全 文 ：药物分析杂志 C h in J ph ar m An al2 00 8, 25 ( 9 ) 14 89
苦石莲化学成分研究 ’
袁经权 ’ , 邹忠杰’ , 杨新洲’ , 缪剑华` , 董悦生’ , 许旭东’ , 杨峻山 2 ’ `
( 1
. 厂一西药用植物研究所 ,南宁 5 3 0 0 23 ; 2 . 中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京 100 94 ;
3
. 中国科学院上海药物研究所新药研究国家重点实验室 , 上海 2 01 2 03 )
摘要 目的 : 系统研究苦石莲的化学成分 , 为进一步开发苦石莲和制定苦石莲药材定量分析标准提供科学根据 。 方法 : 利用
硅胶 、凝胶和制备薄层等常规色谱分离方法进行化合物分离 ,采用波谱技术和化学方法鉴定化合物的结构 , 并对苦石莲各萃
取物 、水溶部位和 。 ae as] m in (C 化合物 2) 进行了流感甲型病毒活性的抑制作用试验 。 结果 :从苦石莲乙醇提取物中分离得到
9 个化合物 , 分别鉴定为 n o r e a e s a l爪 n E (化合物 l ) 、 e a e s al m in C (化合物 2 ) 、 5 一 经甲基 一 2 一 吠喃醛 (化合物 3 ) 、 胡萝 卜营 (化
合物 4 ) 、蔗糖 (化合物 5) 尹一 谷幽醇 (化合物 6 ) 、硬脂酸 (化合物 7 ) 、咖啡酸十八醇醋 (化合物 8 ) 、 2 , 5 一 二经基苯甲酸乙酷
(化合物 9 ) , 活性试验结果表明 , 乙酸乙醋萃取物和化合物 2 对流感 甲型病毒活性的抑制作用最强 。 结论 : 除化合物 2 外 , 其
他 8 个化合物均为首次从该植物中分离得到 ;化合物 2 可以作为有效成分定量分析苦石莲质量 。
关键词 :苦石莲 ( 咏荚云实种仁 ) ; 化学成分 ;卡萨烷型吠喃二菇 ;抗流感病毒活性
中图分类号 : Rg l 7 文献标识码 : A 文章编号 : 02 54 一 17 93 ( 2 00 8 )0 9 一 14 89 一 05
S t u d i e s o n ht e Ch e m iC a l c o n s t i tu e n ts fr o m s e e d s
o f aC
e s a lP i n 忍a
Y u A N Ji n g 一 q u a n ’ , ZO U z h o n g 2一 J l e ,
m i n a x H a n c e
*
Y AN G x i n 一 : h o u 3 , M I A O Ji a n 一 h u a
D o N G Y u e 一 s h e n g , , x u x u 一 d o n g , , Y A N c Ju n 一 s h a n , ”
( 1
.
G u a n邵 1 In s ti t u r e o f M e d i e i n al p l a n t , N a n n i n g 53 0 0 2 3 , C h i n a ; 2 . In s t i t u t e of M e d i e i n al p l a n t D e v e l o p m e n r , C hi n e s e A e a d e m y o f M e d i ( al
Se i e n e e s an d P e k i n g U n i o n M e di e a l C o l e g e
,
B e iji n g 10 00 94
,
Ch i n a : 3
.
S t at e Ke y L ab o ar t o叮 o f D ru g Re s e acr h
,
Sh a n g h a i
I n s t i t t: t
e o
f M a t
e
ir
a
M
e
d i
c a , C h i n e s e A e a d e m y o f Se i e n e e s
,
S h an gh ia 2 0 1 20 3
,
Ch i n a )
A b s t r a c t o bj e e it v e : oT i
n v e s ti g a t e t h e e o n s ti t u e n t s fr o m s e e d s o f C a es a lP i
n ia m i n o H an
e e s y s te m a t i e a l ly
.
M e ht
·
o d s : T h e e o m P o u n d s h a v e b e e n s e P a ar t e d an d p u r iif e d b y s i l i e a g e l a n d S e Ph a d e x L H 一 2 0 g e l e o l u m n e h or m at o g r a
-
p场 a s w e l l a s th e p r e p a ar t i v e T L C m e t h o d . R e s u l t s : N i n e e o m p o u n d s w e r e i s o l a t e d for m t h e s e e d s o f aC es a lP i n i a m i -
n二 . O n th e b a s i s of t h e s p e e t r a l d at a , t h e ir s tur e t u er s w e er id e n ti if e d a s n o cr a e s a l n i n E ( e o m p o u n d l ) , e a e s a lm in C
(
e o呷 o u n d Z ) , 5 一 h y d or x ym e t h y l 一 2 一 fu ar ld e h y d e ( e o m p o u n d 3 ) , d a u e o s t e or l ( e o呷 o u n d 4 ) , s u e or s e ( e o m p o u n d
5 )
,月一 s i to s te or l ( e o哪o u n d 6 ) , s t e iar e a e id ( e o m p o u n d 7 ) , c 王if fe i e a e id n 一 o e t a d e e y l e s t e r ( e o m p o u n d s ) , 2 , 5 一 di -
h y dr o叮 b e n z o i e a e id e t h y l e s te r ( e o m p o u n d g ) , a n d e o m p o u n d 2 e x h ib i t e d m o d e s t a e ti v i ty a g a i n s t fl u e n z a v iur s ·
C o n e lus i o n : A l l e o m p o u n d s w e er i s o l a t e d for m
th e p l a n t fo
r t h e if r s t ti m e e x e e p t e o m p o u n d 2
.
K e y w o r d s : s e e d s o f C a es a lP i
n ia m i n a x H a n e e ; e h e m i e a l e o n s t i tu e n t s ; e a s s a n e fu r a n o d i t e甲 e n o i d s : a n ti 一 fl u e n z a v i -
ur s a e t
l v l t y
苦石莲为豆科云实属植物咏荚云实 (南蛇勒 )
c a es a lP i
n i。 m i n ax H a n e e 的种仁 ,性凉 、味苦 ,有清热
解毒 、化湿 、散疲止痛功效 ,主治风热感冒 、 痢疾 、淋
浊 、痈肿 、跌打损伤等症 , 主要分布于广西 、 广东 、 福
建等省区川 。 在民间为治疗流感和肝炎常用药 ,并
被广西 、贵州等省区的中药材标准 l2, , J收载 。 近年
来 , R en 等从苦石莲中分离鉴定了多个具有抗病毒
活性的二菇类化学成分 上` 一 6」。 为进一步研究民族草
药苦石莲化学成分 , 以期从中开发有效部位乃至有
效成分 , 并为制定苦石莲定量分析标准提供技术依
, 广西科学研究 ’于技术开发计划 (桂科能 0 44 30 02 一 2)
* * 通讯作扦 T e l : ( 0 10 ) 6 2 8 9 9 70 7 ; E 一 m a i l : Ju n sh a n y a n g@ h o tm a i ] , e o rn
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 09. 017
1 9 4 0药物分析杂志 ChinJ P ha r mAn a l 28 0 0, 28 ( 9 )
据 ,本文对 一苦石莲进行了系统的化学成分研究 ,从其
95 % 乙醇提取物中分离得到 9 个化合物 , 分别鉴定
为 n o r e a e s a l n i n E (化合物 l ) 、 e a e s a lm i n C ( 化合物
2 )
、
5 一 经甲基 一 2 一 吠喃醛 ( 5 一 h y d r o x y m e t h y l 一 2 -
fu ar ld e h y d e ) (化合物 3 ) 、胡萝 卜昔 ( d a u e o s t e r o l ) (化
合物 4 ) 、蔗糖 ( s u e r o s e ) (化合物 5 ) 、月一 谷由醇 (刀 -
s i to s t e or l ) (化合物 6 ) 、 硬脂酸 ( s t e a r i e a e id ) (化合物
7 )
、 咖啡酸十八醇醋 ( e afe i e a e i d n 一 o e t a d e e y l e s t e r )
(化合物 8 ) 、 2 , 5 一 二经基苯 甲酸 乙醋 ( 2 , 5 一 id -
h y d r o x y b e n
z o i e a e id e t h y l e s t e r ) (化合物 9 ) ;其中化
合物 1和化合物 2 为结构独特的卡萨烷型峡喃二菇
(见图 1 ) ,除化合物 2 外 ,所有化合物均为首次从该
植物分离得到 。 此外 ,本文还对苦石莲各萃取物 、水
溶部位和化合物 2 进行了流感甲型病毒活性的抑制
作用试验 ,结果 乙酸乙醋萃取物和化合物 2 活性最
强 。 此研究为进一步开发苦石莲以及制定专属性强
的苦石莲质量分析标准奠定了基础 。
19 18
]
.
R l = H
,
2
.
R 】 = O A c ,
R Z 二 O H , R3 二 0
图 1
F ig l
化合物
R Z = O A e
,
R 3 二 C H Z
及化合物 2 的结构式
S回 e tu re s o f e o 口 l p o u n d s 1 an d Z
1 仪器和材料
iF hs e r 一 oJ hn S 型显微熔点仪 (温度未校正 ) ,
7 5 6 M C U V 一 V IS 分光光度计 , N i e o l e t M a g n a 一 FT -
I R 一 7 5 0 红外光谱仪 , A u t o s p e e 一 u l ti m a E TO F 质谱
仪 , NI o v A 一 50 核磁共振仪 。 柱色谱硅胶 ( 10 0 -
2 0 0 目和 2 0 0 一 3 0 0 目 ) ,薄层色谱用硅胶 H 、硅胶 G 、
G凡 4和制备薄层硅胶 G F乃 4均为青岛海洋化工厂生
产 , Se p h a d e x L H 一 2 0 为 p h a mr a e ia 公司产品 ,所用
试剂均为分析纯 。
苦石莲药材于 2 004 年 8 月购 于南宁一心药业
公司 ,经广西药用植物园资源分类室余丽莹主任鉴
定为 c a es a枷 n ia m in ax H an ce 的种仁 , 标本现保存于
)
” 西药用植物研究所植物化学筹建室标本柜 。
2 提取分离
干燥苦石莲 30 k g ,粉碎 ,过 10 目筛 ,加 4 倍量的
石油醚冷浸脱脂 3 次 , 每次 24 h , 以除去油脂 。 药渣
挥干后分别用 巧 倍量 95 % 乙醇加热回流提取 2 次
(每次 Z h ) ,再以 10 倍量 70 % 乙醇加热回流提取 1次
( 1
.
s h )
,合并提取液 ,减压回收乙醇得浸膏3 k g 。 浸
膏加 3 . S L 蒸馏水分散 ,依次用 20 L 石油醚 、 or L 氯
仿 、 6 L 乙酸乙醋及 or L 正丁醇充分萃取 , 分别得到
石油醚萃取物 、氯仿萃取物 、 乙酸乙醋萃取物 、正丁醇
萃取物和水溶部位 。 石油醚萃取物 ( 702 9 )通过硅胶
柱色谱 ,以石油醚 一 乙酸乙醋 ( 98 : 2弓 70 : 30 )梯度洗
脱 ,得到 5 个部分 ,各部分经反复硅胶柱层析及 S即h -
ad e x L H 一 120 纯化 ,得到化合物 6 ( 43 m g ) ,化合物 7
( 26 m g ) ;氯仿萃取物 ( 13 7 9 )通过硅胶柱色谱 , 以石
油醚 一 乙酸乙醋 一 甲醇 ( 90 : 10 : 0弓 6 0 : 35 : 5) 梯度洗
脱 ,得到 8 个部分 ,各部分经反复硅胶柱层析及 S eP h -
a d e x L H 一 120 纯化 , 得到化合物 l ( 9 m g ) , 化合物 2
( 5 4 5 m g )北合物 3 ( 2 1 m g ) ;乙酸乙醋萃取物 ( 6 8 9 )
通过硅胶柱色谱 , 以氯仿 一 甲醇 ( 95 : 5* 5 0 : 50 )梯度
洗脱 ,得到 8 个部分 , 各部分经反复硅胶柱层析及
s e p h a d e 、 L H 一 12 0 纯化 ,得到化合物 4 ( 57 m g )北合
物 5 ( 124 m g )北合物 6 (朽 m g )北合物 7 ( 2 36 m g ) ,
化合物 8 ( 13 m g )北合物 9 ( 19 m g ) 。
3 结构鉴定
化合物 l : 白色粉末 , m p . 13 6 一 1 3 7 ℃ 。 E l 一 M S
耐: : 3 7 6 仁M ] + , 3 5 8 , 3 16 , 2 9 8 , 2 8 0 , 13 5 。 I R 光谱显
示有醋碳基 ( 17 4 3 c m 一 ’ ) 、 酮碳基 ( 16 5 5 C m 一 ’ ) 、经
基 ( 3 5 9 1 C m 一 ’ ) 、吠喃环 ( 16 0 0 , 15 0 0 , x4 0 0 C m 一 ’ )和
偕二甲基 ( 13 5 5 , 1 4 5 6 Cm 一 ’ )等吸收峰 。 u v 光谱在
26 2
n m 处有中低等强度吸收峰 ,示有共扼双键 。 ’ H
一 N M R 中显示 3 个甲基信号 [吕 1 . 0 6 ( 3 H , S ) , 1 . 1 1
( 3 H
, s
)
,
1
.
2 4 ( 3 H
, s
) 〕和 1 个乙酞基信号 [ a 2 . 0 9
( 3 H
, S
) 〕 , 2 个连氧碳氢信号比 4 . 3 8 ( I H , m ) , 4 . 9 4
( I H
,
b r s ) 」, 吠喃环 _ L Z 个双键氢信号 [ 6 6 . 5 4
( I H
,
d
,
J
= 2
.
0 H z )
,
7
.
3 3 ( I H
,
d
,
J
= 2
.
0 H z ) 〕。 ” e
一 N M R 中显示 l 个乙酞基信号仁a 2 1 . 5 , 16 9 . 1 ]和 l
个酮碳基信号 「6 198 . 4 〕。 分析其 H M B C 谱 ,发现
酮淡基 ( 6 1夕8 . 4 )与 H 一 7 、 H 一 8 、 H 一 9 和 H 一 15 远
程相关 ,说明酮拨基在 14 位 , H 一 1 与 C 一 2 , C 一 3 , C
一 5 , e 一 10 , e 一 2 0 和醋淡基 ( 6 16 9 . 1 )远程相关 ,说
明乙 酞氧基连在 1 位 。 将化合物与 no cr ae s al in n
E [ 7」比较 ,发现二者 N M R 数据相同 。 ’ H 一 N M R 和 ” e
一 NM R 数据归属见表 1 , H M B C 相关见图 2 。 化合
物 l 鉴定为 n o cr a e s a l n i n E O
药物分析杂志 Ch in J h P ar mAn l a2 0 08, 2 8 ( 9 ) 一 1 49 1 一
表 i 化合物 i 和 2 的` H 一 N M R 和 ` 3 e 一 N M R 数据 ( e D e l 3 , 500 H z )
T a b 1 NM R s P e e t r a l d a t a o f e o m P o u n d s 1 a dn Z
位置
( p
o s i一i o n )
化合物 l ( C o m p o u n d l ) 化合物 2 ( e o m p o u n d Z )
13 C 一 NM R I H 一 NM R 13 C 一 NM R IH 一 N M R
7 5
.
2
2 2
.
7
2 9
.
9
3 8
.
4
7 7
.
8
33
.
6
4
.
94 ( I H
,
b : s )
1
.
9 8 ( I H
,
m )
,
1
.
7 6 ( I H
, m )
1
.
7 4 ( I H
,
m )
,
1
.
19 ( I H
,
m )
7 5
.
0
2 2
.
1
32
.
3
3 8
.
5
7 9
.
3
75
.
3
4
.
89 ( I H
, s
)
1
.
9 1 ( I H
,
m )
,
1
.
75 ( I H
,
m )
1
.
7 5 ( I H
,
m )
,
1
.
11 ( I H
, m )
5
.
59 ( I H
,
b r s )
67
.
2
5 1
.
0
3 8
.
6
43
.
6
22
.
8
2
.
16 ( I H
,
dd
,
J = 5
.
5
,
13
.
5 H z )
,
1
.
66 ( I H
,
dd
,
J 二 11
.
5
,
13
.
5 H z )
4
.
38 ( I H
,
m )
2
,
3 9 ( I H
,
d d
,
J = 9
.
5
,
12
.
5 H z )
3
.
0 8 ( I H
,
dd
,
J = 5
.
5
,
12
.
5 H z )
7 5
.
6
4 1
.
6
3 8
.
0
4
.
5
23
.
2
5
.
59 ( I H
, 卜r , )
2
.
82 ( I H
, s
)
2
.
7 3 ( I H
,
dd
,
J = 4
.
0
,
11
.
5 H z )
2
.
73 ( I H
,
dd
,
J = 12
.
5
,
17
.
O H z )
,
2
.
5 2 ( I H
,
d d
,
J = 5
.
5
,
17
.
O H z )
2
.
6() ( I H
,
dd
,
j = 11
.
5
,
16
.
0 H z )
,
2
.
42 ( I H
,
dd
,
J = 4
.
0
,
16
.
0 H Z )
798101
l 2
l 3
l 4
l 5
l 6
I 7
l 8
l 9
20
l 一 O C OC H 3
6 一 O C OC H 3
7 一 O COC H3
:咒. : 15 0 . 5119 . 8
138
.
5
6
.
65 ( I H
,
d
,
J 二 2
.
O H : )
7
.
33 ( I H
,
d
,
J = 2
.
0 H z )
4ǎj, ,980643
2 7
.
9
24
.
9
18
.
1
2 1
.
4
,
169
1
.
06 ( 3 H
, s
)
1
.
1 1 ( 3 H
, s
)
1
.
24 ( 3 H
, s
)
2
.
09 ( 3 H
, s
)
106
.
5
142
.
0
105
.
6
30
.
7
2 5
.
0
17
.
1
2 1
.
4
,
169
.
1
2 1
.
4
,
170
.
8
2 1
.
8
,
170
.
8
6
.
4 1 ( I H
, S
)
7
.
24 ( I H
, s
)
4
.
9 5 ( I H
,
b f s )
,
5
.
09 ( I H
,
b r s )
1
.
1 6 ( 3 H
, s
)
1
.
16 ( 3 H
, s
)
1
.
3 1 ( 3 H
, s
)
2
.
0 8 ( 3 H
, s
)
1
.
97 ( 3 H
, 。
)
2
.
10 ( 3 } l
, s
)
图 2 化合物 1 的 HM B C 主要相关图
F i g 2 K
e y H M B C e o re l
a t i o n s Of e o呷 o u n d l
化合物 2 : 白色粉末 , m p . 12 9 一 13 0℃ 。 E l 一 M s
m八 : 4 7 4 「M 」+ , 4 14 , 2 9 4 , 27 6 , 2 5 1 , 2 2 5 , 19 7 , 17 4 ,
13 9
,
9 7
。 `
H 一 NM R 和 ` , e 一 N M R 数据见表 一。 以上
数据与文献 [ 4 〕报道的基本一致 , 故鉴定为 C ae -
s a lm i n C
。
化合物 3 : 灰黄色粉末 , E l 一 M S 刀“ 名 : 12 6 〔M」+ ,
10 9
,
97
,
8 1
,
6 9
,
5 3
。 质谱数据与文献仁8 ]报道一致 ,
故鉴定为 5 一 经甲基 一 2 一 吠喃醛 ( 5 一 h yd or xy m et h y l
一 2 一 fu r a ld e h y d e )
。
化合物 4 : 白色粉末 , m p . 2 86 一 2 8 ℃ , iL b e r -
m a n n 一 B u r e h a r d 反应 阳性 , M o l i s h 反 应 阳性 。 I R
( K B
r
)
。 m a : e m 一 ’ : 3 4 0 0 , 2 9 3 0 , 2 8 6 0 , 1 4 6 0 , 1 3 7 0 ,
107 0
,
1 02 0
。 与已知物胡萝 卜普对照 , fR 值相同 ,
混合熔点不下降 , 其 IR 数据与对照 品图谱对照一
致 , 由以上结果确定此化合物为胡萝 卜昔 ( d au -
e o s t e r o l )
。
化合物 5 : 无色晶体 , m p . 18 一 190 ℃ 。 ’ H -
N M R ( D
Z
O ) a
: 5
.
2 7 ( G l u H 一 l
,
I H
,
d
,
J
= 3
.
6 H z )
,
4
.
0 5 ( r ur H 一 l
’ ,
I H
,
d
,
J
= 8
.
4 H
z
)
, 说明该化合物
为二糖 , 3 . 2 5 一 3 . 9 3 (糖上其他 H , 12 H ) 。 ” e 一 N M R
( D
Z O ) 吕: G l u : 9 4 . 8 ( C 一 l ) , 7 5 . 2 ( C 一 2 ) , 7 5 . 0 ( C -
3 )
,
7 1
.
8 ( e
一 4 )
,
7 3
.
7 ( C
一 5 )
,
6 2
.
7 ( C
一 6 ) ; F ur :
6 5
.
0 ( C
一 l ’ )
,
1 0 6
.
3 ( C
一 2 ` )
,
8 4
.
0 ( C
一 3 ’ )
,
7 9
.
0 ( C
一 4 ` )
,
7 6
.
6 ( e
一 5 ` )
,
6 3
.
9 ( e 一 6
’
)
。 以上数据与文
献仁9 」报道基本一致 , 故鉴定化合物 5 为蔗糖 ( su -
e or s e )
。
化合物 6 : 白色针状结晶 , m p . 13 8 一 13 9 ℃ , 与
对照品 月一 谷街醇比较 , 二者 fR 值相同 , 且混合熔
一 12 9 4一 药物分析杂志 h Cin JPh ra m An a2 l) 0 (8, 28 ( 9 )
点不下降 。 鉴定该化合物为月一 谷幽醇 (月一 ist os et r -
0 1 )
。
化合物 7 : 白色固体 , m p . 6 1 一 63 ℃ , IE 一 M S m/
z : 2 8 4 [ M ]
+ ,
2 5 6
,
2 4 1
,
2 13
,
19 9
,
18 5
,
17 1
,
15 7
,
14 3
,
129
,
60
。 质谱数据 一与文献「10] 报道的数据一致 ,鉴
定该化合物为硬脂酸 ( s t e a r i e a e id ) 。
化合物 s : 白色粉末 , E l 一 M S m / : : 4 3 2 「M 」+ ,
15 0
,
1 6 3
。 ’ H 一 N M R ( e D e l 3 ) 8
: 7
.
0 9 ( H
一 2 , I H , d , J
= 2
.
0 H
z
)
,
6
.
8 2 ( H
一 5 , I H , J = 8
.
2 H z )
,
7
.
0 1 ( H
-
6
,
I H
,
J
= 8
.
2
,
2
.
0 H z )
,
7
.
5 8 ( H
一 7 , I H , d , J = 1 5
.
8
H z )
,
6
.
2 6 ( H 一 8
,
I H
,
d
,
J
= 1 5
.
8 H z )
,
4
.
18 ( Z H
,
t
,
J
= 7
.
0 H z
,
o e H Z )
,
1
.
2 4 一 1
.
3 3 ( 长链烷烃质子 ) ,
0
.
5 5 ( 3 H
,
t
,
J = 7
.
0 H z
,
C H
。
)
。 质谱和氢谱数据与
文献「11 〕报道的一致 ,鉴定化合物 8 为咖啡酸十八
醇醋 ( c a fe i C a e id n 一 o e t a d e e y l e s t e r ) 。
化合物 9 : 白色粉末 , E l 一 M S m / z : 15 2 「M 〕+ ,
16 7
, 一5 4 , 1 3 7 , 10 9 。 ` H 一 N M R ( C D e l 3 ) 右: 7 . 5 7 ( H -
6
,
I H
,
d
,
J
= 2
.
0 H z )
,
6
.
8 7 ( H 一 3
,
I H
,
d
,
J
二 8
.
4
H z )
,
6
.
6 1 ( H
一 4 , I H , J = 8
.
4
,
2
.
0 H z )
,
4
.
37 ( ZH
,
q
,
J
= 7
.
0 H z
,
O C H Z )
,
1
.
3 8 ( 3 H
,
t
,
J
= 7
.
0 H z
,
C H : )
。
质谱和氢谱数据经对 照文献 「12 , 13 〕报道 , 鉴定化
合物 9 为 2 , 5 一 二经基苯甲酸乙醋 ( 2 , 5 一 d ih y d or xy
b e n z o ie a e id e t h y l e s t e r )
。
4 苦石莲制备备份对流感甲型病毒活性的抑制作用
4
.
1 测试原理 分别将苦石莲石油醚萃取物 、氯仿
萃取物 、 乙酸乙酷萃取物 、 正丁醇萃取物和水溶部位
以及收率较大的化合物 2 ( c ae sa lm in )C 作为抗流感
甲型病毒活性筛选的备份 , 以 M D C K (狗肾 ) 细胞为
病毒宿主 , 测定样品抑制病毒 引起细胞病变程度
( C P E )
。
4
.
2 测试材料和方法
4
.
2
.
1 测试材料 狗肾细胞 ( M D C )K : 中国医学科
学院医药生物技术研究所病毒室提供 。 病毒株 : 流
感甲型病毒 (粤防 72 一 243 ) , 在鸡胚尿囊腔内培养
传代 ( 2 0 0 5 , 10 ) , 一 8 0 ℃保存 。
4
.
2
.
2 测试材料对流感甲型病毒的处理方法
50 倍稀释浓度处理 : 流感甲型病毒原液作 5 0 倍稀
释 ,分别取病毒稀释液 3 m L 通过 2 层 、 4 层 、 8 层
活性炭纤维填塞的 5 m L 针管 ,滤液经孔径为 0 . 2
协m 针头滤器过滤后用 C P E 法测定病毒对 M D c K
细胞半 数感染浓 度 ( T CI D S。 ) 。 观察结果 , 记 录
c P E
,计算各样品半数有毒浓度 ( T C S。 ) 、 抗流感病
毒半数抑制浓度 ( IC S。 )和选择指数 SI ( sI = T C S。 /
I C S
。
)
。
4
.
2
.
3 实验结果及评价 测试结果见表 2 。
表 2
T s b
苦石莲各备份抗流感甲型病毒作用的测定
2 I n h i b iot r y e n陌e st o f C m in ax H a n e e
e x t ar e ts o n i n n u e n z a 城 r u s
筛选备份 ( s am p les ) CT 犷此 · 毗 一 I IC 郊此 · mL 一 1 51
石油醚萃取物 ( p e tr o l e u m e th e : e x tar e 一)
氯仿萃取物 ( ,?h 场 r O lb mr 。 xl a(r i)t
乙酸乙醋萃取物 ( e一l, y l a o e ta *e e x * r a e t )
正丁醇萃取物 ( n 一 l , u t a n o l e x tar ` .t )
> 20 > 2《洲〕
> 20() > 20()
115
.
47 2 1
.
02 5
.
4 9
水溶部位 (明 u e o u , 。 x t r a 〔、
c韶 s a !m i n C
5 77
.
35 > 33 3
.
33
> 2以】 1以〕 > 2
192
.
45 3 7
.
0 3 5
.
19
从以上的抗流感病毒活性数据可看出 ,各备份
对流感甲型病毒具有不同程度的抑制作用 ,其中乙
酸乙酚萃取物 、 水溶部位和 ca es al m in C 对相同数量
的病毒进行活性抑制试验时 ,使其中 50 % 的实验病
毒数遭到有效抑制生长或杀死的最大效应浓度即
xe
s。分别为 2 1 . 0 2 , 10 0 , 3 7 . 0 3 协g · m L 一 ’ , 而且 乙酸
乙醋萃取物和 C ae sa lm in C 显著小于水溶部位 ,说明
苦石莲乙酸乙醋萃取物和 ca es al m in C 对抗流感甲
型病毒活性最强 。
从它们的 T C S。 (药物半数有毒浓度 : 能引起
5 0% 的实验病毒数遭受中毒的最大效应浓度 )来
看 ,石油醚萃取物 、氯仿萃取物 、 乙酸乙酷萃取物 、 水
溶部位和 ca es al m in C 相差不大 ,但比正丁醇萃取物
小得多 ,表明在相同条件下 , 正丁醇萃取物使实验病
毒细胞中毒的机率要远远小于其他 5 种备份 。
从 sI (选择指数 , SI = T C 50 I/ C , , 判断物效果的
安全范围的指标 ,选择指数大于 1 为有效 ,选择指数
越大安全范围越大 )来看 , 乙酸乙醋萃取物 、水溶部
位和 c ae sa lm in c 均大于 1 ,说明它们的安全性良好 。
5 讨论
R e n 也报道了 c a e s a lm i n C 具有流感病毒活性 ,
其抑制副流感病毒模型 3 活性增殖的 I C S。为 8 . 2 此
·
m L
一 ’ , T C S。为 19 6 . 3 林g · m L 一 ’ , 5 1为 2 3 . 9 〔` 1 。 前
人报道和我们的活性研究结果初步阐明了苦石莲清
热解毒功效以及治疗风热感冒的物质基础 , 为进一
步开发苦石莲有效部位 ,甚至 以有效成分为先导化
合物进行结构修饰开发新药奠定了基础 。 目前苦石
莲在广西 、贵州等省区的中药材标准中均没有有效
成分的定量分析标准 ,只有简单定性分析 ,如性状描
述 、 标准药材薄层对照等 〔’ , , 〕 ,专属不强 , 重复性差 。
苦石莲中 ca es al m in C 含量相对较大 ,抗病毒活性较
强 ,可作为有效成分定量分析苦石莲的质量 ,研究结
药物分析杂志 Chin Jp h a r m An a l 25 0 0, 25 ( 9 ) 一 14 93 一
果为提升苦石莲质量分析水平提供了一定的技术基
础 。
致谢 : 中国协和医科大学药物研究所贺文义教授代测核磁共振谱 ,再帕尔 . 阿不力孜教授课题组代测质谱 ;华北 7
制药集团新药研究中心代测生物活性 。
参考文献
1 St a t。 A d m i n i s tart i
o n 。 f T r a d i t i o n al C h i n e s e M e d i e i n e , Ch i n a ( 国家
中医药管理局 ) . Ch i n a H e lb al Vl (中华本草 VI ) . S h an gh a i (上
海 ) : s h a n gh缸 s e i e n e 。 a n d T e e h n ol o gy p u b il sh e rs (上海科学技术
出版社 ) , 19 9 8 . 3 74
2 D
e
p art m
e n t 。 f H e al t h o f G u a n 群 i Z hu an g A u t o n o m o u s R e g i o n ( J 一西
壮族自治区卫生厅 ) . uG an 扣 S t a n dadr o f t h e arT d i t i o n al Ch i n e s e
M e d i e i n al M a t e ` al s (广西中药材标准 ) . Nan i n g (南
`
i
`
) : C u a n群 i
s e i e n e e & 介 e h n o l o gy P u b一i s hi n g H o u s 。 (广西科学技术出版社 ) ,
19 9 2
.
6 3
3 D e p art m
e n t of H e a l t h o f G u i z h o u p ro v i n e e (贵 州省 卫生 厅 ) .
G u ihz o u S tan d ard Of
t h e T
r
ad i t i o n a l Ch i n e s e M e di e i n al M a t e r ia] S (贵
州省中药材质量标准 ) . G u iy a n g (贵阳 ) : G u i zh o u p e o p l e ’ 5 uP b -
l i
s
h i n g H o u s e (贵州人民出版社 ) , 19 9 0 . 2 6
4 R
e n
WJ
,
s h u a n g e M
,
p a u l p H
,
et a l
.
N ew
a n t i v iral
e a s s a n e fo
r a n -
o d i t e甲e n e s fro m C a e s a lp i n i a m i n a x
.
J Na t p ro d
,
2 0 0 1
,
64 ( 10 )
:
12 6 6
5 R e n WJ
,
Sh u an g C M
,
z h e n D H
, e t a l
.
M o l e
e u lar s t ru e t u re s a n d an t i
-
v iarl
a e t i v t i e s Of n a t u arl ly
o e e u币 n g an d m o d i if e d e a s s an e of ar n -
o d i t e甲 e n o id s a n d ifr de i l a n e t it t e印 e n o id s ofr m Cae s al pi n i a m i n ax .
B动 o gr Me d hC e m
,
2 0 0 2
,
10 ( 7 ) : 2 16 ]
6 R e n WJ
,
P a己 P H , Sh u an g CM , et a l . St nr e r u er a n d a n t i v i r al p or p e -r
8
9
10
l l
l 2
1 3
t ie s o f m a e or e a e s a lm i n
, a n o v e l e a s s a n e fu ar n o d i t e甲 e n o id l a e t o n e
ofr m t h
e s e e d
s o
f C
a e s al p i n i a m i n ax H
a rl e e
.
eT rar h
e
d or n 加 t , 2 0 0 2 ,
4 3 ( 13 )
: 2 4 15
T h e n Z L
,
S u r e s h A
,
Y a s hu ior T
,
e未 a l . C a s s a n e 一 a n d n o rc a s s a ,l e -
t y p e d i tepr
e n e s
for m C
a e s习p i n i a e ir s t a Of In do n e s i a a n d th e i r an t i -
m al iar al
a e t iv i ty a g a i n s t th e 脚 w th Of P l a s m o d i u m fa le i paur m
.
J Na
l
尸了。 d , 2X() 5 , 6 8 ( 5 ) : 7 06
CO N G P u 一 : h u (丛浦珠 ) , S U K e 一 m an (苏克曼 ) . H a n d ho o k o f
nA al y
s i s C h e m i s t叮 XI (分析化学手册 Xl ) . B e i j i n g (北京 ) : C he m i -
e a l I n du s t叮 P I℃5 5 (化学土业出版社 ) , 2 0 0 0 . 26 3
H A I L IQIA N T a o 一 e dr a ho n g (海力茜 · 陶尔大洪 ) , X U J i a n 一 ju n
(徐建军 ) , K A IS AI E R A 一 b u d u k e re m u (凯赛尔 · 阿不 都克热
木 ) , e t a l . C h e n l i e al e o n s t i t u e n t s o f H e d y s a rn m a u s t or s ib i ir e u rn b .
eF dt cs h( 新疆红茂的化学成分 ) , 环几活 1 hC ian 了hP a mr cS i( 华西药
学杂志 ) , 2 0 06 , 2 1 ( l ) : 47
CO N G P u 一 z h u (丛浦珠 ) , S U K e 一 m a n (苏克曼 ) . H an d b o o k of
A n
a
ly
s
i
s
C h e m i
s t仃 Xl (分析化学手册 XI ) . B e ij i o g (北京 ) : C h e m i -
e a
l I n d u s r叮 P re s s (化学工业出版社 ) , 2 0 0 0 . 2 9 7
G acr i
a 一 A gar
e z AN
,
P e r e z 一 A m a d o l
,
M C
,
A剖ire 二 H e rn a n d e z E , e t
a l
.
r
l’W 0 n e w e a m 三a t e e s t e rs fr o m ro o t s o f M e re m i a t u b e ro s a a n d M
.
di
s s e c t a
.
p la n t a Me d
,
19 9 9
,
65 ( 7 ) : 6 7 5
Y A O S h e n g (姚胜 ) , M IN z h i 一 d a ( 阂知大 ) , wT o n e w e h a l e o n e s
for rn
t h e l
e a v e s o f A rt o c呷 u s h e t e or p h y l lu s (波罗蜜。 t 中新的查耳
酮 ) . hC i n J Na t eM d (中国大然药物 ) , 2 0 0 5 , 3 ( 4 ) : 2 19
A h a d A M
,
G
o t o Y
,
K i u e h i F
, e r a l
.
N e m a t o e id al p ir n e i p le s i n
“
O a k
-
om
s s A b
s o lu t e
” a n d n e m a t o e id a l a c t i v i ty o f Z
,
4 一 d ih yd ro x y b e n z o
-
a t e s
·
Ch e m hP
a
rm B
u l l
,
199 1
,
3 9 ( 4 )
:
104 3
(本文于 2 0 0 7 勺砚 10 月 18 [ !收到 )