全 文 :[药 理]
白子菜提取物对 SHR大鼠靶器官损伤的保护作用研究
曾春晖1, 郝永靖1, 黄开珍2, 冼寒梅1, 杨 柯1* , 韦乃球1
(1. 广西中医学院药学院;2. 广西中医学院第一附属医院仁爱分院,南宁 广西 530001)
收稿日期:2010-12-14
基金项目:广西中医药管理局资助项目(GZKZ09-17)
作者简介:曾春晖(1974—) ,女,副教授,硕士,硕士研究生导师,从事中草药炮制药理研究。Tel: (0771)2219854,E-mail:chhzeng@ 163.
com
* 通信作者:杨 柯(1975—) ,男(侗族) ,副教授,硕士,硕士研究生导师,从事中草药药理学研究。Tel: (0771)2279423,E-mail:kyang_11
@ 126. com
摘要:目的 评价白子菜水提物对高血压诱导的组织器官损伤的保护作用。方法 根据基础血压将 40 只 SHR 大鼠分
成 5 组:空白对照组(蒸馏水)、阳性对照组(卡托普利,25 mg /kg)、白子菜水提物高、中、低剂量组(2 g生药 /kg、1 g生药 /
kg、0. 5 g生药 /kg) ,每天灌胃给药,持续 7 周,每周称重并记录心率 1 次,第 7 周末,通过肉眼和显微观察各鼠心、脑、肾
和脾脏的外观或病理变化并予以分级评分。结果 经过 7 周实验,与空白组比较,白子菜高、中剂量组均能明显抑制心
肌细胞肥大和肾小球(管)萎缩或代偿性肥大(P < 0. 01)。高剂量组能显著改善脾脏中央动脉硬化变性现象 (P <
0. 05) ,降低左室壁厚 /右室壁厚,增加肾皮质厚 /肾髓质厚 (P < 0. 05)。而低剂量仅对肾脏病理改变有显著保护作用(P
< 0. 05)。结论 白子菜提取物对高血压引起的主要器官损伤具有明显的保护作用。
关键词:白子菜;高血压诱导的器官损伤;保护作用
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)08-1303-05
Protective effect of Gynura divaricata extract on hypertension-induced target or-
gans damage in spontaneous hypertensive rats
ZENG Chun-hui1, HAO Yong-jing1, HUANG Kai-zhen2, XIAN Han-mei1, YANG Ke1* , WEI Nai-qiu1
(1. Guangxi College of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530001,China;2. No. 1 Hospital Affiliated to Guangxi College of Traditional Chinese
Medicine Nanning 530001,China)
ABSTRACT:AIM To evaluate the protective effect of water extract of Gynura divaricata on hypertension-in-
duced target organs damage in spontaneous hypertensive rats. METHODS According to baseline blood pressure,
forty SHR rats were randomly divided into five groups:control group (distilled water) ,captopril group (125 mg /
kg) ,three water extract of Gynura divaricata groups (low,middle and high dose). Each rat was administered i. g
respectively for 7 weeks. Body weight and heart rate were measured by tail-cuff technique on each weekend. At the
end of the 7th weekend,the damage scoring of the heart,brain,kidney and spleen of each rat was performed accord-
ing to both gross observation and light microscopic evaluation. RESULTS After 7 weeks' treatment,comparing
with control group,the pathological phenomenon of cardiac muscle cell hypertrophy,renal tubule atrophy or com-
pensatory hypertrophy were inhibited,central artery of spleen sclerotic degeneration was scarcely seen in the high
dose group (P < 0. 05) ,the thickness ratio of left ventricular to right ventricular decreased and the thickness ratio
of kidney cortex to kidney medulla increased in the high dose group (P < 0. 05). there was also significant differ-
ence in renal pathological change in the low dose group. CONCLUSION Gynura divaricata extract could obvi-
ously prevent and cure the hypertension-induced target organs damage in rats.
KEY WORDS:Gynura divaricata(L.)DC.;hypertension-induced organ damage;protective effect
高血压病不仅发病率高,且随着病程的发展,持 续高血压往往会引起心、肾、脑和血管等重要脏器受
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损而发生致残、致死性并发症[1-2]。尽管目前已有许
多降压疗效确切的药物在临床上使用,但在降低血
压的同时却很难避免并发症的发生,甚至加重高血
压靶器官损伤(target organ damage,TOD)[3]。白
子菜是菊科植物白子菜 Gynura divaricata (L.)DC.
的全草[4-5],广西民间以其为食谱治疗头痛、头晕、目
眩、耳鸣、乏力、多梦、失眠等高血压病症。我们前期
研究[6]发现白子菜能明显降低自发性高血压大鼠(
SHR)的血压,其降压作用与升高血清中 NO 水平,
降低血清 ET水平,调整体内 NO与 ET平衡状态,提
高 SOD活性有关。这些途径与高血压靶器官损伤
有密切的联系。因此,本实验以 SHR 为研究对象,
观察白子菜干预下对高血压主要靶器官损伤的保护
作用。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SHR大鼠 40 只,雄性,12 周龄,体
质量(265 ± 20)g,清洁级,购自北京维通利华公司,
合格证号:SCXK(京)2002-2003。试验期间以标准
大鼠合成饲料饲养,自由饮用自来水,并适应性喂养
1 周后进行实验。
1. 2 药品及试剂 实验药材经广西中医学院中药
鉴定教研室蔡毅教授鉴定为菊科植物白子菜 Gynu-
ra divaricata(L.)DC. 的全草。以 10 倍量水提取 2
次,每次 2 h,过滤,合并滤液,醇沉,回收溶剂至浸膏
状,浓度为 2. 0 g 生药 /mL。卡托普利片剂(湖南湘
君制药有限公司生产,批号 0712109) ,卡托普利混
悬液:将卡托普利片研成细末,加蒸馏水配制成 2. 5
mg /mL的药液。其他试剂均为分析纯。
1. 3 实验仪器 BP-6 动物无创血压测试系统(成
都泰盟科技有限公司) ;BP-420 四通道生物机能实
验系统(成都泰盟科技有限公司) ;EL204 万分之一
克电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司) ;
HM355S MICROW 切片机(德国) ;EG1160 石蜡包
埋机(德国) ;BH-2 光学显微镜(日本 OLYMPUS) ;
2MN-6802 病理组织漂烘仪(中国常州市华利电子
有限责任公司) ;TGL-16B 台式离心机(中国上海安
亭科学仪器制造厂) ;0-150 mm游标卡尺(桂林量具
刀具厂)。
2 实验方法
2. 1 分组及给药 40 只 SHR 大鼠按基础血压随
机分为 5 组,即空白对照组(蒸馏水) ,阳性对照组
(卡托普利,25 mg /kg) ,药物高、中、低剂量组(白子
菜水提物 2 g 生药 /kg、1 g 生药 /kg、0. 5 g 生药 /
kg) ,每组 8 只。各组每天分别 i. g 给予相应的药物
及蒸馏水,连续 7 周,给药容量 10 mL /kg。
2. 2 心率、体质量的测量 实验期间室温保持在
(20 ± 2)℃,所有大鼠在 BP-6 动物无创血压测试系
统下用尾部加压法测定心率。检测前先将恒温箱预
热至 37 ℃,然后选择大小合适的大鼠固定套笼将大
鼠固定于其中,充分暴露大鼠尾部,并固定在测压台
上,尾部套置红外线测定装置,待大鼠稳定后连续测
心率 3 次,取平均值作为心率的结果。正式灌胃测
量前 7 天每天尾部加压测一次,让大鼠适应每天将
要进行测量的环境和刺激,然后在第 7、14、21、28、
35、42、49 天灌胃后 2 h 测量大鼠的心率,并于测心
率前称量体质量。
2. 3 各靶器官损伤程度的测定[7] 实验期间定期
观察动物的精神状态及日常活动,注意有无中风症
状并及时记录。末次给药 24 h 后,处死动物,打开
胸腔,取出心脏,肉眼检查心脏外表有无明显梗塞坏
死病灶,然后置于预冷的生理盐水中漂洗,清除残留
血液;去除心底大血管,滤纸吸干水分后称全心重;
横切心脏,并用游标卡尺分别测量左右心室壁厚度;
打开腹腔,取出左右肾脏,肉眼观察肾脏表面是否有
明显颗粒状突起,生理盐水冲洗干净后用吸水纸吸
干亦分别称重,纵切肾脏,用游标卡尺测量肾皮质和
髓质厚度。另取脾脏和全脑,与上述心脏组织及肾
组织一起置于福尔马林溶液中固定。1 周后以乙醇
逐级脱水,石蜡包埋,切成厚 5 μm 的石蜡切片。做
苏木素-伊红(HE)染色,然后光学显微镜下检查各
器官的病理变化,包括冠状动脉硬化,心肌细胞肥
大,肾小球、肾小管萎缩及代偿性肥大,肾脏内各级
血管变化,大脑出血、软化,基底动脉硬化和脾脏中
央动脉的变化等指标。
2. 4 靶器官损伤程度的量化标准[8] 如表 1 所示。
2. 5 统计学处理 实验数据采用 SPSS11. 0 进行统
计学处理,计量资料用均数 ±标准差(x ± s)来表示,
两组之间均数比较采用 t 检验;病理分级资料使用
Nonparametric tests 中 2-Independent samples 来进行
两组之间比较;以 P < 0. 05,认为有统计学差异。
3 实验结果
3. 1 白子菜提取物对 SHR大鼠体重、心率的影响
大鼠饲养于干燥、通风、安静的环境中,每日喂食
颗粒饲料,自由饮水后,一般情况良好。各组大鼠体
质量增长速度相近,无显著性差异。各组大鼠心率
比较差异无统计学意义。结果见表 2、表 3。
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表 1 自发性高血压大鼠靶器官损伤程度的评分标准
Tab. 1 Scoring system for the damage degree of target organ in SHR rat
光学显微镜镜检 靶器官相对质量量及大体尺寸变化
心肌细
胞肥大
肾小球
(管)萎缩
或代偿性
肥大
大脑基底
动脉硬化
大脑出
血软化
脾脏中央
动脉硬化
变性
心脏质量 /
体质量 /%
雌性 雄性
肾脏质量 /
体质量 /%
雌性 雄性
左室壁
厚 /右室
壁厚
肾皮质
厚 /肾髓
质厚
0 不明显 不明显 不明显 不明显 不明显 < 0. 45 < 0. 40 > 0. 95 > 0. 85 < 4. 00 > 0. 40
1 轻度 轻度 轻度 轻度 轻度 0. 45 ~ 0. 40 ~ ≤0. 95 ≤0. 85 ≥4. 00 > 0. 30
2 显著 显著 显著 显著 显著 ≥0. 60 ≥0. 55 ≤0. 80 ≤0. 70 ≥6. 00 ≤0. 30
外观病变附
加分(否 0;是
1)
中风偏瘫心
脏外表可见
梗塞缺血块
肾脏表现晦
暗、呈颗粒状
表 2 不同时间体质量(g)的变化比较 (x ± s,n =8)
Tab. 2 The change of body weight in experimental period
组别
给药剂量
/(g /kg)
各组大鼠不同时间体质量 / g
给药前 1 周 2 周 3 周 4 周 5 周 6 周 7 周
空白对照组 - 270 ± 10 262 ± 20 277 ± 17 277 ± 18 280 ± 16 288 ± 22 281 ± 22 284 ± 27
阳性对照组 0. 025 268 ± 12 245 ± 27 255 ± 32 262 ± 26 262 ± 23 273 ± 21 277 ± 14 286 ± 19
白子菜组 2. 0 269 ± 13 246 ± 20 258 ± 22 262 ± 20 263 ± 21 271 ± 19 268 ± 22 281 ± 20
1. 0 272 ± 7 256 ± 11 273 ± 12 274 ± 14 271 ± 15 284 ± 12 278 ± 14 294 ± 13
0. 5 273 ± 10 255 ± 18 264 ± 26 269 ± 30 270 ± 27 277 ± 29 270 ± 22 283 ± 29
表 3 不同时间心率(bpm)的变化比较 (x ± s,n =8)
Tab. 3 The change of heart rate in experimental period
组别
给药剂量
/(g /kg)
各组大鼠不同时间心率 /(次 /min)
给药前 1 周 2 周 3 周 4 周 5 周 6 周 7 周
空白对照组 - 410 ± 34 403 ± 40 392 ± 48 364 ± 28 373 ± 15 369 ± 15 392 ± 31 376 ± 22
阳性对照组 0. 025 412 ± 39 397 ± 34 405 ± 32 386 ± 36 382 ± 45 374 ± 31 359 ± 27 368 ± 15
白子菜组 2. 0 395 ± 36 389 ± 46 381 ± 41 375 ± 38 357 ± 42 382 ± 40 364 ± 42 363 ± 16
1. 0 397 ± 32 386 ± 38 356 ± 26 362 ± 33 381 ± 30 396 ± 57 358 ± 34 373 ± 25
0. 5 415 ± 32 408 ± 18 376 ± 27 377 ± 44 364 ± 31 371 ± 47 359 ± 38 377 ± 27
3. 2 光学显微镜镜检结果
3. 2. 1 心肌细胞肥大镜检结果 与空白对照组比
较,白子菜高、中剂量组能明显抑制心肌细胞肥大
(P < 0. 01) ;提示白子菜具有明显抑制高血压状态
下的心肌肥厚,阻止心室壁增厚、心室重构发生的可
能,防止心衰的发生。结果见表 4。
表 4 白子菜提取物对心肌细胞肥大的影响
Tab. 4 Effect of Gynura divaricata extract on
hypertrophy of cardiomyocytes
组别
给药剂量
/(g /kg)
动物数
/只
0
不明显
1
轻度
2
显著
空白对照组 - 8 0 3 5
阳性对照组 0. 025 7 0 1 6
白子菜组 2. 0 8 4 3 1
1. 0 8 2 6 0
0. 5 8 0 3 5
3. 2. 2 肾小球(管)萎缩或代偿性肥大镜检结果
与空白对照组比较,白子菜各剂量组均对肾小球
(管)萎缩或代偿性肥大有显著抑制作用(P < 0. 01
~ 0. 05) ,提示白子菜可以改善高血压状态下肾脏
皮质中肾小球硬化、萎缩及部分区域的代偿性肥大
现象,防止肾衰的发生。结果见表 5。
表 5 白子菜提取物对肾小球(管)萎缩或
代偿性肥大的影响
Tab. 5 Effect of Gynura divaricata extract on atrophy
or compensatory hypertrophy of glomeruli or renal tubule
组别
给药剂量
/(g /kg)
动物数
/只
0
不明显
1
轻度
2
显著
空白对照组 - 8 0 3 5
阳性对照组 0. 025 7 0 5 3
白子菜组 2. 0 8 6 2 0
1. 0 8 5 3 0
0. 5 8 4 3 1
3. 2. 3 脾脏中央动脉硬化变性镜检结果 与空白
对照组比较,白子菜高剂量能明显改善脾脏中央动
脉硬化变性(P < 0. 05) ,提示白子菜能防止脾中央
动脉管壁的增厚,达到保护内脏动脉血管的作用。
结果见表 6。
3. 2. 4 大脑基底动脉硬化和出血软化镜检结果
各组大鼠大脑形态正常,未见基底动脉硬化和出
血软化。各组间没有显著差异。结果见表 7。
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表 6 白子菜提取物对脾脏中央动脉硬化变性的影响
Tab. 6 Effect of Gynura divaricata extract on
central artery of spleen sclerotic degeneration
组别
给药剂量
/(g /kg)
动物数
/只
0
不明显
1
轻度
2
显著
空白对照组 - 8 0 4 4
阳性对照组 0. 025 7 0 4 3
白子菜组 2. 0 8 4 2 1
1. 0 8 3 3 2
0. 5 8 2 4 2
表 7 白子菜提取物对大脑基底动脉硬化和
出血软化的影响
Tab. 7 Effect of Gynura divaricata extract on
cerebral-basilar arteriosclerosis and hemorrhage
组别
给药剂量
/(g /kg)
动物数
/只
0
不明显
1
轻度
2
显著
空白对照组 - 8 8 0 0
阳性对照组 0. 025 7 7 0 0
白子菜组 2. 0 8 8 0 0
1. 0 8 8 0 0
0. 5 8 8 0 0
3. 3 靶器官相对质量及大体尺寸变化结果
3. 3. 1 心脏质量 /体质量结果 各组间大鼠心脏质
量 /体质量的比较显示没有统计学差异(P > 0. 05)。
结果见表 8。
表 8 白子菜提取物对心脏质量 /体质量的影响 (%)
Tab. 8 Effect of Gynura divaricata extract on
coefficient of heart
组别
给药剂量
/(g /kg)
动物数
0 不明显
(< 0. 40)
1 轻度
(0. 40 ~)
2 显著
(≥0. 55)
空白对照组 - 8 4 4 0
阳性对照组 0. 025 7 4 3 0
白子菜组 2. 0 8 7 1 0
1. 0 8 4 4 0
0. 5 8 6 2 0
3. 3. 2 肾脏质量 /体质量结果 各组间大鼠肾脏质
量 /体质量的比较显示没有统计学差异(P > 0. 05)。
结果见表 9。
表 9 白子菜提取物对肾脏质量 /体质量的影响 (%)
Tab. 9 Effect of Gynura divaricata
extract on coefficient of kidney
组别
给药剂量
/(g /kg)
动物数
0 不明显
(> 0. 85)
1 轻度
(≤0. 85)
2 显著
(≤0. 70)
空白对照组 - 8 7 1 0
阳性对照组 0. 025 7 7 0 0
白子菜组 2. 0 8 8 0 0
1. 0 8 8 0 0
0. 5 8 8 0 0
3. 3. 3 左室壁厚 /右室壁厚结果 与空白对照组比
较,白子菜高剂量能显著降低左室壁厚 /右室壁厚比
值(P < 0. 05) ,提示白子菜可能具有防止心肌肥厚,
特别是左室肥厚的作用。结果见表 10。
表 10 白子菜提取物对左室壁厚 /右室壁厚的影响
Tab. 10 Effect of Gynura divaricata extract on
ratio of the ventricular thickness of left / right
组别
给药剂量
/(g /kg)
动物数
0 不明显
(< 4. 00)
1 轻度
(≥4. 00)
2 显著
(≥6. 00)
空白对照组 - 8 3 4 1
阳性对照组 0. 025 7 4 3 0
白子菜组 2. 0 8 7 1 0
1. 0 8 4 4 0
0. 5 8 5 2 1
3. 3. 4 肾皮质厚 /肾髓质厚结果 与空白对照组比
较,白子菜高剂量能显著增加肾皮质厚 /肾髓质厚
(P < 0. 05) ,提示白子菜可能具有防止肾脏的萎缩,
特别是肾皮质萎缩的作用。结果见表 11。
表 11 白子菜提取物对肾皮质厚 /肾髓质厚的影响
Tab. 11 Effect of Gynura divaricata extract on
ratio of the renal thickness of cortex / medulla
组别
给药剂量
/(g /kg)
动物数
0 不明显
(> 0. 40)
1 轻度
(> 0. 30)
2 显著
(≤0. 30)
空白对照组 - 8 0 7 1
阳性对照组 0. 025 7 2 5 0
白子菜组 2. 0 8 4 4 0
1. 0 8 0 8 0
0. 5 8 0 7 1
3. 4 外观病变结果 日常肉眼观察,各组大鼠均没
有出现中风偏瘫症状。末次解剖后肉眼观察心脏外
观正常,无梗塞缺血块,左右肾脏大小、形态分布均
匀,外观未发现异常。
4 讨论
高血压治疗的最终目标是降低过高血压,同时
阻止与高血压相关的靶器官损伤,最终降低心血管
事件的出现,延长生命,避免致残事件的发生,提高
患者生活质量[9]。但目前临床使用的大多数抗高
血压药物往往都存在只有确切的降压效果而缺乏对
靶器官保护作用的弊端。因此,新的抗高血压药物
除了从降压效果及其副作用大小进行评价外,更应
强调其对靶器官的保护作用[10]。
SHR大鼠是国际公认的原发性高血压实验研
究的最佳动物模型[11]。持续高血压所损害的主要
靶器官是心、脑、肾和血管等,主要表现为心室壁肥
厚、心肌缺血,室性心律失常,肾小球和肾小管的萎
缩及代偿性肥大,肾动脉硬化,脑梗塞缺血、脑内出
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血及小动脉硬化等[10]。张黎明[8]等人从 SHR 外观
病变、靶器官相对重量及大体尺寸的变化、靶器官病
变的光镜检查等 3 个层次,较全面地拟定考察项目,
并以具有良好代表性的指标为评估标准,能够客观
的反映高血压引起组织器官损伤程度,因此,我们参
照其拟定的评估标准来评价白子菜提取物对高血压
靶器官损伤的保护作用。本实验中,肉眼观察各组
大鼠均未出现中风偏瘫症状;心脏、肾脏外观正常,
大脑未见病变现象;各组间心率、体重、心脏重 /体
重、肾脏重 /体重等方面也无显著差异,说明靶器官
的损伤不是特别严重,这与本实验大鼠周龄最后为
20 周,处于高血压早期(4 ~ 7 月龄)有关。但在光
学显微镜镜检病理形态上,未给予药物干预的动物
出现了心肌细胞肥大,肾小球(管)萎缩或代偿性肥
大,脾脏中央动脉硬化变性现象,左室壁厚 /右室壁
厚,肾皮质厚 /肾髓质厚等方面明显异常。与空白对
照组比较,白子菜高剂量对各靶器官病变均有显著
的保护作用;中剂量在改善心、肾病理改变方面有明
显作用;而低剂量仅在肾脏病变上有良好的保护作
用。由此可以推断,白子菜能够有效保护因持续高
血压引发的靶器官损伤,尤其对心、肾损害方面,并
且呈一定的剂量正相关性。
结合以往研究结果[6],白子菜提取物在通过升
高血清中 NO水平,降低血清 ET水平,调整体内 NO
与 ET平衡发挥明显的降血压作用的同时,也可能
通过提高 SOD活性,抗氧自由基的作用来保护高血
压诱发的重要组织器官损伤[12,13],因此,对白子菜
的深入研究,将其研发为稳定有效的治疗高血压病
的中药新药,具有广阔的前景,对于提高高血压病的
防治效率有重要意义。
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气滞胃痛颗粒对胃肠动力作用的影响
刁云鹏1, 韩 凌2, 李 坤3, 黄珊珊1, 周 琴1, 张厚利1*
(1.大连医科大学,辽宁 大连 116044;2.辽宁本溪三药有限公司,辽宁 本溪 117004;3.辽宁师范大学,辽宁
大连 116029)
收稿日期:2010-09-19
基金项目:辽宁省教育厅科技研究项目(2010050)
作者简介:刁云鹏(1980—) ,男,讲师,研究方向:中药学,Tel:(0414)86110419,E-mail:dldiaoyp@ 126. com
* 通信作者:张厚利(1971—) ,女,副教授,研究方向:中药药理学。Tel: (0411)86110414,E-mail:houlizh@ yahoo. com. cn
摘要:目的 考察气滞胃痛颗粒(柴胡、枳壳、白芍、甘草、香附、延胡索)对胃肠功能的影响。方法 本研究以大鼠的离
体肠平滑肌条为模型,考察加入气滞胃痛颗粒对大鼠肠平滑肌条收缩状况。通过给予多巴胺制作胃肠运动抑制模型,采
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2011 年 8 月
第 33 卷 第 8 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
August 2011
Vol. 33 No. 8