全 文 ：北京:化学工业出版社 , 2005:52-53.
[ 2] 严衍禄 ,赵龙莲 , 韩东海 ,等 .近红外光谱分析基础与应
用 [ M] .北京:中国轻工业出版社 , 2005:9-10.
[ 3] 杨海雷 ,刘雪松 , 瞿海斌 ,等 .一种基于近红外的红参药
材质量快速评价方法 [ J] .中草药 , 2005, 36(6):912-
915.
[ 4] 宋丽丽 , 范丙义 ,徐晓杰 , 等.近红外光谱法用于六味地
黄丸摸拟样品中熊果酸的含量测定 [ J] .中国中药杂
志 , 2006, 31(19):1590-1593.
[ 5] 何智慧 ,练文柳 ,吕名剑 , 等 .声光可调-近红外光谱技
术分析烟草主要化学成分 [ J] .分析化学 , 2006, 34
(5):702-704.
[ 6] 王宁 , 蔡绍松 ,魏红 , 等 .声光可调-近红外光谱技术快
速分析复方丹参片中丹参酮 ⅡA和丹酚酸 B的新方法
[ J] .中国中药杂志 , 2008, 33(3):261-264.
[ 7] 王宁 , 蔡绍松 ,武卫红 , 等 .一种基于声光可调滤光器-
近红外光谱技术的复方丹参片快速定性分析方法 [ J] .
中国中药杂志 , 2008, 33(16):1964-1967.
[ 8] 谷筱玉 , 徐可欣 ,汪燕 .波长选择算法在近红外光谱法
中药有效成分测量中的应用 [ J] .光谱学与光谱分析 ,
2006, 26(9):1618-1620.
收稿日期:2008-04-25基金项目:四川省青年科技基金项目(05ZQ026-017);四川省重点学科建设项目(SZD0240)作者简介:邓锷(1983-),男 ,主要从事植物次生代谢产物分离和活性分析研究;Tel:13980315704, E-mail:edeng1983@ 163.com。＊通讯作者:杨军 , E-mail:yangjunlz@tom.com。
扯根菜多糖的提取
邓　锷 ,杨　军＊ ,王立强 ,王光碧
(西华师范大学生命科学学院 ,四川 南充 637002)
　　摘要　目的:研究扯根菜多糖最佳提取工艺。方法:通过单因素试验和 L9(33)正交实验 , 研究了料液比 、温度 、
提取时间对扯根菜多糖提取率的影响。结果:温度是影响扯根菜多糖提取率的主要因素 ,最佳提取工艺为料液比 1
∶15,提取温度 95℃, 提取时间 3h。在此条件下 ,测得扯根菜多糖提取率为 1.12%, RSD=1.21%。结论:本工艺为
扯根菜多糖的进一步研究奠定了基础。
关键词　扯根菜;多糖;提取工艺
中图分类号:R284.6　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)01-0121-03
ExtractionofPolysaccharidefromPenthorumchinense
DENGE, YANGJun, WANGLi-qiang, WANGGuang-bi
(ColegeofLifeSciences, ChinaWestNormalUniversity, Nanchong637002, China)
Abstract　Objective:TostudytheextractiontechnologyofpolysaccharidefromPenthorumchinense.Methods:Singlefactortest
andorthogonalexperimentdesignmethodsL9(33)wereappliedtoanalyzetheinfluenceofsolid-liquidrate, extractiontemperatureand
timeontheextractionpercentofpolysaccharidefromPenthorumchinense.Results:Thetemperaturesignificantlyafectedtheextraction
percentofthesolublepolysaccharide, andtheoptimumconditionsfortheextractiontechnologywereasfollows:solid-liquidrateat1∶
15, temperatureat95℃, timefor3h.Underthiscondition, theextractionpercentofpolysaccharidefromPenthorumchinensewas
1.12%, RSD=1.21%.Conclusion:Theresearchcanprovideatheoreticalfoundationforfurtherdevelopmentandutilizationofpoly-
saccharidefromPenthorumchinense.
Keywords　PenthorumchinensePursh;Polysaccharide;Extractiontechnology
　　扯根菜俗名赶黄草 ,为虎耳草科扯根菜属植物
扯根菜 PenthorumchinensePursh的干燥地上部分 ,
现收载于《中华人民共和国卫生部部颁标准中药成
方制剂十三册 》附录。其性平 、味苦 、微辛 ,为苗族
民间草药 ,具有清热 、利湿 、解毒 、活血 、平肝 、健脾等
作用 ,广泛用于治疗各型肝炎 、胆囊炎 、脂肪肝等 〔1〕
病症。近年来 ,随着对多糖生物活性的深入研究 ,人
们发现多糖具有抗肿瘤 、抗衰老 、抗病毒 、降血糖 、降
血脂 〔2〕等功效。本文首次对扯根菜中多糖的提取
工艺进行了研究 ,以期为进一步提取分离鉴定扯根
菜活性成分提供参考。
1　材料与仪器
1.1　药材　2006年 3月由四川泸州移栽至南充市
西华师范大学实验地(经西华师范大学生命科学学
·121·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 1期 2009年 1月
院黎云祥教授鉴定为正品药材),于 2007年 10月收
割 ,干燥粉碎后置于干燥器中保存备用。
1.2 　试剂　浓硫酸 、蒽酮 、葡萄糖 、无水乙醇 、乙
醚 、丙酮 、石油醚等化学试剂均为分析纯 ,实验用水
为蒸馏水。
1.3 　仪器　微型植物试样粉碎机(深圳化试科技
有限公司);电热恒温水浴锅(DK-S28型 ,上海精宏
实验设备有限公司);旋转蒸发仪(R201型 ,上海生
申科技有限公司);紫外可见分光光度计(UV-916
型 , GBC科学仪器公司);高速冷冻离心机 (centri-
fuge5810R, Eppendorf公司)。
2 　方法
2.1 　扯根菜中多糖的确证 　取检品的水溶液 5
mL于水浴蒸发至干 ,加入 1mL蒸馏水 ,再加入乙醇
5 mL,如出现沉淀 ,滤过收集后用少量热乙醇洗涤 ,
再将沉淀物溶于 3 mL蒸馏水中 ,取水溶液 1 mL,加
入稀盐酸 5滴 ,置沸水浴中加热 10 ～ 15 min,然后用
10%氢氧化钠液中和至中性 ,再加新配制的碱性酒
石酸铜试液 4滴 ,另取检液 1 mL,不加酸水解直接
加入上述试液 4滴 ,两管同置水浴上煮沸 5 ～ 6min。
如果水解后生成棕红色沉淀物的量比未经水解的
多 ,则示有多糖。
2.2 　扯根菜中多糖的提取　准确称取一定量的扯
根菜粉末 ,置于圆底烧瓶中 ,先以石油醚回流除去脂
质 ,再以 80%乙醇提取去除单糖 、低聚糖 、苷类及生
物碱等干扰成分 ,然后按一定的时间 、温度 、料液比 ,
在热水浴中回流浸提 ,回流结束后抽滤 ,收集滤液 ,
经旋转蒸发仪浓缩到一定体积 ,加入乙醇 ,使乙醇含
量达到 90%以上 ,搅拌以沉淀多糖 ,放于 4℃冰箱过
夜 。离心收集沉淀物 ,回收乙醇。所得沉淀依次用
无水乙醇 、丙酮 、无水乙醚洗涤数次并每次离心 。挥
干溶剂后 , 60℃烘干 ,得到灰白色粗多糖。
2.3 　单因素试验　影响多糖得率的因素主要有时
间 、温度和料液比 。本实验选取料液比 1∶10、1∶15、
1∶20、1∶25、1∶30、1∶35,浸提温度选取 20、35、50、
65、80、95℃,时间选取 10、50、90、130、170、210 min
各 6个水平分别进行单因素试验 。
2.4 　正交实验设计 　在单因素试验结果的基础
上 ,采用 L9(33)正交试验设计 ,以确定扯根菜多糖
的最佳工艺条件 。
2.5 　多糖含量的测定
2.5.1　标准曲线的绘制:精确称取 105℃干燥至
恒重的标准葡萄糖 10mg,加适量蒸馏水溶解 ,转移
至 100 mL的容量瓶中 ,加蒸馏水至刻度 ,摇匀 ,配成
浓度为 0.1 mg/mL的标准葡萄糖溶液 。分别精确
量取葡萄糖标准溶液 0、 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.6、
0.8、1.0mL置于 8支干燥洁净的试管中 ,以蒸馏水
增加至 1 mL再加入 4mL蒽酮试剂(加完 1支后立
即摇匀 ,置冰水中 ,下同)一起放入沸水浴 10 min,
取出流水冷却到室温并静置 10 min后 ,在波长 620
nm处测定吸光度 A。试剂为空白 ,以葡萄糖浓度 C
(mg/mL)为横坐标 ,吸光度为纵坐标 ,绘制标准曲
线。得到回归方程为 A=16.856C-0.0025(r=
0.9995)。
2.5.2 　样品中多糖含量的计算:把得到的粗多糖
溶解后转移至 100 mL容量瓶中 ,精密吸取 0.2 mL
的多糖样品溶液 ,按 “2.5.1”项下方法操作 ,测定吸
光度 ,根据标准曲线方程计算多糖的浓度 ,再计算粗
多糖的得率。
3　结果与分析
3.1　多糖的确证　水解后生成的棕红色沉淀物明
显比未经水解的多 ,说明有多糖的存在 。
3.2　提取时间对提取率的影响　准确称取 3 g扯
根菜粉末 6份 ,料液比为 1∶20,提取温度为 70℃,提
取时间分别为 10、 50、 90、 130、 170、 210 min,按照
“2.5.1”项下方法测定出吸光度并计算出提取率。
如图 1所示。提取时间为 130 min时提取率最大。
由此可知 ,提取时间在 2 h左右为佳 。
3.3　料液比对提取率的影响　准确称取 3 g扯根
菜粉末 6份 ,料液比分别为 1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、
图 1　时间对提取率的影响
图 2　料液比对提取率的影响
·122· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 1期 2009年 1月
1∶30、1∶35,提取温度为 70℃,提取时间为 2 h,按照
“ 2.5.1”项下方法测定出吸光度并计算出提取率 ,
如图 2所示 。料液比过小 ,提取不完全;太大 ,不仅
浪费溶剂 ,而且给浓缩带来困难 ,增加成本 。当料液
比从 1∶10到 1∶25时 ,提取率增加比较明显 ,大于 1
∶25后 ,提取率增加不明显 ,可能是多糖溶出已完
全 ,故料液比应在 1∶25左右比较合适 。
3.4 　提取温度对提取率的影响　准确称取 3 g扯
根菜粉末 6份 ,料液比 1∶20 ,分别在 20、35、50、65、
80、95℃条件下 ,提取 2h,按照 “ 2.5.1”项下方法测
定出吸光度并算出提取率。如图 3所示 。可见 ,温
度对提取的影响较大 ,从 50℃到 95℃,提取率增加
幅度明显。结果表明 , 95℃提取效果为好 。
图 3　温度对提取率的影响
3.5 　正交实验结果 　在单因素实验结果的基础
上 ,以多糖得率为考察指标 ,选用 L9(33)设计表 ,进
行正交实验 。因素水平见表 1,正交实验和方差分
析结果见表 2和表 3。由正交实验结果可知 ,影响
扯根菜多糖提取的主要因素是温度 ,温度的影响达
到显著性差异 ,而其他因素差异不显著。综合考虑
各项因素 ,确定扯根菜多糖最佳提取工艺条件为
A3B3C1 ,即提取时间 3h,提取温度 95℃,料液比 1∶
15。
3.6 　最佳提取工艺的验证　在最佳工艺条件下进
行验证实验 ,该条件下的多糖提取率为 1.12%, RSD
=1.21%(n=4)。结果表明该工艺稳定可行。
　表 1 　因素水平表
水平 A提取时间 /h B提取温度 /℃ C料液比
1 1 65 1∶15
2 2 80 1∶25
3 3 95 1∶35
　表 2 　正交实验结果
试验 A B C 多糖得率/%
1 1 1 1 0.56
2 1 2 2 0.82
3 1 3 3 0.93
4 2 1 2 0.55
5 2 2 3 0.77
6 2 3 1 1.04
7 3 1 3 0.58
8 3 2 1 0.84
9 3 3 2 1.06
K1 0.770 0.563 0.813 -
K2 0.787 0.810 0.810 -
K3 0.827 1.010 0.760 -
R 0.057 0.447 0.053 -
　表 3 　方差分析表
差异来源 离差平方和 自由度 F 显著度
A 0.005 2 1.000 -
B 0.300 2 60.000 P<0.05
C 0.005 2 1.000 -
误差 0.01 2 - -
　　注:F0.05(2, 2)=19.00
4　讨论
4.1　扯根菜多糖的提取中 ,原料的预处理用 80%
乙醇回流 ,目的是为了除去扯根菜中单糖 、双糖 、低
聚糖 、苷类 、生物碱 、氨基酸及醇溶性蛋白质等物
质〔3〕 ,对后期处理有一定的帮助 ,最大限度减少了
干扰物质的存在。
4.2　实验过程中发现 ,蒽酮试剂的质量对结果有
一定影响 ,应现配现用。醇沉浓度 、醇沉时间和乙醇
倍数对多糖的得率也有影响 ,醇沉时使乙醇浓度达
到 90%,于 4℃冰箱醇沉 12 h以上较为完全 。
参 考 文 献
[ 1] 何述敏 , 李敏 ,吴众 , 等 .扯根菜的研究进展 [ J] .中草
药 , 2002, 33(6):附 5-6.
[ 2] 陈旋 , 张翼 ,张剑波 .植物多糖的研究进展 [ J] .中国新
药杂志 , 2007, 16(13):1000-1004.
[ 3] 张琳华 , 高瑞昶 ,许明丽 , 等.桑叶中多糖提取分离工艺
的研究 [ J] .中草药 , 2005, 36(4):534-537.
·123·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 1期 2009年 1月