全 文 ：图 3 DMSO对不同浓度 FSP和 FSD酪氨酸酶活性抑制率的影响
酶实验受环境的影响很大。笔者认为，本实验有几个容易出
现误差的环节需要特别注意:①称取样品:此类实验反应体系较
小，涉及到的样品量也很小，最好使用精密分析天平称取样品;②
配制 PBS 的时间:PBS 尽量在临用前配制，过夜或配制时间较长
的 PBS的酸碱度会发生变化，影响酶的活性;③96 孔板的洁净程
度:实验最好使用全新的 96 孔板。如果是以前使用过的，一定要
确保已经清洗干净，否则会干扰实验数据;④各组检测时设计:应
该充分利用同一块 96 孔板中的各孔，尽量把要比较的组设计在
同一板中检测，有利于减少组间误差。⑤实验中晶体析出的问
题:充分溶解的样品加入反应体系后，因浓度得到稀释，理论上可
能会有晶体析出，这可能会影响实验结果。目前的实验技术还难
以避免这一问题。如何从技术层面上减少误差来源，也是我们将
来需要研究的方面。本实验适宜的反应体系为:底物 L －酪氨酸
40 μl，酶体积 70 μl 或以下，加入适量 pH 6． 8 缓冲液和受试药
物，使 DMSO的终体积分数为 5%，体系总体积为 200 μl，恒温
37℃下孵育 20 ～ 26 min 之后检测。今后，我们将用这个反应体
系对连翘的单体成分进行体外抑制酪氨酸酶活性实验的筛选研
究。
参考文献:
［1］ 刘锦梅，王艳丽，潘 维． 4 种茶叶醇提物对酪氨酸酶的抑制作用
［J］．现代食品科技，2009，25(6) :610．
［2］ 朴香兰．白芷酪氨酸酶抑制成分研究［J］．中国中药杂志，2009，34
(9) :1117．
［3］ 张春乐．抑制剂对蘑菇酪氨酸酶的抑制效应及抗菌活性［D］． 厦门
大学硕士学位论文，2007:15．
收稿日期:2011-01-10; 修订日期:2011-05-29
基金项目:国家自然科学基金(No． 30900123)
作者简介:吕 寒(1980-) ，女(汉族) ，浙江永康人，现任江苏省中国科学
院植物研究所研习员，硕士研究生，硕士学位，主要从事植物化学研究工
作．
* 通讯作者简介:李维林(1966-) ，男(汉族) ，陕西汉中人，现任江苏省·
中国科学院植物研究所研究员，博士学位，主要从事植物学研究工作．
红凤菜中黄酮类化合物的
高效液相色谱与多级质谱联用分析
吕 寒，裴咏萍，李维林1* ，徐德然2
(1．江苏省·中国科学院植物研究所，江苏 南京 210014; 2．中国药科大学中药学院，江苏 南京 210038)
摘要:目的 检测红凤菜中黄酮类化学成分。方法 采用高效液相色谱与多级质谱联用法(HPLC － MSn)对黄酮成分进行
鉴定分析。结果 初步鉴定了 5 个黄酮类物质，其中槲皮素 － 3 － O － β － D －吡喃葡萄糖和槲皮素 － 3 － O －鼠李糖苷未
见文献报道。结论 采用 HPLC － MSn 可以快速鉴定红凤菜黄酮类化合物。
关键词:红凤菜; 黄酮; 高效液相色谱与多级质谱联用法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 11． 005
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)11-2582-02
Detection of Flavonoids in Gynura bicolor DC． by HPLC －MSn
L Han1，PEI Yong-ping1，LI Wei-lin1* ，X De-ran2
(1． Institute of Botany，Jiangsu Provincial and the Chinese Academy of Sciences，Nanjing 210014，China;
2． School of Traditional Chinese Materia Medical，China Pharmacological University，Nanjing，Jiangsu 210038，
China)
Abstract:Objective To detect flavonoids in Gynura bicolor DC． ． Methods The extracts were analyzed by HPLC － MSn tech-
nique． Results 5 flavonoids were found from this plant． Conclusion HPLC － MSn is able to identify flavonoid compounds in Gy-
nura bicolor DC． rapidly ．
Key words:Gynura bicolor DC．; Flavonoids; HPLC － MSn
红凤菜 Gynura bicolor DC．又名观音苋、紫背天葵、木耳菜、血
皮菜、水三七，为菊科三七草属多年生草本，分布于江西、福建、台
湾、广东、广西、四川及云南等地［1］。据记载红凤菜有清热凉血、
解毒消肿作用，主治咳血、崩漏、外伤出血、痛经等［2］。红凤菜在
民间作为一种蔬菜，含有丰富的矿质元素和氨基酸等营养成
分［3，4］。目前关于该植物的化学成分的研究较少，本实验室前期
从中分离得到几个黄酮化合物［5］，本研究采用 HPLC － MSn 方法
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 11 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 11
对红凤菜中的黄酮类成分进行了检测分析，为进一步研究红凤菜
的化学成分提供基础。
1 材料与仪器
红凤菜 Gynura bicolor DC．采自江苏省南京市，原植物经江苏
省中国科学院植物研究所李维林研究员鉴定。8 ～ 10 月采集植
物叶片，晒干，粉碎，备用。
冰醋酸为分析纯，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为
分析纯。
2 方法
2． 1 样品制备和测定 750 g红凤菜干品粉末，以 70%乙醇回流
提取两次，合并提取液，浓缩离心，取上清液通过 D101 型大孔树
脂，依次用水、20%、50%、90%乙醇梯度洗脱，取 50%乙醇部分
浓缩，以 40%甲醇溶解并定容至 50 ml，0． 45 μm微孔滤膜过后进
样。
2． 2 高效液相色谱与多级质谱联用法(HPLC － MSn)检测 仪
器:Agilent 1100series LC － MSD Trap 联用系统，包括二元溶剂泵，
真空脱气机，自动进样器，内置柱切换阀的柱温箱，光电二极管阵
列检测器(DAD) ，ESI接口的离子阱质谱检测器，Agilent Rev． A．
0901 化学工作站。
色谱与质谱条件:色谱柱为 Hanbon Kromasil C18色谱柱(4． 6
mm × 250 mm，5 μm) ;流 动相 A为 1%醋酸水溶液，流动相 B 为
甲醇，梯度洗脱，A∶ B (85∶ 15) ，0 ～ 50 min，A∶ B (50∶ 50) ，50
～ 60 min，流速 1． 0 ml /min;经过分流后进入质谱的流速为 0． 3
ml /min。质谱检测参数:雾化气压力为 40 psi，干燥气流速 9 L /
min，干燥气温度 350℃，电离电压 3 000 V，电喷雾离子化(ESI) ，
负离子方式检测，Auto MSn，扫描范围 50 ～ 1 400 m/z。
3 结果
红凤菜提取物的 HPLC色谱图、总离子流色谱图见图 1 ～ 2，
各色谱峰对应的 ESI － MSn 数据见表 1。通过各主要色谱峰的
MS数据与相关文献报道进行比较分析，初步鉴定或推测出 5 种
黄酮类的化合物，结果见表 1。
1 号峰 MS2具有与槲皮素相符的 m/z 301 及其裂解的 m/
z271，179 和 151 碎片，故推测其结构中含有槲皮素，同时［M －
H］－的 m/z为 609，MS2 有 m/z463 和 301 碎片，说明分别裂解脱
去 1 分子鼠李糖和 1 分子葡萄糖，与文献［5］报道的槲皮素 － 3 －
O － β － D －吡喃葡萄糖(6→1)－ α － L －鼠李糖苷(quercetin － 3
－ O － glucosyl(6→1)－ α － L － rhamnoside)一致。
2 号峰的 MS2 中具有与山柰酚相符的 m/z 285 及其裂解的
m/z 255，151 和 107 碎片，故推测其结构中含有山柰酚。同时［M
－ H］－的 m/z为 593，MS2 有 m/z 447 和 285 碎片，说明分别裂解
脱去 1 分子鼠李糖和 1 分子葡萄糖，与文献［5］报道的山柰酚 － 3
－ O － β － D －吡喃葡萄糖(6→1)－ α － L －鼠李糖苷(kaempherol
－ 3 － O － glucosyl(6→1)－ α － L － rhamnoside)一致。
3 号峰［M － H］－的 m/z 为 463，MS2m/z 为 301，说明裂解脱
去 1 分子六碳糖;同时有裂解的 m/z151 和 107 碎片，故推测其结
构中含有槲皮素。红凤菜中未见有含槲皮素与半乳糖结合成苷
化合物的报道，红凤菜中已知槲皮素连接六碳糖的只有槲皮素 －
3 － O － β － D －吡喃葡萄糖(6→1)－ α － L －鼠李糖苷，故推测该
化合物为槲皮素 － 3 － O － β － D －吡喃葡萄糖(quercetin － 3 － O
－ glucoside)。
4 号峰的 MS2 中具有与槲皮素相符的 m/z 301 及其裂解的
m/z 255，179 和 151 碎片，故推测其结构中含有槲皮素。同时［M
－ H］－的 m/z为 447，MS2 有 m/z 285 碎片，说明裂解脱去 1 分子
的鼠李糖，故推测该化合物为槲皮素 － 3 － O －鼠李糖苷(querce-
tin － 3 － O － rhamnoside)。
5 号峰的 MS2 中具有与山柰酚相符的 m/z 285 及其裂解的
m/z 257 和 151 碎片，故推测其结构中含有山柰酚。同时［M －
H］－的 m/z为 447，MS2 有 m/z 285 碎片，说明裂解脱去 1 分子的
六碳糖，与文献［5］报道的山柰酚 － 3 － O － β － D －吡喃葡萄糖苷
(kaempherol － 3 － O － glucoside)一致。
4 讨论
本研究运用 LC /MSn 技术，选择负离子源进行 ESI － MS 检
测，通过二级质谱数据信息，从红凤菜中检测并鉴定了 5 个黄酮
化合物，其中槲皮素 － 3 － O － β － D －吡喃葡萄糖和槲皮素 － 3 －
O －鼠李糖苷未见文献报道。
表 1 各化合物的 HPLC出峰时间及各级质谱数据
No．
出峰时间
(tR /min)
［M －H］－
m /z
MS2
m /z
化合物
1 38． 2 609 463，301→271，179，151
槲皮素 －3 － O － β － D －吡喃葡
萄糖(6→1)－ α － L －鼠李糖苷
(quercetin － 3 － O － glucosyl
(6→1)－ α － L － rhamnoside)
2 41． 6 593 447，285→255，151，107
山柰酚 －3 － O － β － D －吡喃葡
萄糖(6→1)－ α － L －鼠李糖苷
(kaempherol － 3 － O － glucosyl
(6→1)－ α － L － rhamnoside)
3 42． 2 463 301→151，107 槲皮素 －3 － O － β － D －吡喃葡萄糖(quercetin － 3 － O － glucoside)
4 43． 4 447 301→255，179，107 槲皮素 －3 － O －鼠李糖苷(quercetin － 3 － O － rhamnoside)
5 44． 3 447 285→257，151
山柰酚 －3 － O － β － D
－吡喃葡萄糖苷
(kaempherol － 3 － O － glucoside)
图中所标为 1 ～ 5 号化合物峰
图 1 红凤菜提取物的 HPLC图谱(270nm)
图中所标为 1 ～ 5 号化合物峰
图 2 红凤菜提取物的总离子流色谱图
对于化学成分不明确的植物使用 LC /MSn 检测技术可以对
其中含有的成分进行初步的分析鉴定，本研究采用该技术对红凤
菜的黄酮类成分进行了初步的鉴定，该方法简便迅速，为进一步
的化学成分分离鉴定提供了基础。
参考文献:
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志，第 77 卷第 1 分
册［M］．北京:科学出版社，1999:768．
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社，1997:988．
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［5］ 卓 敏，吕 寒，任冰如，等． 红凤菜化学成分研究［J］． 中草药，
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 11 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 11 期