全 文 ：浙江科技学院学报 , 第 巧 卷增刊 , 2 0 3 年 1 月
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凹叶景天的生理活性成分研究
乔剑峰 , 胡 伟 , 李祖光 , 胡 宝祥 ,王 瑾
(浙江工业大学 化学工程与材料学院 , 浙江 杭州 31 0 14)
摘 要 :采 用 自建保肝 药物 筛选新模型对中草药凹叶 景天 的 生 理活性部位进行跟踪测 试 , 并对其生 理 活性 成分进
行 了分 离 、鉴 定 。
关键词 : 凹叶景天 ;保肝 ; 生理活性成分
中图分类号 :肠58 文献标识号 : A 文章编号 : 1671 一 8 7 98( 2 0() 3) so 一 印 26 一 03
凹叶景天为景天属植物凹叶景天 ( tS ed u m Em a isr n at u m iM go )的全草 ,性味性平 , 味微酸 。 主治肝炎 ,疙
毒 ,痢疾 , 痈疥 ,吐血 ,哑血 ,血崩 ,跌打损伤等症 ; 具清热解毒 ,止血利湿之功效川 。 江南民间用其治疗肝炎效
果显著 ,但是其化学成分的研究在国内外尚未见文献报道 。
实验部分
1
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1 仪器与试剂
仪器 : G c 38 0 / M s Sat u m 20 0 气相色谱 一质谱联用仪 ,配有液体化学源 (色谱级乙睛为化学电离反应试
剂 ) (美国 v iar an 公司 ) ;红外分光光度计 (美国尼高力公司 ) ; 紫外分光光度计 (美 国 v iar an 公 司 ) ;高效液相
色谱 (美国 v iar an 公司 ) ;气相色谱仪 (温岭福立仪器厂 ) ;
药材 : 凹叶景天采自杭州天 目山 , 经浙江中医学院资源鉴定科陈锡林教授鉴定 ; 试剂 : 四氯化碳 ,氯仿 ,
乙酸乙酷 ,正丁醇 , 乙醇 (以上试剂均为分析纯 ) , 以及联苯双酷 (购之药店 ) 。
1
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2 生理活性部位的测试方法
在参考活体小白鼠实验模型 ,细胞器实验模型和酶解游离肝细胞法川 的基础上 , 自建了生理活性部位的
测试方法模型 。
( l) 试验环境条件 : 室温 不透光 密封 (模拟人体内部环境 ) 。
( 2) 实验过程 : 取相同小瓶若干分别加等量试验药物 ,有效药物对照组加联苯双醋 , 空白对比组加等量溶
剂 ; 在各组中加等量致伤剂四氯化碳 ;从猪肝内部取一小块新鲜部位 , 把其切成若干相等薄片 , 分别加入到各
组 ; 取出肝切片居中切成对半 , 比较肝切片损伤程度 。
( 3 )实验结果分类 : V G ( v e叮 g o do ) G (卿d ) M ( me d i u m ) B ( b a d ) v B ( v e叮 b a d )
1
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3 活性成分提取分离
按文献 「3〕用预实验试剂对 中草药凹叶景天进行系统有效成分预实验 , 以生理活性成分的提取分离及生
理活性部位的跟踪测定指导 ,结合有效成分预实验及 HPCL 结果 , 经过对 3 种不同的分离提取系统的 比较 ,
对提取物经多次分离条件优化选择 ,选出了较优的分离提取系统 (见图 l ) ,对每一步的分离部位进行活性跟
收稿 日期 : 2X() 3 一 o 一 or
作者简介 : 乔剑峰 l( 97 8一 ) ,男 , 在读硕士研究生 , 浙江工业大学医药科技协会副会长 。 李祖光 ( 19 71 一 ) ,男 , 江西上饶 人 ,
副教授 , 博士 , 主要从事分析化学的教学和科研工作 , 已发表学术论文 40 余篇 (其中 S cl 或 EI 收录 10 篇 ) 。
增 刊 乔剑峰等 : 凹叶景天的生理活性成分研究
踪 ,最后再对活性部位进行柱色谱分离 。
2 结果与分析
2
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1 系统有效成分预实验
根据文献方法对中草药凹叶景天进行系统有效成分预实验 ,结果见表 1。
由表 1可知 ,酸化碘化秘钾显黄色加酸有沉淀说明有生物碱存在 ,斐林试剂变黄色加热有沉淀说明有糖
类或贰存在 ,用热乙醇有 肉色沉淀说明有蛋白质 ,酸化三氯化铁显棕褐色说明有酚类物质 , 2 一 4 一 二硝基苯
拼显黄色及氯仿浓硫酸下层变色说明可能有皂贰 。
表 1 有效成分预实验表
一一一几丽瓜痴 一 - -一嵌或现象 } 加入蕊前 ’结某鼓豌豪” ’
酸化碘化秘钾
斐林试剂
浓硫酸
酸化三抓化铁
醋配浓硫酸
黄 , 加酸有沉淀
变黄色加热有沉淀
浅黄色
棕褐色
黄色
2 一 4 一 二硝基苯脐
铁氰化钾
氯仿浓硫酸
氢氧化钾
黄色
茶黄色
下层变色
浅黄色
2
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2 提取的活性部位
经过对 3 种不同的分离提取系统的比较 ,对提取物经多次分离条件优化选择 ,选出了较优的分离提取 系
统 ,按优化的 60 % 的乙醇分离提取系统 (见图 1 ) ,对每一步的分离部位进行活性跟踪 。 不同提取部位的活性
比较见表 2 。
热水提取
凹
叶
景
天
全
草
图 1 活性部位的提取分离流程图
表 2 提取的生理 活性部位跟踪测试表
提取部位
水提取液
60 % 乙醇提取液
肝切片形态 肝切片形态
Me
VG
BcVcv
流分 l
流分 2
流分 3
流分 4
联苯双醋组
提取部位
氯仿层
乙酸 乙醋层
正丁醇层
水层
各中间层混合
不溶物
空 白对照组
由表 2 可知 , 60 % 乙醇提取了大部分有效成分 , 60 % 乙醇提取液过弱极性柱后流分 1 和流分 2 都显示了
很强的活性 ,把这两部分合并 , H PL C 表明此部分包含不 同极性的化合物 , 所以依次用不同极性的溶剂萃取 。
浙江科技学院学报 第 巧 卷
水层和各 中间层混合都显示出很强的活性 , 由于各中间层混合量很少 ,故暂不对其进行分离 ,仅对水层中的
生理活性成分作进一步分离 。
2
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3 活性部位有效成分预实验
预实验试剂对的活性部位的有效成分预实验结果见表 3 。
表 3 预实验试剂对分离系统 C 的活性部位的有效成分预实验表
加人试剂 结果或现象 加人试剂 结果或现象
斐林试剂 无变化 , 酸化加热有铜色沉淀 … 明胶 无反应浓硫酸 浅黄色
1
冷乙 醇 变浑浊 , 井有不酬分
二氯化铁 一 铁氰 化钾 墨绿色 … 热乙 醇 有不溶
酸化三 氯化铁 浅黄绿色 … 冷水 溶
由表 3 可知 , 由于加入斐林试剂沸水浴无变化 ,所以无还原糖昔 ;酸化加热有沉淀说明有贰类存在 结
合系统预实验和提取分离路线 , 确定活性成分为贰类化合物 :
2
`
4 生理活性部位的分离
生理活性部位的成分分离采用柱色谱分离 ,用高效液相色谱 ( HPL )C 检测分离成分的纯度 。 提取的活 嵘
部位经旋转蒸发仪浓缩后析出大量晶体 ,加乙醇 ,滤取不溶的方状晶体 工 ( 呷 > 30 飞 , 紫外 人 二 2 54 n m 基本
无吸枚 ) 。 乙醇溶部分过弱极性 柱后 , 乙醇洗脱部分再过聚酸胺柱 ,梯度洗脱 ,在水洗部分得 晶体 n ( mp >
30 0 飞 ,紫外 几 二 2 54 n m 基本无吸收 ) ,在乙醇洗脱部分得膏状物 3 。
2
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5 分离成分的波谱鉴定
用气相色谱 一 质谱仪和红外分光光度计对分离成分进行了波谱鉴定 , 晶体 上 , 晶体 1 经红外测定 ,计算
机标准谱库检索 , 均鉴定为无机硝酸盐 。 膏状物 3 经质谱 ,红外测定 ,质谱 M ST 标准谱库及红外标准谱库检
索结合人工检索又 ’ 〕 ,初步鉴定为氨基糖昔类抗生素新霉素 。
3 小 结
本研究用活性筛选模型优化了分离提取系统 ,确定 了生理活性部位 ,并确定生理活性成分为贰类 ,还用
聚酞胺柱分离得到一个氨基糖昔类化合物 。 我们认为 , 凹叶景天中大量的无机硝酸盐成分可能是该植物具
有罕见的生命力 (放置一个月还有生命 )的一个原因 ; 而该 中草药对疤毒 ,痢疾 ,痈疥等证有效可能与其 中存
在氨基糖昔类抗生素有关 。
参考文献 :
】 浙江 民间中草药 〔M〕 . 杭州 :浙江 出版社 , 1982 .
2
〕 吕圭源 , 王 涛 . 中药新产品开发学〔M〕. 北京 :人民卫生出版社 , 19 7 .
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4 陈允魁 . 红外吸收光谱法及其应用【M 〕. 上海 : 上海交通大学出版社 , 19 93 .
5 丛浦珠 质谱学在天然有机化学中的应 用 [ M」. 北京 :科学 出版社 , 19 87 .
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