称(图 6)。
2.2　共有指纹峰的标定
采用相对保留时间标定共有指纹峰 ,按峰面积大小 ,选取
10个共有峰作为指纹图谱的强峰 ,分别以图谱中 4号峰 (芦
丁色谱峰)的保留时间和峰面积为参照 ,将各色谱峰与其比
值 ,计算供试样品指纹图谱中共有峰的相对保留时间和相对
峰面积(表 1、表 2)。
表 1　主要共有峰的相对保留时间
材料编号 峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10
1 0.68 0.83 0.91 1.00 1.35 1.98 1.90 2.16 2.34 4.93
2 0.69 0.77 0.87 1.00 1.35 1.53 1.70 1.90 2.20 4.69
3 0.63 0.78 0.87 1.00 1.33 1.53 1.69 1.82 2.22 4.75
4 0.68 0.85 0.93 1.00 1.10 1.42 1.63 1.80 2.34 4.97
5 0.63 0.78 0.91 1.00 1.30 1.45 1.62 1.84 2.12 4.51
表 2　共有峰的相对峰面积
材料编号 峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 10
1 0.61 0.66 0.52 1.00 0.74 0.26 0.20 0.05 0.11 0.07
2 0.85 0.94 1.12 1.00 1.07 0.23 0.21 0.06 0.16 0.12
3 1.36 1.02 0.60 1.00 1.96 0.78 0.39 0.07 0.17 0.15
4 0.44 0.45 0.22 1.00 0.80 0.20 0.19 0.03 0.11 0.05
5 0.79 0.45 0.79 1.00 1.32 0.31 0.10 0.14 0.12 0.10
3　讨论
由表 2可看出 , 10个共有指纹峰的相对峰面积值都有一
定的差异 ,反映了化学成分含量的差异 。可见 ,不同的生长环
境对翻白草黄酮类化合物的积累有一定的影响 。
(下转第 177页)
—176— 江苏农业科学　2009年第 4期
白蝶合果芋水培影响因素研究
杨锋利 , 杜保国 , 钟　丽
(绵阳师范学院园林科学研究所 ,四川绵阳 621000)
　　摘要:以洗根法和水插法处理的白蝶合果芋为材料 ,研究不同 IAA浓度对其水培生根及不同营养液组合和施用
方式对其生长的影响 ,寻找适合白蝶合果芋水培的最佳方法。结果表明:经洗根法和水插法处理的白蝶合果芋均能诱
导出健康根系 ,即使在不加 IAA的水溶液中也能正常生根 , 20 mg/L的 IAA能显著提高白蝶合果芋的生根率和单株根
数 ,采用 T3营养液上下双施的方式 , 更有利于白蝶合果芋的生长和提高观赏效果。
　　关键词:白蝶合果芋;水培;营养液;生根;观赏效果
　　中图分类号:S682.360.36　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2009)04-0177-03
(上接第 176页)
　　HPLC指纹图谱是通过比较样本间色谱图的差异来反映
样品间化学成分的种类及含量的差异 [ 7] 。由本试验得出的
指纹图谱看出 ,不同地区的翻白草共有指纹峰数量较多 ,相对
保留时间一致 ,并且高效液相色谱图谱相似。
本试验中的样品收集 、制备及色谱条件优选均符合
HPLC中药指纹图谱的技术要求和建立原则 。对所建立的指
纹图谱进行方法学考察和指纹图谱评价方法学考察包括精密
度试验 、重复性试验和稳定性试验 ,结果表明 ,主要共有峰的
相对保留时间和相对峰面积相对标准偏差 (RSD)均小于
3%,均符合 HPLC中药指纹图谱要求 [ 8 ] 。供试品溶液在 25
min内稳定 。
黄酮类化合物中酚羟基易电离 ,组分峰易产生拖尾 ,加入
磷酸二氢钠调节 pH值至弱酸性 ,组分峰形对称性良好 ,但磷
酸二氢钠对 SOD柱填料有一定损害 。为保持柱性能稳定 ,延
长柱寿命 ,本试验中采取在确保组分峰形良好的前提下降低
磷酸二氢钠用量 [ 9] 。翻白草含有酯类物质 ,此类物质通过石
油醚的萃取可有效除去 ,避免造成测定时组分峰分离度下降
及降低反相柱使用寿命 。
参考文献:
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　　白蝶合果芋 (Syngoniumpodophylumcv.` WhiteButter-
fly )是天南星科合果芋属多年生常绿草本 ,有很强的吸收甲
醛和氨气能力 [ 1-2 ] ,是较为热销的室内盆栽观叶植物 。常用
的繁殖方法有扦插和组培 ,以顶芽或腋芽作为外植体的组培
快繁技术已比较成熟 [ 3-5 ] 。水培花卉是继 20世纪 60年代世
界农业的 “绿色革命 ”之后兴起的一场新的 “种植革命 ” ,将花
卉直接栽养在盛水的容器中 ,施以其生长所需的营养元素进
行栽培 ,具有环保 、卫生 、方便 、可以花鱼共养 、观赏性好的特
点 ,是未来植物栽培技术的趋势和发展方向 [ 6-7 ] 。丁映等 [ 8 ]
曾对合果芋水培进行研究 ,但并未涉及适合白蝶合果芋水培
的营养液及提高其观赏效果方面 。本试验在已有的研究基础
收稿日期:2009-01-16
基金项目:四川省教育厅青年基金(编号:07ZB039)。
作者简介:杨锋利(1978—),女 ,山东人 ,硕士 ,讲师 ,主要从事植物学
教学和科研工作。 Tel:(0816)2202691;E-mail:yangfenglihao@
163.com。
上 [ 8 -12 ] ,采用营养液上下双施的方式 ,对白蝶合果芋水培生
根及其观赏效果的影响因素进行了初步研究 ,以期探寻适合
其生长及达到较好观赏效果的培养方式 ,为今后的大量生产
或居家水培提供依据 。
1　材料与方法
1.1　试验材料
生长良好 、无病虫危害 、长势相对一致的白蝶合果芋一年
生盆栽植株 , 2008年 3月 1日购自绵阳市东方红大桥花卉市
场 。在不同 IAA浓度营养液的生根效果试验中 ,将材料进行
以下两种处理 。洗根法:将盆栽植株托出 ,泡在水中除去根部
土壤 ,剪去烂根和老根 ,并用细毛刷在流水下将根刷洗干
净 [ 13] 。水插法:在选定截取枝条的茎节下端 0.5 ～ 1.0 cm
处 ,用枝剪快速剪下 ,切面要平滑 ,避免挤压和纵向裂痕 [ 14] 。
将上述两种方法处理的试验材料浸入 1% KMnO4溶液中消毒
10 min,再用清水洗净 。
—177—江苏农业科学　2009年第 4期