全 文 ：黑龙江农业科学２０１４（１２）：２５～２７
Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
红花檵木组培快繁技术的研究
张　燕１，李志芳２，韩向峰２，周永青２
（１．信阳农林学院 园艺系，河南 信阳４６４０００；２．广东省佛山市农业科学研究所，广东 佛山
５２８１４５）
摘要：为满足生产上对红檵木的需求，深入研究了红花檵木的组培快繁技术。结果表明：红花檵木组培快繁
中，初代培养基 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１；继代增殖培养基 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ
０．１ｍｇ·Ｌ－１；生根培养基１／２ＭＳ＋ＩＡＡ　２．５ｍｇ·Ｌ－１＋０．１％活性炭；继代培养和生根培养时用有透气孔的培养
瓶有利于组培苗以及组培苗根系的生长。
关键词：红花檵木；组培；快繁
中图分类号：Ｓ７９２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００２－２７６７（２０１４）１２－００２５－０３
收稿日期：２０１４－０５－１２
第一作者简介：张燕（１９７９－），女，山西省潞城市人，硕士，副
教授，从事园艺植物组织培养技术的教学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｔａ－
ｎｙａ＿２００１＠１２６．ｃｏｍ。
　　红花檵木（Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ　ｖａｒ．ｒｕｂｒｕｍ），
别名红桎木、红檵花，为金缕梅科常绿灌木或小乔
木，是我国湖南、江西两省特产的珍贵园林观赏植
物［１］。红花檵木是彩叶观赏植物，生态适应性强，
耐修剪，易造型，广泛用于色篱、模纹花坛、灌木球、
彩叶小乔木、桩景造型和盆景等城市绿化美化［２］，
市场需求量较大。由于红花檵木是木本，比草本难
以扦插生根，扦插对时间、环境和土壤处理要求较
多［３］，繁殖速度慢，往往不能满足生产上对数量日益
增多的需求。章志红等［４］和路梅等［５］分别以红花檵
木半木质化茎为外植体材料，重点研究了不同的消
毒剂组合对外植体消毒效果的影响，以及红花檵木
启动培养基的确立。通过无性繁殖则能够达到迅
速快繁，并大量出苗。因此，通过对红花檵木组培
中芽的增殖与生长、根的诱导以及生根苗的移栽技
术进行研究，旨在提高红花檵木的组培快繁水平。
１　材料与方法
１．１　材料
供试材料为一年生盆栽红花檵木小苗，由绿
化苗种植户提供。
１．２　方法
试验于２０１３年在信阳农林学院园艺系植物
组织培养实验室进行。
１．２．１　初代培养物的建立　取２～４ｃｍ的新梢为外
植体，去掉展开大叶片，加２滴洗洁精用自来水冲洗
３０ｍｉｎ，在超净工作台上用７５％酒精消毒２０ｓ，再用
３％的次氯酸钠消毒８ｍｉｎ，无菌水冲洗４次，切掉消
过毒的切口，单芽接种于 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋
ＮＡＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１，白糖３％，琼脂０．６％，ｐＨ　５．８的
初代培养基上，３０～４０ｄ获得无菌苗。培养温度为
２３±２℃左右，光照时间１４ｈ·ｄ－１，光照强度为
１　５００～２　０００ｌｘ。一般每瓶接种材料为１０株。
１．２．２　增殖培养基筛选　以 ＭＳ为基本培养基，
将６－ＢＡ配制成０．１及０．２ｍｇ·Ｌ－１，ＮＡＡ配制成
０．１０及０．０５ｍｇ·Ｌ－１，分别将无菌苗接种在３种增
殖培养基上（见表１），每瓶接种１０株，合计２０
瓶，３０ｄ后调查组培苗增殖生长的情况，并筛选
出最佳培养基配方。
表１　红花檵木增殖培养基筛选
Ｔａｂｌｅ　１　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ
ｆｏｒ　Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ
编号
Ｎｏ．
基本培养基
Ｂａｓｉｃ　ｍｅｄｉｕｍ
６－ＢＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
ＮＡＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
１ ＭＳ　 ０．１　 ０．１０
２ ＭＳ　 ０．１　 ０．０５
３ ＭＳ　 ０．２　 ０．０５
１．２．３　不同组培容器对增殖培养的影响　利用
筛选出的培养基作为基础，将增殖苗分别接种到
有透气孔和无透气孔的培养瓶中，观察透气孔对
红花檵木组培苗（无根）生长的影响，每瓶接种１０
株，合计２０瓶。
１．２．４　不定根的诱导　以１／２ＭＳ＋０．１％活性
炭基 本 培 养 基，配 制 浓 度 为 ２．０、２．５ 及
３．０ｍｇ·Ｌ－１ＩＡＡ，将高度达２ｃｍ的健壮芽分别接
种到３种培养基上（见表２），每瓶接种１０株，合
计２０瓶，３０ｄ后调查红花檵木的生根情况。
５２
　　　　　黑　龙　江　农　业　科　学 １２期
１．２．５　不同组培容器对生根培养的影响　利用
筛选出的较好的生根培养基，用有透气孔和无透
气孔的培养瓶接种生根，以观察透气孔对红花檵
木生根的影响，每瓶接种１０株，合计２０瓶。
表２　红花檵木生根培养基筛选
Ｔａｂｌｅ　２　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｎ　ｒｏｏｔ　ｍｅｄｉｕｍ
ｆｏｒ　Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ
编号
Ｎｏ．
基本培养基
Ｂａｓｉｃ　ｍｅｄｉｕｍ
ＩＡＡ／
ｍｇ·Ｌ－１
Ａ　 １／２ＭＳ＋０．１％活性炭 ２．０
Ｂ　 １／２ＭＳ＋０．１％活性炭 ２．５
Ｃ　 １／２ＭＳ＋０．１％活性炭 ３．０
１．２．６　组培苗的驯化移栽　将已生根的组培瓶苗
移栽到混有珍珠岩和泥炭土的１２８孔的穴盘中，
保持苗床湿润，注意通风透气。２个月后，当长出
新叶苗高度达到１０～１５ｃｍ即可进入市场销售或
者移入大田定植。
２　结果与分析
２．１　不同浓度培养基组合对芽增殖的影响
从表３可知，组合３分化比例最高达到３．６０，
组合１分化比例为２．５５，但整体长势健壮，叶色
全部为正常的红色，叶片也较厚，而组合２与３叶
片均有转绿的趋势，多数叶片由两边以主叶脉为
轴，向中间卷曲。且长出的新芽头部均出现玻璃
化现象，且从顶部向下蔓延。综合上述结果，
ＭＳ＋６－ＢＡ０．１ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ０．１ｍｇ·Ｌ－１是较好
的增殖培养基组合。
表３　红花檵木组培增殖系数及芽生长情况
Ｔａｂｌｅ　３　Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｎｄ　ｂｕｄｓ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｆｏｒ　Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ
编号
Ｎｏ．
接种用母株数
Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｎｕｍｂｅｒ
ｗｉｔｈ　ｍｏｔｈｅｒ　ｐｌａｎｔ
继代株数
Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ
ｎｕｍｂｅｒ
增殖系数
Ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
叶片情况
Ｌｅａｖｅｓ
芽玻璃化情况
Ｖｉｔｒｉｆａｃｔｉｏｎ
ｏｆ　ｂｕｄ
其它
Ｏｔｈｅｒｓ
１　 ２００　 ５１０　 ２．５５ 紫红色，平展较厚 无 无愈伤，少量长根
２　 ２００　 ６１０　 ３．０５ 暗红偏绿，卷曲 芽顶少量玻璃化 少愈伤，个别长根
３　 ２００　 ７２０　 ３．６０ 红少绿多，卷曲 芽顶多数玻璃化 少愈伤，部分有根源基
２．２　容器透气孔对增殖苗的影响
由图１可知，有透气孔的苗整体叶片为深红
色，叶片较厚，看起来健壮；无透气孔的苗叶色由
红色向翠绿转变，叶片变薄，且扭曲较多不平展，
随着时间延长部分转变为玻璃苗。因此，有透气
孔的容器有利于增殖苗的生长。
图１　不同容器对增殖苗的影响
图中矮瓶为有气孔瓶，高瓶为无气孔瓶。
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｏｔｔｌｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｐｌａｎｔｌｅｔ
Ｔｈｅ　ｓｈｏｒｔ　ｂｏｔｔｌｅ　ｈａｓ　ｔｈｅ　ａｉｒ－ｈｏｌｅ，ｈｉｇｈ　ｂｏｔｔｌｅ　ｈａｓ　ｎｏ－ａｉｒ－ｈｏｌｅ．
２．３　不同浓度ＩＡＡ对红花檵木诱导不定根的
影响
　　从表４可知，Ｃ组１／２ＭＳ＋０．１％活性炭＋
３．０ｍｇ·Ｌ－１　ＩＡＡ培养基中虽然生根率为７６．５％，
但是基部愈伤组织较多，不利于组培苗驯化移栽。
故Ｂ组１／２ＭＳ＋０．１％活性炭＋２．５ｍｇ·Ｌ－１　ＩＡＡ
培养基较适合用于红花檵木组培苗诱导生根。
６２
１２期 　　张　燕等：红花檵木组培快繁技术的研究
表４　红花檵木组培苗生根情况
Ｔａｂｌｅ　４　Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｆｏｒ　Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ
编号
Ｎｏ．
接种数
Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
生根数
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ
生根率／％
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
其它
Ｏｔｈｅｒｓ
Ａ　 ２００　 １０７　 ５３．５ 单根较多，叶片生根有２０％
Ｂ　 ２００　 １２８　 ６４．０ 以２～３条根为主，叶生根较多
Ｃ　 ２００　 １５３　 ７６．５ 生根较多，基部愈伤较大
图２　红花檵木组培苗生根情况
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｆｏｒ　Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ
２．４　不同容器对红花檵木组培苗生根的影响
由图３可知，在同一培养基上的生根苗，在无透
气孔的培养瓶，叶片多数生长正常，但几乎全部为绿
色，失去了正常的红色，且无气孔生根苗的根部为暗
红色，仅有部分根尖为亮红色；在有透气孔培养瓶
内，叶色为红色，培养基内部的根系也为亮红色。
图３　不同容器对生根的影响
图中左边瓶为有气孔瓶，右边瓶为无气孔瓶。
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｏｔｔｌｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ
Ｔｈｅ　ｌｅｆｔ　ｂｏｔｔｌｅ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ａｉｒ－ｈｏｌｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｉｇｈｔ　ｂｏｔｔｌｅ　ｗａｓ　ｎｏ－ａｉｒ－ｈｏｌｅ．
２．５　生根苗的移栽
把已生根的组培苗移栽到１２８孔的穴盘中，基
质为珍珠岩∶泥炭为１∶５，移栽后盖好塑料薄膜，保
持小拱棚内的相对湿度在９０％以上，注意通风。
半个月后，结合杀菌处理进行叶面喷肥一次，以防
立枯病和猝倒病的发生，待幼苗开始长出新叶时，
开始逐渐加强通风，直到全部去掉塑料薄膜，这时
炼苗成活率可达８０％以上。２个月后当苗高度达
到１０～１５ｃｍ时，即可移入大田定植或者出售。
３　结论与讨论
该试验结果表明，在材料增殖过程中，并不是
细胞分裂素浓度越高越好，浓度过高反而成苗率降
低，材料的玻璃化程度会加重，增殖系数较低时，反
而芽的可利用程度会更高，细胞分裂素和生长素之
间应该形成一个适合的组合。另外，不论是在继代
还是生根的过程中，培养瓶有无透气孔对红花檵
木的生长有很明显的影响，红花檵木在繁殖过中需
要补充较其它植物更多的空气或者氧气。
一般来讲，木本植物组培苗生根要比草本植
物困难得多，生根率相对较低，生根过程中，也不
是生长素浓度越高越好，而是需要适合生根的范
围，或者几种激素组合可能更有利于提高其生根
率，因此，还有待于进一步试验探索。
参考文献：
［１］　徐敏，丁艳春．新品红花檵木在园林绿化中的运用［Ｊ］．中国
园艺文摘，２０１０（１２）：９２－９３，１２７．
［２］　侯伯鑫．红花檵木特色花卉产业的发展与展望［Ｊ］．技术与
市场：园林工程，２００６（１１）：４０－４３．
［３］　李党训，李昌珠，赵明，等．红檵木嫩枝扦插技术［Ｊ］．林业科
技开发，２００１，１５（６）：５５．
［４］　章志红，吴向明．红花檵木组织培养离体快速繁殖试验［Ｊ］．
江苏林业科技，２００９，３６（２）：４１－４３．
［５］　路梅，张洁雯，郑聘静．红花檵木组织培养初探［Ｊ］．湖南农
业科学，２０１２（４）：１３－１４，１９．
７２
黑龙江农业科学２０１４（１２）：２８～３２
Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
赤桉ＥｃＷＲＫＹ７５基因的电子克隆
和生物信息学分析
王鹏良１，杨利平２，李铁英３，王华宇２，高　磊４，覃雯霞３，甘四明５，６
（１．广西林业科学研究院 广西优良用材林资源培育重点实验室，广西 南宁５３０００２；２．广西钦
州市林业科学研究所 钦州市植物生物工程技术研究中心，广西 钦州５３５０００；３．广西国有三门
江林场，广西 柳州５４５００６；４．中国科学院 武汉植物园，湖北 武汉４３００７４；５．中国林业科学研
究院 热带林业研究所，广东 广州５１０５２０；６．林木遗传育种国家重点实验室，北京１０００９１）
摘要：ＷＲＫＹ７５基因在植物的生长发育以及生物和非生物胁迫过程中发挥着重要作用，对其遗传改良进行研
究极为必要。以赤桉的ＥＳＴ序列为材料，利用电子克隆技术克隆１个与拟南芥中ＷＲＫＹ７５高度同源的
ＷＲＫＹ转录因子，命名为ＥｃＷＲＫＹ７５，并对其开展生物信息学分析。结果表明：ＥｃＷＲＫＹ７５开放阅读框长
为５７９ｂｐ，编码１９２个氨基酸，分子量为２１．３９５ＫＤ，等电点为９．７２；该基因编码的蛋白包含１个 ＷＲＫＹＧＱＫ
保守结构域和１个Ｃ２Ｈ２的结构域，属ＧｒｏｕｐⅡ成员；该蛋白很可能在细胞核中起转录、转录调控或信号转导
等作用。该基因的电子克隆和生物信息学分析为其实验克隆和功能分析提供可靠的参考依据。
关键词：赤桉；ＥｃＷＲＫＹ７５；电子克隆；生物信息学分析
中图分类号：Ｓ７９２．３９　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００２－２７６７（２０１４）１２－００２８－０５
收稿日期：２０１４－０５－１２
基金项目：广西优良用材林资源培育重点实验室开放课题基
金资助项目（１２Ａ０３０１）；国家高技术研究发展计划（８６３计
划）资助项目（２０１３ＡＡ１０２７０５）；钦州市科学研究和技术开发
资助项目（２０１３７００３）
第一作者简介：王鹏良（１９７８－），男，浙江省新昌县人，博士，
工程师，从事林木分子育种研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｐｅｎｇｌｉａｎｇ＿ｗａｎｇ＠
１６３．ｃｏｍ。
通讯作者：甘四明（１９７０－），博士，研究员，从事林木分子育种
研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｉｍｉｎｇ＿ｇａｎ＠１２６．ｃｏｍ。
　　赤桉（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ　ｃａｍａｌｄｕｌｅｎｓｉｓ）是分布最
广的桉树树种之一，其木材颜色从淡红色至深红
色，结构细致，极耐腐蚀，是澳大利亚著名的枕木
用材［１］；同时赤桉具有较好的抗寒性［２］、抗旱
性［３］。因其对环境极强的适应能力，被引种到世
界各地，成为全世界最广泛种植的桉树树种之一。
　　ＷＲＫＹ 是植物特有的最大超级基因家族之
一［５］，拥有众多的基因家族成员［６－７］，参与众多生
理代谢通路的调控［８］，并起重要作用。ＷＲＫＹ７５
是ＷＲＫＹ 超级基因家族中的重要一员。Ｄｅｖａｉａｈ
等研究表明，转录因子ＷＲＫＹ７５在磷吸收中起至
关重要的正向调控作用［９－１０］，同时也调控根的发
育［９，１１］；Ｅｎｃｉｎａｓ－Ｖｉｌａｒｅｊｏ等［１２］研究发现，ＷＲＫＹ７５
作为重要元件参与草莓抗尖孢炭疽菌的防卫反应。
Ｌｉ等［１３］发现，ＷＲＫＹ７５对叶片衰老起正向调控
作用。Ｃｈｅｎ等［１４］研究表明，ＷＲＫＹ７５的过量表
达可以提高对草酸和核盘菌的抵抗能力。Ｒａｎｊａｎ
等［１５］在研究草棉时发现ＷＲＫＹ７５受干旱胁迫响
应，说明该基因也参与干旱调控的相关通路。这
些研究均说明ＷＲＫＹ７５基因在植物的生物和非
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆａｓｔ　Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ
ＺＨＡＮＧ　Ｙａｎ１，ＬＩ　Ｚｈｉ－ｆａｎｇ２，ＨＡＮ　Ｘｉａｎｇ－ｆｅｎｇ２，ＺＨＯＵ　Ｙｏｎｇ－ｑｉｎｇ２
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｘｉｎｙａｎｇ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｘｉｎｙａｎｇ，
Ｈｅｎａｎ　４６４０００；２．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｏｓｈａｎ，Ｆｏｓｈａｎ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５２８１４５）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｓａｔｉｓｆｙ　ｔｈｅ　ｄｅｍａｎｄ　ｆｏｒ　Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ　ｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｆａｓｔ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－
ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１＋ＮＡＡ
０．１ｍｇ·Ｌ－１．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｒｏｏｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　１／２ＭＳ＋ＩＡＡ　２．５ｍｇ·Ｌ－１＋０．１％ＡＣ（ａｃｔｉｖｅ　ｃａｒｂｏｎ）．Ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ
ｃｕｌｔｕｒｅ　ｂｏｔｔｌｅ　ｗｉｔｈ　ａｉｒ　ｈｏｌｅｓ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｉｖｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ａｎｄ　ｒｏｏｔｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｏｒｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｄｅｎｓｅ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｆａｓｔ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
８２