全 文 ：153
红凤菜抗氧化成分提取分离研究
任冰如1，申玉香2，刘俊康2，滕杰晖1，吕 寒1，陈 剑1，*
(1.江苏省中国科学院植物研究所，江苏南京 210014;
2.盐城工学院，化学与生物技术学院，江苏盐城 224051)
收稿日期:2016－01－29
作者简介:任冰如(1964－) ，女，博士，研究员，从事植物资源研究与开发，E－mail:bingruren@ 126.com。
* 通讯作者:陈剑(1980－) ，男，博士，助理研究员，从事植物化学研究，E－mail:chenjian80@ aliyun.com。
基金项目:江苏省产学研联合创新资金(BY2012213) ;江苏省科技基础设施建设计划－科技公共服务平台项目(BM2011117)。
摘 要:目的 有效地从红凤菜中提取分离抗氧化活性成分。方法 以“乙醇提取－NKA 大孔树脂柱层析－聚酰胺柱层
析－重结晶”的方法进行分离，测定各阶段样品的 DPPH IC50、ABTS IC50、总酚及总黄酮含量，并作相关性分析。结果 大
孔树脂的 30%乙醇洗脱物抗氧化活性最高(DPPH IC50为 31.5 μg /mL，ABTS IC50为 15.1 μg /mL)、总酚含量较高
(22.8%)、未检出黄酮苷元成分，50%乙醇洗脱物抗氧化活性较高(DPPH IC50为 42.1 μg /mL，ABTS IC50为 33.2 μg /mL)、
总酚含量最高(26.3%)、总黄酮苷元及总黄酮含量均最高(分别为 18.7%和 33.7%) ;50%乙醇洗脱物经聚酰胺柱层析
得到的黄酮苷结晶Ⅰ、Ⅱ及其母液干燥物，其抗氧化活性、总酚及总黄酮含量均提高;DPPH IC50与总酚含量间存在显
著负相关(r = －0.883* )。结论 红凤菜提取物清除 DPPH自由基的活性与其总酚含量显著相关，依次采用 NKA大孔树
脂和聚酰胺柱层析可有效地富集抗氧化活性成分。
关键词:红凤菜，抗氧化，总酚，总黄酮
Isolation of the antioxidant components from Gynura bicolor
ＲEN Bing－ru1，SHEN Yu－xiang2，LIU Jun－kang2，TENG Jie－hui1，LV Han1，CHEN Jian1，*
(1.Institute of Botany，Jiangsu Province and the Chinese Academy of Sciences，Nanjing 210014，China;
2.Department of Chemsitry and Biotechnology，Yancheng Technology College，Yancheng 224051，China)
Abstract:Objective To isolate the antioxidant components from Gynura bicolor.Methods Fresh stems and leaves
were extracted and isolated following the project of “ethanol extract － NKA macroporous resin column
chromatograph－polyamide column chromatograph－recrystallize”，DPPH IC50，ABTS IC50，total phenols content and
total flavonoids content about the samples at different treatment stages were measured and their correlations were
analyzed.Ｒesults After NKA macroporous resin column chromatography，30% ethanol elution possesses the
highest antioxidant activity(DPPH IC50 31.5 μg·mL
－ 1 and ABTS IC50 15.1 μg·mL
－ 1)with higher total phenols content
(22.8%) ，but flavonoid aglycone had not been detected;50% ethanol elution owns more antioxidant activity(DPPH
IC50 42.1 μg·mL
－ 1 and ABTS IC50 33.2 μg·mL
－ 1)with the highest content of total phenols(26.3%) ，total flavonoid
aglycones(18.7%)and total flavonoids(33.7%) ;all the samples of flavonoid crystalⅠ，crystalⅡ and their mother
liquor had higher antioxidant activity，total phenols and total flavonoids content than the sample chromatographed
with polyamide column before;DPPH IC50 of different extracts had significant negative correlation(r = －0.883
* )with
total phenols content of G.bicolor.Conclution The activity of scavenging DPPH radical was significantly correlated
with the total phenols content in extracts of G.bicolor，antioxidant components can be effectively enriched followed
by NKA macroporous resin and polyamide column chromatography.
Key words:Gynura bicolor;antioxidant;total phenols;total flavonoids
中图分类号:TS201.1 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2016)17－0153－05
doi:10． 13386 / j． issn1002 － 0306． 2016． 17． 021
红凤菜(Gynura bicolor DC.)为菊科菊三七属植
物［1］，别名血皮菜、观音菜、观音苋、紫背天葵等，原产
于我国南方各地，作为传统民间药全草入药，具有凉
血止血、解毒消肿的功用［2］，红凤菜富含营养成
分［3－4］，作为保健蔬菜在我国多个地区有栽培和销
售。科学研究证明，由各种氧自由基所引发的氧化
作用是导致身体中各组分和器官损伤、病变的重要
原因之一［5］，植物中广泛存在着各类抗氧化活性成
分［6］，可作为有效的外源性物质克服自由基对人体的
危害。红凤菜的乙酸乙脂萃取物具有较高的总酚含
量和抗氧化活性，并具有细胞毒性，尤其可引起人结
肠癌细胞 HCT116 和 HCT－15 的细胞凋亡及细胞坏
154
死［7］，因此研究红凤菜的抗氧化活性成分具有重要
意义。
DPPH和 ABTS 法是基于分光光度法来测定样
品抗氧化活性的方法，具有操作简单、快速、高通量
等优点而被广泛使用［8］。为了更深入地了解红凤菜
的抗氧化活性及其有效成分，建立有效的提取分离
方法，为红凤菜的开发利用提供依据和方法，本实验
采用“乙醇提取 －大孔树脂柱层析 －聚酰胺柱层
析－重结晶”的流程进行提取分离，在不同阶段取样，
测定样品对 DPPH 自由基和 ABTS 自由基的清除作
用、样品的总酚含量和总黄酮含量，并对各参数之间
的相关性进行分析。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
红凤菜(Gynura bicolor DC.)于 2003 年 7 月引自
重庆，凭证标本号 0648614，凭证标本保存于江苏省
中国科学院植物研究所标本馆(NAS) ，新鲜茎叶于
2012 年 9 月采自江苏省中国科学院植物研究所的实
验苗圃。
NKA大孔树脂 天津南开和成科技有限公司;
芦丁化学对照品 中国药品生物制品检定所，批号
100080－200306，供 UV法含量测定，纯度 91.7%;没食
子酸对照品 成都瑞芬思生物科技有限公司，液相色谱
测得其纯度为 98.21%;FC(Folin ＆ Ciocalten’s
phenol) sigma－Alorich公司，浓度 2 N，Lot:BCBM
1927V;DPPH(2，2－Diphenyl－1－ picrylhydrazyl) Sigma
公司，Cat.NO:D913 － 2，Lot:S44112 － 089;ABTS
(2，2－联氮－二(3－乙基－苯并噻唑－6－磺酸)二铵
盐) 上海生工生物公司，Lot:XP1204B2012J;槲皮
素对照品 中国药品检定研究院，批号 100081 －
200907，纯度 96.5%;山柰酚对照品 中国食品药品
检定研究院，批号 110861－200808，纯度 95.9%;分析
纯乙醇(95%) 南京化学试剂有限公司;高效液相所
用色谱纯甲醇 Tedia 公司;过硫酸钾 上海凌峰化
学试剂有限公司。
METTLEＲ TOLEDO EL 204 电子天平 梅特
勒－托利多仪器(上海)有限公司;DIONEX ultimate
3000 高效液相色谱仪 美国戴安公司;SpectraMax
Plus384 酶标仪 美国美谷分子仪器公司。
1.2 实验方法
1.2.1 红凤菜提取物的制备 红凤菜新鲜茎叶，用
95%乙醇冷浸提取，减压浓缩后冷沉去杂，得到的上
清液为乙醇提取物，用大孔树脂柱层析，依次用 2 倍
床体积的体积分数为 0、30%、50%、70%、95% 乙
醇－水溶液洗脱，得到水洗脱物、30% 乙醇洗脱物、
50%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物和 95%乙醇洗脱
物，取 50%乙醇洗脱液，再用聚酰胺柱层析，依次用 2
倍床体积的体积分数为 0、30%、50%、70%、95%乙
醇洗脱，每留份为 1 /10 柱床体积，减压浓缩后用聚酰
胺薄层层析检识黄酮类化合物［以 BAW(正丁醇∶乙
酸∶水 = 4∶ 1∶ 5)为展开剂，1 g /100 mL的 AlCl3 －乙醇
溶液为显色剂］，留取有黄酮反应的部分，在室温放
置直到结晶物充分析出，过滤，得到不同留份的黄酮
苷结晶Ⅰ和黄酮苷结晶Ⅱ，将母液合并得到黄酮苷
母液，以上样品在水浴上蒸干后研磨成均匀粉末，55
℃烘干至恒重，置干燥器中保存备用。
1.2.2 红凤菜提取物的抗氧化活性测定 精密称取
红凤菜提取物 2.00 mg左右，加入体积分数为 80%的
乙醇，配制成质量体积为 2～15 mg /mL 的溶液，根据
预备实验稀释成不同的工作浓度。样品“乙醇提取
物”、“水洗脱物”、“30%乙醇提取物”、“50%乙醇提
取物”、“95%乙醇提取物”、“黄酮苷结晶Ⅰ”、“黄酮
苷结晶Ⅱ”及“黄酮苷母液”的工作浓度，用于测定对
DPPH 自由基的清除活性时，分别为 10.12、5.00、
1.12、1.04、2.64、5.02、1.12、0.43 及 0.66 mg /mL;用于
测定对 ABTS 自由基的清除活性时，分别为 10.12、
5.00、0.56、1.04、1.32、5.02、1.12、0.85 及 1.31 mg /mL。
1.2.2.1 DPPH自由基清除活性的测定 参照曾维才
等［8］的方法并作改进，测定红凤菜样品对 DPPH自由
基的清除活性，具体方法如下:用无水乙醇配制浓度
为 0.16 mmol /L的 DPPH工作液，避光低温保存。向
96 孔板中分别加入配成工作浓度的样品溶液 2、4、6、
8、10、15、20、30、40 μL、用无水乙醇补足至 100 μL，
再加入 DPPH 工作液 100 μL，25 ℃反应 30 min 后，
在 517 nm处测得样品的吸光度(Ai) ;将体系中的样
品用无水乙醇代替，其他试剂不变，测定得空白对照
的吸光度(Ao) ;将体系中的 DPPH 用无水乙醇代替，
其他试剂不变，测得样品本底的吸光度(Aj) ，每个样
品重复 3 次，取平均值，按以下公式计算清除率:清
除率(%)=［Ao－(Ai－Aj) ］/Ao × 100。当清除率为
50% 时，反应体系中样品的浓度为半数清除率
(DPPH IC50) ，以 DPPH IC50表示样品对 DPPH自由基
的清除活性。以抗坏血酸作阳性对照。
1.2.2.2 ABTS自由基的清除活性的测定 参照曾维
才等［8］的方法并作改进，测定红凤菜样品对 ABTS 自
由基的清除活性，具体方法如下:将 5 mL 7 mmol /L
ABTS和 88 mL 140 mmol /L过硫酸钾溶液混合，在室
温、避光条件下静置过夜，形成 ABTS储备液，该储备
液在室温、避光的条件下表现稳定。使用前用无水
乙醇稀释成 ABTS 工作液，要求其在 734 nm 波长下
的吸光度为 0.5 ± 0.02。向 96 孔板中分别加入配成
工作浓度的样品溶液 2、3、4、6、8、10、15、20、25 μL、
用无水乙醇补足到体积为 50 μL，再加入 ABTS 工作
液 200 μL，混匀，30 ℃反应 6 min后，在 734 nm处测
定，得到样品吸光度(Ai) ，将体系中的样品用无水乙
醇代替，其他试剂不变，测定得空白对照吸光度
(Ao) ;将体系中的 ABTS工作液用无水乙醇代替，其
他试剂不变，测得样品本底吸光度(Aj) ，每个样品重
复 3 次，取平均值，按以下公式计算清除率:清除率
(%)=［Ao－(Ai－Aj) ］/Ao × 100。当清除率为 50%
时，反应体系中样品的浓度为半数清除率(ABTS
IC50) ，以 ABTS IC50表示样品对 ABTS 自由基的清除
活性。以抗坏血酸作阳性对照。
1.2.3 红凤菜提取物的总酚含量测定 参照张毛
莉［9］等采用的 Folin－Ciocalteu比色法，进行修改后测
定总酚含量。工作曲线制作:精密称取没食子酸对
照品 5.59 mg，用去离子水定容到 10 mL，再稀释 5 倍
155
得到没食子酸对照品工作液，其质量体积分数为
0.1118 mg /mL，将市售的 FC 试剂稀释 10 倍配制成
FC工作液。分别取没食子酸对照品工作液 0、5、10、
20、30、40、50 μL，加入 96 孔板的反应孔中，用去离子
水补足到 50 μL，振荡混匀后加入 50 μL FC 工作液，
振荡混匀后放置 3 min，加入 50 μL 质量体积分数为
20%的 Na2CO3，振荡混匀反应 1 h 后，用酶标仪测定
A760。每个反应重复 3 次，求平均值。测得没食子酸
工作曲线方程为:y = 4.7718x－0.1707(r = 0.9984) ，
其中 x为 760 nm 处的吸光值，y 为反应体系中的没
食子酸质量(μg)。
表 1 红凤菜不同提取物的抗氧化活性、总酚含量及总黄酮含量
Table 1 Antioxidant capacity，total phenols content，total flavonoids content of the extracts from Gynura bicolor
样品
抗氧化活性(μg /mL) 组分含量(%)
DPPH IC50 ABTS IC50 总酚 总黄酮苷元 总黄酮
乙醇提取物 223.6 92.0 4.5 － －
水洗脱物 220.8 129.6 4.5 － －
30%乙醇洗脱物 31.5 15.1 22.8 未检出 未检出
50%乙醇洗脱物 42.1 33.2 26.3 18.7 33.7
70%乙醇洗脱物 72.0 26.4 16.6 5 9.1
95%乙醇洗脱物 295.9 75.2 5.4 － －
黄酮苷结晶Ⅰ 32.6 27.9 33.9 47.2 97.1
黄酮苷结晶Ⅱ 11.6 13.2 41.6 64.2 99.7
黄酮苷母液 25.2 21.0 33.5 46.9 84.8
VC(CK) 1.8 1.1
注:“－”表示未检测。
样品测定:精密称取 1.2.1中制备的红凤菜提取物
3.00 mg左右，用体积分数 80%乙醇配制成 1 mg /mL
的样品溶液，取 25 μL 样品溶液，以与“工作曲线制
作”相同的方法测得 A760，求出样品的总酚含量(%)。
1.2.4 红凤菜提取物总黄酮含量测定 工作曲线制
作:采用任冰如［10］的方法测定，以槲皮素和山柰酚配
制混合对照品溶液，其中槲皮素的质量体积分数为
13.82 μg /mL，山柰酚的质量体积分数为 13.71 μg /mL。
色谱柱为 Welch Material XB － C18 柱(4.5 mm ×
250 mm，粒径 5 μm) ，以 V(甲醇)∶ V(0.4%磷酸水溶
液)= 55 ∶ 45 为流动相，检测波长为 360 nm，流速
1 mL /min，柱温 30 ℃。取混合对照品溶液，分别进
样 5、10、15、20、25、30 μL，进行 HPLC 测定，记录峰
面积，以进样量(x，μg)对峰面积积分值(y)进行线
性回归，得槲皮素的回归方程为:y = 0.0295x + 0.0003
(r = 0.9994) ，在 0.0691～0.4146 μg 范围内呈线性相
关;山柰酚的回归方程分别为:y = 0.0208x + 0.0015
(r = 0.9997) ，在 0.0686～0.4133 μg 范围内呈线性相
关(参见任冰如［10］的方法)。
样品测定:精密称取待测样品 2.50 mg 左右，精
密加入 25 mL 甲醇－25% HCl(4∶ 1)溶液，待样品溶
解后，在 93 ℃水浴上回流 1 h，冷却后用分析纯甲醇
定容到 50 mL，得到黄酮苷的酸解液，用于 HPLC 测
定。样品进样量 10 μL，根据峰面积积分值分别计算
样品中槲皮素和山柰酚含量，槲皮素和山柰酚之和
为样品中总黄酮苷元的含量(%) ，根据文献［10，12］的
测定结果和方法，将不同样品中的槲皮素换算为槲
皮素糖苷、山柰酚换算为山柰酚糖苷，不同样品中的
槲皮素糖苷与山柰酚糖苷之和为该样品的总黄酮含
量(%)。
1.2.5 数据处理 采用 SPSS v16.0 软件进行统计分
析，求样品的 DPPH IC50、ABTS IC50、总酚含量、总黄
酮苷元含量、总黄酮含量之间的相关性，以 0.05 水平
表示显著相关，0.01 水平表示极显著相关。
2 结果与分析
2.1 红凤菜提取物的抗氧化活性及其总酚、总黄酮
含量
由表 1 可见，红凤菜乙醇提取物经大孔树脂柱
层析，所得到的 30%、50%和 70%乙醇洗脱物抗氧化
活性均明显高于层析前的样品(乙醇提取物) ，而其
他洗脱物抗氧化活性较弱，故重点对 30%、50%和
70%乙醇洗脱部分进行分析。
表 1 显示，30%乙醇洗脱物对 DPPH 自由基及
ABTS +·的 清 除 活 性 均 最 高，其 DPPH IC50 为
31.5 μg /mL、ABTS IC50为 15.1 μg /mL，该样品总酚含
量较高(22.8%) ，但未检出黄酮苷元成分，说明该样
品的酚性物质是黄酮以外的成分。
50%乙醇洗脱物也具有较高的抗氧化活性，该
样品总酚含量最高(26.3%) ，总黄酮苷元及总黄酮含
量均最高(分别为 18.7%和 33.7%) ，是黄酮的富集
部分。
70%乙醇洗脱物对 DPPH 自由基的清除能力低
于 30%洗脱物和 50%洗脱物，但对 ABTS +·的清除
能力略高于50%乙醇洗脱物，其总酚含量较低。
因 50%乙醇洗脱物是黄酮的富集部分，故进一
步采用聚酰胺柱层析分离纯化，得到黄酮苷结晶Ⅰ、
黄酮苷结晶Ⅱ及其母液的干燥物，用以分析红凤菜
黄酮成分的抗氧化活性。由表 1 可见黄酮苷结晶物
及其母液的抗氧化活性均较纯化前提高，其中黄酮
苷结晶Ⅱ对 DPPH自由基、ABTS +·的清除作用均最
强，总酚及总黄酮苷元含量均最高，由于其总黄酮
含量高达 99.7%，可以确定该样品抗氧化活性的主
要成分为黄酮，酚性物质的主要组成也是黄酮;黄
酮苷结晶Ⅰ的抗氧化活性低于结晶Ⅱ，总酚及总黄
156
表 2 红凤菜提取物的抗氧化活性与总酚、总黄酮含量的相关性
Table 2 Correlations among the antioxidant capacity，total phenols content
and total flavonoids content of the extracts from Gynura bicolor
相关系数(r) DPPH IC50 ABTS IC50 总酚含量 总黄酮含量 总黄酮苷元含量
DPPH IC50 1 .586 － 0.883* － 0.670 － 0.718
ABTS IC50 0.586 1 － 0.370 － 0.132 － 0.244
总酚含量 － 0.883* － 0.370 1 0.922＊＊ 0.955＊＊
总黄酮含量 － 0.670 － 0.132 0.922＊＊ 1 0.982＊＊
总黄酮苷元含量 － 0.718 － 0.244 0.955＊＊ 0.982＊＊ 1
注:* :在 0.05 水平上显著相关;＊＊:在 0.01 水平上显著相关。
酮苷元含量也都低于结晶Ⅱ，黄酮苷结晶Ⅰ的总黄
酮含量为 97.1%，说明其抗氧化活性的主要成分及
酚性物质的主要组成也均为黄酮;黄酮苷母液部分
的抗氧化活性高于黄酮苷结晶Ⅰ，总酚及总黄酮苷
元含量均与黄酮苷结晶Ⅰ相近，黄酮苷母液部分的
总黄酮含量为 84.8%，说明样品中存在其他非黄酮
成分，其抗氧化活性物质除黄酮外还有非黄酮
成分。
2.2 红凤菜提取物抗氧化活性与化学成分的相关性
分析
红凤菜乙醇提取物经大孔树脂柱层析，得到的
30%、50%及 70%乙醇洗脱物以及将 50%乙醇洗脱
物进一步分离得到的黄酮苷均具有较强抗氧化活
性，这些物质的体外抗氧化活性(对 DPPH 自由基及
ABTS +·的清除活性)、总酚含量、总黄酮含量之间的
相关性如表 2 所示。
结果表明，不同提取物的 DPPH IC50与 ABTS IC50
之间无显著相关性;不同提取物的 ABTS IC50与总酚
含量、总黄酮含量之间无显著相关性;不同提取物
DPPH IC50与总黄酮苷元及总黄酮苷含量之间均无显
著相关性。
不同提取物的 DPPH IC50与总酚含量之间存在
显著负相关(r = －0.883* ) ，说明总酚含量越高，清除
DPPH自由基的活性越强。
不同提取物的总酚含量与总黄酮苷含量及总黄
酮苷元含量之间具有极显著的相关性，相关系数分
别达到 0.922＊＊和 0.955＊＊，说明不同提取物的酚性物
质主要来自黄酮。
3 讨论
分析结果表明，红凤菜提取物的总酚含量越高，
清除 DPPH自由基的活性越强，说明从红凤菜中提
取分离酚性物质具有重要意义。红凤菜乙醇提取物
经大孔树脂柱层析，得到的 30%、50%和 70%乙醇洗
脱物抗氧化活性均明显高于层析处理前的样品，
50%乙醇洗脱物经过聚酰胺柱层析后得到黄酮成
分，其抗氧化活性又均较纯化前提高，因此依次采用
这两种层析方法可有效地富集红凤菜中的抗氧化活
性成分。
红凤菜不同提取物的 DPPH IC50与 ABTS IC50无
显著相关性，其原因可能是两种方法测定抗氧化活
性所基于的反应原理不同从而导致测定结果存在差
异［8］。红凤菜不同提取物的 ABTS IC50与总酚、总黄
酮含量之间无显著相关性，提示样品中含有可清除
ABTS +·自由基的非酚性物质。
红凤菜提取物清除 DPPH 自由基的活性与总酚
含量显著相关，总酚含量又与总黄酮含量及总黄酮
苷元含量极显著相关，但总黄酮含量及总黄酮苷元
含量均与 DPPH IC50无显著相关，其原因是黄酮为酚
性物质的一部分，即除黄酮以外提取物还含其他酚
性物质，这在 30% 乙醇洗脱物有明确体现。由于
30%乙醇洗脱物的抗氧化活性最高，其中的酚性物
质主要是黄酮以外的成分，Chen Jian 等［11］检测到红
凤菜含有多种酚性酸，如咖啡酰奎宁酸、香豆酰奎宁
酸、阿魏酰奎宁酸、二咖啡酰奎宁酸等，推测这些酚
性酸类物质是其中的抗氧化有效成分。研究结果显
示，红凤菜黄酮主要由槲皮素、山柰酚以及以槲皮
素、山柰酚为苷元的黄酮苷组成［12］，而黄酮以外的酚
性成分，其结构、含量、抗氧化强度以及纯化方法均
值得进一步分析研究。
测定结果显示，黄酮苷母液样品的总酚含量及
总黄酮苷元含量分别与黄酮苷结晶Ⅰ样品的总酚含
量及总黄酮苷元含量相近，由于黄酮苷结晶Ⅰ中的
酚性物质主要是黄酮，所以黄酮苷母液样品中的酚
性物质也主要是黄酮，即在黄酮苷母液样品中，黄酮
是主要的酚性成分，非黄酮则主要为非酚性成分。
黄酮苷母液样品的总黄酮含量为 84.8%，表明非黄
酮成分亦即非酚性成分约为 15%。母液样品的抗氧
化活性高于黄酮苷结晶Ⅰ，推测是其中的非酚性成
分具有更强抗氧化活性或非酚性成分与黄酮苷之间
有协同作用［13］，实际情况也有待深入研究。
4 结论
红凤菜提取物清除 DPPH 自由基的活性与其总
酚含量显著相关，依次采用 NKA 大孔树脂和聚酰胺
柱层析可有效地富集抗氧化活性成分。
参考文献
［1］中国科学院中国植物志编辑委员会 .中国植物志［M］.北
京:科学出版社，1999.77(1) :310－316.
［2］江苏新医学院 .中药大辞典(上) ［M］.上海:上海科学技术
出版社，1977.988－989.
［3］任冰如，汪洪江，梁呈元，等 .4 种野生蔬菜的氨基酸含量
及其营养价值评价［J］.植物资源与环境学报，2004，13(3) :
55－56.
［4］汪泓江，梁呈元，卓敏，等 .Gynura 属 3 个野生蔬菜营养成
(下转第 161 页)
161
床阶段，但蛋白质药物生物利用率较低，稳定性差，半
衰期短，需要频繁给药，对患者生理和心理上造成很大
负担;通过将蛋白类药物制成微球，使其发挥缓释、控
释作用，已成为近年来开发蛋白类药物缓控释制剂的
研究的方向［17－18］。本研究以高分子材料壳聚糖为载
体，运用离子凝胶法成功制备载牛血清白蛋白壳聚糖
微球。研究发现，壳聚糖分子量、三聚磷酸钠浓度以及
壳聚糖浓度对载牛血清白蛋白壳聚糖微球成球性有较
大影响，牛血清白蛋白加入量对微球载药率有影响。
通过单因素实验与正交实验，研究制备载牛血清白蛋
白壳聚糖微球的最佳方法，结果显示，载药率随壳聚糖
分子量的增加、壳聚糖浓度的降低、三聚磷酸钠浓度的
降低、牛血清白蛋白用量的增加而增加。
此外，通过体外释放实验表明，载牛血清白蛋白
壳聚糖微球能够在体外持续缓慢释放，具有明显的
缓释效果和持续释放特性，该研究为以壳聚糖作为
药物缓控释载体的进一步研究提供依据，为蛋白类
药物壳聚糖微球的研究提供借鉴。
参考文献
［1］陆春燕，龙伟，温露，等 .载牛血清白蛋白 PLGA 微球的包
封率测定及体外表征［J］.海峡药学，2014，26(9) :141－143.
［2］Sanchez A，Tobio M，Gonzalez L，et al.Biodegradable micro－
and nanoparticles as long－ term delivery vehicles for interferon－
alpha［J］.Eur J Pharm Sci，2003，18(18) :221－229.
［3］柳昌武，曾淼洋，童张法，等 .辣椒碱－壳聚糖 /海藻酸钠微
球的制备与体外释药研究［J］.中成药，2014，36(3) :620－622.
［4］李思阳，孔庆新，王洋 .载 10－羟基喜树碱超声微泡的制备
表征及其体外超声成像特性［J］.中成药，2014，36(10) :
49－53.
［5］陈玉玺，浦益琼，张彤，等 .难溶性小分子药物微球体内外释
放及相关性研究进展［J］.中成药，2015，35(12):2721－2725.
［6］文庆怡，张光宇，周晓峰，等 .去甲斑蝥素－N－乳糖酰壳聚
糖 /丝素蛋白微球在兔体内的抗肿瘤作用［J］.中国新药杂志，
2014，23(9) :1075－1080.
［7］吴巧丽，张少凡，孙洋，等 .食品安全级固定化载体－壳聚
糖微球制备的条件［J］.食品与机械，2012，28(1) :26－28.
［8］金娜，孔先利，林敏，等 .基于核酸适体微球的沙门氏菌检
测方法研究［J］.食品工业科技，2015，36(13) :321－324.
［9］Tian X，Yin HZ，Zhang SC，et al.Bufalin loaded biotinylated
chitosan nanoparticles:an efficient drug delivery system for
targeted chemotherapy against breast carcinoma［J］.Eur J Pharm
Biopharm，2014，87(3) :445－453.
［10］孙川，梁云星，郑颖，等 .受体介导的主动靶向壳聚糖衍
生物递药载体的研究进展［J］.中国新药杂志，2015，24(22) :
2584－2588.
［11］王坦，胡志海，彭敏，等 .胺乙基壳聚糖接枝胶原蛋白肽
的制备及其性能［J］.武汉大学学报，2015，62(1) :51－58.
［12］林晓洁，张华，金少钢，等 .盐酸青藤碱壳聚糖纳米粒的
制备及体外释放性能的研究［J］.中国实验方剂学，2011，17
(4) :22－25.
［13］何黎黎，邓 黎，林芸竹 .红景天苷壳聚糖纳米粒的制备及
其体外释放性能研究［J］.中草药，2013，44(5) :552－556.
［14］曹力凡，周纲，杨建设，等 .盐析法制备小檗碱壳聚糖纳
米载药微球［J］.中国实验方剂学，2014，20(1) :5－8.
［15］郑彩虹，梁文权，虞和永 .海藻酸－壳聚糖－聚乳酸羟乙醇
酸复合微球的制备及其对蛋白释放的调节［J］.药学学报，
2005，40(2) :182－186.
［16］汪家政，范明 .蛋白质技术手册［M］.北京:科学出版社，
2000:38－55.
［17］刘占军，张卫国，于九皋，等 .负载紫杉醇壳聚糖纳米粒
的制备、表征与释药性能［J］.中国组织工程研究与临床康复，
2009，13(3) :493－495.
［18］袁金芳，郭保林，张晓丽，等 .pH、离子强度敏感性壳聚糖
水凝胶的合成及其对辅酶 A的控制释放［J］.功能材料，2007，
38(1) :
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
36－38.
(上接第 156 页)
分的比较及评价［J］.中国野生植物资源，2004，23(5) :48－49.
［5］凌关庭 .抗氧化食品与健康［M］.北京:化学工业出版社，
2004:22.
［6］谭榀新，叶涛，刘湘新，等 .植物提取物抗氧化成分及机理
研究进展［J］.食品科学，2010，31(15) :288－292.
［7］Teoh WY，Sim KS，Moses Ｒichardson JS，et al. Antioxidant
Capacity，Cytotoxicity，and Acute Oral Toxicity of Gynura bicolor
［J］.Evid Based Complement Alternat Med.，2013，2013:958407.
doi:10.1155 /2013 /958407.
［8］曾维才，石碧 .天然产物抗氧化活性的常见评价方法［J］.
化工进展，2013，32(6) :1205－1247.
［9］张毛莉，罗仓学 .石榴皮中总酚含量测定方法的比较［J］.
食品工业科技，2011，32(5) :383－384，388.
［10］任冰如，吕寒，陈剑，等 .HPLC测定红凤菜提取物的总黄
酮含量及对提取方法的评价［J］.食品科学，2014，35(12) :
160－164.
［11］Chen Jian，Mangelinckx Sven，Lü Han，et al. Profiling and
Elucidation of the Phenolic Compounds in the Aerial Parts of
Gynura bicolor and G.divaricata Collected from Different Chinese
Origins［J］.Chemistry and Biodiversity，2015，12(1) :96－115.
［12］任冰如，吕寒，陈剑，等 .红凤菜新鲜茎叶中总黄酮提取
物的 LC－MS 分析［J］.植物资源与环境学报，2014，23(3) :
108－110.
［13］张志清，向建军，周利茗，等 .麦苗中阿魏酸、抗坏血酸
(VC)、总黄酮协同抗氧化能力分析［J］.中国粮油学报，2013，
28(7) :5－11，18.