全 文 ：ChineseJournalofNewDrugs2010, 19(12)
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中国新药杂志 2010年第 19卷第 12期
[基金项目 ] 　国家 “十一五 ”科技支撑计划子课题(2006BAI06A01-
3);贵州省中药现代化科技产业研究开发专项基金 (黔科合中药专
字 [ 2005] 5039号)
[作者简介 ] 　何迅 ,男 ,副教授 ,主要从事质量控制及中药新药研究。
联系电话:(0851)6908568, E-mail:hexun224@gmc.edu.cn。
[通讯作者 ] 　王永林 ,男 ,教授 ,主要从事中药新药研究开发。联系
电话:(0851)6908899, E-mail:gywyl@gmc.edu.cn。
·实验研究·
羊耳菊药材中 4 , 5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量测定
何　迅 ,王爱民 ,李勇军 ,王永林 ,迟明艳
(贵阳医学院药学院 ,贵阳 550004)
　　[摘要 ] 　目的:建立羊耳菊药材中 4, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量测定方法 ,为其质量控制提供科学
依据。方法:采用 HPLC直接测定 ,色谱柱 EclipseXDBC18柱 ,保护柱为 SecurityGuardC18柱;流动相甲醇 -
0.1%磷酸 (28∶72);检测波长为 325nm。结果:测定了 13批不同产地市售的羊耳菊药材 , 4 , 5-O-二咖啡酰
基奎宁酸的含量在 0.12% ～ 0.55%之间。结论:该法方便 、快速 、准确 、重复性好 ,可以控制该药材的质量。
[关键词 ] 　羊耳菊;4, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸;高效液相色谱法
[中图分类号 ] R978.7;R927.2　[文献标志码 ] A　[文章编号 ] 1003-3734(2010)12-1084-03
Determinationof4 , 5-O-dicaffeoyl-quinicacidcontentin
HerbainulaecappaebyHPLC
HEXun, WANGAi-min, LIYong-jun, WANGYong-lin, CHIMing-yan
(SchoolofPharmacy, GuiyangMedicalColege, Guiyang550004, China)
[ Abstract] 　Objective:ToestablishthequalitystandardofHerbainulaecappaefordeterminingthe4, 5-O-
dicafeoyl-quinicacidwithHPLC.Methods:TheseparationwasperformedonaEclipseXDBC18 columnwithSe-
curityGuardC18 protectivecolumn.Themobilephaseconsistedofmethanoland0.1%phosphoric(28∶72), thede-
tectionwavelengthwassetat325nm.Results:Thecontentsof4, 5-O-dicafeoyl-quinicacidin13 samplesofHerba
inulaecappaeinmarketwereintherangesof0.12% ～ 0.55%.Conclusion:Themethodissimple, accurateand
reproducible, andissuitableforthequalitycontrolofHerbainulaecappae.
[ Keywords] 　Herbainulaecappae;4, 5-O-dicafeoyl-quinicacid;HPLC
　　羊耳菊为菊科植物羊耳菊 Inulacappa(Buch.-
Ham.exD.Don)DC.的新鲜或干燥全草 , 收载于
2003年版《贵州省中药材 、民族药材质量标准》。性
辛 、微苦 ,温 ,具有疏风散寒 ,解毒消肿之功能 ,临床
用于感冒发热 ,咽喉肿痛等症 [ 1] ,主要产于贵州 、广
西等地 [ 2 -4] 。以羊耳菊为君药的产品已上市销售多
年 ,羊耳菊以独特的疗效及我省少数民族地区长期
用药的基础 ,正越来越受到研究者的重视。在 03版
贵州药材标准中仅有性状和薄层色谱鉴别 ,没有相
关指标成分的含量测定 ,难以控制其质量。为了提
高羊耳菊药材质量控制标准 ,充分利用贵州羊耳菊
的丰富资源 ,为羊耳菊药材的再开发应用提供试验
依据。作者对羊耳菊药材的化学成分进行了研究 ,
从中分离出含量较高的 4, 5-O-二咖啡酰基奎宁酸 。
并以此作为质量控制指标 ,对羊耳菊药材中 4, 5-O-
二咖啡酰基奎宁酸的含量测定方法进行了研究 ,结
果方法专属 、简便 、准确 ,为控制和评价羊耳菊质量
提供科学依据。
材　　料
岛津 LC 10Avp高效液相色谱系统(包括二元
梯度泵 、紫外-可见光检测器 、 7725i手动进样阀 、
WML色谱工作站 ,广西威玛龙色谱科技公司);岛津
UV 2401PC紫外 -可见光分光光度计;TCQ 250
超声波清洗器(北京医疗设备二厂 ,功率 250 W;频
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率 19 ～ 33kHz)等。
不同地区市售羊耳菊药材共 13批 ,分别采自贵
州 、广西 、云南 、四川 。经贵阳医学院生药教研室鉴
定为植物 Inulacappa(Buch.-Ham.exD.Don)DC.的
新鲜或干燥全草;4, 5-O-二咖啡酰基-奎宁酸对照品
由贵阳医学院药物研究开发中心临床前药物研究所
制备 ,批号:20070503 ,经 1HNMR, 13CNMR, MS, UV,
IR等波谱鉴定为 4, 5-O-二咖啡酰基 -奎宁酸 ,采用
HPLC-DAD在多个波长检测其峰面积归一化结果
均 >98%;甲醇为色谱纯(美国 TEDIA公司),水为
纯化水。
方法与结果
1　色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:EclipseXDBC18柱(150mm×4.6mm, 5
μm,美国 Agilent公司),保护柱为 SecurityGuardC18
(4.0mm×3.0mm, 5 μm, Phenomenex公司);流动
相:甲醇-0.1%磷酸 (28∶72);流速:1mL·min-1;
柱温:40℃;检测波长:325 nm。理论板数按 4, 5-
O-二咖啡酰基 -奎宁酸峰计算应≥5 000,样品中 4 ,
5-O-二咖啡酰基 -奎宁酸与相邻峰达到基线分离 。
见图 1。
1为 4, 5-O-二咖啡酰基-奎宁酸
图 1　羊耳菊药材的 HPLC图谱
2　对照品溶液的制备
精密称取 4, 5-O-二咖啡酰基-奎宁酸对照品适量 ,
加甲醇溶液制成每 1mL含 0.204 8mg的对照品溶液。
3　供试品溶液制备
取本品粉末(过 40目筛)0.2g,精密称定 ,精密
加入 50%乙醇 25mL,称定重量 ,加热回流 2 h,放
冷 ,用 50%乙醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续
滤液作为供试品溶液。
4　线性关系考察
分别精密量取上述对照品溶液 0.5, 1, 2, 4, 8
mL置 10mL量瓶中 ,分别加甲醇溶液稀释至刻度 ,
摇匀。分别精密吸取 5μL,注入液相色谱 ,以峰面积
(Y)为纵坐标 ,进样浓度(X)为横坐标 ,绘制工作曲线
计算回归方程为:Y=27 812 343.5X-15 695.7, r=
0.999 9。结果表明 4, 5-O-二咖啡酰基-奎宁酸进样量
在 0.05 ～ 0.82μg范围内直线关系良好。
5　重复性试验
取同一批次羊耳菊药材 9份 ,分别按 0.15,
0.2, 0.25g各取 3份 ,精密称定 ,照 “ 3”项下方法制
备供试液分别测定 。 4, 5-O-二咖啡酰基-奎宁酸平
均含量为 0.274%, RSD为 1.32%(n=9),表明方
法的重复性良好。
6　精密度试验
在不同日期 ,以不同实验人员按 “重复性试验 ”
项下方法制备 9份供试品溶液 ,分别测定。第 1次
测定的平均值为 0.271%, RSD为 0.3%(n=9);第
2次测定的平均值为 0.278%, RSD为 1.2%(n=
9),说明方法的中间精密度良好 。
7　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,分别于 0, 1, 2, 4, 8h进样 ,结
果 4, 5-O-二咖啡酰基-奎宁酸峰面积平均值为 319 529,
RSD为 0.7%,表明供试品溶液在 8h内稳定。
8　耐用性试验
另取样品粉末按 “3”项下方法制备供试液 ,分
别以不同品牌的色谱柱进行测定 ,结果 Diamonsil
C18柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)分析的结果为
0.277%, RSD为 0.6%(n=3);HypersilC18柱(150
mm×4.6mm, 5μm)分析的结果为 0.281%, RSD为
1.1%(n=3);SymmetryC18柱(150mm×4.6mm, 5
μm)分析的结果为 0.279%, RSD为 0.3%(n=3)。
另外还以不同流动相比例 、不同柱温 、不同检测波
长等分别对供试品溶液进行了测定 。结果显示不
同分析条件对测定结果影响不大 ,表明方法的耐
用性较好 。
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9　回收率试验
分别精密称取已测定含量的羊耳菊药材
(0.274%)样品 9份 ,分别加入不同浓度的对照品储
备液 ,按 “3”项下方法制备供试液 ,测定 ,结果见表 1。
表 1　羊耳菊药材含量测定回收率试验结果
称量 /mg 含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD/%
106.3 0.291 3 0.241 0 0.539 0 102.8
101.8 0.278 9 0.241 0 0.517 2 98.88
104.5 0.286 3 0.241 0 0.522 5 98.01
108.2 0.296 5 0.456 0 0.769 4 103.7
105.5 0.289 1 0.456 0 0.734 8 97.74 100.5 2.2
102.4 0.280 6 0.456 0 0.744 8 101.8
103.9 0.284 7 0.824 0 1.106 8 99.77
100.4 0.275 1 0.824 0 1.116 9 102.2
103.2 0.282 8 0.824 0 1.106 1 99.92
10　样品测定
取不同产地羊耳菊药材 ,按 “3”项下方法制备
供试液 ,同时制备对照液 ,分别进样 ,记录色谱 ,测定
峰面积 ,计算药材含量 ,结果表 2。
表 2　13批不同产地羊耳菊药材
含量测定结果 n=3
产地 批号 含量 /% RSD/%
贵州罗甸 20060603 0.27 1.13
20060713 0.32 1.28
20070518 0.42 1.10
20080907 0.26 1.16
贵州惠水 20061014 0.23 1.79
20070611 0.55 1.73
20080624 0.22 1.16
四川成都 20070815 0.20 1.06
20080906 0.16 1.30
广西桂林 20070916 0.12 1.22
20080609 0.21 1.90
云南大理 20070603 0.32 1.08
20080804 0.44 1.06
讨　　论
据文献 [ 5 -6]报道 ,二咖啡酰奎宁奎酸类具有抗
炎 、抗病毒 、抗氧化 、抗纤维化等诸多药理活性;我国
第一个具有自主知识产权的抗乙型肝炎病毒和艾滋
病病毒药物 “二咖啡酰宁酸 ”临床前研究取得成功 ,
该药物已被国家食品药品监督管理局批准作为一类
新药进入 Ⅰ期临床研究。基于 4, 5-O-二咖啡酰基-
奎宁酸在羊耳菊药材含量较高且具有较好的抗炎 、
抗病毒等作用 ,是羊耳菊药材的活性成分之一 ,因此
本研究选择该化合物作为含测指标能客观评价羊耳
菊药材的质量。
通过紫外光谱扫描 , 4, 5-O-二咖啡酰基-奎宁酸
甲醇溶液在 223 nm处有最大吸收 ,故选择 325nm
为检测波长 。
在含量测定样品溶液制备中 ,分别考察采用甲
醇 、乙醇索氏提取 ,不同体积分数乙醇加热回流提取
和超声处理等提取方法 ,结果以 50%乙醇加热回流
提取的方法效果最佳。同时考察了以 50%乙醇加
热回流提取的时间 ,结果加热回流提取 2h可将羊
耳菊药材中 4, 5-O-二咖啡酰基 -奎宁酸提取完全。
本实验对市售的 13批羊耳菊药材进行了含量
测定研究 ,结果表明 ,不同产地药材含量差别较大 ,
以贵州惠水产羊耳菊药材含量较高 , 最高者达
0.55%,可能是受气候 、土壤 、生长期 、采收季节等因
素的影响有关。
[ 　参　考　文　献　]
[ 1] 　贵州省药品监督管理局编.贵州省中药材 、民族药材质量标准
[ S].2003年版.贵阳:贵州科技出版社 , 2003:176.
[ 2] 　国家中医药管理局 《中华本草 》编委会.中华本草 [ M] .第 7
版.上海:上海科学技术出版社 , 1999:866.
[ 3] 　江苏新医学院主编.中药大词典 [ M] .上册.上海:上海科学
技术出版社 , 1996:698-699.
[ 4] 　中国药品生物制品检定所.中国民族药志(第二卷)[ M] .北
京:人民卫生出版社 , 1990:215-220.
[ 5] 　李祖晟 ,朱志安.二咖啡酰奎宁酸药理实验研究进展 [ J] .医
学综述 , 2004, 10(4):249-251.
[ 6] 　PELUSOG, DEFEOV, DESIMONEF.Studiesontheinhibitory
efectsofcafeoylquinicacidsonmonocytemigrationandsuperox-
ideionproduction[ J] .JNatProd, 1995, 58(5):639-641.
编辑:周卓 /接受日期:2009-09-25