全 文 ：为：超滤法、透析法、超速离心法和凝胶柱层析法等，
上述４种测定方法中超滤法设备要求简单，易于操
作。因此，本研究通过预实验结果并结合各种测定
方法的优劣，最终选择超滤法测定离葛根素－ＮＬＣｓ
中药物的包封率。
将葛根素制备成纳米结构脂质载体，大鼠尾静
脉注射后比显出良好的器官靶向作用。这可能是由
于Ｓｏｌｕｔｏｌ　ＨＳ１５?的亲水性和“立体位阻”作用，降
低了单核巨噬细胞系统以及ＲＥＳ对葛根素－ＮＬＣｓ
的识别并吞噬，相对减少了药物在肝脏及脾脏的分
布，可以在血液中滞留较长的时间。此过程中葛根
素－ＮＬＣｓ可能通过细胞的内吞作用透过血脑屏障
或者被脑血管上皮细胞吞噬性摄取，从而实现了
ＮＬＣｓ血脑屏障的转运，从而提高了葛根素在脑中
的靶向效率。
葛根素－ＮＬＣｓ的组织分布表现出与葛根素注射
液明显不同的特征。与葛根素注射液相比，葛根素－
ＮＬＣｓ均提高了药物在各个组织中的分布，延长了药
物在体内各组织中的相对滞留时间。尤其在脑部，葛
根素－ＮＬＣｓ提高了药物达峰浓度，显著增加了葛根素
在脑部的滞留总量。本文的实验结果与文献［１８］报
道的结果相似，也证实了ＮＬＣｓ这种纳米粒能帮助药
物透过血脑屏障，可作为脑靶向药物的理想载体。
参考文献：
［１］　周本宏，刘刚，罗顺德．葛根素对红细胞膜脂质过氧化损伤的防
护作用［Ｊ］．中国医院药学杂志，２００４，２４（８）：１４３７－１４４０．
［２］　杨蕾，舒娈，姚冬冬，等．葛根素对链脲佐菌素诱导的糖尿病小
鼠降糖作用［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１４，３４（１６）：１３３８－１３４２．
［３］　陈先震，沈照立，薛飞，等．葛根素辅助脑蛋白水解物治疗缺血
性脑血管病预后疗效分析［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１３，３３
（１）：４９－５２．
［４］　Ｑｕａｎ　ＤＱ，Ｘｕ　ＧＸ，Ｗｕ　ＸＧ．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｂｓｏｌｕｔｅ
ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ａ　ｓｅｌｆ－ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｐｕｅｒａｒｉｎ
［Ｊ］．Ｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌ，２００７，５５（６）：８００－８０３．
［５］　王宜梅，杨宇．葛根素注射液静脉滴注致头面部水肿１例［Ｊ］．
中国医院药学杂志，２０１３，３３（３）：２５５．
［６］　曹烨君，丁选胜．某院葛根素葡萄糖注射液致可疑急性血管内
溶血分析［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１４，３４（１３）：１１１６－１１１８．
［７］　姜霞，陈思渊，刘卫．辅酶 Ｑ１０纳米结构脂质载体的制备及皮
肤靶向性评价［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１２，３２（１２）：９３２－９３６．
［８］　李磊，周雪芹，孙进，等．注射用亮菌甲素纳米结构脂质载体系
统的制备、体外释药及体内药动学研究［Ｊ］．中国药学杂志，
２０１２，４７（４）：２８７－２９１．
［９］　袁菱，周蕾，陈彦，等．雷公藤红素纳米结构脂质载体的制备及
其理化性质考察［Ｊ］．中成药，２０１３，３５（９）：２０２３－２０２７．
［１０］谷珊珊，李津明，赵金凤，等．葛根素磷脂复合物固体自微乳的
研制及体外评价［Ｊ］．中成药，２０１４，３６（５）：９４６－９５１．
［１１］夏春芳，叶祖光，周湘宁，等．ＰＥＧ化葛根素在急性心肌缺血模
型大鼠上的组织分布［Ｊ］．药学学报，２０１４，４９（１０）：１４１３－１４１７．
［１２］陈小新，赖小平，李耿，等．葛根素自微乳在大鼠体内的药代动
力学研究［Ｊ］．中成药，２０１１，３３（７）：１２２０－１２２２．
［１３］朱柳，罗承锋，袁牧，等．葛根素固体脂质纳米粒保护长爪沙鼠
脑缺血－再灌注损伤的分子机制初探［Ｊ］．中草药，２０１０，３３
（１２）：１９００－１９０４．
［１４］杨凯亮，陈大为，王书典，等．莪术油纳米脂质载体给药系统的
制备及其评价［Ｊ］．中国药学杂志，２００６，４１（２４）：１８８１－１８８４．
［１５］贾乐姣，张典瑞，王言．水飞蓟宾纳米结构脂质载体中主药含量
及包封率测定［Ｊ］．中国药学杂志，２００９，４４（１８）：１４００－１４０３．
［１６］Ａｋｋａｒ　Ａ，Ｍｕｌｅｒ　ＲＨ．Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ　Ｃａｒｂａｍａｚ－
ｅｐｉｎｅ　ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ　ｂｙ　ＳｏｌＥｍｕｌｓ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｉｏ－
ｐｈａｒｍ，２００３，５５（３）：３０５－３１２．
［１７］代文婷，张典瑞，郭晨煜，等．ＨＰＬＣ法测定冬凌草甲素纳米脂
质载体药物的含量及包封率［Ｊ］．药物分析杂志，２００９，２９（４）：
５８７－５９０．
［１８］吴鸿飞，周安，鲁传华，等．不同粒径葛根素纳米乳动物体内吸
收和分布研究［Ｊ］．中国药学杂志，２０１２，４７（１）：４４－４９．
［收稿日期］２０１５－０４－１２
［基金项目］国家自然科学基金新疆联合基金重点项目（编号：Ｕ１２０３２０４）；国家自然科学基金（编号：８１４６０６３８）　［作者简介］张燕萍，女，硕士
研究生，研究方向：制药工程　［通讯作者］王新春，女，主任药师，研究方向：中药民族药研究，电话：０９９３－２８５５８２７
高效液相色谱法同时测定香青兰提取物中４种黄酮成分的含量
张燕萍１，刘杨１，袁勇２，陈庆伟１，王洋洋１，王新春１，２　（１．石河子大学药学院，新疆 石河子８３２０００；２．石河子大学医学
院一附院，新疆 石河子８３２０００）
［摘要］　目的：建立ＲＰ－ＨＰＬＣ同时测定香青兰提取物中４种黄酮成分含量的方法。方法：Ｓｕｎｆｉｒｅ－Ｃ１８色谱柱（２５０　ｍｍ×４．６
ｍｍ，５μｍ）；以乙腈 （Ａ）－０．２％磷酸 （Ｂ）水溶液为流动相，线性梯度洗脱 （０～５　ｍｉｎ，１６％ Ａ；５～４５　ｍｉｎ，１６％→２８％ Ａ；４５～
６５　ｍｉｎ，２８％ →８０％ Ａ）；流速１．０５　ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温３５℃；检测波长３３０　ｎｍ。结果：香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷、田蓟
苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷和刺槐素质量浓度分别在１．２０～２４．００μｇ·ｍＬ
－１（ｒ＝０．９９９　８），９．０３～１８０．４８μｇ·ｍＬ
－１（ｒ
＝０．９９９　９），１．００～２０．００μｇ·ｍＬ
－１（ｒ＝０．９９９　９）和０．８３～１６．６４μｇ·ｍＬ
－１（ｒ＝０．９９９　９）范围内呈良好的线性关系；平均回收
率分别为９９．６２％，１００．１１％，９８．８６％，１０２．５１％，ＲＳＤ分别为１．１０％，１．５０％，０．８８％，１．７２％。结论：该方法简单、准确可靠，可
为香青兰提取物中黄酮成分的含量测定提供科学依据。
［关键词］　香青兰提取物；黄酮类化合物；含量测定；高效液相色谱法
［中图分类号］Ｒ９２７．２　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１６）０４－０２５５－０４　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１６．０４．０２
·５５２·中国医院药学杂志２０１６年２月第３６卷第４期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｆｅｂ　２０１６，Ｖｏｌ　３６，Ｎｏ．４
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｏｆ　Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　Ｍｏｌｄａｖｉｃａ　ｂｙ
ＨＰＬＣ
ＺＨＡＮＧ　Ｙａｎ－ｐｉｎｇ１，ＬＩＵ　Ｙａｎｇ１，ＹＵＡＮ　Ｙｏｎｇ２，ＣＨＥＮ　Ｑｉｎｇ－ｗｅｉ　１，ＷＡＮＧ　Ｙａｎｇ－ｙａｎｇ１，ＷＡＮＧ　Ｘｉｎ－
ｃｈｕｎ１，２（１．Ｐｈａｒｍａｃｙ　ｏｆ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｓｈｉｈｅｚｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｓｈｉｈｅｚ　８３２０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌ－
ｌｅｇｅ，Ｓｈｉｈｅｚｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｓｈｉｈｅｚ　８３２０００，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｏｆ　Ｄｒａ－
ｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　Ｍｏｌｄａｖｉｃａ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　Ｓｕｎｆｉｒｅ－Ｃ１８（２５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５μｍ），ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（Ａ）
－０．２％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂ）ｗｉｔｈ　ｌｉｎｅａｒ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ（０－５　ｍｉｎ，１６％ Ａ；５－４５　ｍｉｎ，１６％→２８％ Ａ；４５－６５　ｍｉｎ，２８％→
８０％ Ａ），ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０５　ｍＬ·ｍｉｎ－１，ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３５℃ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　３３０　ｎｍ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｉｓ
ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｉｎ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　１．２０－２４．００μｇ·ｍＬ
－１（ｒ＝０．９９９　８）ｆｏｒ　ｄｉｏｓｍｅｔｉｎ－７－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ，９．０３－
１８０．４８μｇ·ｍＬ
－１（ｒ＝０．９９９　９）ｆｏｒ　ｔｉｌｉａｎｉｎ，１．００－２０．００μｇ·ｍＬ
－１（ｒ＝０．９９９　９）ｆｏｒ　ａｃａｃｅｔｉｎ－７－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ　ａｎｄ　０．８３－
１６．６４μｇ·ｍＬ
－１（ｒ＝０．９９９　９）ｆｏｒ　ａｃａｃｅｔｉｎ．Ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｄｉｏｓｍｅｔｉｎ－７－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ，ｔｉｌｉａｎｉｎ，ａｃａｃｅｔｉｎ－７－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕ－
ｃｕｒｏｎｉｄｅ　ａｎｄ　Ａｃａｃｅｔｉｎ　ｗｅｒｅ　９９．６２％，１００．１１％，９８．８６％ ａｎｄ　１０２．５１％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲＳＤ　ｗｅｒｅ　１．１０％，１．５０％，０．８８％ ａｎｄ
１．７２％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ｅｖｉｄｅｎｃｅｓ
ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｏｆ　Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　Ｍｏｌｄａｖｉｃａ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅ　ｏｆ　Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　Ｍｏｌｄａｖｉｃａ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＲＰ－ＨＰＬＣ
　　香青兰 （Ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　Ｍｏｌｄａｖｉｃａ　Ｌ．）别名
巴迪然吉布亚，为唇形科青兰属草本植物，是新疆地
产维吾尔药，其药材标准在《全国中草药汇编》和《中
华人民共和国卫生部药典·维吾尔药分册》均有收
载［１－２］，具有补益心脑、保健肝脾等功效［３］。香青兰
提取物中含有黄酮类、苯丙素类、环烯醚萜类等成
分［４－５］，其中黄酮类成分是香青兰抗心肌缺血的主要
活性成分［６－７］。目前，测定香青兰黄酮类成分的文献
报道主要是田蓟苷、木犀草素、异鼠李素、槲皮素
等［８－１０］，而对于同时测定含量较高的黄酮类成分的
研究尚未见报道。本课题组在前期研究基础上，制
备得到含量较高的香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸
苷、田蓟苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷和刺槐
素四种黄酮单体，建立了 ＨＰＬＣ同时测定香青兰提
取物中４种黄酮类成分含量的方法。方法简单、准
确可靠，为香青兰提取物和香青兰黄酮制剂质量控
制的研究提供了一种简单而有效的方法。
１　材料
１．１　仪器　Ａｌｉａｎｃｅ　２６９５型高效液相色谱仪（四
元梯度泵、自动进样器、ＰＤＡ检测器，美国 Ｗａｔｅｒｓ
公司）；ＡＥ２００型电子分析天平（梅特勒－托利多上海
仪器有限公司）；ＢＺ１００２型超纯水机（青岛富勒姆科
技有限公司）；ＫＤＭ 型电热套（山东省邺城永兴仪
器厂）；ＦＫＳ－５００Ｄ 超声波清洗器（宁波科生仪器
厂）；ＡＰ－０１Ｄ真空泵（天津奥特赛恩斯仪器有限公
司）；ＸＴ－５００Ａ型高速多功能摇摆粉碎机（浙江永康
市红太阳机电有限公司）。
１．２　试药　香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷、田
蓟苷及刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷由本实验室
分离得到，经 ＭＳ、１３　Ｃ－ＮＭＲ、１　Ｈ－ＮＭＲ确定结构，
并通过 ＨＰＬＣ分析测定含量，纯度均大于９８．２％；
刺槐素 （四川曼斯特生物科技有限公司，批号
１４０５１２０３）；香青兰提取物为香青兰药材粉碎，经
７５％乙醇回流提取减压干燥所得干膏（实验室自制，
批号２０１４０９２１、２０１５０５２４、２０１５０６１２）。
乙腈为色谱纯（Ｆｉｓｈｅｒ），水为超纯水，其余试剂
均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　色谱条件　采用Ｓｕｎｆｉｒｅ－Ｃ１８色谱柱 （２５０　ｍｍ
×４．６　ｍｍ，５μｍ）；以乙腈（Ａ）－０．２％磷酸水溶液
（Ｂ）为流动相，梯度洗脱（０～５　ｍｉｎ，１６％ Ａ；５～４５
ｍｉｎ，１６％→２８％ Ａ；４５～６５　ｍｉｎ，２８％→８０％ Ａ）；
流速１．０５　ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温３５℃；检测波长３３０　ｎｍ；
进样量２０μＬ。
２．２　溶液的制备
２．２．１　供试品溶液　将香青兰提取物粉碎，过４０
目筛，精密称取６４　ｍｇ粉末，置５０　ｍＬ量瓶中，加入
适量的７０％甲醇溶液，超声处理４０　ｍｉｎ（功率
１２０　Ｗ、频率４０　ｋＨｚ），冷却至室温后，加入７０％甲醇
定容，摇匀，０．４５μｍ 微孔滤膜过滤，取续滤液作为
供试品溶液。
２．２．２　混合对照品储备液　精密称取适量的香叶
木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、刺槐素－７－Ｏ－
β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷和刺槐素对照品，分别置２５　ｍＬ
量瓶中，加７０％甲醇定容，分别制成每１　ｍＬ含香叶
·６５２· 中国医院药学杂志２０１６年２月第３６卷第４期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｆｅｂ　２０１６，Ｖｏｌ　３６，Ｎｏ．４
木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷１００μｇ、田蓟苷５６４
μｇ、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷１００μｇ和刺槐素
１０４μｇ的对照品储备液。分别精密移取上述４种对
照品储备液６．０，８．０，５．０，４．０ｍＬ，置２５　ｍＬ量瓶中，
加７０％甲醇定容，摇匀，即得混合对照品储备液。
２．３　系统适用性实验　在“２．１”项色谱条件下，分
别取２０μＬ混合对照品储备液和香青兰供试品溶液
进行测定，记录色谱图，见图１－Ａ，Ｂ。该实验条件
下，供试品溶液各色谱峰与对照品溶液对应色谱峰
的理论塔板数均不低于１０　０００，且各色谱峰的分离
度均大于２．０。
２．４　线性关系考察　分别精密移取“２．２．２”项下混
和对照品储备液０．２５，０．５，１．０，２．０，３．０，５．０ｍＬ置
５　ｍＬ量瓶中，加７０％ 甲醇溶液定容，摇匀，即得系
列混合对照品溶液。
Ａ．对照品；Ｂ．样品；１－香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷；２－田蓟苷；３－
刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷；４－刺槐素
Ａ．ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ；Ｂ．ｓａｍｐｌｅ；１－ｄｉｏｓｍｅｔｉｎ－７－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｕ－
ｒｏｎｉｄｅ；２－ｔｉｌｉａｎｉｎ；３－ａｃａｃｅｔｉｎ－７－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ；４－Ａｃａｃｅｔｉｎ
图１　高效液相色谱图
Ｆｉｇ　１　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ
　　依照“２．１”项下色谱条件测定系列混合对照品溶
液中４种成分的含量，并分别以４种成分的质量浓度
Ｘ（μｇ·ｍＬ
－１）为横坐标，峰面积Ｙ 为纵坐标，绘制标
准曲线，得４种成分的回归方程，结果见表１。
表１　４种成分的线性关系
Ｔａｂ　１　Ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ
成分
线性范围
／μｇ·ｍＬ－１
回归方程 Ｒ值
香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－
葡萄糖醛酸苷
１．２０～２４．００ Ｙ＝４１　２５２　Ｘ＋６　５３４　 ０．９９９　８
田蓟苷 ９．０３～１８０．４８　Ｙ＝４６　８３３　Ｘ＋８４　９９４　０．９９９　９
刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－
葡萄糖醛酸苷
１．００～２０．００ Ｙ＝４４　４３８　Ｘ＋５　９１５　 ０．９９９　９
刺槐素 ０．８３～１６．６４　Ｙ＝４４　９８９　Ｘ＋８　３２３　 ０．９９９　９
２．５　精密度试验　依照“２．１”项下色谱条件，将
“２．４”项下最大质量浓度的混合对照品重复进样６
次，测得上述４种黄酮成分峰面积的 ＲＳＤ分别为
１．２６％、０．９０％、１．８２％、１．２７％，表明仪器具有良好
的精密度。
２．６　重复性试验　按“２．２．１”项下方法平行制备供
试品溶液６份（批号２０１４０９２１），依照“２．１”项下方
法进行４种黄酮成分的含量测定，记录各峰面积。
结果显示香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷、田蓟
苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷和刺槐素峰面积
的ＲＳＤ分别为１．１５％、２．０６％、１．７８％、１．８３％，表
明方法的重复性良好。
２．７　稳定性试验　取同一供试品溶液（批号
２０１４０９２１），分别时隔０，２，４，８，１２，２４　ｈ，依照“２．１”
项下方法进行含量测定，结果显示上述４种黄酮成
分峰面积的 ＲＳＤ分别为１．１０％、１．９０％、１．０７％、
０．９４％，供试品溶液在２４　ｈ内稳定性良好。
２．８　加样回收率试验　精密称取已知香叶木素－７－
Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄
糖醛酸苷和刺槐素含量的香青兰提取物３２　ｍｇ，共６
份，置５０　ｍＬ量瓶中，分别精密加入１００μｇ·ｍＬ
－１
香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷对照品２．５　ｍＬ，
５６４μｇ·ｍＬ
－１田蓟苷对照品１．８　ｍＬ，１００μｇ·ｍＬ
－１
刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷对照品１．７　ｍＬ和
１０４μｇ·ｍＬ
－１刺槐素对照品０．８　ｍＬ充分混匀后，依
照“２．２．１”项下方法制备供试品溶液，进样２０μＬ，
记录４种成分的峰面积，并以外标法计算加样回收
率。结果：４种黄酮类成分的平均回收率在９８．８６％
～１０２．５１％，ＲＳＤ值为０．８８％～１．７２％，显示方法
的准确度良好。
表２　回收率试验结果（ｎ＝６）
Ｔａｂ　２　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ（ｎ＝６）
组分
取样量
／ｇ
样品含
量／μｇ
加入量
／μｇ
测得量
／μｇ
回收率
／％
平均回
收率／％
ＲＳＤ
／％
香叶木素 －０．０３１　９　 ２４３．７　 ２５０　 ４９２．２　９９．４０　 ９９．６２　１．１０
７－Ｏ－β－Ｄ－ ０．０３２　１　 ２４５．２　 ２５０　 ４９６．８　１００．６３
葡萄糖醛 ０．０３２　１　 ２４５．２　 ２５０　 ４９７．１　１００．７５
酸苷 ０．０３２　０　 ２４４．５　 ２５０　 ４９０．１　９８．２６
０．０３１　９　 ２４３．７　 ２５０　 ４８９．８　９８．４２
０．０３２　２　 ２４６．０　 ２５０　 ４９６．６　１００．２５
田蓟苷 ０．０３１　９　１　０００．４　１　０１５　２　０２４．８　１００．９１　１００．１１　１．５０
０．０３２　１　１　００６．７　１　０１５　２　０１６．１　９９．４３
０．０３２　１　１　００６．７　１　０１５　２　０３８．７　１０１．６６
０．０３２　０　１　００３．５　１　０１５　２　０２７．８　１００．８９
０．０３１　９　１　０００．４　１　０１５　２　０１９．２　１００．３５
０．０３２　２　１　００９．８　１　０１５　１　９９９．１　９７．４５
刺槐素 － ０．０３１　９　 １５９．２　 １７０　 ３２５．５　９７．８１　 ９８．８６　０．８８
７－Ｏ－β－Ｄ－ ０．０３２　１　 １６０．２　 １７０　 ３２９．７　９９．６９
葡萄糖醛 ０．０３２　１　 １６０．２　 １７０　 ３２６．６　９７．８９
酸苷 ０．０３２　０　 １５９．７　 １７０　 ３２８．６　９９．３５
０．０３１　９　 １５９．２　 １７０　 ３２８．８　９９．７６
０．０３２　２　 １６０．７　 １７０　 ３２８．４　９８．６８
刺槐素 ０．０３１　９　 ８０．７　 ８３　 １６５．４　１０１．７８　１０２．５１　１．７２
０．０３２　１　 ８１．２　 ８３　 １６７．０　１０３．０９
０．０３２　１　 ８１．２　 ８３　 １６５．４　１０１．１４
０．０３２　０　 ８１．０　 ８３　 １６４．５　１００．４６
０．０３１　９　 ８０．７　 ８３　 １６８．４　１０５．３５
０．０３２　２　 ８１．５　 ８３　 １６７．４　１０３．２３
·７５２·中国医院药学杂志２０１６年２月第３６卷第４期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｆｅｂ　２０１６，Ｖｏｌ　３６，Ｎｏ．４
２．９　样品的含量测定　分别精密称取３个批号的
香青兰提取物粉末６４　ｍｇ（过４０目筛），按“２．２．１”
项下方法制备样品溶液，进样２０μＬ，依照“２．１”项
下色谱条件测定４种黄酮成分的峰面积，以外标法
计算样品中各成分的含量，结果见表３。
表３　香青兰提取物的含量测定结果（珚ｘ±ｓ，ｎ＝３，ｍｇ·ｇ－１）
Ｔａｂ　３　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ＤＭＬ　ｅｘｔｒａｃｔｉｖｅｓ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝３，
ｍｇ·ｇ－１）
批号
香叶木素－
７－Ｏ－β－Ｄ－
葡萄糖醛酸苷
田蓟苷
刺槐素－
７－Ｏ－β－Ｄ－
葡萄糖醛酸苷
刺槐素
２０１４０９２１　８．６４±０．０７　 ２９．２６±０．２２　 ５．０３±０．０４　２．７７±０．０４
２０１５０５２４　８．２８±０．０８　 ３０．０５±０．３１　 ５．３７±０．０３　２．４７±０．０２
２０１５０６１２　７．６６±０．０２　 ３１．４３±０．３７　 ５．０３±０．０７　２．５１±０．０３
３　讨论
３．１　流动相的选择　由于香青兰药材中黄酮类成
分结构相似［５，１１］，使用等度洗脱法短时间难以达到
理想的分离度和理论塔板数，因此采用梯度洗脱对
香青兰药材中４中黄酮成分进行分析测定。本课题
组通过比较甲醇－水与乙腈－水不同的流动相体系，
并加入适量甲酸和磷酸调节ｐＨ；结果显示，乙腈黏
度较小、洗脱各黄酮成分的能力明显优于甲醇，流动
相中加入０．２％磷酸会显著改善各黄酮成分的峰
形，各色谱峰的分离度均大于２．０，且峰形对称，理
论塔板数均大于１０　０００，故确定乙腈－０．２％磷酸溶
液为流动相。
３．２　最大吸收波长的选择　采用ＰＤＡ检测器分
别对香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、刺
槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷和刺槐素的对照品溶
液进行全波长扫描，结果田蓟苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－
葡萄糖醛酸苷和刺槐素在２６７．７　ｎｍ和３３０．８　ｎｍ有
较大吸收峰，而香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷在
２５２．３　ｎｍ和３４６．３　ｎｍ处吸收显著，综合各黄酮成
分的紫外吸收情况，选择３３０　ｎｍ为检测波长。
３．３　香青兰提取物制备方法的选择　据文献报道，
香青兰醇提物中黄酮的含量最高［１２］，且对心肌缺
血／再灌注损伤具有明显的保护作用［１３－１４］。经考察
７５％乙醇提取物中香叶木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸
苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷和田蓟苷的提取
率均高于４０％和９５％乙醇提取物。因此，本课题采
用７５％乙醇为提取溶剂，对回流法、超声波法及浸
渍提取的方法进行比较，结果表明回流提取的香叶
木素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄
糖醛酸苷和田蓟苷的提取率均高于超声波法及浸渍
提取法，故选择回流提取法制备香青兰提取物。
３．４　测定指标的选择　黄酮类成分是香青兰提取
物中的主要活性成分［１５－１６］，对含量较高的黄酮成分
的检测成为控制香青兰提取物质量研究的重要内
容。然而，由于含量较高的黄酮成分的对照品一直
短缺，因此，限制了对这些成分的检测。香叶木素－
７－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷、田蓟苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－葡
萄糖醛酸苷和刺槐素在香青兰提取物中含量较高。
基于此，本实验在前期突破制备得到对照品后，首次
建立了ＲＰ－ＨＰＬＣ同时测定香青兰提取物中４种黄
酮类成分的分析方法，该方法简便快速、准确可靠，
可以为香青兰的质量评价提供科学依据。
参考文献：
［１］　冯长根，李琼．香青兰化学成分与药理活性研究综述［Ｊ］．中成
药，２００３，２５（２）：１５４－１５６．
［２］　翁剑锋，陈浩．维药香青兰研究新进展［Ｊ］．江西中医学院学报，
２０１１，２３（２）：８１－８４．
［３］　宋睿，金传山，周亚伟．香青兰中总黄酮和单体的含量测定［Ｊ］．
中国实验方剂学杂志，２０１０，１６（１２）：７１－７４．
［４］　宋睿，金传山，周亚伟．维药香青兰的研究进展［Ｊ］．安徽医药，
２０１０，４（３）：３４４－３４５．
［５］　杨丽娜，邢建国，何承辉，等．维药香青兰的化学成分与药理作
用评价［Ｊ］．世界临床药物，２０１３，３４（４）：２２６－２３１．
［６］　袁勇，邢建国，王新春，等．香青兰黄酮类化合物的大鼠在体肠
吸收［Ｊ］．中国医院药学杂志，２０１１，３１（２０）：１６６７－１６７０．
［７］　樊鑫梅，曹文疆，邢建国，等．香青兰总黄酮对大鼠心肌缺血再
灌注损伤保护作用的研究［Ｊ］．中成药，２０１３，３５（８）：１６２５－
１６２９．
［８］　向阳，曹秀荣，袁铭，等．ＨＰＬＣ测定香青兰中木犀草素、异鼠李
素的含量［Ｊ］．中成药，２００９，３１（６）：９５４－９５６．
［９］　袁勇，邢建国，张永军，等．高效液相色谱法测定香青兰提取物
中田蓟苷的含量［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１０，１６（１３）：６８－
６９．
［１０］周明明，葛亮．反相高效液相色谱法测定香青兰中槲皮素的含
量［Ｊ］．中国民族医药杂志，２０１０，１７（１）：１－２．
［１１］戴晓庆，汪豪，叶文才，等．维药香青兰叶的化学成分研究［Ｊ］．
药学与临床研究，２０１０，１８（３）：２６７－２６８，２７３．
［１２］麦路德木·麦麦吐逊．维吾尔药香青兰有效成分以及定量分析
［Ｄ］．乌鲁木齐：新疆医科大学，２００９．
［１３］王盛，姚佳茗，郭新红，等．香青兰总黄酮抗心肌细胞缺氧／复氧
损伤作用的研究［Ｊ］．石河子大学学报（自然科学版），２０１４，３２
（５）：５６８．
［１４］田友清，尚靖，阿布卡．香青兰及其含药血清对 Ｈ９ｃ２心肌细胞
三种缺氧／复氧损伤模型的影响［Ｊ］．中国新药杂志，２０１２，２１
（１５）：１７３６－１７３９，１７４８．
［１５］袁勇，邢建国，王立萍，等．香青兰总黄酮在大鼠体内的药代动
力学研究［Ｊ］．石河子大学学报（自然科学版），２０１４，３２（１）：６９．
［１６］于宁，陈文，邢建国，等．ＨＰＬＣ法测定益心巴迪然吉布亚颗粒
中４种化学成分的含量［Ｊ］．药物分析杂志，２０１５，３５（４）：６７０－
６７４．
［收稿日期］２０１５－０６－０１
·８５２· 中国医院药学杂志２０１６年２月第３６卷第４期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ｆｅｂ　２０１６，Ｖｏｌ　３６，Ｎｏ．４