全 文 ：羊耳菊总黄酮的大孔树脂纯化工艺优化
陈保红，刘轶华
(漯河医学高等专科学校第二附属医院药剂科，漯河 462300)
摘 要 目的 探讨羊耳菊总黄酮的大孔树脂纯化工艺条件。方法 以静态吸附量和解吸率为考察指标，确定最
佳型号大孔树脂，并对其进行羊耳菊总黄酮的的动态吸附-解吸实验研究，对上样浓度、上样速度、上样 pH、上样量、洗脱
浓度、洗脱流速、洗脱体积进行优化选择。结果 最佳工艺为采用 AB-8 大孔树脂;最佳动态吸附条件为:上柱液浓度
1． 04 mg·mL －1，上柱流速为 2 BV·h －1，pH 为 5． 06。最佳洗脱条件为 4 倍体积的 70%乙醇洗脱，洗脱流速控制在
2 BV·h －1。结论 AB-8 大孔树脂对羊耳菊总黄酮具有良好的吸附和解吸效果。
关键词 羊耳菊;黄酮;大孔树脂;吸附;解吸
中图分类号 Ｒ286;Ｒ927． 2 文献标识码 B 文章编号 1004 － 0781(2015)02 － 0263 － 04
菊科植物羊耳菊(Inula cappa DC．)分布我国南方
各省区，地上部分和根入药，味辛，性平，具有祛风痰、
散热毒作用，用于治疗哮喘等［1］。主要含有黄酮类、
三萜类、甾体类、糖类等成分［2］。有关羊耳菊总黄酮
的提取工艺等方面报道近年来较多［3］，但对总黄酮的
富集纯化方面报道较少。笔者在本实验中主要探讨大
孔树脂对羊耳菊总黄酮纯化工艺。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 ＲE52CS-1 旋转蒸发器(上海亚荣生化仪
器厂)，TU-1901 紫外-可见分光光度计(北京普析通用
仪器有限责任公司) ，AE240 型电子天平(瑞士梅特勒-
托利多公司)，FD-1C-50 冷冻干燥机(北京博医康实验
仪器有限公司)。
1． 2 试剂与药物 羊耳菊为菊科植物羊耳菊(Inula
cappa DC．)干燥全草，产自贵州六盘水，经漯河医学高
等专科学校药学系赵喜兰副教授鉴定为菊科植物羊耳
菊的干燥全草，粉碎过 60 目筛(筛孔内径 0． 250 mm)，
备用。芦丁对照品(中国食品药品检定研究院，纯度
＞ 98%，批 号:110752-201012 ) ，D101、DM130、
HPD300、HPD826 型大孔树脂(沧州宝恩化工有限公
司，批号:110323，100821，110112，100123) ，D4020 型
大孔树脂(上海试剂一厂，批号:120919) ;AB-8、NKA-9
型大孔树脂 (南开大学化工厂，批号:100911，
110818)。其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 标准曲线的绘制 用 60% 乙醇溶液配制
0． 24 mg·mL －1芦丁对照品溶液。准确吸取对照品溶
液0． 5，1． 0，2． 0，3． 0，4． 0 mL于 10 mL量瓶，60%乙醇
收稿日期 2014 － 01 － 06 修回日期 2014 － 02 － 15
作者简介 陈保红(1966 －)，女，河南漯河人，副主任药
师，学士，研究方向:从事中药活性成分的分离与鉴定。电话:
(0)13721370729，E-mail:cbhonglh@ 163． com。
溶液补至 5 mL，加 5%亚硝酸钠(NaNO2)溶液0． 3 mL，
摇匀，放置 6 min 后加入 10%硝酸铝［Al (NO3)3］溶
液 0． 3 mL，摇匀，放置 6 min 后加入 4% 氢氧化钠
(NaOH)溶液 4 mL，60% 乙醇溶液定容，摇匀，静置
20 min后，在 510 nm 波长处测定吸光度，芦丁质量浓
度(C)为纵坐标，吸光度(A)为横坐标绘制标准曲线，
计算得回归方程为 Y = 1． 107X － 0． 131，r = 0． 999 7。
结果表明芦丁浓度在 0． 012 ～ 0． 096 g·L －1范围内呈
现良好线性关系。
2． 2 黄酮粗提物的制备 取药材 100 g，以料液比
1∶10加入 75%乙醇 1 L，超声波功率为 600 W下萃取
3 次，每次 3 h，滤过，合并，浓缩至 0． 5 g·mL －1原生
药，备用。
2． 3 大孔树脂的预处理 树脂适量，95%乙醇浸泡
24 h，去除杂物，湿法上柱，95%乙醇洗涤至没有白色
浑浊为止，然后纯化水洗至无乙醇味为止。分别采用
5% HCl 和 2% NaOH 溶液以 2 倍树脂床体积(The
resin bed volume，BV)·h －1洗脱，共洗脱 2 BV，纯化水
洗至中性，备用。
2． 4 树脂的筛选
2． 4． 1 吸附量和解析率的测定 称取预处理的树脂各
3． 0 g 于 100 mL 锥形瓶中，精密移取黄酮粗提物20 mL
(浓度 1． 56 mg·mL －1)，110 r·min －1震荡 24 h，吸附，过
滤，测定滤液中总黄酮含量，计算各种树脂的静态吸附
量。取吸附饱和后的树脂置于 100 mL锥形瓶，分别精密
加入 75%乙醇 20 mL，110 r·min －1震荡24 h，过滤，测定
平衡液中总黄酮含量，计算静态解吸率。［吸附量(mg·
g －1)=(原液总黄酮含量 ×原液体积 －吸附液总黄酮含
量 ×吸附液体积)/树脂质量;解吸附量 (mg·g －1)=解
析液总黄酮含量 ×解析液体积)/树脂质量;解析率(%)
=解吸附量/吸附量］［4］。
2． 4． 2 大孔吸附树脂的静态吸附动力学特性测定
·362·医药导报 2015 年 2 月第 34 卷第 2 期
精密称取预处理的树脂 3． 0 g 于 100 mL锥形瓶，精确
加入样品溶液 20 mL (浓度 1． 56 mg · mL －1) ，
110 r·min －1震荡 12 h，每隔 1 h吸取上清液测定总黄
酮的含量，绘制静态吸附动力学曲线。
2． 5 树脂动态吸附与解吸工艺参数研究 将筛选出
的理想树脂 5 g湿法装入层析柱中(径高比 1∶8) ，考
察上柱液浓度、pH、上样流速对吸附效果的影响以及
洗脱剂浓度、体积、流速对洗脱效果的影响。
2． 6 大孔树脂的筛选
2． 6． 1 不同树脂对羊耳菊总黄酮的静态吸附和解吸
实验 树脂的吸附效果与树脂极性、孔径、比表面积存
在一定的关系［5］。由表 1 可知，非极性 D101、D4020
和弱极性 AB-8 的解吸附能力都较好，非极性
HPD300、氢键 HPD826 吸附量较高，但是解析效率较
低。因此选择 D101、D4020 和 AB-8 进行静态吸附动
力学实验。
2． 6． 2 静态吸附动力学特性测定 图 1 显示，树脂吸
附 4 h后，D101、D4020、AB-8 树脂基本达到吸附平衡，
属于快速平衡型，尤以 AB-8 树脂达到饱和的速度比
其他树脂快，而且吸附量大于其他型号的树脂。
2． 7 AB-8 树脂动态吸附实验
2． 7． 1 上样液浓度的影响 AB-8 树脂 5 g湿法装柱，
将黄酮粗提液(1． 56 mg·mL －1)加纯化水稀释成 1．
33，1． 17，1． 04，0． 93，0． 85，0． 78，0． 67，0． 58 mg·mL －1
的样液各 3 BV，以流速 2 BV·h －1［BV·h －1指柱内单
位时间(h)流经单位体积树脂平均液量］、pH 保存不
变的条件下上样，上样完毕，3 BV纯化水以2 BV·h －1
流速过柱，收集流出液和洗脱液，测定黄酮含量，计算
吸附量。结果见图 2 所示，AB-8 树脂吸附量随浓度的
增大而加大，但浓度达到 1． 04 mg·mL －1，吸附量变化
幅度不大。综合考虑选择 1． 04 mg·mL －1样品液上
样。
2． 7． 2 上 样 速 率 的 考 察 将 3 BV 样 液
(1． 04 mg·mL －1)分别以 1，2，3，4，5 BV·h －1流速进
行上样，上样完毕，3 BV 纯化水以 2 BV·h －1流速过
柱，收集流出液和洗脱液，测定黄酮含量。图 3 显示，
伴随流速的增加，树脂的吸附量在减少，流速过慢时，
吸附量增加，但循环周期延长。因此，综合考虑工作效
率和吸附效果，控制流速 2 BV·h －1较理想。
2． 7． 3 样液的 pH 的确定 用稀氨水和稀盐酸调节
样液(1． 04 mg·mL －1)pH 为 3． 07，4． 06，5． 06，6． 07，
7． 08上柱，流速 2 BV·h －1，上样完毕，3 BV 纯化水以
2 BV·h －1流速过柱，收集流出液和洗脱液，测定黄酮
含量。由图 4 可见，pH5． 06 树脂吸附量最大，这可能
是由于黄酮类化合物多为多羟基酚类化合物，呈弱酸
性，因此酸性条件下吸附量最好。但如果 pH 过低，容
易形成烊盐，吸附效果变差。
2． 7． 4 上样液体积的考察 处理好的 AB-8 大孔树
脂 5 g 湿法装柱，样液(浓度为 1． 04 mg·mL －1)以
2 BV·h －1流速上样，收集流出液，每份 1 BV，检测流
出液黄酮含量。由图 5 结果显示，上样体积 ＜ 3 BV 时
泄漏较少，＞ 3 BV时样液泄漏明显，体积达 10 BV时，
流出液的总黄酮浓度与上样液接近，此时树脂已基本
吸附饱和。
2． 8 动态洗脱实验
2． 8． 1 洗脱剂乙醇浓度的确定 AB-8 大孔树脂 5 g
湿法装柱，取 1． 04 mg·mL －1样液，以流速 2 BV·h －1
上样，依次采用 3 BV 纯化水，30%，40%，50%，60%，
70%，80%，90%乙醇梯度以 2 BV·h －1流速洗脱，收
集流出液，测定黄酮含量，计算解析率。图 6 显示，当
乙醇浓度达到 70%时，解析率最高，可能与黄酮极性
较弱相关，与 70%乙醇的极性相当。乙醇浓度过大
时，杂质容易洗脱下来。
2． 8． 2 洗脱剂流速的确定 AB-8大孔树脂湿法装柱，
取样液(浓度 1． 04 mg·mL －1)以流速为 2 BV·h －1上
样 ，充分吸附，2BV去离子水冲洗，3BV的70%乙
表 1 7 种树脂静态吸附及解吸性能比较
树脂 极性
粒径 /
mm
比表面积 /
(m2·g －1)
平均孔径 /
nm
吸附量 /
(mg·g －1)
解析率 /
%
D101 非极性 0． 2 ～ 0． 60 400 ～ 600 10． 0 ～ 12． 0 7． 3 89． 8
D4020 非极性 0． 3 ～ 1． 25 540 ～ 580 10． 0 ～ 10． 5 7． 9 88． 4
DM130 中极性 0． 3 ～ 1． 25 500 ～ 550 9． 0 ～ 10． 0 6． 3 72． 4
NKA-9 极性 0． 3 ～ 1． 25 250 ～ 290 15． 5 ～ 16． 5 6． 1 67． 9
AB-8 弱极性 0． 3 ～ 1． 20 480 ～ 520 13． 0 ～ 14． 0 7． 7 90． 7
HPD300 非极性 0． 3 ～ 1． 20 800 ～ 870 5． 0 ～ 5． 5 7． 4 82． 8
HPD826 氢键 0． 3 ～ 1． 25 500 ～ 600 9． 0 ～ 10． 0 7． 1 81． 2
·462· Herald of Medicine Vol. 34 No. 2 February 2015
图 1 树脂静态吸附动力学曲线
图 2 不同上样液浓度的吸附量的变化曲线
图 3 不同流速的吸附量的变化曲线
图 4 不同 pH的吸附量的变化曲线
醇以 1，2，3，4，5 BV·h －1的流速洗脱，收集流出液，测
定黄酮的含量。由图 7 可以看出，伴随流速的增加，黄
酮的解析率逐步减少;若流速过慢则循环周期延长，以
选择流速 2 BV·h －1较理想。
图 5 不同上样体积羊耳菊总黄酮泄漏曲线
图 6 不同乙醇浓度的解析率的变化曲线
图 7 不同洗脱剂流速的解析率的变化曲线
2． 8． 3 洗脱曲线 AB-8 大孔树脂湿法装柱，取样液
(浓度 1． 04 mg·mL －1)以流速 2 BV·h －1上样，充分
吸附，2 BV纯化水洗脱，70%乙醇以 2 BV·h －1流速洗
脱，分段收集洗脱液，每段 1 BV。图 8 显示，当洗脱量
为 4 BV时，树脂上的黄酮基本完全洗脱。故洗脱剂用
量的确定为 4 BV。
3 讨论
7 种树脂中，AB-8 大孔树脂对羊耳菊总黄酮的吸
附量和解析率较好，为快速平衡型，是纯化羊耳菊总黄
酮理想的树脂。
AB-8大孔树脂吸附羊耳菊总黄酮的最佳工艺参
数:上样药液浓度 1． 04 mg·mL －1，流速为2 BV·h －1，
·562·医药导报 2015 年 2 月第 34 卷第 2 期
图 8 黄酮动态洗脱曲线
pH为 5． 06。解析工艺参数:4 BV 的 70%乙醇浓度洗
脱，洗脱流速控制在 2 BV·h －1。
羊耳菊提取液经过 AB-8 大孔树脂分离纯化后，羊
耳菊总黄酮总纯度可以达到 65． 3%。
参考文献
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取工艺研究［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16(8):7 －
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抑菌作用［J］．湖北农业科学，2010，49(2) :426 － 429．
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化工艺研究［J］．怀化学院学报，2007，26(11) :56 － 59．
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的工艺研究［J］．中国药学杂志，2011，46(4) :287 －292．
DOI 10． 3870 /yydb． 2015． 02． 035
正交实验优选羟丙基 -β-环糊精对
右旋龙脑的增溶条件*
缪菊连1，黄照昌2，李红艳2，杨丽娟1
(1．大理学院药学与化学学院药物研究所，大理 671000;2．大理药业股份有限公司，大理 671000)
摘 要 目的 探讨羟丙基-β-环糊精对右旋龙脑溶解度的影响。方法 采用气相色谱法测定右旋龙脑含量，设计
L16(4
5)正交实验优选超声时间、羟丙基-β-环糊精浓度、温度、搅拌时间对右旋龙脑溶解度的影响。结果 超声时间为
60 min，羟丙基-β-环糊精浓度 25%，温度 25 ℃，搅拌时间 8 h，右旋龙脑溶解度为 59． 80 mg·mL －1。结论 羟丙基-β-环
糊精对右旋龙脑溶解度有很大的提高。
关键词 羟丙基-β-环糊精;右旋龙脑;溶解度
中图分类号 Ｒ286;TQ460． 1 文献标识码 B 文章编号 1004 － 0781(2015)02 － 0266 － 03
右旋龙脑(bomeolum)原名龙脑香，又称天然冰片，
俗称梅片，分子式为 C10H180，原产于印尼的苏门答腊群
岛，最早是从龙脑香［Dryobalanops arornatica Gaertmer］
的树干经水蒸汽蒸馏的结晶产物，国内现为将樟科植物
樟［Cinnamomun Camphora(L．)Presl］的新鲜枝叶经水
蒸汽蒸馏取其结晶产物即得。其气清香，味苦、辛凉，有
通诸窍、散郁火、消肿止痛、消热解毒、去翳明目、开窍醒
神、化腐生肌、抗癌治癌等药用功效，是名贵珍稀药材和
高级香料［1］。右旋龙脑容易升华，制剂加工过程中损失
较大［2］。为提高其稳定性，20 世纪 80 年代有学者进行
了右旋龙脑的包合研究［3-4］。另一方面，右旋龙脑的水
溶解度小，约为0． 3 mg·mL －1，液体制剂的开发存在一
收稿日期 2014 － 01 － 22 修回日期 2014 － 02 － 25
基金项目 * 大学生科研基金项目(KYSX2013084)
作者简介 缪菊连(1977 －) ，女，云南宣威人，副教授，硕
士，从事药剂学的研究与教学工作。电话:(0)15125282836，
E-mail:582090645@ qq． com。
定困难。如何提高右旋龙脑的溶解度及溶出度，也是
制剂研究者关注的课题。杜松等［5］采用羟丙基-β-环
糊精与 β-环糊精研究相溶解度问题，证明右旋龙脑与
β-环糊精生成不溶性包合物，β-环糊精不能增加右旋
龙脑的溶解度。右旋龙脑与羟丙基-β-环糊精生成可
溶性包合物，羟丙基-β-环糊精可以增加右旋龙脑的溶
解度，但没有对影响溶解度的因素做系统研究。笔者
采用羟丙基-β-环糊精水溶液法，通过正交实验，优选
羟丙基-β-环糊精提高右旋龙脑溶解度较佳的实验条
件，为右旋龙脑的羟丙基-β-环糊精包合物液体制剂的
制备提供参考。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 7890A 气相色谱仪(Agilent 公司);
SB5200DT超声清洗机［必能信超声(上海)有限公
司］;HZS-H水浴震荡器(哈尔滨市东联电子技术开发
有限公司)。
1． 2 试药 右旋龙脑对照品(中国食品药品检定研
·662· Herald of Medicine Vol. 34 No. 2 February 2015