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收稿日期:2015-01-14; 修订日期:2015-05-12
基金项目:江苏大学第十三批学生科研立项资助项目(13A167)
作者简介:江 珊(1990-)，女(汉族)，江苏镇江人，江苏大学药学院在读
硕士研究生，主要从事中药及其制剂质量控制研究工作．
* 通讯作者简介:欧阳臻(1964-)，女(汉族)，江苏金坛人，江苏大学药学
院教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事中药资源及中药新药研究
工作．
垂盆草凝胶剂的制备及其质量控制
江 珊，赵 明，欧阳臻* ，叶 丹，芮梦珏，邵 扬，徐 贺
(江苏大学药学院，江苏 镇江 212013)
摘要:目的 制备垂盆草凝胶剂并对其质量进行控制。方法 采用正交设计法优选垂盆草凝胶剂最佳处方，并采用 HPLC
法同时测定垂盆草凝胶剂中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量。结果 垂盆草凝胶剂最佳处方为:垂盆草鲜汁 40． 0g ，薄荷油
5． 0g、卡波姆 － 940 1． 5 g ，丙二醇 25． 0g 和 25%三乙醇胺 20． 0g。槲皮素、山柰素和异鼠李素分别在 2． 632 ～ 26． 32μg /
mL，1． 056 ～ 10． 56μg /ml，0． 968 ～ 9． 68μg /ml范围内呈良好线性关系，相关系数分别为 0． 9998，0． 9997，0． 9994。平均加样
回收率分别为 100． 66%，100． 45%，97． 12%(ＲSD值分别为 0． 64，0． 77，1． 37，n = 5)。在该处方条件下制备的三批样品中
槲皮素、山柰素、异鼠李素总含量分别为 6． 72，6． 61，6． 42μg /g。结论 该凝胶剂工艺合理，含量测定方法操作简便，快速
准确。
关键词:垂盆草凝胶剂; 正交试验; 高效液相色谱法; 槲皮素; 体外释药; Higuchi方程
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 09． 038
中图分类号:Ｒ282． 4 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)09-2154-03
垂盆草为景天科植物垂盆草 Sedum sarmentosum Bunge 的干
燥全草，收载于 2010 版《中国药典》，其性凉，味甘、淡。具有利
湿退黄，清热解毒之效。用于治疗湿热黄疸，小便不利，痈肿疮
疡［1］。临床主要以垂盆草干品为原料制成颗粒剂、胶囊剂、滴丸
等单方或复方制剂用于治疗各种急慢性肝病，特别是对谷丙转氨
酶升高的患者治疗效果显著［2 ～ 4］。但我国民间常有将垂盆草鲜
用捣敷或取汁外涂，用于蛇虫咬伤、水火烫伤，皮肤痒疹，带状疱
疹等［5，6］。目前尚无以垂盆草鲜草为原料的制剂应用。本研究
将鲜垂盆草汁制成凝胶剂，用于治疗蚊虫叮咬、皮肤搔痒等皮肤
病症，并采用 HPLC法同时测定垂盆草凝胶剂中槲皮素，山柰素，
异鼠李素含量，对其质量进行控制，为鲜垂盆草的应用提供了一
条新的途径。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 安捷伦 1200 Infinity LC 高效液相色谱仪(安捷伦公
司);ZＲS － 8G智能溶出仪(天津天大天发科技有限公司);MET-
TLEＲ AE240 分析天平(上海托利多． 梅特勒仪器有限公司);
1810B型自动双重纯水蒸馏器(上海申立玻璃仪器有限公司)。
1． 2 试药与材料 垂盆草，采于江苏大学药植园，经江苏大学药
学院欧阳臻教授鉴定为景天科植物垂盆草 Sedum sarmentosum
Bunge;槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品(中国药品生物制品检定
所，批号分别为:100081 － 200907，110861 － 201209，110860 －
201109，纯度均 ＞ 98%);薄荷油(江西康盛堂药业有限公司);
MD －44 透析袋(美国联合碳化科技有点公司);卡波姆 － 940(青
岛力源生物科技有限公司);色谱甲醇(国药集团);丙二醇，三乙
醇胺，甘油，甲醇，磷酸，盐酸均为分析纯(国药集团)。
2 方法与结果
2． 1 槲皮素，山柰素和异鼠李素的含量测定
2． 1． 1 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18 柱(250nm × 4． 6nm，
5μm);流动相:甲醇 － 0． 4% 磷酸溶液 (45 ∶ 55)，流速
1． 2ml·min －1，检测波长 360nm，柱温 25℃，进样量 20μl。采用此
色谱条件，槲皮素，山柰素，异鼠李素达到基线分离。结果见图
1。
2． 1． 2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品 3． 29mg，山
柰素对照品 1． 32mg和异鼠李素对照品 1． 21mg 分别加甲醇溶解
并定容至 5ml，精密吸取上述对照品溶液各 1． 0ml，置 10ml 容量
瓶，加甲醇稀释至刻度并摇匀，作为对照品储备溶液。
2． 1． 3 供试品溶液的制备 取适量卡波姆 － 940 加入少量蒸馏
水中润湿研磨，放置 48h 至完全溶胀，加入丙二醇和甘油研磨均
匀作为凝胶剂基质，再分别加入薄荷油 5g 和垂盆草鲜汁 40g 搅
拌均匀，最后加入 25%三乙醇胺调节 pH值至 6 ～ 8 之间，加蒸馏
水至 100g 研磨均匀，即得垂盆草凝胶。取 5． 0g 垂盆草凝胶剂，
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加入 16ml甲醇和 4ml 25%盐酸超声溶解 30min，水浴加热提取
40min，溶液经高速离心，过滤，取续滤液 20ml浓缩并用甲醇定容
至 1ml，作为凝胶剂的供试品溶液。
1 －槲皮素;2 －山柰素;3 －异鼠李素
A －混合对照品;B －样品;C －阴性样品
图 1 高效液相色谱图
2． 1． 4 阴性溶液的制备 按“2． 1． 3”项下方法制备不含垂盆草
的空白凝胶剂，即得阴性溶液。
2． 1． 5 线性关系考察 精密吸取对照品储备溶液 0． 2，0． 4，0． 8，
1． 6，2． 0ml加甲醇稀释定容至 5ml 摇匀，得系列对照品溶液，按
“2． 1． 1”项下色谱条件测定，以对照品浓度为横坐标，峰面积积
分值为纵坐标，得槲皮素，山柰素，异鼠李素回归方程，分别为:Y
= 28892X － 4456． 5(r = 0． 9998)，Y = 28519X － 445． 81(r =
0． 9997) ，Y = 28390X － 13181(r = 0． 9994)。槲皮素、山柰素和异
鼠李素分别在 2． 632 ～ 26． 32μg /ml，1． 056 ～ 10． 56μg /ml，0． 968 ～
9． 68μg /ml范围内呈良好线性关系。
2． 1． 6 精密度试验 精密吸取对照品储备液 20μl，按“2． 1． 1”项
下色谱条件进行测定，连续进样 5 次，结果得到槲皮素，山柰素，
异鼠李素的 ＲSD值分别为 0． 47%，0． 98%，0． 42%(n = 5)。表明
精密度良好。
2． 1． 7 稳定性试验 取同一供试品溶液，按“2． 1． 1”项下色谱条
件进行测定，于 0，2，4，6，8h分别取样，结果得到槲皮素，山柰素，
异鼠李素的 ＲSD 值分别为 0． 57%，0． 38%，0． 69%，表明供试品
溶液在 8h内稳定性良好。
2． 1． 8 重复性试验 取同一批样品 5 份按上述方法制备供试品
溶液，按“2． 1． 1”项下色谱条件进行测定，结果得到槲皮素，山柰
素，异鼠李素的平均含量分别为 6． 09，2． 85，2． 10μg，ＲSD 值分别
为 0． 74%，1． 53%，1． 29%，表明该方法重复性良好。
2． 1． 9 加样回收率试验 精密称取已知含量样品 5 份，加入一定
量的对照品溶液，按“2． 1． 1”项下条件测定槲皮素，山柰素，异鼠
李素的回收率。结果见表 1 ～ 3。
表 1 槲皮素加样回收率
序号
样品槲皮素
含 /μg
加入槲皮素
含 /μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回收
率 /%
ＲSD
/%
1 4． 62 4． 00 8． 69 100． 17
2 4． 61 4． 00 8． 65 101． 11
3 4． 54 4． 00 8． 6 101． 58 100． 66 0． 64
4 4． 61 4． 00 8． 63 100． 27
5 4． 57 4． 00 8． 59 100． 17
表 2 山柰素加样回收率
序号
样品槲皮素
含 /μg
加入山柰素
含 /μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回收
率 /%
ＲSD
/%
1 1． 68 1． 60 3． 30 100． 05
2 1． 70 1． 60 3． 32 101． 25
3 1． 64 1． 60 3． 27 101． 33 100． 45 0． 77
4 1． 67 1． 60 3． 27 99． 91
5 1． 66 1． 60 3． 32 99． 73
表 3 异鼠李素加样回收率
序号
样品异鼠李素
含量 /μg
加入异鼠李素
含量 /μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均回收
率 /%
ＲSD
/%
1 1． 68 1． 47 3． 08 95． 45
2 1． 63 1． 47 3． 09 98． 82
3 1． 7 1． 47 3． 14 97． 93 97． 12 1． 37
4 1． 68 1． 47 3． 06 97． 15
5 1． 68 1． 47 3． 03 96． 26
2． 2 体外释药实验 采用动态透析法测定［7］。取 40． 0g 凝胶置
于载留分子量 14000 透析袋中，去除气泡，两端夹紧，固定于搅拌
桨上，以 500ml超纯水为释药介质，温度控制在(37 ± 0． 2)℃，于
0． 5，1，2，3，4h取 50ml溶液，并同时补足等量等温的超纯水。将
取得的释药介质经微孔滤膜(0． 45μm)过滤后，按“2． 1． 1”项下
条件测定槲皮素，山柰素和异鼠李素的含量，作为释放度。
以槲皮素，山柰素，异鼠李素的释放度为指标，计算在 0． 5，
1，2，3，4h时的累计释药量 Q(μg /cm2)，本制剂垂盆草指标性成
分释放行为符合零级方程和 Higuchi 方程，采用 Origin9． 0 拟合释
药动力学方程及相关系数。见表 4。
表 4 释药动力学方程及相关系数
试验号 Higuchi释药动力学方程 相关系数 r
1 Q = 3． 4413t + 3． 8320 0． 8080
2 Q = 1． 4502t + 10． 954 0． 0880
3 Q = 1． 4514t + 12． 525 0． 0650
4 Q = 0． 0247t + 10． 219 0． 0030
5 Q = 1． 2861t + 10． 707 0． 5996
6 Q = 0． 2174t + 13． 503 0． 0626
7 Q = 0． 3891t + 8． 8020 0． 0513
8 Q = 2． 4075t + 6． 4108 0． 6799
9 Q = 2． 4012t + 6． 4270 0． 6978
2． 3 处方优化
2． 3． 1 因素与水平 在单因素试验的基础上，选取卡波姆 － 940，
丙二醇，三乙醇胺的用量为考察因素。因素水平表见 5。
表 5 正交因素水平表
分组
A
卡波姆 － 940 /g
B
丙二醇 / g
B
25%三乙醇胺 / g
1 1 10 10
2 1． 5 20 16
3 2 25 20
2． 3． 2 正交试验 按 L9(3
4)正交表设计实验，采用综合评分
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法［8］对垂盆草凝胶剂评分，各项指标分值判别如下:外观:明亮
且透明(3 分)，透明(2 分)，半透明(1 分)，不透明(0 分)。粘稠
性:倾斜后用力震动才发生流动(3 分)，倾斜后轻轻震动发生流
动(2 分)，倾斜后缓慢流动(1 分) ，倾斜后快速流动(0 分)。pH
值:pH在 6 ～ 8 范围内(1 分)，pH 在 6 ～ 8 范围外(0 分)。释放
能力:4h内累计释放量小于 50μg /cm2(0 分)，51 ～ 55μg /cm2(1
分)，56 ～ 60μg /cm2(2 分)，61 ～ 65μg /cm2(3 分)，66 ～ 70μg /cm2
(4 分)，大于 70μg /cm2(5 分)。以外观，粘稠性，pH 值，体外释
药能力作为指标，优化垂盆草凝胶剂的处方。正交试验表见
表 6，方差分析结果见表 7。
表 6 正交优化表
试验号
因素
A B C
外观 粘稠性 pH值
释放度
/μg·cm －2
综合
评分
1 1 1 1 0 1 6． 38(1) 55． 29(3) 5
2 1 2 2 1 0 7． 63(1) 70． 00(5) 7
3 1 3 3 1 0 7． 70(1) 77． 87(5) 7
4 2 1 3 2 2 7． 79(1) 51． 36(1) 6
5 2 2 1 0 2 5． 91(0) 67． 04(4) 6
6 2 3 2 2 2 6． 64(1) 69． 80(4) 9
7 3 1 3 0 2 6． 32(1) 48． 10(0) 3
8 3 2 2 1 3 6． 55(1) 57． 33(2) 7
9 3 3 1 1 2 5． 52(0) 57． 35(2) 5
K1 6． 33 4． 67 5． 33 － － － －
K2 7． 00 6． 67 6． 33 － － － －
K3 5． 00 7． 00 6． 67 － － － －
Ｒ 2． 00 2． 33 1． 67 － － － －
由极差 Ｒ可知，在试验范围内，卡波姆 － 940 和丙二醇的用
量对凝胶剂理化性质影响较大，而三乙醇胺的影响较小。通过方
差分析结果表明影响因素卡波姆 － 940，丙二醇和三乙醇胺的用
量影响差异有统计学意义，其优选最佳工艺条件为 A2B3C3，即
每 100g凝胶剂中垂盆草汁 40． 0g，薄荷油 5． 0g，卡波姆 － 940
1． 5g，丙二醇 25． 0g，25% 三乙醇胺 20． 0g，甘油 5． 0g，蒸馏水
3． 5g。
表 7 方差分析结果
方差来源 偏差平方和 自由度 F比值 F临界值 显著性
A 6． 89 2． 00 0． 21 19． 00 *
B 0． 22 2． 00 0． 01 19． 00 *
C 4． 22 2． 00 0． 13 19． 00 －
误差 33． 22 2． 00 －
2． 3． 3 验证试验 按优选处方平行制备 3 批垂盆草凝胶剂，3 批
样品外观、粘稠性、pH值与正交试验各工艺比较相对较好，验证
试验表明该优选处方配比合理、重复性良好，稳定可行。
2． 4 垂盆草凝胶剂中槲皮素，山柰素，异鼠李素的含量测定 制
备三批垂盆草凝胶剂，按“2． 1． 1”项下色谱条件条件测定其槲皮
素，山柰素，异鼠李素的含量。结果见表 8。
表 8 样品含量测定结果 μg·g － 1
试验号 槲皮素 山柰素 异鼠李素 总量
1 3． 16 1． 72 1． 85 6． 72
2 3． 02 1． 70 1． 89 6． 61
3 2． 98 1． 61 1． 83 6． 42
n =3
3 讨论
药材鲜用一直是我国中医药的重要组成部分，是中医治病的
特色之一。民间常有将垂盆草鲜用捣敷或取汁外涂，用于蛇虫咬
伤、水火烫伤，皮肤痒疹，带状疱疹等，据文献报道垂盆草鲜草中
活性物质要高于晒干品和烘干品［8］，但垂盆草鲜草因采收季节、
保鲜、加工等因素的影响，致使其难以广泛使用［9］。以卡波姆 －
940 为基础的水溶性凝胶剂具有释药迅速，能吸收组织液渗出，
生物相容性好等多种优点［10］，故本研究选用卡波姆 － 940，丙二
醇，三乙醇胺作为基质加入鲜垂盆草汁制成水溶性凝胶剂，为垂
盆草鲜用提供了一条新的途径。
处方中加入少量薄荷油能够增强垂盆草凝胶清凉止痒，抗炎
镇痛的作用，舒缓皮肤不适，同时薄荷油具有较好的促渗透作用
和防腐作用，既能够提高凝胶剂的稳定性又能促进鲜垂盆草凝胶
的透皮吸收。垂盆草中主要含有糖类、黄酮类、三萜类等成分，其
中黄酮类成分是垂盆草中重要抗炎活性成分［11］。为控制垂盆草
凝胶剂中黄酮的含量，本研究选取槲皮素、山柰素、异鼠李素三种
成分作为指标性成分对其进行质量控制。
实验中卡波姆的用量对药物释放具有阻滞作用且随着卡波
姆用量的增加。故本实验中采用卡波姆用量为 1． 5%，其释放效
果要优于用量 2． 0%。丙二醇作为促渗透剂和助溶剂，在用蒸馏
水溶胀卡波姆 940 的同时加入丙二醇可以使卡波姆 940 溶胀更
彻底且更易搅拌均匀，当丙二醇用量增加时，药物释放速度明显
增加，故本实验采用 25%的丙二醇用量。三乙醇胺作为 pH调节
剂，并可以控制凝胶剂的粘稠程度，但直接加入难以控制其用量，
故本实验将三乙醇胺稀释至 25%使用。
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 9