全 文 ：作者简介:陈嘉 ,女 ,正攻读基础兽医专业的硕士学位。
＊通讯作者(Correspondent author)
不同产地雪莲花中多糖的含量测定
陈　嘉 ,黄雅杰 ,张　琦＊
(西南民族大学生命科学与技术学院 , 四川 成都 610041)
摘要:目的　测定不同产地雪莲花中多糖的含量。方法　采用蒽酮-硫酸比色法测定相对单糖含量 , 利用单糖和多糖的换
算因子计算多糖含量;测定波长 620 nm。结果　线性范围为 0.01 ～ 0.06 mg·ml-1(r=0.9994),平均加样回收率为 100.08%,
RSD=4.15%。结论　所用方法快速 、准确 、灵敏。测得 5种不同产地雪莲花中多糖含量为 14.5%～ 22.3%。
关键词:雪莲花;多糖;蒽酮-硫酸比色法;含量测定
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1006-0103(2006)03-0268-02
Determination of polysaccharides in Snow Lotuses
CHEN Jia ,HUANG Ya-jie ,ZHANG Qi＊
(Southwest Nationalitive University , Chengdu 610041 , China)
Abstract:OBJECTIVE　To determine polysaccharides in Snow Lotuses.METHODS　The polysaccharides content was determined with An-
throne-sulfuric acid colorimetry.The detectve wavelength was 620 nm.RESULTS　The linearity was in the range of 0.01-0.06 mg·ml-1
(r=0.9994).The average recovery rate was 100.08%with RSD of 4.15%.CONCLUSION　The method is rapid , reliable and sensitive.
The 5 samples of Snow Lotuses which bought from different areas in China were assayed and the contents of polysacckarides varied from 14.5%
to 22.3%.
Key words:Snow Lotuses;Polysaccharides;Anthrone-sulfuric acid colorimetry;Assay
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006-0103(2006)03-0268-02
　　雪莲花又名雪莲 ,属于菊科风毛菊属 Saussurea
雪兔子亚属Subgen Eriocoryne 植物 ,作为药材使用的
品种有产于西藏等地的三指雪兔子 S .tridactyla
Sch.-Bip.ex Hook.f.;产于四川 、云南等地的绵头
雪兔子 S .lanicep Hand.-Mazz;产于甘肃 、青海等地
的水母雪莲 S .medusa Maxim;产于新疆的天山雪莲
S .involucrata Kar.et Kir.、鼠曲雪兔子 S.gnaphalders
Sch.-Bip.等[ 1] 。雪莲多生长在海拔 4 km 以上的
高山石滩上 ,是高山地区的民间药用植物 ,具有散寒
除湿 、活血通经 、抗炎镇痛等功效 ,用于治疗风湿性关
节炎 、妇科病等。所含成分除黄酮类化合物 、萜类及
其衍生物 、甾体类化合物外 ,还有糖和苷类化合物等。
关于雪莲花总黄酮含量测定已有报道[ 2] 。现采用比
色法测定不同产地(或品种)雪莲花中多糖的含量。
1　实验部分
1.1　仪器 、试剂和试药
721型分光光度计(上海分析仪器厂);CARY 50
型紫外分光光度计(Varian 公司)。乙醇 、丙酮 、乙
醚 、蒽酮 、硫酸 、葡萄糖均为分析纯 ,水为双蒸水。雪
莲花(市售)经四川省药品检验所黎跃成主任药师鉴
定为水母雪莲花和绵头雪莲花 ,品种及来源见表 3。
1.2　方法与结果
1.2.1　多糖的提取与纯化　准确称取雪莲花干品
(用烘干法测定药材水分为 12.25%)100.0 g ,加 15
倍量的水煎煮(1.5 h×3),合并煎液 ,过滤 ,滤液静
置 12 h。取上清液浓缩至 1∶2(药材∶药液),加乙醇
至含醇量为 80%,搅拌 ,静置 24 h。沉淀物转移至
圆底烧瓶中 ,分别以无水乙醇 、丙酮 、乙醚回流洗涤 ,
得灰白色粗多糖粉末。将粗多糖溶于水 ,用Sevag法
除去蛋白质 ,0.5%活性炭脱色 。上清液装入透析袋
(分子量 3.5 kD)透析 3 d ,前两天用自来水透析 ,第
3天用蒸馏水透析 ,换水 4次 。透析液浓缩 ,加乙醇
至醇含量为 80% ,静置24 h。所得沉淀物用无水乙
醇洗涤 ,抽滤 , 60℃烘干 , 得白色粉末状雪莲多糖。
雪莲多糖溶于水 ,与茚三酮反应呈阴性 ,与碘反应不
显蓝色 ,说明不含蛋白质和淀粉。紫外扫描图谱在
200 nm 有最大吸收 ,在 280 nm 和 260 nm 无蛋白和
核酸吸收峰 ,亦未见其他杂质吸收峰 。
1.2.2　溶液的配制　精密称取 105℃干燥至恒重的
葡萄糖 0.1004 g ,以蒸馏水溶解 ,定容至 100 ml量瓶
中 ,即得1.004mg·ml-1的葡萄糖标准溶液。取60℃
干燥至恒重的雪莲花多糖 0.5 g ,于 100 ml量瓶中 ,
精密称定 ,加少量蒸馏水溶解 ,定容 ,得雪莲多糖供
试液 。称取 0.2 g 蒽酮 ,加 100 ml浓硫酸 ,混合摇匀
即得蒽酮溶液(临用配)[ 3] 。取雪莲花细末 0.5 g ,精
密称定 ,置圆底烧瓶中 ,以 80%乙醇 20 ml回流提取
1 h ,趁热过滤 ,残渣用 80%热乙醇洗涤 2次 ,挥干乙
醇 。残渣连同滤纸置圆底烧瓶中 ,以 40 ml蒸馏水
加热回流提取1 h ,趁热过滤 ,重复操作 1次 ,残渣用
华西药学杂志
W C J · P S 　2006 , 21(3):268～ 269　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2006.03.022
热水洗涤2次 ,洗液并入滤液中 ,放冷后 ,定容至100
ml量瓶中 ,即得样品溶液 。
1.2.3　标准曲线的制备　分别量取葡萄糖标准溶
液0.10 、0.20 、0.30 、0.40 、0.50 、0.60 ml于 10 ml量
瓶中 ,蒸馏水定容 ,摇匀。分别精密吸取 2 ml 上述
溶液于10 ml具塞试管中 ,以 2 ml蒸馏水作空白 ,各
自加入 4 ml蒽酮试剂 ,立即混匀 ,置沸水浴中加热
10 min ,迅速冷却至室温 ,于 620 nm测定吸光度。以
吸光度对葡萄糖浓度做线性回归 ,回归方程为:C =
7.73×10-2A+4×10-4(r =0.9994)。表明葡萄糖
在0.01 ～ 0.06 mg·ml-1范围内与吸光度呈良好的线
性关系。
1.2.4　换算因子的测定　取“1.2.2”项下的雪莲多
糖供试液 ,分别精密吸取 2 ml于 10 ml具塞试管中 ,
加4.0 ml蒽酮试液 ,摇匀 。按“1.2.3”项下操作 ,测
定吸光度 ,计算 5份平行样品中葡萄糖含量和平均
值。再计算换算因子 , f =W/ CD =7.43(RSD =
2.68%, n=5)。式中 f为换算因子 ,W 为多糖质量
(mg), C为多糖溶液中葡萄糖质量(mg), D 为多糖
的稀释倍数。
1.2.5　稳定性试验　取“1.2.2”项中样品溶液 ,按
“1.2.3”项下操作 ,每隔 5 min ,连续 30 min测定吸光
度。平均吸光度为 0.637 , RSD =0.08%(n =7),表
明稳定性良好。再每隔 1 h ,连续 6 h 内测定吸光
度。结果平均吸光度为 0.574 , RSD =0.83%(n =
6),表明样品溶液 6 h内较稳定。
1.2.6　精密度试验　取雪莲花多糖供试液 ,按“1.
2.3”项下重复测定同一样品吸光度 5次 。结果吸光
度的 RSD=0.09%,表明仪器精密度良好 。
1.2.7　重复性试验　取同一样品平行操作 5份 ,按
“1.2.2”项制备溶液 。按“1.2.3”项下测吸光度。计
算雪莲花多糖的含量 , 结果平均含量为 17.31%,
RSD =1.64%(n=5),表明方法重复性良好。
1.2.8　加热时间的选择　取同一雪莲花样品 3份 ,
按“1.2.2”项制备样品溶液 ,测定吸光度 ,结果表明
加热时间在15 min时 ,有较大吸光度且稳定。
1.2.9　加样回收率的测定 　精密称定样品粉末
0.2 g ,加入一定量葡萄糖溶液 ,按“1.2.2”项下方法
制备溶液 ,测定吸光度。平均回收率为 100.08%,
RSD =4.15%(表 1)。
1.2.10　样品的测定　分别取不同产地的雪莲花
0.5 g ,精密称定 ,同一样品平行操作 3份 ,按“1.2.2”
项下方法制备溶液 ,测定吸光度 ,求供试液中相对葡
萄糖的含量 ,并计算样品中多糖含量(表 2)。多糖
含量=CDf/W×100%。式中 C为供试液中葡萄糖
含量(mg),D为供试液的稀释因子 , f为换算因子 ,W
为样品的重量。实验结果表明:不同产地和品种的
雪莲花中多糖的含量不同 ,其中甘肃冰山的含量最
高 ,云南丽江的最低。
表 1　加样回收率的实验结果(mg , n=5)
Table 1　The results of recovery test(mg , n=5)
Original Added Detected Recovery/ % X/ % RSD/ %
4.761 4.016 8.933 103.90 100.08 4.15
5.208 4.016 9.386 104.00
4.704 4.016 8.888 104.20
4.611 4.016 8.494 96.70
4.544 4.016 8.402 96.10
表 2　不同产地雪莲花中多糖的含量
Table 2　Crude drugs and their origin and the results of determination
of total polysaccharides in Saussurea
Scientific name of sample Habitat Contents/ % X/ % RSD/ %
S.medusa Maxim Sichuan Aba 15.68 16.94 15.38 16.00 4.74
S.medusa Maxim Sichuan Baoxin 15.97 14.86 15.45 15.45 3.61
S.medusa Maxim Sichuan Ya an 17.43 17.18 17.43 17.35 0.99
S.medusa Maxim Gansu Bingshan 22.29 22.29 22.29 22.29 0
S.lanicep Hand.-Mazz Yunnan Lijiang 14.93 13.76 14.76 14.54 4.47
2　讨论
我们先以 80%乙醇回流提取除去小分子糖类 、
苷类和生物碱等干扰成分 ,再用水回流提取多糖 ,以
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量 。所用方法简单 、
易行 ,重复性良好 ,灵敏度高 ,显色稳定 ,但所用显色
剂宜临用时现配 。制备样品溶液时 ,对雪莲的残渣
再重复一次提取操作 ,所得溶液以硫酸-蒽酮法检
测 ,溶液不显黄绿色 ,说明前两次提取已将雪莲中多
糖提尽 ,证明样品溶液的制备方法合理可行。
在多糖的含量测定中 ,尤其当多糖组成复杂时 ,
因较难得到相应多糖对照品 ,多采用葡萄糖代替对
照品 ,测定样品中多糖的相对含量。文中以比色法
测定样品中的单糖 ,通过单糖和多糖的换算因子计
算药材中的多糖。蒽酮-硫酸比色法能有效测定多
糖含量 ,但影响因素较多 。照文献[ 4]确定了测定波
长及显色剂的用量 ,同时考察了加热时间和显色剂
的稳定性。不同来源和产地的雪莲花多糖含量不
同 ,同种水母雪莲花以甘肃冰山出产者含量最高 ,四
川阿坝 、四川雅安和四川雅安宝兴出产者差异不大 ,
云南丽江产的绵头雪莲含量最低 。同品种雪莲因产
地不同其多糖含量也有较大差异 。提示进行雪莲产
品开发研究时 ,应确定品种和产地。
参考文献:
[ 1] 　 赵德修 , 赵丽丽.雪莲花的研究进展[ J] .中草药 , 1996 , 27
(6):372-375.
[ 2] 　 张琦 ,伍红 ,张嫦.五种药用雪莲花中总黄酮及微量元素的测
定和比较研究[ J] .华西药学杂志 , 1997 , 12(3):145-150.
[ 3] 　陈友仙 ,张中苏.黄芪多糖含量测定法中存在的问题及解决
办法[ J] .中医药研究 ,1993 ,(5):56-56.
[ 4] 　 陈鸿英 , 朱永智 ,吴乃居 ,等.朝鲜淫羊藿多糖的含量测定
[ J] .中草药 , 2003 , 34(9):810-812.
收稿日期:2005-12
269第 3期 陈　嘉 ,等 。不同产地雪莲花中多糖的含量测定