全 文 ：漏芦抗肺癌活性部位的筛选
周 婷1，2， 王程成1，2， 封 亮1， 谭晓斌1* ， 贾晓斌1
(1． 南京中医药大学附属中西医结合医院，江苏 南京 210028;2． 江苏省中医药研究院，江苏 南京
210028)
收稿日期:2015-12-14
作者简介:周 婷 (1990—) ，女，硕士，从事中药活性物质基础研究。Tel: (025)85608672，E-mail:jsnjjxzs@ 163． com
* 通信作者:谭晓斌 (1971—) ，男，副研究员，从事中药活性物质基础研究。Tel: (025)85608672，E-mail:njtxb@ hotmail． com
摘要:目的 筛选漏芦 Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC． 体内外抗肺腺癌的活性部位，并对其化学成分进行解析。方
法 漏芦经有机溶媒提取，其残渣再经水提，共 5 个活性部位与人肺腺癌细胞 A549 和 H1299 共孵育，从中筛选抗肺
癌活性最强的部位;并观察它们对 Lewis接种 C57BL /6J 荷瘤小鼠抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数的影响，验证其体内
抗肺癌作用。采用 UPLC-Q-TOF-MS-MS对该活性部位进行解析。结果 漏芦抑制 A549 细胞增殖作用的提取物依次为
正丁醇 (半数抑制浓度 IC50 为 205. 43 μg /mL) ＞ 乙酸乙酯 (IC50 为 244. 22 μg /mL) ＞ 二氯甲烷 (IC50 为
350. 40 μg /mL) ;漏芦抑制 H1299 细胞增殖作用的提取物依次为正丁醇 (IC50为 315. 87 μg /mL) ＞乙酸乙酯 (IC50为
356. 13 μg /mL) ＞二氯甲烷 (IC50为 416. 13 μg /mL)。漏芦提取物抑制 Lewis 荷瘤小鼠肿瘤增长的作用排序为正丁醇
高剂量组 (37. 43%) ＞ 正丁醇低剂量组 (32. 91%) ＞ 乙酸乙酯高剂量组 (25. 87%) ＞ 乙酸乙酯低剂量组
(21. 15%)。漏芦抗肺癌活性部位的主要成分为三萜类、甾醇类和植物激素类等。结论 漏芦体内外抗肺癌作用最强
的部位为正丁醇部位，该部位主要的成分为以齐墩果酸和熊果酸为代表的三萜类，以 β-谷甾醇和豆甾醇为代表的甾
醇类，以 β-蜕皮甾酮、漏芦素甲为代表的植物激素类。
关键词:漏芦;活性部位;抗肺癌;成分
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2016)10-2099-07
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 10. 002
Screening of active fractions from Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC． for anti-
lung cancer
ZHOU Ting1，2， WANG Cheng-cheng1，2， FENG Liang1， TAN Xiao-bin1* ， JIA Xiao-bin1
(1． The Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210028，China;2． Jiangsu
Provincial Aacademy of Chinese Medicine，Nanjing 210028，China)
ABSTＲACT:AIM To screen the active fractions from Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC． for anti-lung cancer in
vivo and to analyze its chemical composition． METHODS The five active fractions of organic extract of Ｒ． uni-
florum plus aqueous extract of decoction dregs were incubated with human lung adenocarcinoma cells A549 and
H1299 to screen the strongest active fraction． Tumor inhibition rate，thymus index，and spleen index were observed
on Lewis transplanted C57BL /6J-bearing mice． UPLC /Q-TOF-MS-MS was used to analyze the chemical composi-
tion of active fractions． ＲESULTS The fraction from Ｒ． uniflorum inhibited the proliferation of A549 and H1299
cells from the strongest to the least strong were n-butanol (IC50 205. 43 μg /mL) ＞ ethyl acetate (IC50
244. 22 μg /mL) ＞ dichloromethane (IC50 350. 40 μg /mL) ，and n-butanol (IC50 315. 87 μg /mL) ＞ ethyl ace-
tate (IC50 356. 13 μg /mL) ＞ dichloromethane (IC50 416. 13 μg /mL) ，respectively． The fraction from Ｒ． uniflo-
rum inhibited the Lewis tumor-bearing mice tumor growth in the order of n-butanol high dose group (37. 43%) ＞
n-butanol low dose group (32. 91%) ＞ ethyl acetate high dose group (25. 87%) ＞ ethyl acetate low dose group
(21. 15%)． The main chemical compositions of active fractions for anti-lung cancer are comprised terpenes，sterols
and plant hormones． CONCLUSION The strongest active fraction from Ｒ． uniflorum for anti-lung cancer in vivo
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is n-butanol fraction，which contains oleanolic acid and ursolic acid as triterpenes，beta-sitosterol and stigmasterol
as sterols，and beta-ecdysterone and rhaponticum as plant hormones．
KEY WOＲDS:Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC．;active fraction;anti-lung cancer;chemical composition
漏芦来源于菊科植物祁州漏芦 Ｒhaponticum
uniflorum (L．)DC． 的干燥根，具有清热、解毒、
消痈、除肿等功效［1］。漏芦主要成分为三萜类、
植物激素类、甾醇类、酚酸类等［2］。文献报道漏
芦提取物有诱导肿瘤细胞凋亡、调控肿瘤发生过程
的相关酶、逆转多药耐药性、提高机体免疫力、化
学预防肿瘤等作用［3-5］。漏芦的化学成分和抗肿瘤
作用研究已经有了较好的基础，但是漏芦抗肿瘤的
活性部位和活性部位成分的研究并不明确。本研究
建立体内外抗肺癌模型，筛选漏芦抗肺癌的活性部
位，对活性部位的成分进行解析，为漏芦抗肺癌的
物质基础研究提供依据。
1 实验材料
1. 1 药材与试剂 漏芦，产地河北 (批号
2013060701)，购自河北安国万联中药饮片有限公
司，经南京中医药大学吴德康教授鉴定为菊科植物
祁州漏芦 Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC． 的干燥
根;对照品齐墩果酸 (批号 110709-200505，纯度
99. 4%)购自中国食品药品检定研究院;β-蜕皮
甾酮 (批号 MUST-12122111，纯度≥98%)、黄独
乙素 (批号 MUST-12050812，纯度≥98%)、坡模
酸 (批号 MUST-13102507，纯度≥98%)、熊果酸
(批号 MUST-13020602，纯度≥98%)购自成都曼
思特生物科技有限公司;胎牛血清、ＲPMI 1640 培
养基、PBS缓冲盐、胰蛋白酶均购于美国 Gibco 公
司;顺铂 (DDP，批号 20121104，南京制药厂有
限公司);羧甲基纤维素钠 (CMC-Na，批号
20130420，杭州普修生物科技有限公司) ;环磷酰
胺 (CTX，批号 12071721，南京制药厂有限公
司);四甲基偶氮唑蓝 (MTT，批号 EXP2014 /12，
南京生兴生物有限公司) ;化学试剂均为分析纯。
1. 2 仪器 Waters Q-TOF Synapt G2 质谱仪 (Wa-
ters MS Technologies，美国) ;生物安全柜 (Class
II Biosafety Cabinet，美国 Labconco 公司) ;酶标仪
(Multiskan spectrum，美国 Thermo公司) ;Nikon E-
clipse TS100 倒置显微镜 (XDS-1B，日本尼康公
司) ;CO2 细胞培养箱 (HEＲA cell 150，美国
Thermo公司)。
1. 3 细胞与动物 A549、H1299 和 Lewis 肺癌细
胞株购自南京凯基生物科技发展有限公司;C57
BL /6J小鼠，雄性，6 ～ 8 周龄，体质量 20 ～ 24 g，
由上海斯莱克动物中心提供，合格证号 SCXK
(沪)2012-0004。
2 实验方法
2. 1 漏芦的提取 称取漏芦 2. 0 kg，加 8 倍量
80%乙醇回流提取 2 次，每次 2 h，过滤，得到醇
提液和药渣。将漏芦醇提液合并，减压浓缩，留取
适量作为醇提部位，余下的醇提浓缩液依次用二氯
甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。药渣再加入 8 倍量
蒸馏水，提取 2 次，每次 2 h，水提液与萃取余下
的水溶液合并，得到水提部位［6］，共得漏芦醇提、
二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、水提 5 个提取
部位。
2. 2 漏芦不同溶剂提取物抑制 A549、H1299 细胞
增殖的作用 取对数期的细胞，消化后调整细胞密
度为 1. 0 × 104 /mL。接种于 96 孔板中，每孔
100 μL，每组设 6 个复孔，置于 37 ℃、5% CO2
培养箱中孵育。24 h 后，吸去培养基，加入药液
使得药物的终质量浓度分别为 63、125、250、
500、1 000 生药 μg /mL。设定空白孔 (空白培养
基)、阳性对照孔 (顺铂，给药质量浓度为
10 μg /mL) ，置于 37 ℃、5% CO2 培养箱中。24 h
后，加入 MTT 10 μL，继续孵育 4 h 后，每孔加
100 μL DMSO 溶液，振荡 10 min 后，置酶标仪
570 nm下测定吸光度值 (A) ，实验平行操作 3
次［7-8］。计算肿瘤细胞生长抑制率，采用 SPSS 17. 0
计算半数抑制浓度 IC50。计算公式如下:
抑制率 =
A空白 － A给药
A空白
× 100%
2. 3 漏芦不同溶剂提取物抑制 Lewis 荷瘤小鼠肿
瘤增长的作用 取对数期的 Lewis 细胞，胰酶消化
后，离心 (2 000 r /min，2 min) ，收集底部细胞配
制成细胞悬液，调整细胞密度为 1. 0 × 107 /mL。先
用酒精棉球将小鼠右前肢腋下擦湿消毒，用注射器
吸取 600 μL的细胞悬液接种 3 只小鼠后，再吸取
600 μL接种下面 3 只。次日称重。随机分为模型
组，阳性组，乙酸乙酯高、低剂量组，正丁醇高、
低剂量组，每组 6 只。称取适量漏芦提取部位，研
磨成粉末，加入 0. 5% CMC-Na，得漏芦提取部位
悬液。模型组灌胃生理盐水，每日 0. 3 mL /次;阳
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性组腹腔注射环磷酰胺 ［30 mg /(kg·d) ］，每日
0. 2 mL /次;给药组 ［高剂量组 30 g 生药 /(kg·
d)］，低剂量组 15 g 生药 /(kg·d) ］灌胃药液，
每日 0. 3 mL /次。14 d后，称重后处死小鼠，剥取
瘤块、脾脏、胸腺，称重［9-10］。计算荷瘤小鼠的抑
瘤率、脏器指数。计算公式如下。
抑瘤率 = 模型组瘤重 － 药物组瘤重
模型组瘤重
× 100%
脏器指数 = 脏器质量 / g
小鼠体质量 / g
× 100
2. 4 液质联用条件
2. 4. 1 色谱条件 色谱柱:Waters Acquity C18
(2. 1 mm × 50 mm，1. 7 μm)。流动相:乙腈
(A)-0. 1% 冰乙酸水溶液 (B)。梯度洗脱 0 ～
2 min，2% A;2 ～ 5 min，2% ～ 15% A;5 ～
10 min，15% ～ 35% A;10 ～ 15 min，35% ～ 45%
A;15 ～ 20 min，45% ～ 65% A;20 ～ 28 min，
65% ～ 100% A。体积流量 0. 2 mL /min;进样量
2 μL;柱温 30 ℃。
2. 4. 2 质谱条件 电喷雾离子源 (ESI)，锥孔电
压 23 V，毛细管电压 1. 3 kV，雾化器压力 40 psi，
电离电压 40 V，离子源温度 120 ℃，去溶剂化气流
温度 350 ℃，气流量 700 L /h，检测质量范围 m / z
50 ～1 500。离子极性:正离子模式 (positive)。
2. 4. 3 溶液的配制 对照品溶液:分别精密称取
β-蜕皮甾酮 1. 00 mg、黄独乙素 1. 03 mg、坡模酸
1. 02 mg、齐墩果酸 1. 03 mg、熊果酸 1. 02 mg，分
别定容至 10 mL，加甲醇至刻度，摇匀，备用。
供试品溶液:称取漏芦粉末约 10. 0 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中。加 8 倍量 80%乙醇回流提
取 2 次，每次 2 h，合并滤液，减压浓缩，滤过，
备用。
2. 5 数据处理方法 实验数据采用 x ± s 表示，采
用 SPSS 17. 0 软件进行统计分析，组间比较采用单
因素方差分析，P ＜ 0. 05 有统计意义。
3 实验结果
3. 1 漏芦不同溶剂提取物抑制 A549、H1299 细胞
增殖的作用
3. 1. 1 漏芦不同溶剂提取物抑制肺癌细胞 A549
增殖的作用 漏芦不同溶剂提取物抑制 A549 增殖
的作用由大到小依次为:正丁醇部位 ＞乙酸乙酯部
位 ＞二氯甲烷部位，抑制 A549 增殖的 IC50分别为
(205. 43 ± 16. 10)、(244. 22 ± 10. 34)、(350. 40 ±
19. 67)μg /mL。在不同部位中，质量浓度越大，
抑制率越高，漏芦不同溶剂提取物抑制 A549 增殖
的作用呈剂量依赖性。与醇提组比，正丁醇组和乙
酸乙酯组抑制 A549 增殖的 IC50 有显著性差异
(P ＜ 0. 05) ，漏芦正丁醇部位抑制 A549增殖作用最
强，乙酸乙酯部位次之，水部位大于 1 000 μg /mL，
体外无明显抑制活性，见表 1、图 1。
表 1 漏芦不同溶剂提取物抑制肺癌细胞 A549、H1299 增
殖的 IC50 (x ± s，n =3)
Tab. 1 IC50 of extracted fractions of Ｒhaponticum uniflo-
rum (L．)DC． inhibiting A549，H1299 lung canc-
er cell proliferation (x ± s，n =3)
组别
IC50 /(生药 μg·mL －1)
A549 H1299
漏芦醇提部位 375. 47 ± 23. 70 428. 87 ± 7. 98
漏芦二氯甲烷部位 350. 40 ± 19. 67 416. 13 ± 10. 45
漏芦乙酸乙酯部位 244. 22 ± 10. 34* 356. 13 ± 11. 30*
漏芦正丁醇部位 205. 43 ± 16. 10* 315. 87 ± 13. 72*
漏芦水提部位 ＞ 1 000 ＞ 1 000
注:与漏芦醇提部位比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
注:与漏芦 63 μg /mL比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
图 1 漏芦不同溶剂提取物抑制肺癌细胞 A549 增殖的
作用 (x ± s，n =3)
Fig. 1 Effects of extracted fraction of Ｒhaponticum uni-
florum (L．)DC． inhibiting A549 lung cancer
cell proliferation (x ± s，n =3)
3. 1. 2 漏芦不同溶剂提取物抑制肺癌细胞 H1299
增殖的作用 漏芦不同溶剂提取物抑制 H1299 增
殖的作用由大到小依次为:正丁醇部位 ＞乙酸乙酯
部位 ＞二氯甲烷部位，抑制 H1299 增殖的 IC50分别
为(315. 87 ±13. 72)、(356. 13 ± 11. 30)、(416. 13 ±
10. 45)μg /mL。在不同部位中，质量浓度越大，抑
制率越高，漏芦不同溶剂提取物抑制 H1299 增殖的
作用呈剂量依赖性。与醇提组比，正丁醇组和乙酸
乙酯组抑制 H1299 增殖作用有显著性差异 (P ＜
0. 05)，漏芦正丁醇部位抑制 H1299 增殖作用最强，
乙酸乙酯部位次之，水提物大于1 000 μg /mL，体外
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无明显抑制活性，见表 1、图 2。
注:与漏芦 63 μg /mL比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
图 2 漏芦不同溶剂提取物抑制肺癌细胞 H1299 增殖的
作用 (x ± s，n =3)
Fig. 2 Effects of extracted fraction of Ｒhaponticum uni-
florum (L．)DC． inhibiting H1299 lung cancer
cell proliferation (x ± s，n =3)
3. 2 漏芦对 Lewis 荷瘤小鼠肿瘤、胸腺、脾脏的
影响
3. 2. 1 漏芦不同溶剂提取物对荷瘤小鼠肿瘤的影
响 漏芦给药组抑瘤率从大到小依次为:正丁醇高
剂量组 ＞正丁醇低剂量组 ＞乙酸乙酯高剂量组 ＞乙
酸乙酯低剂量组，抑瘤率分别为 (37. 43 ±
4. 80)%、(32. 91 ± 7. 31)%、(25. 87 ± 4. 75)%、
(21. 15 ± 5. 31)%。漏芦给药组小鼠瘤重由小到大
依次为:正丁醇高剂量组 ＜正丁醇低剂量组 ＜乙酸
乙酯高剂量组 ＜乙酸乙酯低剂量组，瘤重分别为
(2. 49 ± 0. 58)、 (2. 54 ± 0. 95)、 (3. 24 ± 0. 42)、
(3. 31 ± 0. 26)g。
与模型组比，给药组瘤重有显著性差异 (P ＜
0. 05)，漏芦乙酸乙酯和正丁醇部位对 Lewis 肿瘤
的增长有抑制作用;与低剂量组比，高剂量组瘤重
有显著性差异 (P ＜ 0. 05) ，漏芦乙酸乙酯和正丁
醇部位对漏芦 Lewis肿瘤增长的抑制作用呈现剂量
依赖性;与乙酸乙酯高剂量组比，正丁醇高剂量组
瘤重有显著性差异 (P ＜ 0. 05)，漏芦正丁醇部位
抑制小鼠肿瘤增长的作用更强，见表 2、图 3。
3. 2. 2 漏芦不同溶剂提取物对荷瘤小鼠胸腺、脾
脏的影响 与模型组比，给药组胸腺指数有显著性
差异 (P ＜ 0. 05) ，小鼠胸腺指数升高，漏芦乙酸
乙酯和正丁醇部位能调节荷瘤小鼠的免疫力;与正
丁醇低剂量组比，正丁醇高剂量组胸腺指数有显著
性差异 (P ＜ 0. 05) ，正丁醇对小鼠免疫力的调节
作用呈现剂量依赖性;与乙酸乙酯高剂量组比，正
表 2 漏芦不同溶剂提取物对荷瘤小鼠肿瘤的作用 (x ± s，
n =6)
Tab. 2 Effects of extracted fractions of Ｒhaponticum uni-
florum (L．)DC． on mice bearing Lewis lung car-
cinoma (x ± s，n =6)
组别 瘤重 / g 抑制率 /%
模型组 3. 58 ± 0. 71 —
环磷酰胺组 1. 37 ± 0. 20 61. 45 ± 2. 61
漏芦乙酸乙酯低剂量组 3. 31 ± 0. 26* 21. 15 ± 5. 31
漏芦乙酸乙酯高剂量组 3. 24 ± 0. 42* # 25. 87 ± 4. 75
漏芦正丁醇低剂量组 2. 54 ± 0. 95* 32. 91 ± 7. 31
漏芦正丁醇高剂量组 2. 49 ± 0. 58* #※ 37. 43 ± 4. 80
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05;漏芦高剂量组与低剂量组比
较，#P ＜ 0. 05;漏芦正丁醇高剂量组与乙酸乙酯高剂量组比较，
※P ＜ 0. 05
A． 模型组 B． 阳性组 C． 漏芦乙酸乙酯低剂量组 D． 漏芦乙
酸乙酯高剂量组 E． 漏芦正丁醇低剂量组 F． 漏芦正丁醇高剂
量组
A． the model group B． positive group C． low dose of ethyl acetate ex-
tracted fraction of Ｒ． uniflorum group D． high dose of ethyl acetate ex-
tracted fraction of Ｒ． uniflorum group E． low dose of n-butanol extrac-
ted fraction of Ｒ． uniflorum group F． high dose of n-butanol extracted
fraction of Ｒ． uniflorum group
图 3 漏芦不同溶剂提取物对荷瘤小鼠 Lewis 肿瘤的抑制
作用 (x ± s，n =6)
Fig. 3 Extracted fractions of Ｒhaponticum uniflorum
(L．)DC． inhibiting mice bearing Lewis lung
carcinoma (x ± s，n =6)
丁醇高剂量组胸腺指数有显著性差异 (P ＜ 0. 05) ，
漏芦正丁醇部位调节免疫力作用更强，见表 3。
与模型组比，漏芦高剂量组脾脏指数有显著性
差异(P ＜ 0. 05)，小鼠脾脏指数升高，漏芦乙酸乙
酯和正丁醇部位能调节荷瘤小鼠的免疫力;与低剂
量组比，高剂量组脾脏指数有显著性差异(P ＜
0. 05)，漏芦乙酸乙酯和正丁醇部位对小鼠免疫力的
调节作用呈现剂量依赖性;与乙酸乙酯高剂量组比，
正丁醇高剂量组脾脏指数有显著性差异(P ＜ 0. 05)，
漏芦正丁醇部位调节免疫力作用更强，见表 3。
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表 3 漏芦不同溶剂提取物对荷瘤小鼠胸腺和脾脏的影响 (x ± s，n =6)
Tab. 3 Effect of extracted fractions of Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC． on mice thymus and spleed (x ± s，n =6)
组别 胸腺质量 /mg 胸腺指数 /(mg·g － 1) 脾脏质量 /mg 脾脏指数 /(mg·g － 1)
模型组 10. 48 ± 2. 27 0. 37 ± 0. 07 108. 60 ± 21. 40 3. 58 ± 0. 66
环磷酰胺组 7. 63 ± 1. 94 0. 30 ± 0. 08 52. 02 ± 8. 42 2. 16 ± 0. 31
漏芦乙酸乙酯低剂量组 12. 25 ± 4. 26 0. 44 ± 0. 16* 97. 87 ± 34. 86 3. 62 ± 1. 36
漏芦乙酸乙酯高剂量组 12. 70 ± 3. 58 0. 47 ± 0. 12* 134. 05 ± 25. 01 4. 71 ± 0. 73* #
漏芦正丁醇低剂量组 12. 52 ± 3. 32 0. 49 ± 0. 12* 84. 57 ± 12. 91 3. 31 ± 0. 43
漏芦正丁醇高剂量组 21. 13 ± 1. 46 0. 81 ± 0. 04* #※ 164. 95 ± 32. 24 6. 31 ± 1. 29* #※
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05;漏芦高剂量组与低剂量组比较，#P ＜ 0. 05;漏芦正丁醇高剂量组与乙酸乙酯高剂量组比较，※P ＜ 0. 05
3. 3 UPLC /Q-TOF-MS-MS 对漏芦萜类、甾醇类、
植物激素类的解析 混合对照品和漏芦醇提部位在
正离子模式下有较好的响应值，见图 4。参照对照
品解析出来的有 1、3、4、7、8 号峰，它们分别是
β-蜕皮甾酮、黄独乙素、坡模酸、齐墩果酸和熊果
酸，它们的化学结构式见图 5。参照文献和一级、
二级质谱信息［11-15］，推测 2、5、6、9、10 号峰分
别为漏芦素甲、胡萝卜苷、土克甾酮、β-谷甾醇和
豆甾醇，见表 4。
1． β-蜕皮甾酮 3． 黄独乙素 4． 坡模酸 7． 齐墩果酸 8． 熊果酸
1． β-hydroxyecdysone 3． diosbulbin B 4． pomolic acid 7． oleanolic acid 8． ursolic acid
图 4 混合对照品和漏芦不同溶剂提取物总离子流图
Fig. 4 Total ion chromatograms of extracted fractions of mixed reference substance and extracted fractions
of Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC．
4 讨论
本研究中发现漏芦乙酸乙酯和正丁醇部位均能
抑制肺癌细胞 A549 和 H1299 增殖，漏芦正丁醇部
位抑制作用优于乙酸乙酯部位;漏芦乙酸乙酯和正
丁醇部位均能抑制 Lewis移植性荷瘤小鼠肿瘤的增
长，正丁醇部位抑制作用优于乙酸乙酯部位。研究
表明，漏芦抗肺癌活性最强的部位是正丁醇部位，
水提部位对肺癌细胞无明显的抑制作用，这与传统
水煎服药有明显差异。这可能是因为某些脂溶性的
抗肺癌活性成分未提取出来，传统水煎提取的大多
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第 38 卷 第 10 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
October 2016
Vol． 38 No． 10
图 5 漏芦不同溶剂提取物成分的化学结构式
Fig. 5 Chemical structures of extracted fractions
of Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC．
是中药水溶性成分，大部分脂溶性成分被忽略，而
这些成分可能也是发挥药效的活性成分。根据中医
药理论，中药是通过多组分的协同作用发挥整体综
合效应，漏芦中的脂溶性和水溶性药效成分通过协
同作用发挥整体抗肺癌的作用。鉴于这一点，笔者
对漏芦进行初步的醇提和水提，再用不同有机溶剂
对醇提液进行萃取，富集得到不同的有效部位，对
各提取部位留样，逐步展开 HPLC 和 MS 分析，同
时进行体内外抗肺癌活性部位 /成分筛选。漏芦抗
肺癌的脂溶性和水溶性活性成分都是研究的重点，
本课题组将对漏芦水提部位和不同溶剂提取部位展
开深入的研究。
表 4 漏芦不同溶剂提取物化合物的质谱信息
Tab. 4 Mass spectrometry information of extracted fractions of Ｒhaponticum uniflorum (L．)DC．
编号 化合物 保留时间 /min 分子量 检测离子 m / z 一级碎片 二级碎片
1 β-蜕皮甾酮 5. 869 480 481［M + H］+ 481，459，228，209 481，475，201，118
2 漏芦素甲 7. 900 508 509［M + H］+ 509，340，209 －
3 黄独乙素 8. 536 344 383［M + K］+ 383，367，317，209 383，367
4 坡模酸 17. 487 472 511［M + K］+ 511，397，231 511，228，184
5 胡萝卜苷 18. 124 576 577［M + H］+ 577，354，308 577，385，193，147
6 土克甾酮 18. 860 496 497［M + H］+ 497，330 497，184
7 齐墩果酸 21. 762 456 913［2M + H］+ 913，457，439，411 913，411，203，184
8 熊果酸 21. 801 456 913［2M + H］+ 913，457，439，191 913，411，203，147
9 β-谷甾醇 25. 077 414 415［M + H］+ 415，378，355，279 －
10 豆甾醇 26. 089 412 413［M + H］+ 413，393 413，393，184，149
文献报道齐墩果酸、熊果酸和坡模酸等三萜类
能诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿
瘤细胞侵袭转移，β-谷甾醇和豆甾醇能阻滞肿瘤细
胞周期、逆转多药耐药性，咖啡酸和迷迭香酸具有
细胞毒性、直接杀伤肿瘤细胞的作用，蜕皮甾酮植
物激素类可提高免疫［16-22］。本研究显示漏芦乙酸
乙酯部位和正丁醇部位主要成分是以齐墩果酸和熊
果酸为代表的三萜类，以 β-谷甾醇、豆甾醇为代
表的甾醇类和以 β-蜕皮甾酮、漏芦素甲为代表的
植物激素类，这两个活性部位体内外抗肺癌作用显
著，与文献报道一致。漏芦乙酸乙酯部位和正丁醇
部位体内外抗肺癌药效的差异有待研究，相关成分
仍须进一步解析和确认［23-24］。
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紫草提取物对果蝇肠道损伤的保护作用
丁秋然， 张 宏， 洛方舟， 金丽华*
(东北林业大学生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 150040)
收稿日期:2015-12-21
基金项目:国家自然科学基金项目 (31270923);黑龙江省科学基金项目 (C2016010)
作者简介:丁秋然 (1990—) ，女，硕士生，从事果蝇天然免疫研究。Tel:15244681784，E-mail:805969264@ qq． com
* 通信作者:金丽华 (1970—) ，女，教授，从事细胞与分子免疫学，遗传与发育方向研究。Tel:15046109867，E-mail:lhjin2000@
hotmail． com
摘要:目的 探究紫草 Arnebia euchroma水提取物对果蝇肠道损伤的保护作用与保护机制。方法 利用十二烷基硫酸
钠 (SDS)与百草枯诱导野生型黑腹果蝇肠道损伤，分析喂食正常培养基与含紫草培养基的果蝇生存率。通过免疫染
色法检测果蝇肠道前体细胞数量、处于分裂期的干细胞数量、肠道上皮细胞内活性氧自由基水平与死亡细胞的数量，
并用 Axioskop 2 plus型荧光显微镜观察肠道形态学变化。结果 喂食含 10%紫草水提取物可以明显提高果蝇的生存
率、显著抑制肠道损伤引起的前体细胞与肠道干细胞的过度增殖、降低肠道上皮细胞的死亡，结果具有统计学意义
(P ＜ 0. 01)。此外，10%紫草提取物还可以降低肠道上皮细胞内活性氧的水平，保护和维持肠道形态。结论 紫草水
提取物对 SDS与百草枯诱导的果蝇肠道损伤具有保护作用。
关键词:紫草;水提取物;黑腹果蝇;十二烷基硫酸钠;百草枯;肠道损伤;肠道上皮细胞
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2016)10-2105-07
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 10. 003
Protective effect of Arnebia euchroma aqueous extract on gut injury of fluit fly
DING Qiu-ran， ZHANG Hong， LUO Fang-zhou， JIN Li-hua*
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