全 文 ：2010年 11月　第 12卷　第 11期 中国现代中药 ModernChineseMedicine Nov.2010　Vol.12　No.11
药理研究
■ [基金项目 ] 　河北省科技厅项目(062761955)
[通讯作者 ] 　＊李清 , E-mail:lqlqlqlqlq5@126.com
垂盆草不同提取物急性毒性实验■
李清＊ , 刘姣 , 曹秀莲 , 由会玲 , 张雪静
(河北医科大学中医学院 , 河北　石家庄　050091)
[摘要 ] 　目的:观察垂盆草不同提取物的急性毒性反应。方法:经预实验 , 垂盆草水提物以最大浓度及最大
给药体积的药液连续给小鼠灌胃 2次 , 间隔 7h, 继续观察 14d, 记录小鼠毒副反应情况 , 计算最大耐受量及耐受量
倍数;垂盆草醇提物按文献方法测定 LD
50
。取小鼠 50只随机分为 5组 , 每组 10只 , 以 360g生药·kg-1(相当于临床
单日剂量的 600倍)为最高剂量 , 按 1∶0.83的剂间比例 , 分别给 5组小鼠灌胃给药 2次 , 间隔 7h(给药剂量分别为
360, 300, 250, 207, 172g生药·kg-1) 1次 , 常规饲养观察 14 d。记录小鼠毒性反应及死亡情况 , 按改进寇氏法公
式进行计算。结果:垂盆草水提物的 MTD为 206.892 g·kg-1·d-1 , 该剂量相当于人体推荐服用量 344.82倍;垂盆草
醇提物的 LD
50
为 208.305g·kg-1。结论:垂盆草提取物无明显毒性 , 认为临床常用量是安全可行的。
[关键词 ] 　垂盆草;小鼠;急性毒性试验
景天科植物垂盆草 SedumsarmentosumBunge是
历版 《中国药典 》 收载的常用中药之一 , 味甘 、
淡 , 性凉。具有利湿退黄 , 清热解毒的功能。用于
湿热黄疸 , 小便不利 , 痈肿疮疡[ 1] 。目前 , 垂盆草
的应用已经比较普遍 , 对垂盆草的研究主要是临床
方面 , 基础研究不是很深入 。据此 , 笔者对垂盆草
提取物的急性毒性进行了初步研究 , 为其临床安全
应用提供药理学依据 。
1　材料
1.1药物与试剂
垂盆草干品 , 购自石家庄乐仁堂连锁药店 , 经
河北医科大学中医学院由会玲副教授鉴定为正品。
垂盆草提取物 (ExtractofSedum sarmentosum
BungeESB)的制备:醇提物(ESB-Ⅰ):将 400g药材
常规加工粉碎后 , 用 70 %乙醇回流提取 2次 , 每次
1 h, 合并提取液。提取液用旋转蒸发仪浓缩至无醇
味 , 蒸馏水配制成浓度为 6g生药·mL-1溶液 , 置冰箱
备用 。水提物(ESB-Ⅱ):垂盆草 250g, 加水至没过药
面加热 , 水沸后煎煮 20min, 趁热过滤 , 蒸发浓缩至
3.448 2g生药·mL-1 , 置冰箱备用。乙醇为分析纯(天
津市北方天医化学试剂厂 , 批号 070820)。
1.2动物
昆明种小鼠 , 清洁级 , 18 ～ 22 g, 雌雄各半 ,
由河北省实验动物中心提供 。实验动物使用许可证
号 SCXK(冀)2008-1-003, 合格证编号 904124。
2　方法与结果
2.1预实验
选取昆明种小鼠 40只 , 体重(20 ±2)g, 随机
分成 2组 , 每组 20只 , 雌雄各半。禁食 12 h, 自由
饮水 。垂盆草醇提物 (ESB-Ⅰ )和垂盆草水提物
(ESB-Ⅱ)配制成最大浓度(6 g生药·mL-1 , 3.448 2
g生药·mL-1), 按最大体积 0.3 mL·(10g)-1容量灌
胃 2次 , 间隔 7 h, 使其日累计量达到 360 g·kg-1 ,
206.892g·kg-1 , 连续观察 7 d内动物的一般状态 、
行为及死亡情况 , 每天称取其体重及进食量。若死
亡数≥30 %, 则测定半数致死量(LD50), 否则测定
最大耐受量(MTD)。预实验具体结果见表 1。
表 1　垂盆草提取物预实验结果
组别 性别 剂量 /g·kg-1·d-1
体重 /g
给药前 给药后
死亡数
/只
水提物 1 雌性 206.892 22.4±1.10 27.18±3.55 0
水提物 2 雄性 206.892 19.18±2.92 23.41±2.70 0
醇提物 1 雌性 360 24h死亡 24h死亡 10
醇提物 2 雄性 360 24h死亡 24h死亡 10
注:n=10
小鼠灌胃给予垂盆草水提物(ESB-Ⅱ)后 , 7 d
内未见死亡 , 且精神与活动状态亦无异常 , 故按照
《中药新药审批办法 》 的要求进行其最大耐受量
(MTD)的测定。小鼠灌胃给予垂盆草醇提物(ESB-
I)后 , 出现死亡 、 毛色无光泽 、 倦怠 、 饮食量明显
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DOI :10.13313/j.issn.1673-4890.2010.11.011
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减少等中毒症状 , 需进行半数致死量(LD50)测定。
2.2垂盆草醇提取物 0%致死剂量与 100%致死剂量
的确定
　　取小鼠数只 , 雌雄各半 , 随机分组 , 每组 4只 。
实验前禁食 12 h, 自由饮水。将垂盆草醇提物备用
液用蒸馏水稀释成数个浓度 , 按 1∶0.7的剂间比例 ,
每鼠按 0.3 mL·(10g)-1容量灌胃 2次 , 间隔 7 h。
连续观察 7 d, 找出 0 %致死剂量和 100 %致死剂
量 。经预实验得出 , 垂盆草醇提物 0 %致死剂量为
176.4 g生药·kg-1 , 100 %致死剂量为 360 g生药·
kg-1。根据上述结果确定正式实验分 5个剂量组 ,
按公式 r=(N-1) Dn/Dm求出剂量比(式中 N为
分组组数 , Dm是估计 100 %死亡的致死量 , Dn是
估计 0 %的致死量 , r为比值), r=0.83。
2.3垂盆草醇提物(ESB-I)半数致死量(LD50)的
测定[ 2]
　　按文献 [ 3]方法进行 , 本实验的药物浓度采用
“低比稀释法 ” 配置 , 取体重 18 ～ 22 g小鼠 50只 ,
按体重随机分为 5组 , 每组 10只 , 雌雄各半 , 换算
成原生药量 360g·kg-1(相当于临床单日剂量的 600
倍)为最高剂量 , 按 1∶0.83的剂间比例 , 分别给 5
组小鼠灌服药液 (给药剂量分别为 360, 300, 250 ,
207, 172g生药·kg-1), 给药前禁食不禁水 12 h,
常规饲养观察 14d。记录小鼠毒性反应及死亡情况 。
实验完毕 , 清点各组死亡数和死亡率(P), 实验中
出现相邻剂量有重复的 100 %和 0 %反应率时 , 靠
边的组弃去不计 。按改进寇氏法公式 LD50 =lg-1
[ Xm-i(΢P-0.5)] (g·kg-1)进行计算 。
高剂量组小鼠给药 1 h后自主活动开始减少 ,
精神萎靡 , 弓背竖毛 , 对外界刺激反应迟钝 , 拒食 ,
直至呼吸抑制死亡 , 动物死亡一般在给药后 12 ～
48 h。剂量越高出现时间越早 , 症状越明显。存活
动物中毒症状到第 2 ～ 3天后基本消失。用改良寇氏
法计算小鼠的半数致死量(LD50), 结果见表 2。
表 2　垂盆草醇提物组 LD50测定
组别 剂量 /g·kg-1· d-1 logd(X)
死亡数
/只
死亡率
(P) P2
醇提物 1 360 2.556 3 10 1.0 1.00
醇提物 2 300 2.477 1 10 1.0 1.00
醇提物 3 250 2.397 9 9 0.9 0.81
醇提物 4 207 2.316 0 6 0.6 0.36
醇提物 5 172 2.235 5 0 0 0 　
X50 =2.318 7　i=0.079 2; ∑P=2.5 ∑P2 =2.17
　注:n=10
　　经公式计算得 LD50 =208.305 g·kg-1 , Sx50 =
0.015 2;LD50的 95 %可信限为 194.49 ～ 223.10 g·
kg-1;LD50的平均可信限为(208.305±14.31)g·kg-1。
2.4最大耐受量(MTD)的测定
选取昆明种小鼠 20只 , 体重(20±2)g, 雌雄各
半 , 禁食不禁水 16 h, 以 ESB-Ⅱ的最大浓度 (6 g·
mL-1 , 3.448 2 g·mL-1), 按最大体积 0.3 mL·
(10g)-1容量灌胃 2次 , 间隔 7 h, 连续观察 14 d内动
物的一般状态 、行为及死亡情况 , 每天称取其体重及
进食量。如有死亡 , 则以刚不出现死亡组为准 , 此时
的用量即为小白鼠的最大耐受量。并按公式计算出耐
受量倍数 。以耐受人用量口服 100倍以上为安全 。计
算公式:小鼠的最大耐受量倍数 =(每只小鼠的耐受
量 /小鼠平均体重 20g) ×(成人平均体重 50 000g/成
人每日用量 30g)倍。
观察指标:行为活动(包括不正常叫声 , 烦躁 ,
窜跑 , 少动等);肌肉运动 (包括肌肉抽搐 , 僵硬 ,
强直 , 松弛 , 麻痹 , 共济失调等);植物神经系统反
应:有无竖毛 , 流泪 , 流涎 , 凸眼 , 腹泻 , 扭体等;
呼吸及心血管:呼吸状态 , 鼻分泌 , 触心前区心率
快慢等;胃肠方面:腹部胀气或收缩 , 大便性状和
色泽等;皮肤颜色:有无充血 , 紫绀 , 苍白 , 发疹
等;眼:瞳孔是否缩小或放大 , 有无限脸下垂 , 眼
球突出 、 震颤等。
小鼠灌胃给予 ESB-Ⅱ后 , 7 d内未见死亡 , 且
精神与活动状态亦无异常 , 故小鼠灌胃的 MTD为
206.892g·kg·d-1。临床上成人服用 ESB的剂量为
30g·(50kg)-1·d-1 =0.6 g·kg·d-1 , 由公式计算[ 2]
得 ESB-Ⅱ的最大安全耐受量倍数为 344.82倍 , 该剂
量相当于人体推荐服用量 344.82倍 , 提示 ESB-Ⅱ提
取物无明显毒性 , 认为是安全可行的。
3　讨论
急性毒性试验是在 1d内单次或多次(2或 3次)
对动物给药后 , 在 14 d内连续观察动物所产生的毒
性反应及死亡情况 。急性毒性实验中如受试药物引
起动物死亡 , 应测定药物毒性反应与剂量的关系 ,
通常进行 LD50测定;当受试药物测不出 LD50时 , 可
以做 1次或 1d内数次给药的最大耐受量实验来考察
动物的急性毒性情况。笔者在实验中测定出垂盆草
醇提物的 LD50为(208.305±14.31)g·kg-1。在垂盆
草水提物测不出 LD50的情况下 , 为了充分证实其急
性毒性 , 进行了 1 d给药 2次的最大给药量实验 ,
MTD相当于成人临床日用量的 344.82倍 , 结果表明
动物完全能耐受 , 未出现任何毒性反应。以上实验
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结果表明 , 垂盆草水提取物及醇提取物的急性毒性
都很小 。但急性毒性实验仅 1次或数次给药 , 观察
时间较短 , 故还应结合长期毒性实验的毒性表现及
多种检查结果综合分析评价其毒性。
参考文献
[ 1] 国家药典委员会 .中国药典(一部)[ S] .北京:中国医药
科技出版社 , 2010:198-199.
[ 2] 陈奇 .中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出版
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[ 3] 金雪萍 .林檎叶提取物急性毒性实验研究 [ J] .食品与机
械 , 2004, 20(2):16-17.
(收稿日期　2010-06-29)
AcuteToxicityReactionofDiferentExtractsfromSedumsarmentosumBungeonMice
LiQing, LiuJiao, CaoXiulian, YouHuilin, ZhangXuejing
(TraditionalChineseMedicalColege, HebeiMedicalUniversity, Shijiazhuang　Hebei　050091, China)
[ Abstract] 　Objective:ToobservetheacutetoxicityreactionofdiferentextractsfromSedumsarmentosum
Bungeonmice.Methods:Throughthepre-experiment, MicewereadministeredaqueousextractofSedumsarmento-
sumBungebyirigatinggastric(ig)withthehighestconcentrationandthelargestvolume　for2times, 7hinterval,
andwereobservedonthesituationofacutetoxicityinthesuccessive14days, andtomeasurethemaximumtolerance
dose(MTD).MedianLethalDose(LD50)oftheethanolextractofSedumsarmentosumBungewasmeasuredbylitera-
turemethod.50micewererandomlydividedintofivepharmaceuticaldosegroups, tenmiceeachgroup, set360g·kg-1
(equivalenttoclinicaldailydosesof600times)asthehighestdosesaccordingtothe1∶0.83betweenproportion, (Ad-
ministrationdosagerespectivelyare360, 300, 250, 207, 172g·kg-1).Micewereadministeredalcoholextractionof
SedumsarmentosumBungebyirigatinggastric(ig)for2times, 7 hinterval, andwereobservedonthesituationofa-
cutetoxicityinthesuccessive14 days.ToxicityanddeathrecordsofmicearemeasuredbyimprovedKarbermethod.
Results:Themaximumtolerance(MTD)doseofaqueousextractofSedumsarmentosumBungeaftertheacutetoxicex-
perimentwasnotlessthan206.892 g·kg-1·d-1 , whichwasequalto344.82 timesofaducts′oraldoseperday.the
LD50 ofthealcoholextractionofSedumsarmentosumBungeis208.305g·kg-1.Conclusion:ExtractsfromSedumsar-
mentosumBungehavelitleacutetoxicinmice.Theyarerelativelysafe.
[ Keywords] 　SedumsarmentosumBunge;Mice;Acutetoxicity
(上接第 16页)
TestingMethodsofGerminationandViabilityofLeonurusjaponicusHoutt.Seed
LiWeidong1, 2 , WangSonghan1, 2 , YuFulai1, 2 , HuXuan1, 2 , XingDan1, 2 , WangWenquan1, 2
(1.SchoolofChinesePharmacy, BeijingUniversityofChineseMedicine, Beijing　100102, China;
2.EngineeringResearchCenterofGoodAgriculturalPracticeforChineseCrudeDrugsofEducation
Ministry, BeijingUniversityofChineseMedicine, Beijing　100102, China)
[ Abstract] 　Objective:TodeterminethebesttestingmethodsofgerminationandviabilityofLeonurusjaponi-
cusHout.seed.Methods:Thebestseedgerminationconditionsdeterminedbytheefectofthediferentgermina-
tionbedsandtemperatureongerminationrate, germinationpotential, andgerminationindex;thebestseedviability
testingmethoddeterminedbytheefectofTCCconcentration, dyetime, andtemperatureonseeddyerate.Results:
Thebestseedgerminationconditionsweretemperature25 ℃ andfilterpaperasgerminationbed;thebestseedvia-
bilitytestingconditionswereTCCdyetime5 h, TCCconcentration0.2 %, andtemperature35 ℃.Conclusion:
ThesetestingmethodscouldprovidehelpsfortheestablishmentoftestingrulesandqualitystandardofLeonurusja-
ponicusHout.seed.
[ Keywords] 　LeonurusjaponicusHout.;Seed;Germinationrate;Viability;Testingmethods
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