全 文 ：［收稿日期］ 20130124(017)
［基金项目］ 中医药公共卫生专项(财社［2011］76 号) ;中医药行业科研专项(201207002)
［第一作者］ 杜清华，在读本科，从事天然产物化学研究，E-mail:237081269@ qq． com
［通讯作者］ * 潘乔丹，硕士，讲师，从事天然产物化学研究，Tel:0776-2849498，E-mail:panqiao112@ 163. com
翼齿六棱菊多糖的含量测定及抗氧化活性考察
杜清华，黄元河，潘乔丹* ，王柳念，唐海燕，林庆云
( 右江民族医学院，广西 百色 533000)
［摘要］ 目的:测定翼齿六棱菊多糖的含量并探讨其体外抗氧化活性。方法:运用微波-超声波协同提取翼齿六棱菊多
糖，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，通过 FRAP法、水杨酸法、ABTS法和邻苯三酚法检测翼齿六棱菊多糖的抗氧化能力。结
果:翼齿六棱菊多糖提取量 200 mg·g －1;与对照品抗坏血酸和茶多酚相比，翼齿六棱菊多糖的 Fe3 +还原抗氧化能力(829. 75
μmol·g －1)弱于抗坏血酸(1 536. 5 μmol·g －1) ，强于茶多酚(739. 75 μmol·g －1) ;清除 ABTS +自由基能力(IC50 0. 197 g·L
－1)及
清除超氧阴离子自由基能力(IC50 0. 289 g·L
－1)比抗坏血酸弱(IC50分别为 0. 032，0. 259 g·L
－1) ，但比茶多酚强(IC50分别为
0. 233，0. 335 g·L －1) ;清除 OH·自由基能力(IC50 0. 245 g·L
－1)弱于抗坏血酸(IC50 0. 199 g·L
－1)和茶多酚(IC50 0. 233 g·L
－1)。
结论:采用苯酚-硫酸比色法测定翼齿六棱菊多糖的含量具有简便、快速、准确、灵敏度好等优点，翼齿六棱菊多糖具有较强的
抗氧化能力。
［关键词］ 翼齿六棱菊;多糖;含量测定;抗氧化活性
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)15-0067-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013150067
Determination and Antioxidant Activity Investigation
of Polysaccharides from Laggera pterodonta
DU Qing-hua，HUANG Yuan-he，PAN Qiao-dan* ，WANG Liu-nian，TANG Hai-yan，LIN Qing-yun
(Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China)
［Abstract］ Objective:To determine the content of polysaccharides in Laggera pterodonta and investigate
its in vitro antioxidative activity． Method:Polysaccharides in L． pterodonta was extracted by ultrasonic-microwave
synergistic method， the content of polysaccharides was determined by phenol-sulfuric acid colorimetry， its
antioxidant activity was measured by FRAP assay， salicylic acid assay，ABTS assay and adjacent benzene
pyrogallol assay． Result:The content of polysaccharides in L． pterodonta was 200 mg·g －1 ． Compared with the
positive control of ascorbic acid and tea polyphenols，reducing Fe3 + antioxidant capacity of polysaccharides in L．
Pterodonta (829. 75 μmol·g －1)was weaker than ascorbic acid (1 536. 5 μmol·g －1) ，but higher than tea
polyphenols (739. 75 μmol·g －1)． Scavenging ABTS + radical capacity (IC50 0. 197 g·L
－1)and superoxide anion
radical capacity (IC50 0. 289 g·L
－1)was lower than ascorbic acid (IC50 were 0. 032，0. 259 g·L
－1，respectively) ，
but higher than tea polyphenols (IC50 were 0. 233，0. 335 g·L
－1，respectively)． Scavenging OH· (IC50 0. 245
g·L －1)was lower than ascorbic acid (IC50 0. 199 g·L
－1)and tea polyphenols (IC50 0. 233 g·L
－1)． Conclusion:
Phenol-sulfuric acid colorimetry to determine the content of polysaccharides from L． pterodonta was simple，rapid
and accurate with good sensitivity，antioxidant activity of polysaccharides from L． pterodonta was strong．
［Key words］ Laggera pterodonta;polysaccharides;content determination;antioxidant activity
多糖是高等植物、动物细胞膜、微生物细胞壁中 天然大分子物质，是构成生命的基本物质之一，具有
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Vol． 19，No． 15
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抗肿瘤、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、免疫调节等
生物活性［1-3］，这些生物活性与多糖的抗氧化活性
密切相关［4］。翼齿六棱菊又名臭灵丹草，气特异，
味苦，具有清热解毒、止咳祛痰的功效，用于治疗风
热感冒、咽喉肿痛、肺热咳嗽等症［5］。目前有关翼
齿六棱菊多糖含量测定和抗氧化活性研究的尚未见
报道。本实验采用苯酚-硫酸比色法测定翼齿六棱
菊多糖的含量，通过 FRAP法、水杨酸法、ABTS 法和
邻苯三酚法对翼齿六棱菊多糖的抗氧化性能进行检
测，为多糖的药物研制及保健食品开发提供参考。
1 材料
DF-15 型台式连续投料粉碎机(温岭市林大机
械有限公司) ，DHG-9070A 型电热恒温鼓风干燥箱
(上海精宏实验设备有限公司) ，TU-1800 型紫外-可
见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司) ，
FA1104 型电子天平(上海良平仪器仪表有限公
司) ，XH-300A型微波超声波组合合成萃取仪(北京
祥鹄科技发展有限公司)。
翼齿六棱菊(采自广西百色，经本院生物教研室
黄元河老师鉴定为翼齿六棱菊 Laggera pterodonta
(Dc．)Benth的开花期植株) ，三吡啶三吖嗪(TPTZ，
阿拉丁试剂上海有限公司) ，2 2＇-连氨-(3-乙基苯并
噻唑林-6-磺酸)二氨盐(ABTS，生工生物公司) ，葡萄
糖对照品(百灵威化学技术有限公司，批号 234317) ，
抗坏血酸(天津博迪化工股份有限公司) ，茶多酚(广
州食品添加剂公司) ，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 多糖的提取 称取翼齿六棱菊干燥粉末
32. 248 g，加 8 倍量石油醚(60 ～ 90 ℃)回流脱脂 2
次，每次 1 h;加 10 倍量 95%乙醇回流提取 2 次，每
次 2 h，以除去单糖和低聚糖，将药渣烘干，加水用超
声波-微波联合提取 3 次，每次 5 min，微波功率 500
W，超声波功率 100 W。合并提取液，浓缩至 100
mL，加 4 倍量 95%乙醇于 4 ℃静置过夜，5 000 r·
min －1离心 10 min，沉淀用适量无水乙醇洗涤 2 次，
室温干燥，用水溶解，过滤，反复加 1 /3 倍量的三氯
甲烷-正丁醇(4∶ 1)溶液去蛋白，浓缩至干，得精多糖
样品 2. 439 g。精密称取翼齿六棱菊多糖 0. 10 g，加
水配制成 2. 0 g·L －1的母液，稀释成不同质量浓度的
溶液备用。
2. 2 多糖含量测定
2. 2. 1 标准曲线的绘制 称取葡萄糖对照品适量，
配制成不同质量浓度对照品溶液，采用苯酚-硫酸法
测定［6］，于 300 ～900 nm扫描，确定检测波长 490 nm。
以吸光度(A)为纵坐标，葡萄糖质量浓度为横坐标，
得回归方程 Y = 7. 62X + 0. 084(r = 0. 999 5) ，线性
范围 0. 01 ～ 0. 05 g·L －1，计算翼齿六棱菊多糖的提
取量 200 mg·g －1。
2. 2. 2 重复性、精密度与稳定性试验 按 2. 1 项下
方法制备 5 份样品溶液，按 2. 2. 1 项下方法测定，结
果多糖含量的 RSD 0. 68%，说明该方法重复性较
好。精密吸取 5 份样品溶液各 2 mL，按 2. 2. 1 项下
方法测定，结果 A 的 RSD 0. 77%，表明仪器精密度
良好。精密吸取样品溶液 2 mL，按 2. 2. 1 项下方法
测定 A，每隔 30 min测 1 次，测 5 次，结果 A 的 RSD
0. 45%，说明样品溶液在 2. 5 h内较稳定。
2. 3 抗氧化活性测定
2. 3. 1 总抗氧化能力(FRAP 法)［7］ 移取不同质
量浓度的多糖溶液各 1. 0 mL，加入 TPTZ 工作液
1. 0 mL，混匀，于 37 ℃水浴 1 h，在 593 nm 处测定
A，每份样品平行操作 3 次，计算清除率。结果均以
FeSO4 当量表示，FeSO4 线性回归方程 Y = 0. 000 4X
+0. 003(r = 0. 999 2) ，显示翼齿六棱菊多糖的 Fe3 +
还原 /抗氧化能力(829. 75 μmol·g －1)弱于抗坏血酸
(1 536. 5 μmol·g －1) ，但强于茶多酚(739. 75 μmol·
g －1)。
2. 3. 2 清除羟自由基(OH·)能力(水杨酸法) 采
用 Fenton反应法［8］。移取不同质量浓度的多糖溶液
各 2. 0 mL于试管中，加入 9 mmol·L －1 FeSO42. 0 mL，
9 mmol· L －1 水 杨 酸-乙 醇 溶 液 2. 0 mL 和
9. 8 mmol·L －1 H2O2 2. 0 mL，于室温下反应1 h。以蒸
馏水调零，于 510 nm处测定 A(n =3) ，结果见图 1。
OH·清除率 = A0 －(A1 － A1 )/A0 × 100%
式中 A0 为溶剂代替样品液的吸光度;A1 为样
品组的吸光度;A1 为蒸馏水代替 H2O2 的空白对照
组吸光度。
图 1 翼齿六棱菊多糖的清除羟基自由基作用
由图 1 可知，翼齿六棱菊多糖对羟基自由基具
有一定的清除能力，并呈明显的量效关系。根据试
样质量浓度与羟基自由基清除率的线性回归方程(r
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均 ＞ 0. 99) ，计算半清除率质量浓度(IC50) ，表明对
羟基自由基的清除能力顺序为抗坏血酸(0. 199 g·
L －1)＞ 茶多酚(0. 233 g·L －1)＞ 翼齿六棱菊多糖
(0. 245 g·L －1)。
2. 3. 3 清除 ABTS +自由基能力(ABTS 法) 分别
移取不同质量浓度的多糖溶液 2. 0 mL于试管中，各
加入 ABTS +·测定液4. 0 mL［9］，准确振荡 30 s，反应
一定时间后，于 734 nm处测定 A，计算清除率，见图
2，结果表明翼齿六棱菊多糖对 ABTS +自由基表现
出一定程度的清除能力，并呈明显量效关系，对
ABTS + 自 由 基 的 清 除 能 力 顺 序 为 抗 坏 血 酸
(0. 032 g·L －1)＞翼齿六棱菊多糖(0. 197 g·L －1)＞
茶多酚(0. 233 g·L －1)。
ABTS +·清除率 =(A测定液 － A样品)/A0 × 100%
图 2 翼齿六棱菊多糖的清除 ABTS +自由基作用
2. 3. 4 超氧阴离子自由基(O －2·)的抑制作用(邻苯
三酚法)［10］ 分别移取不同质量浓度的多糖样品
1. 0 mL于试管中，各加入 50 mmol·L －1的 Tris-HCl
缓冲溶液 4. 5 mL，加水 3. 2 mL，混匀后于 25 ℃水浴
中保温 20 min，取出后立即加入于 25 ℃水浴中预热
过的 3 mmol·L －1邻苯三酚 0. 3 mL，混匀，立即倒入
比色杯，于 320 nm处每隔 30 s测定 1 次 A，共测定 8
次，以 10 mmol·L －1的 HCl 代替邻苯三酚作空白调
零，以 1. 0 mL 水代替多糖溶液作邻苯三酚自氧化
管，计算氧化速率(K)和抑制率，见图 3，结果发现多
糖对超氧阴离子自由基的清除能力呈明显量效关
系，各样品对超氧阴离子自由基清除能力顺序为抗
坏血酸(0. 259 g·L －1)＞翼齿六棱菊多糖(0. 289 g·
L －1)＞茶多酚(0. 335 g·L －1)。
抑制率 =(K自氧化 － K样品)/K自氧化 × 100%
3 讨论
微波-超声波协同提取技术克服了常规超声波
和微波萃取的不足，具有速度快、耗能小、溶剂用量
小、回收率高等优点，有利于极性和热不稳定组分的
提取［11］。
多糖在各种实验体系中均表现出明显的抗氧化
图 3 翼齿六棱菊多糖的清除超氧阴离子自由基作用
活性，这可能是它防衰老、抗炎症、降血脂、抗肿瘤、
增强免疫等功效的药理基础［12］。通过抗氧化性试
验发现，翼齿六棱菊多糖对 Fe3 + 的抗氧化还原能
力、清除 ABTS +自由基能力及清除超氧阴离子自由
基能力比抗坏血酸弱，但比茶多酚强;而清除 OH·
自由基能力却弱于抗坏血酸和茶多酚。
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［责任编辑 仝燕］
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