全 文 ：[ 收稿日期] 　2006-06-16
[ 基金项目] 　国家科技部科研课题(99-929-01-34)
[ 通讯作者] 　＊熊玉兰 , Tel:(010)84076822
垂盆草小麦黄素苷体外对正常小鼠
淋巴细胞增殖的影响
熊玉兰1＊ ,王彦礼1 ,孙建辉1 , 魏太明2 , 阎玉凝2 , 张思巨1 ,周钟鸣1
(1.中国中医科学院中药研究所 ,北京 100700;2.北京中医药大学中药学院 ,北京 100013)
　　[ 摘要] 　目的:观察垂盆草小麦黄素苷对小鼠脾脏 T 、B 淋巴细胞转化增殖的影响。方法:采用小鼠脾细胞3H-TdR 掺入
法 ,用刀豆球蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)刺激 ,测定掺入细胞 DNA中3H-TdR的放射性相对数量(cpm)。结果:小麦黄素苷 100 ,
10 , 1μg mL(终浓度)对 T淋巴细胞的 cpm 数有非常显著的抑制作用(均 P <0.001);小麦黄素苷 100μg mL对 B 淋巴细胞的 cpm
数有非常显著的抑制作用(P<0.01)。结论:垂盆草小麦黄素苷能明显抑制正常小鼠脾脏 T、B 淋巴细胞增殖。
[ 关键词] 　垂盆草小麦黄素苷;免疫;抑制
[ 中图分类号] 　R285.5　　[文献标识码] 　B　　[ 文章编号] 　1005-9903(2006)10-0029-03
The Influence of Sedum sarmentosum Tricin-glucoside to
Lymphocyte Proliferation of Normal Mice in vitro
XIONG Yu-lan1 ,WANGYan-li1 , SUN Jian-hui 1 ,WEI Tai-ming2 , YAN Yu-ning2 , ZHANGSi-ju1 , ZHOU Zhong-ming1
(1.Institute of Chinese Materia Medica , China Academy of Chinese Medical Sciences , Beijing 100700 , China;
2.The College Of Traditional Chinese pharmacy , Beijing University
of Traditional Chinese Medicine ,Beijing 100013 , China)
[ Abstract] 　Objective:To observe the influence of sedum sarmentosum tricin-glucoside on proliferation of spleen T
and B lymphocytes of normal mice.Methods:Method of mixturing 3H-TdR to mice spteen cell was applied.After
stimulation with canavaline(ConA)or lipid polysaccharides(LPS), the radioactive relative quantity(cpm)of 3H-TdR in
DNA in spleen cell.Results:The dosages in 100 , 10 ,1μg mL(final concentration)of sedum sarmentosum tricin-ghcoside
had highly significant inhibition to cpm number of T lymphocyte(P <0.001);the dosage in 100μg mL of sedum
sarmentosum tricin-glucoside had highly significant inhibition to cpm number of B lymphocyte (P <0.01).Conchsions:
Sedum sarmentosum tricin-glucoside can obviously inhibit proliferation of spleen T and B lymphocytes of normal mice.
[ Key words] 　Sedum sarmentosum tricin-glucoside:Immunity;Inhibition
　　垂盆草(Sedum sarmentosum Bunge)为常用中药 ,
具有清热解毒 、利尿消肿 、排脓生肌之效 ,主治丹毒
溃疡 、小便不利等。现代研究表明 ,垂盆草不同提取
部位具有保肝 、降血清转氨酶 、抗菌和免疫(细胞免
疫及体液免疫)抑制作用[ 1 , 2] 。现从垂盆草中分离到
一种新的单体化合物 ———小麦黄素苷 ,我们研究了
该化合物体外对小鼠脾脏 T , B淋巴细胞增殖的影
响 ,报道如下 。
1　实验材料
1.1　动物　BALB C小鼠 ,雄性 ,体重 20 ～ 22g ,中国
医学科学院实验动物中心提供 。
1.2　药品与试剂　垂盆草产自安徽藿山 ,全草入
药 ,采用甲醇加二甲基酰胺超声萃取 ,小麦黄素苷得
率为 1‰,呈淡黄色粉末状 ,纯度为 96%以上 ,以二
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2006年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.12 , No.10
Oct., 2006
DOI :10.13422/j.cnki.syf jx.2006.10.015
甲基亚砜(DMSO)配制;阳性对照药环磷酰胺(cy)为
中美合资·山西泰盛制药有限公司产品 , 批号
000830;RPMI-1640培养基 、小牛血清为 GIBCO 公司
产品;3H-TdR由中国原子能研究院提供;ConA 、LPS
均为 Sigma 公司产品;96孔细胞培养板为丹麦 Nunc
公司产品 。
1.3　实验仪器　CO2 培养箱(YAMATO IP-31),日本
生产;倒置生物显微镜(XDS-IB),重庆光电仪器总公
司产品;多头细胞收集器(Titerlekcell Harvester-550)
英国生产;液体闪烁计数仪(LS-9800),美国 Beckman
公司产品 。
2　实验方法
2.1　对小鼠脾T 淋巴细胞增殖的影响[ 3] 　取 BALB
C小鼠 6只摘眼球放血处死 ,无菌条件下取出脾脏 ,
按每 15mg 加入 1mL 含 10%小牛血清的 RPMI-1640
培养液 ,在 200目不锈钢丝网上碾碎 ,制成混合脾细
胞悬液 。取 96孔培养板 ,每孔加入 100 μL(5×106
mL)细胞悬液 ,20 μL ConA(2μg 孔)及不同浓度小麦
黄素苷药液(用 0.2%DMSO 配制),另设环磷酰胺
(cy)阳性对照 ,0.2%DMSO溶剂对照和空白对照 ,每
孔终体积 180μL ,振荡混匀后置 5%CO2 , 37℃恒温培
养箱中培养 72h ,在终止培养前 24h ,每孔加入 20μL
3
H-TdR(3.7×104Bq 孔)。培养完毕 ,用多头细胞收
集器收集细胞于玻璃纤维滤膜上 ,并依次用蒸馏水 、
5%三氯醋酸 、无水乙醇抽滤洗涤 ,滤膜 80℃烘干后 ,
置盛有 5mL 闪烁液(2 , 5-二苯基恶唑-PP 0.4g ,
POPOP 0.3g ,二甲苯加至 1000mL)的测量杯中 ,测定
1min掺入的放射性强度(以 cpm 表示),每个浓度以
4复孔平均 cpm 值表示增殖水平 。
2.2　对小鼠脾 B 淋巴细胞增殖的影响[ 3] 　取
BALB C小鼠 5只摘眼球放血处死 ,无菌条件下取出
脾脏 ,按每 15mg加入 1mL 含 10%小牛血清的 RPMI-
1640培养液 ,在 200目不锈钢丝网上碾碎 ,制成混合
脾细胞悬液。取 96孔培养板 ,每孔加入 100μL(5×
10
6 mL)细胞悬液 ,20μL LPS(10μg 孔)及不同浓度小
麦黄素苷药液(用 0.2%DMSO 配制),另设环磷酰胺
(cy)阳性对照 , 0.2%DMSO溶剂对照和空白对照 ,
每孔终体积180μL ,振荡混匀后置 5%CO2 ,37℃恒温
培养箱中培养 72h ,在终止培养前 24 h ,每孔加入 20
μL 3H-TdR(3.7×104Bq 孔)。培养完毕 ,用多头细胞
收集器收集细胞于玻璃纤维滤膜上 ,并依次用蒸馏
水 、5%三氯醋酸 、无水乙醇抽滤洗涤 ,滤膜 80℃烘干
后 ,置闪烁液杯中 ,测定放射性强度 ,以每个剂量 4
复孔平均 cpm 值表示增殖水平。
2.3　数据统计　采用 t检验进行组间比较 。
3　实验结果
3.1　对小鼠脾脏 T 淋巴细胞增殖的影响　实验结
果见表 1。
表 1　小麦黄素苷体外对小鼠脾T 淋巴细胞增殖的影响
( x±s , n=4)
组别 ConA浓度(μg 孔)
药物终浓度
(μg mL)
闪烁计数
(min-1)
抑制率
(%)
不加ConA对照 — — 2572.8±1565.7 —
空白对照 2 — 188034.5±47883.8 —
溶剂对照 2 — 253341.0±10884.2 —
Cy对照 2 30 140848.5±10344.91) 44.3
小麦黄素苷 2 100 74558.3±10518.21) 70.7
小麦黄素苷 2 10 130176.3±11952.81) 48.6
小麦黄素苷 2 1 133549.3±6208.21) 47.4
　　注:与溶剂对照组比较:1)P<0.001 。
表 1所示 ,小麦黄素苷 100 ,10 , 1μg mL(终浓度)
3个剂量对小鼠 T 淋巴细胞增殖均有非常显著的抑
制作用(均为 P <0.001)。阳性对照药 cy 对小鼠脾
T 淋巴细胞增殖也有明显的抑制作用 。
3.2　对小鼠脾 B淋巴细胞转化增殖的影响　结果
见表 2。
表 2　小麦黄素苷体外对小鼠脾 B淋巴细胞
增殖的影响( x±s , n=4)
组别 LPS浓度(μg 孔)
药物终浓度
(μg mL)
闪烁计数
(min-1)
抑制率
(%)
不加 LPS对照 — — 1698.3±1755.9 —
空白对照 10 — 8036.5±995.8 —
溶剂对照 10 — 8235.5±1894.7 —
Cy对照 10 30 5616.0±773.5 31.8
小麦黄素苷 10 100 2819.8±1574.81) 65.8
小麦黄素苷 10 10 6744.8±2837.4 18.2
小麦黄素苷 10 1 6619.0±3083.8 19.7
　　注:与溶剂对照组比较:1)P<0.01 。
表 2所示 ,小麦黄素苷 100μg mL 对小鼠 B淋巴
细胞增殖有显著的抑制作用(P <0.01);10 , 1 μg
mL ,2剂量有抑制的趋势(P >0.05)。
4　讨论
用3H-TdR掺入法测定 T 、B淋巴细胞增殖功能 ,
其结果客观 、准确 、重现性较好 。因为 T 、B淋巴细胞
在体外培养时 ,受到特异性抗原或非特异性丝裂原
ConA或LPS刺激后发生增殖反应 ,细胞DNA合成大
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.12 , No.10
Oct., 2006
　　　
量增加 ,此时加入的3H-TdR被作为合成 DNA的原料
而摄入增殖细胞内 ,测定细胞3H-TdR的放射性强度
cpm 数 ,就能客观反映出 T 、B淋巴细胞对刺激剂的
应答水平 。
由于本课题组供给药理实验的小麦黄素苷药量
有限 ,目前只能进行小鼠体外 T 、B 淋巴细胞转化试
验。本实验研究观察到 ,从垂盆草中得到的成分小
麦黄素苷能明显抑制小鼠脾脏 T 、B淋巴细胞增殖 ,
提示小麦黄素苷对正常小鼠细胞免疫及体液免疫功
能均有抑制作用 。
目前 ,临床上常用的免疫抑制剂 ,通常是摧毁机
体免疫系统的某个环节来达到免疫抑制。如 cy 的
作用机制是与 DNA发生交叉联结 ,抑制 DNA 的合
成 ,也可干扰 RNA 的功能 ,其应用后可导致骨髓抑
制使白细胞减少 ,还有恶心 、呕吐 、脱发等一系列毒
副反应。因此 ,在中草药中寻找具有较强免疫抑制
作用而又没有明显毒副作用的免疫抑制剂是一个很
好的途径。如果将垂盆草小麦黄素苷开发成一种新
型的免疫抑制剂 ,无疑是很有价值的 。
[参考文献]
[ 1] 　黄泰康.常用中药成分与药理手册[ M] .北京:中国医药
科技出版社 , 1994.1245-1247.
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研究[ J] .中华微生物学和免疫学杂志 , 1982(3):145-
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[ 3] 　徐叔云 , 卞如濂 ,陈修.药理实验方法学[ M] .北京:人民
卫生出版社 , 2001.1420-1435.
[ 5] 　陈奇.中药药理研究方法学[ M] .北京:人民卫生出版
社 , 1993.707-709.
复合因素致脾虚证模型大鼠血中
胃肠激素含量的变化
王洪海 ,谢　鸣＊
(北京中医药大学国家重点学科方剂学学科 ,北京　100029)
　　[ 摘要] 　目的:观察脾虚证模型大鼠造模不同时间点血中胃肠激素含量的变化。方法:采用游泳劳倦加饮食失节法 , 大鼠
连续造模 3w , 自然恢复 1w。结果:与对照组比较 ,模型大鼠在造模 2～ 3w 出现明显饮食减少 、大便溏薄 、活动减少 、倦卧拱背等
改变;体重显著降低 , 第 4w 仍未见明显恢复;尿 D-木糖排泄率在第 2 , 3 , 4w 均显著降低;血清胃泌素(GAS)和胃动素(MTL)水平
第 3w 显著降低 , 自然恢复期显著升高;生长抑素水平于造模 1w 后明显降低 ,其余各点无明显变化;血管活性肠肽(VIP)水平 2w
时明显上升 ,第 3w 显著降低;P物质(SP)水平 3w 时显著降低;神经肽 Y(NPY)水平于 2 , 3w 时明显降低 , β-内啡肽(β-EP)水平于
4w 时明显降低。结论:该病因造模法造模 3w 可引起大鼠食少便溏 、倦怠少动等表现 ,同时体重降低 、尿 D-木糖排泄率降低以
及伴有多种胃肠激素的异常变化。
[ 关键词] 　脾虚证;动物模型;胃肠激素
[ 中图分类号] 　R285.5　　[文献标识码] 　B　　[ 文章编号] 　1005-9903(2006)10-0031-05
Gastroenteric Hormones Content Changes of Blood in Model Rat of
Spleen-qi Deficiency Made by Compound Factors
WANG Hong-hai , XIE Ming＊
(Department on Formulaology , Beijing University of Chinese Medicine , Beijing 100029)
[ 收稿日期] 　2006-03-15
[ 基金项目] 　“ 211”基金资助项目。
[ 通讯作者] 　＊谢鸣 , Tel:(010)64286992;E-mai l:xieming603@263.net
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2006年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.12 , No.10
Oct., 2006