全 文 ：刀 豆 及 其 伪 品 的 SDS -PAGE 鉴 别
吴 越 ,丁 晴(江苏省无锡药品检验所 无锡 214021)
摘要:目的 比较刀豆及其伪品常春油麻藤种子所含的蛋白质成分的差异。方法 采用 SDS -PAGE凝胶电泳法对刀豆及其伪品的蛋白成分
进行了分析比较。结果 根据所含蛋白质成分的不同 ,可以有效的区分刀豆及其伪品。结论 本法灵敏度高 ,区别明显 ,重复性好 ,操作简便 ,
可用于刀豆的鉴别
关键词:SDS-PAGE凝胶电泳;刀豆;鉴别
中图分类号:R931.71;R282. 5 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2007)07-0062-02
Identification of semen canavaliae and its adulterant by SDS - PAGE
WU Yue, D ING Q ing(Jiangsu Institute forD rug Contro l,Wuxi 214021, Ch ina)
ABSTRACT:OBJECTIVE To distinguish the pro tein between semen canava liae and its adulterant.METHODS
The SDS-PAGE me thod w as adopted to compare the diffe rence of semen canava liae and its adu lteran t.RESULTS
A ccording to the different pro te in ing redien t, semen canavaliae and its adu lte rant can easily be diffie rentiat-
ed.CONCLUSION The me thod is h ighly sensitive, w ith good accuracy and repea tability. It can be used in the i-
den tity o f semen canava iiae.
KEYWORDS:SDS - PAGE:Sem en canavaliae;Identification
刀豆 Canava liag lad ia ta( Jacq.)DC. 为少常用中药 , 始载
于《本草纲目》〔1〕 ,系豆科植物刀豆的干燥成熟种子。有温中
下气 , 益肾补元的功效 〔2〕。用于虚寒呃逆 、呕吐 , 肾虚腰痛 ,
痰喘等症。据报道 〔3〕 , 少数地区以同科植物常春油麻藤 M u-
cuna sempervirensH em sl.的种子代替刀豆入药。 王疏梅 、丁
晴等人 〔4〕曾对二者的性状 、显微及理化方面进行了比较鉴
别 , 但因为种子蛋白质是稳定的遗传表达产物 , 故本实验通过
SDS - PAGE凝胶电泳法对两者所含蛋白质进行了比较。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 伯乐 Pow erPac Basic电泳仪:伯乐 M ini P roteanⅢ
电泳槽;HN - 250型超声波清洗仪 (无锡市华能超声电子有
限公司 , 功率为 250W , 频率为 40KH z);10 ～ 100μL, 100 ～
1000μL移液枪(德国 B rand公司)。
1. 2 试剂 过硫酸铵 , 十二烷基硫酸钠 , TEM ED为华美生物
工程公司生产:考马斯亮蓝 R250, 甘氨酸 , 三羟甲基氨基甲
烷 , N, N′-亚甲基双丙烯酰胺 , 丙烯酰胺 , β -巯基乙醇 , 甘油
均为国药集团化学试剂有限公司生产。
1. 3 样品 刀豆 , 产于沂蒙山区;伪品刀豆 (常春油麻藤种
子),市售;均经无锡药品检验所中药室鉴定。
2 实验方法及结果
2. 1 试剂的配制与凝胶的制备 参照文献 〔5〕方法 , pH8. 3系
统制备凝胶及缓冲液 , 其中分离胶浓度 15%, 浓缩胶浓度
5%。
作者简介:吴越 , 女(1982 - )。毕业于南京工业大学。职称:药师。
联系电话:(0510)66112766
图 1 刀豆及常春油麻藤种子的 SDS - PAGE凝胶电泳(A)刀豆(B)常春油麻藤种子
2.2 样品的制备 取刀豆 , 常春油麻藤种子 , 研细 , 各取
50m g, 分别加入电极缓冲液 1m L,振摇并超声 20m in,离心 , 取
上清液加 2 倍量的 SDS 样品溶解液 (0. 02M pH8. 0的 T ris
30m L, SDS 2g,巯基乙醇 2mL, 溴酚蓝 0.04g, 甘油 20mL溶于
100mL水中), 置冰箱中裂解过夜。
2.3 电泳 装好胶板后 , 取各供试液于沸水浴中煮沸 3m in,
离心 10m in, 取上清液 5μL上样。维持恒定的电压 80V ,进入
分离胶后调至 150V, 待指示剂距前沿约 1cm时关闭电源 , 停
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海峡药学 2007年 第 19卷 第 7期
止电泳。
2. 4 染色脱色 取出胶板 ,放入染色液 , 染色过夜 ,然后用脱
色液脱色 , 直至背景无色为止。
2. 5 结果 刀豆 ,常春油麻藤种子的谱带的条数 、位置 、深浅
度有着明显的差异 , 结果(见图 1)。
3 小结
3. 1 从种子的蛋白色带可以看出 ,刀豆与伪品常春油麻藤种
子的色带有着明显的不同。因此 ,蛋白质电泳 , 可作为刀豆及
其伪品常春油麻藤种子的鉴别依据。
3. 2 凝胶电泳法 ,操作简便 , 药材用量少 ,是鉴别种子类药材
的质量及伪品的有效方法。
参考文献
〔1〕李时珍著 .《本草纲目》〔M 〕.(下册)人民卫生出版社 , 1982,
1522.
〔2〕肖培根 .新编中药志〔M〕第二卷 .北京:化学工业出版社 , 2002,
2, 8.
〔3〕浙江药用植物志编写组 .浙江药用植物志〔M〕.上册 .浙江科技
出版社 . 1980. 559.
〔4〕王疏梅 ,丁晴 .刀豆伪品常春油麻藤种子的鉴别〔 J〕.中国现代应
用药学杂志 .2001, 6, 18, 3.
〔5〕〔美〕J.萨姆布鲁克 , D.W.拉塞尔著 .分子克隆实验指南(第三
版)〔M〕.北京:科学出版社 , 2002.附录 .
荷 叶 的 显 微 生 药 研 究
黄泽豪 1, 2 ,张望斌 1 , 高华娟 1 ,吴锦忠 1 (1, 福建中医学院药学系 福州 350108;2, 复旦大学药学院 上海
200032)
摘要: 本文以福建 “建白莲 GAP基地 ”所产荷叶为实验材料 ,通过表皮制片及切片观察统计了 10种子莲的气孔类型 ,气孔指数 ,叶脉大维管束
中导管数目和通气腔数目等特征 ,为不同来源的荷叶建立显微生药鉴别依据。并且在应用计算机辅助绘图技术对荷叶中各种类型的气孔进行
描绘的基础上 ,探讨了该技术在显微生药研究中的优势及推广应用的可能。
关键词:荷叶;显微生药;气孔;计算机辅助绘图
中图分类号:R282.5 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2007)07-0063-03
荷叶是一味常用中药 , 来自睡莲科莲属植物莲(Nelumbo
Nucife ra)的干燥叶 〔1〕 , 主产于福建 、湖南 、湖北 、江苏 、江西 、浙
江等地。在 1991年 11月中华人民共和国卫生部的卫监发
(1991)第 45号文件中 ,荷叶被列入第 2批 “既是食品又是药
品”的名单之一 〔2〕。传统医学认为 , 荷叶苦平 、归肝 、脾 、胃 ,
具有清解暑热 、升发清阳 、凉血止血的作用。 《本草纲目》记
载 “荷叶服之 ,令人瘦劣” 。现代医学证明 , 荷叶中含荷叶碱 、
莲碱 , 又含黄酮苷类 、荷叶苷 、槲皮黄酮苷及异槲皮黄酮
苷 〔3、4〕。现代研究证实了荷叶具有一定的减肥降脂 、抑菌作
用 、抗氧化性等作用 〔5 ～ 8〕 ,得到了高度的重视和广泛的研究 ,
对荷叶的化学有效成分的提取分析 、药理研究 、临床应用 、食
用等方面已经有较多的研究 〔9、10〕 , 但迄今为止对荷叶的显微
生药学方面的研究较少 〔11、12〕。
我省是莲子的主产区 , 建莲是我省最为优良的地方品种 ,
目前已经建设了 “建白莲 GAP”基地 , 建莲子已经得到较为充
分的研究 , 但荷叶作为其副产品还缺乏研究。另外叶的构造
特征对种子的生产具有重要的影响 , 因此了解荷叶的显微结
构特征也是评价莲的种质资源的一个重要的参考指标。在国
作者简介:黄泽豪 (1976 - ),男 , 讲师 , 在读博士。 huangzeh ao@ fu-
dan. edu. cn
福建中医学院校管课题资助;福建省卫生厅青年基金资助 (2004 - 1
- 12);福建省重大科技项目资助(2002Y006)
内 ,莲子的栽培区域较广 , 不同的省区有不同的栽培品种 , 因
此对于来自不同栽培品种的荷叶 ,其显微生药特征也未见报
导。本研究针对收集栽培于 “建白莲 GAP”基地的湖北芙蓉
莲 、太空莲 36号 、太空莲 3号 、花牌莲 、建莲 、杂交莲 8236、湖
南芙蓉莲 、杂交莲 6236、杂交莲 363、赣莲 62等十多个品种进
行比较研究 ,对十种莲的新鲜立叶表面特征 、解剖结构进行显
微制片观察 ,旨在为建莲 GAP生产中的种质资源评价提供参
考 ,也为有效评价荷叶质量及开发荷叶资源提供依据。
1 材料与方法
1.1 供试材料 2004年 5 ～ 8月 ,材料来自栽培在福建建瓯
“建白莲 GAP”种源保存基地的湖北芙蓉莲 、太空莲 36号 、太
空莲 3号 、花牌莲 、建莲 、杂交莲 8236、湖南芙蓉莲 、杂交莲
6236、杂交莲 363、赣莲 62等 10种的荷叶;部分材料于 2004
年移载至福建中医学院中药圃及福建农林大学试验地。
1.2 方法 剪取立叶 , 自叶片的主脉间的部位撕取上 、下表
皮 ,用水合氯醛透化 , 上表皮用 50%番红乙醇溶液染色 , 装
片 ,观察并计算其气孔指数 ,气孔指数 =单位面积上的气孔数
×100 /(单位面积上的气孔数 +同面积表皮细胞数);下表皮
直接透化装片。过主脉位置做徒手切片 , 用水合氯醛透化装
片。
观察以上标本 , 并通过数码显微成像系统输入计算机 , 在
计算机中利用图像处理软件(如:ADOBE PHOTOSHOP)用鼠
标进行跟踪描绘。
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S tra itPharmaceutica l JournalVo l 19 No.7 2007