全 文 ：· 实验研究 · 7 5
白花疆木花黄酮提取及其抗氧化活性的研究
潘晓军 `, 2 吕 圭源 ` 陈素红 2 胡淑平 2
( 1浙江中医药大学药学院 , 浙江杭州 3 100 5 3 ; 2温州医学院药学院 , 浙江 温州 32 50 35 )
【摘要」 目的 对白花疆木花黄酮提取物杭氧化作用进行研 究 。 方法 采用超声法提取白花疆木花黄酮 , 通过 D P P H 反应体系 , 研究 白花疆木
花黄酮 的杭氧化能力 。 结果 当白花疆木花黄酮质量 浓度 为 2 . 7 84 x 1 0 一2 m g /m L 时 , 对 D P PH 自由基的清除率为 5 0% , 且随浓度的增加其清
除作用增 强 。 结论 白花疆木花黄酮 在体外具有良好 的杭氧化活性 。
【关键词」白花疆木花 ; 黄酮 ; 提取 ; 杭氧化活性
中图分类号 : R 2 8 2 . 7 1 0 . 5 文献标识码 : B 文章编号 : 16 7 1一 8 1 9 4 ( 2 0 1 2 ) 2 6一 0 0 7 5一 0 2
白花 疆 木花来于 金缕梅科 ( H a m a m 。 l i d a 。 。 a 。 ) 疆 木属
(L
o r o p e ta lu m R
.
B r
.
) 植物 L o r o p e ta lu m C h in e n s i s ( R . B r . ) O liv .的花 。
白花疆木花具有止血 、 止泻 、 止痛 、 生肌等功效 , 用于子宫出血 、 腹
泻 、 烧伤和外伤出血等症的治疗l[] 。
研究白花疆木花黄酮的抗氧化活性未见相关文献报道 。 笔者在分
析白花疆木花化学成分时 , 应用 R P 一H PL C法测得白花疆木花 中含有
榭皮素和山奈酚 。 榭皮素及其衍生物是植物界分布最广的黄酮类化合
物 , 广泛存在于植物的花 、 叶、 果实中 。 现代研究发现 , 榭皮素有抗
氧化 、 抗炎、 降血压 、 抗血小板聚集 、 抗癌变 、 抗衰老 、 抗突变 、 抗
动脉粥样硬化等功效 , 而榭皮素的抗衰老 、 抗突变 、 抗动脉粥样硬化
等生物活性都与抗氧化作用有关 2[] 。 本研究对白花疆木花黄酮提取物
进行了体外抗氧化活性研究 , 为更好的开发利用白花疆木花资源提供
一定的理论依据 。
1 材料与方法
1
.
1 试剂与仪器
主要试剂有无水乙醇 、 氢氧似内、 呵肖醚内、 硝酸铝 、 2 义 10“ om比
的D P PH (二苯基苦基苯腆 , 美国 is gm a公司生产 ) 。 其他试剂均为国
产分析纯 。
主要仪器有0 41 2一 1型低速台式离心机 (上海手术器械厂 ) 、 赛多
利斯电子分析天平 (北京赛多利斯仪器系统有限公司 ) 、 7 2 2 5型紫
外分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司 ) 、 R 一20 型旋转薄膜蒸
发器 (上海华岩仪器设备有限公司 ) 、 K Q一 50 D E型数控超声波清洗
器 (昆山市超声仪器有限公司 ) 、 。 p p en d or f 手动可调程单道移液器
(德国艾本德股份公司 ) 、 s H z 一c 型循环水真空泵 (河南豫华仪器有
限公司 ) 、 认艺 一 18 0 s P型恒温水浴锅 (上海申生科技有限公司 )
1
.
2 方法与结果
1
.
2
.
1 线性关系考察
分别取 1 . o m g /m L芦丁对照品溶液。 、 1 . 0 、 2 . 0 、 3 . 0 、 4 . 0 、 5 . o m L ,
置于 10 m L容量瓶中 , 各加人 5% 亚硝酸钠溶液 0 . 3m L , 摇匀 , 放置
6m i n ; 再加人 1 0%硝酸铝溶液 0 . 3m L , 摇匀 , 放置 6 m in ; 最后加人
10 %氢氧化钠溶液4 . om L , 用蒸馏水定容至刻度 , 摇匀 , 放置巧 m in ,
以不加对照品溶液为空白。 在 5 10 n m处测定其吸光值 , 以吸光度为纵
坐标 , 芦丁对照品溶液的质量浓度为横坐标 , 求得线性回归方程为 :
A 一 12
.
59 l C
一
4
.
8 3 6
,
r
一 0
.
9 9 9 4
。
1
.
2 2 白花疆木花黄酮的提取及含量测定
称取干燥至恒重的白花橙木花粉末 1 . 0 9 , 按液料比 1 : 1 0加人
75 % 乙醇浸泡30 m in , 超声提取 l h , 过滤后得滤液和滤渣。 滤渣再按
上述方法提取 2 次 , 合并滤液。 旋转蒸发浓缩 , 再加人 75 % 乙醇定容
至50 m L容量瓶中 , 即得供试品液。 取黄酮试液Zm L于 10 m L容量瓶中 ,
加人 5% 亚硝酸钠溶液0 . 3m L , 摇匀 , 放置 6m in ; 再加人 10 %硝酸铝溶
液 0 . 3m L , 摇匀 , 放置6 m in ; 最后加人 10 % 氢氧化钠溶液 4 . 0 m L , 用
蒸馏水定容至 10 m L , 摇匀 , 放置巧 m in ; 在 5 10 n m 处测定其吸光度
值 , 对照标准曲线 , 计算出供试品液中黄酮的浓度 。
1
.
2
.
3 白花疆木花黄酮清除D PP H自由基实验
分别取 1 . 2 . 2项制得的白花疆木花供试品液 0 . 25 m L 、 0 . s m L 、
l m L
、
Zm L
、
4m L
、
s m L
, 均置于 10 m L容量瓶中 , 用 75 % 的乙醇定
容 , 从而得到等梯度稀释的不同浓度溶液。
分别取不同浓度溶液 2 m L及浓度为 2 义 1 0 一“ m ol L/ 的D P PH溶液 2
m L
, 先后加人同一具塞试管中 , 30 m in 后以样品提取溶剂为空白调
零 , 测定其吸光度 ( iA ) ; 测定 Zm L 浓度为2 义 10 “ m ol L/ 的D P PH溶
液与Zm L蒸馏水混合液的吸光度 (A 。 ) ; 再测定 2 m L白花疆木花黄酮
提取液与 2 m L无水乙醇混合液的吸光度 (A J ) 。 重复 6次 , 求其平均
值 。 根据下列公式计算各浓度白花疆木花黄酮溶液对 D PP H 自由基的
清除率。
D p p H自由基抑制率一 【l一 ( A i一A J ) / A e」义 10 0%
2 结 果
2
.
1 黄酮定量检测结果
检测结果见表 1。
表 1 白花疆木花提取液中黄酮浓度 (m gm/ )L
项 目 白花榷木花样 1
白花榷木花
样 2
白花榷木花
样 3 平均含量 )
超声提取法 让3 31 0 3 3 5 0 . 3 3 0 0 . 33 2
2
.
2 白花疆木花黄酮对 D PP H自由基的清除作用
图 1 白花疆木花黄酮对 D P P H 自由基的清除作用
由图1可知 , 白花疆木花黄酮对 D PP H 自由基具有明显 的清除作
DOI : 10. 15912 /j . cnki . gocm. 2012. 26. 072
76
. 实验研究 ·
用 , 清除效果随着白花疆木花黄酮浓度的增加而增大 , 当质量浓度
为 0 . 0 6 6 4m g /m L时 , 白花疆木花黄酮对 D P P H自由基的清除率高达
91
.
35 %
, 其后随着白花疆木花黄酮浓度升高 , 其清除率毫卞保持稳定。
3 讨 论
通过对 D P P H自由基清除作用的研究发现 , 当白花疆木花黄酮质
量浓度为 2 . 78 4 义 10 一 2 m gm/ L时 , 对 D P PH 自由基的清除率为50 % , 而且
白花疆木花黄酮对 D PP H 自由基的清除作用随着浓度的增加而增大 ,
呈明显的量效关系 。
黄酮类化合物具有抗氧化 、 抗衰老 、 抗肿瘤 、 降血脂等多种生
物活性 , 其中最重要的生物活性是黄酮类化合物的抗氧化作用 , 即
减少 自由基的产生和清除自由基 。 研究表明 , 黄酮类化合物的抗衰
老 、 抗突变 、 抗动脉粥样硬化等作用都与其抗氧化活性有关 。 本试
验通过研究白花疆木花黄酮提取物的抗氧化作用 , 为进一步研究白
花疆木花黄酮的生物活性和综合开发利用 白花疆木花资源提供理论
依据 。
参考文献
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3 9 ( 1 1 )
: 12 4 9
一
12 5 8
.
芍药叶化学成分的研究
孙 鹏
(延边大学附属医院 , 吉林 延吉 13 300 0)
【摘要」目的 研究中药芍药 (P ae on ia l ac it fl or a aP U . )干燥叶的化学成分 。 方法 采用多种层析手段从芍药干燥叶的 乙醇提取物中分离化合物 。
经波谱分析及与对照品和文献数据对照 , 鉴 定了化合物的结构 。 结果 从芍药叶 中分离并鉴定了 9 个化合物 : 芍药普 、 没食子酸 、 没食子
酸乙醋 、 山茶酚 、 苯甲酸 、 大波斯菊普 、 紫云英普 、 日一 谷街醇和胡萝 卜普 。 结论 以上 9 个化合物均为首次从该植物 中分离得到 。
【关键词」芍药叶 ; 毛食科 ; 化学成分
中图分类号 : R 2 8 2 . 7 1 0 . 3 文献标识码 : B 文章编号 : 16 7 1一 8 1 9 4 ( 2 0 1 2 ) 2 6一 0 0 7 6一 0 2
芍药叶系毛蓖科植物芍药属植物芍药 Pae on ia lac it fl or a aP U .的干燥
叶。 药材主要产于安徽毫州 、 浙江杭州和山东菏泽 。 主要为栽培品 ,
贵州 、 河南 、 湖南与陕西亦有生产 。 平肝止痛 , 养血调经 , 敛阴止
汗 。 用于头痛眩晕 , 胁痛 , 四肢痉挛 , 血虚萎黄 , 月经不调 , 自汗 ,
盗汗 l[ 一 5 ]。 为质量标准建立提供可靠的依据 , 我们对药材芍药的干燥叶
进行了系统的植化研究。 从中分离得到 9个化合物 , 通过理化性质研
究 、 对光谱数据分析及与文献数据和标准化合物对照的方法鉴定结构
为 : 芍药普 、 没食子酸 、 没食子酸乙酚 、 山蔡酚 、 苯 甲酸 、 大波斯菊
普 、 紫云英普 、 日一谷街醇和胡萝 卜普。
1 实验材料与仪器
WR R型熔点仪 (上海精密科学仪器有限公司物理光学仪器厂制
造 ) ; 质谱用Z A B 一H S型质谱仪测定 ; 核磁共振谱 : M “ ian 2 0 型 、 3 0
型核磁共振仪及 B ru k e r 4 0 0型 ( `H : 4 0 0M生 ; ` 3 e : l o oM H z ) , T M s
为内标 。 柱层析硅胶 (2 0 一 3 0 0目) 及薄层层析硅胶G F 2 54 均为青岛海
洋化工产品 。 自制薄层板以0 . 5% C M C 一N a为载合剂 。 凝胶柱层析采用
eS 曲 ad xe L -H 20 , hP ~ ac ia 产品
。 显色剂 : 单质碘 、 5%的磷钥酸一无水
乙醇、 硫酸一乙醇。 所用试剂均为分析纯 。 芍药叶购于山东。
2 提取分离
干燥的芍药叶5 . o k g , 粉碎后用 80 % 的乙醇热回流提取 , 提取液减
压回收乙醇得到总浸膏 。 温热水 (60 ℃ ) 溶解浸膏后 , 分别依次用氯
仿 、 乙酸乙酚和正丁醇进行反复萃取 , 回收溶剂得各部分萃取浸膏 。
通过反复硅胶柱色谱 、 eS p h a dxe L H 一 20 柱色谱以及重结晶等方法从
乙酸乙酚和正丁醇部分分离得到 9个化合物 , 并采用薄层对照和波谱
数据分析的方法 , 鉴定了 9个化合物的结构 , 分别为 : 芍药普 1 (50
m g )
, 没食子酸2 ( 10 m g ) , 没食子酸乙酚3 ( 50 m g ) , 山蔡酚4
(21 m g )
, 苯甲酸 5 (巧 m g ) , 大波斯菊普6 ( 10 m g ) 、 紫云英普
7 ( 14 6 m g )
、 日一谷街醇 (8 ) 和胡萝 l\ 普 ( 9 ) 。
3 结构鉴定
化合物 l为白色粉末 (甲醇 ) 。 I H 一 N M R (D M S O 一d 6 ) 6 H :
1
.
2 4 (
3 H
, s , C H 3
一
10 )
,
5
.
3 3 (
`H , s , H 一9 )
,
7
.
5 4一 7
.
9 9 (
, H
,
m
.
A r H )
; 队B 一M s m zz : 4 8 1 [M 十 l ]+ 。 以上数据与文献 [2 ]报道的芍药普
的 I H 一N M R数据对照一致 , 故化合物 1确定为芍药普。
化合物2为白色针晶 (氯仿 ) 。 I H 一 N M R (C D C 13 ) 6 H : 12 . 2 3
(
`H , S , e o o H )
,
9
.
1 9 (3 H
, S , 3 义 o H )
,
6
.
9 2 (
Z H
, S , H
一
2
,
6 )
, 推断化合物2的结构为没食子酸 。 与没食子酸标准品混合后测熔
点 , 混合熔点不下降。 二者经 T L C多种体系检测 , 与没食子酸斑点颜
色相同 , 且 R植一致 。 故化合物2确定为没食子酸 。
化合物 3为白色粉末 ( 甲醇 ) 。 I H 一 N M R 6 H : 6 . 9 4 ( Z H , s ,
H
一
2
,
6 )
,
6 H 8
.
9 2 (
`H , S , o H )
,
6 H g
.
Z s (
ZH
, S , 2 义 o H )
。
6 H 4
.
2 1 (
Z H
, t , J 一 7
.
2 H z
,
o e H Z )
,
1
.
3 0 (
3H
,
d
,
J 一 7
.
2 H z
,
C H 3 )
。 根据以上数据推断化合物3的结构为没食子酸乙酚 。 与没食子
酸乙酚标准品混合后测熔点 , 混合熔点不下降。 二者经 T L c 多种体系
检测 , 与没食子酸乙酚斑点颜色相同 , 且 R植一致 。 故化合物3确定
为没食子酸乙酉旨。
化合物 4为黄色粉末 (甲醇 ) 。 `H 一N M R (D M s o ) 6 H : 1 2 . 4 8
(
`H , b s , o H 一 s )
,
6 H l o
.
7 9
,
1 0
.
1 1
,
9
.
4 1 (各 `H , S , o H 一7 ,
4
, ,
3 )
,
6 8
.
0 7 (
Z H
,
d
,
J 一 8
.
6 H z
,
H
一
2
, ,
6
,
)
,
6 6
.
9 4 (
ZH
,
d
,
J 一 8
.
6 H z
,
H
一
3
, ,
s
,
)
,
6 6
.
4 7 (
`H , S , H 一8 )
,
6 6
.
19 (
` H , S ,
H
一
6 )
。 以上数据与文献 3[] 报道的山蔡酚的I H 一N M R数据对照一致 , 确
定化合物4为山蔡酚 。
化合物s为白色长针晶 (甲醇 ) 。 `H 一N M R (D M s o ) 6 H : 1 2 . 9 5
(
`H , S , e o o H )
,
7
.
9 7 (
Z H
,
d
,
J 一 7
.
2 H z
,
H
一
2
,
6 )
,
6 7
.
6 7
(
`H , t , J 一 7
.
2 H z
,
H
一
4 )
,
6 7
.
5 0 (
ZH
,
d
,
J 一 7
.
2 H z
,
H
一
3
,
5)
。 与苯甲酸标准品混合后测熔点 , 混合熔点不下降。 二者经 TL C
多种体系检测 , 与苯甲酸斑点颜色相同 , 且 R植一致。 故化合物 5确
定为苯甲酸 。