全 文 ：作者简介:伍义行 ,男 ,博士研究生 ,助理研究员　　＊通讯作者:赵昱 ,男 ,博士 ,教授 ,博士生导师　　Tel:(0571)87217313　　E-mail:dryuzhao@
zju.edu.cn
六棱菊总黄酮的抗炎作用研究
伍义行 , 李湘萍 , 周长新 , 陈海永 , 赵军 , 赵昱＊(浙江大学药学院中药与天然药物研究室 ,杭州 310031)
摘要:目的　研究六棱菊总黄酮(LAF)的抗炎活性。方法　采用二甲苯致小鼠耳肿胀 、甲醛致大鼠足跖肿胀 、羧甲基纤维素钠
(CMC-Na)致大鼠皮下气囊白细胞游走和角叉菜胶致大鼠皮下气囊肿 4 个模型分别考察 LAF对炎症反应 3 个不同时相的抑制
作用 ,并通过检测肾上腺中胆固醇和维生素 C 的含量 , 了解药物对肾上腺皮质系统的影响。结果　LAF 在 50 , 100 和 200 mg·
kg-1剂量下能显著抑制小鼠耳肿胀 ,抑制率分别为 41.0%, 52.6%和 68.4%。在 200 mg·kg-1给药剂量下 ,能显著抑制甲醛致
炎后3 , 6 , 12和 24 h 的足肿胀 ,抑制率分别为 21.4%, 33.3%, 56.5%和 76.2%;能显著抑制 CMC-Na致炎后3 和 6 h 的大鼠皮下
气囊白细胞游走 ,抑制率分别为 42.5%和 54.4%;能显著抑制角叉菜胶所致大鼠皮下气囊肉芽组织增生和炎性渗出 , 抑制率
分别为 51.5%和 54.0%。此外 , LAF对大鼠肾上腺中胆固醇和维生素 C 含量以及肾上腺指数均无显著性影响。结论　LAF 对
以上 3种炎症反应均具有显著的抑制作用 ,并与 2.5 mg·kg-1剂量地塞米松接近;对二甲苯致小鼠耳肿胀模型的抗炎活性在 50
mg·kg-1剂量下强于穿心莲内酯(200 mg·kg-1)和齐墩果酸(200 mg·kg-1);其抗炎机制可能并不依赖于下丘脑-垂体-肾上腺皮
质轴的存在。
关键词:六棱菊;黄酮;抗炎
中图分类号:R965　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2006)11-0832-04
Anti-Inflammatory Activity of Total Flavonoids from Laggera alata
WU Yi-hang , LI Xiang-ping , ZHOU Chang-xin , CHEN Hai-yong , ZHAO Jun , ZHAO Yu＊(Department of Traditional Chi-
nese Medicine and Natural Drug Research , College of Pharmaceutical Sciences , Zhejiang University , Hangzhou 310031 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investigate the anti-inflammatory activity of total flavonoids from Laggera alata(LAF).METHODS　Se-
lected acute and chronic animal models , such as xylene-induced ear oedema in mice , formaldehyde-induced paw oedema in rats , CMC-Na in-
duced air pouch leukocyte migration in rats and carrageenan induced air pouch granuloma in rats , were employed to evaluate the anti-inflamma-
tory effects of LAF.The effect of LAF on the pituitary-adrenal system was assessed by measuring the concentrations of cholesterol and vitamin
C in the adrenal glands of rats.RESULTS　The oral administration of LAF suppressed significantly xylene-induced ear oedema in mice with
the inhibitory rates of 41.0%, 52.6% and 68.4% at 50 , 100 and 200 mg·kg -1 , respectively.At a dose of 200 mg·kg-1of LAF , formalde-
hyde-induced rat paw oedema was remarkably suppressed with the inhibitory rates of 21.4%, 33.3%, 56.5% and 76.2% at 3 , 6 , 12 and
24 h , respectively.As for the model of CMC-Na induced air pouch leukocyte migration in rats at the dose of 200 mg·kg-1 , it was found that
LAF showed the inhibitory effects with the rates of 42.5% and 54.4% at 3 and 6 h , respectively.Moreover , the LAF inhibited carrageenan
induced rat air pouch granuloma tissue formation and reduced exudate volume without influencing thymus index , adrenal index and spleen in-
dex.However , the different doses of LAF failed to influence the concentrations of cholesterol and vitamin C in adrenal glands and adrenal in-
dex.CONCLUSION　LAF possesses pronounced inhibitory activities on three phases of the inflammatory reaction and its effects at the dose of
200 mg·kg-1 are close to those of dexamethasone at 2.5 mg·kg-1.Meanwhile , LAF at the dose of 50 mg·kg-1 possesses more potent effects
than oleanolic acid and andrographolide at the dose of 200 mg·kg-1 on xylene-induced mouse ear oedema.According to the concentrations of
cholesterol and vitamin C in adrenal glands , it is suggested that LAF′s anti-inflammatory mechanism might not be related to the pituitary-a-
drenal system.
KEY WORDS:Laggera alata;flavonoids;anti-inflammation
　　六棱菊(Laggera alata)系菊科六棱菊属草本植
物。本属植物约有 20多种 ,分布于非洲热带及亚洲
东南部 ,其药用植物我国主要有2种(六棱菊和齿翼
六棱菊),主要分布于长江流域以南及西南部 。在民
间六棱菊和齿翼六棱菊作为抗菌消炎 、清热解毒的
良药 ,广泛用来治疗上呼吸道感染 、扁桃体炎 、咽喉
炎 、口腔炎 、支气管炎 、感冒咳嗽 、关节炎痛 、肾炎水
肿和疟疾等[ 1-2] 。植物化学研究表明 ,该属植物的主
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要次生代谢产物为黄酮和倍半萜类化合物[ 3-5] 。本
实验采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型对来自六棱菊植
物不同部位进行反复筛选结果表明 ,六棱菊总黄酮
(LAF)具有非常显著的抗炎作用。鉴于该植物中
LAF的抗炎活性尚无研究报道 ,本研究又运用 3 个
炎症模型进一步验证其对炎症反应 3个不同时相的
抑制作用 ,并通过检测 LAF 对大鼠肾上腺中胆固醇
和维生素 C含量的影响 ,探讨其对肾上腺皮质系统
的影响 ,以期为该植物的开发应用提供科学依据。
1　材料和方法
1.1　动物
ICR小鼠 , ♂,(20±2)g;SD大鼠 , ♂,(180±10)
g[浙江省实验动物中心(合格证:浙实动单项准第
2001001号)] 。
1.2　药品及试剂
六棱菊全草于 2003 年 8月采集于云南省腾冲
县 ,由浙江大学药学院中药与天然药物研究室陈柳
蓉副教授鉴定 ,植物标本现存于浙江大学药学院中
药与天然药物研究室(标本号:ZY200308LA)。
二甲苯(中国巨化集团公司试剂厂 , 批号
20011002);穿心莲内酯片(广西梧州嘉进药业有限
公司 ,批号 02110101);齐墩果酸片(北京第四制药
厂 ,批号 030502);醋酸地塞米松片(浙江仙琚制药有
限公司 ,批号 020161);多聚甲醛(上海化学试剂公
司 ,批号 20010606);羧甲基纤维素钠(CMC-Na ,中国
医药集团上海化学试剂公司 ,批号 20020928);角叉
菜胶(carrageenan , Sigma 公司 ,批号 121k1653);促皮
质素(ACTH , 上海第一生化药业有限公司 , 批号
030421);维生素 C 测试盒(南京建成生物工程研究
所);胆固醇测试盒(上海荣盛生物技术有限公司)。
1.3　仪器
YLS-7A型足趾容积测量仪(山东医学科学院
设备站);XD-101型倒置显微镜(南京江南光电股
份有限公司);UV-1600 型紫外-可见分光光度计
(北京瑞利分析仪器公司)。
1.4　LAF 浸膏的制备
六棱菊全草100 kg阴干后切成0.5 ～ 2.0 cm的小
段 ,以体积分数为 95%乙醇回流提取3次 ,提取液合
并后减压浓缩除去乙醇 ,水溶液以 50 g·L-1碳酸钠处
理后以氯仿萃取 3次 ,碱水层以 1 mol·L-1 HCl酸化
至pH 2后以乙酸乙酯萃取 3次 ,水洗至中性 ,乙酸乙
酯层浓缩成浸膏即得六棱菊总黄酮(LAF)1.6 kg 。用
灭菌生理盐水(NS)混悬后灌胃给药。
1.5　对二甲苯致小鼠耳肿胀模型的影响[ 6]
ICR小鼠 70只 , ♂,随机分成 7 个组。依次 ig
给药 NS 、地塞米松 、穿心莲内酯 、齐墩果酸 、LAF (50
mg·kg-1)、LAF (100 mg·kg-1)和 LAF (200 mg·
kg
-1),每天 1次 ,连续给药 3 d。末次给药后 1 h于
小鼠右耳正反两面涂抹二甲苯 0.02 mL ,左耳作对
照 ,2 h后将小鼠脱颈椎处死 ,用直径 9 mm 的打孔
器分别在两耳同一部位打下圆形耳片 ,立即称重 ,以
同一小鼠左右耳片重量之差为肿胀度 。
1.6　对甲醛致大鼠足跖肿胀的影响[ 7]
SD大鼠30只 , ♂,随机分成 3组:正常组 、地塞
米松组(2.5 mg·kg-1)和 LAF (100 mg·kg-1)组 。测
量致炎前大鼠正常足跖体积 2次 ,取其平均值。每
只动物 ig 给予 5 mL NS行水负荷。30 min后灌胃给
药 , 给药后 60 min ,左后足跖腱膜下注射 2%甲醛
0.1 mL致炎。致炎后 1 ,3 ,6 ,12 , 24 h分别测量大鼠
足跖体积。
1.7　对 CMC-Na致大鼠皮下气囊白细胞游走的影
响[ 8]
SD大鼠40只 , ♂,随机分成 4组:正常组 、模型
组 、地塞米松(2.5mg·kg-1)组和 LAF(100mg·kg-1)
组 。各组动物 ig 给药 6 d ,每天 1次。末次给药后 1
h ,模型组和药物组动物于乙醚麻醉下 ,在背部肩胛
间区皮下注射 5 mL 空气形成气囊。正常组动物注
射等体积的灭菌NS 。第 2天再次灌胃给药 ,给药后
1 h ,向囊内注入 1%CMC-Na溶液 5 mL 致炎 。致炎
后 3和 6 h ,分别从囊内吸取渗出液 0.1 mL ,于显微
镜下计数。
1.8　对角叉菜胶致大鼠皮下气囊肿的影响[ 9]
SD大鼠30只 , ♂,随机分成 3组:正常组 、地塞
米松(2.5 mg·kg-1)组和 LAF(100 mg·kg-1)组。乙
醚浅麻醉 ,背部肩胛间区皮下注射 20 mL 空气形成
气囊 ,随即向气囊内注入10 g·L-1的角叉菜胶1mL ,
使致炎剂充分与囊壁组织接触。致炎 24 h 后抽去
囊内气体。致炎当日开始 ig 给药 ,每天 1次 ,连续 7
d。末次给药后24 h乙醚麻醉处死 ,打开气囊 ,收集
囊内渗出液 ,测量其体积。同时剥离囊壁肉芽肿 ,置
60 ℃烤箱中烤干 ,称重。比较各组渗出液量和囊壁
重量 ,并比较各组大鼠胸腺 、肾上腺和脾脏指数 。
1.9　对大鼠肾上腺中维生素 C 和胆固醇含量的影
响[ 10]
SD大鼠50只 , ♂,随机分成 5组:正常组 、ACTH
(5 u·kg-1)组 、LAF(50 mg·kg-1)组 、LAF(100 mg·
kg-1)组和 LAF(200 mg·kg-1)组 。各组动物 ig 给药
6 d ,每天 1次。ACTH组于第 5天开始 ip ACTH , 共
·833·中国药学杂志 2006年 6月第 41卷第 11期　　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2006 June , Vol.41 No.11
2次。末次给药后 1 h 处死动物 ,取右侧肾上腺称
重 ,加入 5%的三氯醋酸制成匀浆后 ,再加入 100 mg
活性炭过滤 ,取滤液按维生素 C 测试盒说明测定其
含量 。取动物左侧肾上腺称重 ,加入Blood′s液2 mL
制成匀浆 , 2 000 r·min-1离心 5 min ,取上清液 0.4
mL 置试管中 ,于 90 ℃烘箱中干燥 ,然后按胆固醇测
试盒说明测定其含量 。
1.10　统计分析
采用 SPSS10.0进行统计 ,数据以 x ±s表示。
2　结　果
2.1　对二甲苯致小鼠耳肿胀模型的影响
LAF不同剂量(50 , 100和 200 mg·kg-1)对小鼠
耳肿胀均有极显著的抑制作用 ,且随剂量增加抑制
作用增强。对照药物地塞米松(2.5 mg·kg-1)、穿心
莲内酯(200 mg·kg-1)和齐墩果酸(200 mg·kg-1)对
该模型亦有极显著的抑制作用 。见表 1。
表 1　LAF对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响.n=10 , x±s
Tab 1　Effect of total flavonoids from LAF on xylene-induced ear
oedema in mice.n=10 , x±s
Group
Dose
/mg·kg -1
Oedema deg ree
/mg
Inhibition
rate/ %
NS - 26.29±3.99 -
Dexamethasone 2.5 9.70±1.721) 63.1
Andrographolide 200 17.29±4.041) 34.2
Oleanolic acid 200 15.65±4.271) 40.1
LAF-50 50 15.51±5.461) 41.0
LAF-100 100 12.46±6.431) 52.6
LAF-200 200 8.30±3.941) 68.4
注:与生理盐水组比较 , 1)P<0.001
Note:1)P<0.001 , vs NS group
2.2　对甲醛致大鼠足跖肿胀急性炎症模型的影响
在 100 mg·kg-1剂量下 ,LAF能显著抑制甲醛致
炎后3 ,6 ,12和24 h的足肿胀 ,而阳性对照地塞米松
在 2.5 mg·kg-1剂量下显示了相似的抑制作用 ,且作
用更强 。见表2。
表 2　LAF 对甲醛所致大鼠足肿胀的影响.n=10 , x±s
Tab 2　Effect of total flavonoids from LAF on formaldehyde-induced paw oedema in rats.n=10 , x±s
Group
Dose
/mg·kg-1
Paw oedema /mL(Inhibition/ %)
1 h 3 h 6 h 12 h 24 h
NS - 0.25±0.02 0.28±0.06 0.36±0.02 0.39±0.06 0.45±0.06
Dexamethasone 2.5 0.15±0.042)(40.0) 0.19±0.022)(32.1) 0.21±0.022)(41.7) 0.12±0.042)(70.3) 0.08±0.042)(81.2)
LAF 100 0.20±0.05(20.0) 0.22±0.051)(21.4) 0.24±0.042)(33.3) 0.17±0.042)(56.5) 0.11±0.032)(76.2)
注:与生理盐水组比较 , 1)P<0.05 , 2)P<0.001
Note:1)P<0.05 , 2)P<0.001 , vs NS group
2.3　对CMC-Na 致大鼠皮下气囊白细胞游走的影
响
在100 mg·kg-1剂量下 , LAF 能显著抑制 CMC-
Na致炎后 3和6 h的大鼠皮下气囊白细胞游走 ,而
阳性对照地塞米松在 2.5 mg·kg-1剂量下显示了稍
强的抑制作用。见表 3。
表 3　LAF 对 CMC-Na致大鼠皮下气囊白细胞游走的影响.
n=10 , x±s
Tab 3　Effect of total flavonoids from LAF on CMC-Na induced air
pouch leukocyte migration in rats.n=10 , x±s
Group
Dose
/mg·kg-1
Exudate
rate/mL
Total leukocyte
/ ×107·mL-1
Inhibition
rate/ %
3 h 6 h 3 h 6 h
NS - 0.02 0.65±0.08 0.68±0.06 - -
Model - 0.85 5.46±0.78 9.04±1.15 - -
Dexamethasone 2.5 0.14 3.08±0.601) 3.57±0.631) 43.6 60.5
LAF 100 0.12 3.14±0.541) 4.12±0.541) 42.5 54.4
注:与模型组比较 , 1)P<0.001
Note:1)P<0.001 , vs model group
2.4　对角叉菜胶致大鼠皮下气囊肿的影响
在100 mg·kg-1给药剂量下 , LAF 能显著抑制角
叉菜胶所致大鼠皮下气囊肉芽组织增生和炎性渗
出 ,并对胸腺指数 、肾上腺指数和脾脏指数没有显著
性影响 。而阳性对照药物地塞米松尽管能显著降低
肉芽组织增生和炎性渗出 ,但也能显著降低大鼠的
胸腺指数和脾脏指数。见表 4。
2.5　对大鼠肾上腺中维生素 C 和胆固醇含量的影
响
LAF 不同剂量(50 ,100 , 200 mg·kg-1)对大鼠肾
上腺中维生素 C 和胆固醇含量以及肾上腺指数均
无显著性影响 ,而 ACTH 能显著升高大鼠肾上腺中
维生素 C含量 ,并能显著降低大鼠肾上腺中胆固醇
含量 ,但对肾上腺指数无显著性影响 。见表5。
3　讨　论
炎症反应是机体最基本的抗损伤反应 ,任何能
够引起组织损伤的因素都可成为产生炎症的原因。
炎症有 3个不同时相:第一时相由血管通透性增加
引起血管内容物渗入到组织间隙所致 ,第二时相由
白细胞从血液渗透到组织间隙所致 ,第三时相为肉
芽肿的形成 。二甲苯致小鼠耳肿胀模型和大鼠足肿
胀模型属于炎症反应的第一时相。CMC-Na致大鼠
皮下气囊白细胞游走模型属于炎症反应的第二时
·834· Chin Pharm J , 2006 June , Vol.41 No.11 　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2006年 6月第 41卷第 11期
　　表 4　LAF 对角叉菜胶致大鼠皮下气囊肿的影响.n=10 , x±s
Tab 4　Effect of total flavonoids from LAF on carrageenan induced air pouch granuloma in rats.n=10 , x±s
Group
Dose
/mg·kg-1
Exudate
/mL(Inhibition/ %)
Granuloma/mg·kg-1
(Inhibition/ %)
Thymus index
/mg·kg-1
Adrenal index
/mg·kg-1
Spleen index
/mg·kg-1
NS - 6.78±0.57 190.5±21.3 150.1±41.3 15.1±1.1 257.0±1.9
Dexamethasone 2.5 3.23±0.421)(52.4) 78.7±8.61)(58.7) 35.1±11.71) 16.3±0.2 128.0±8.11)
LAF 100 3.12±0.511)(54.0) 92.4±7.81)(51.5) 147.3±24.2 15.7±0.5 249.4±8.7
注:与生理盐水组比较 , 1)P<0.001
Note:1)P<0.001 , vs NS g roup
表 5　LAF 对大鼠肾上腺中维生素 C 和胆固醇含量的影响.n=10 , x±s
Tab 5　Effect of total flavonoids from LAF on contents of vitamin C and cholesterol of adrenal glands in rats.n =10 , x±s
Group Dose Vitamin C/mg·L-1 Cholestero l/mmol·L-1 Adrenal index/mg·kg -1
NS 　　- 7.61±0.61 7.46±0.42 15.7±1.54
ACTH 5 /u·kg-1 45.56±4.371) 4.34±0.341) 16.10±0.48
LAF 50 /mg·kg-1 7.21±1.1 7.08±0.53 14.74±1.20
100 /mg·kg -1 6.88±1.33 7.03±0.66 15.15±0.89
200 /mg·kg -1 6.73±1.00 7.68±0.49 14.03±1.50
注:与生理盐水组比较 , 1)P<0.001
Note:1)P<0.001 , vs NS g roup
相。角叉菜胶致大鼠皮下气囊肿模型属于炎症反应
的第三时相。
本实验采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型对六棱菊
植物不同提取部位进行反复筛选最终确定 LAF 活
性部位 ,并与疗效确切的植物来源抗炎药穿心莲内
酯和齐墩果酸对照 ,结果表明 ,LAF 在 50 mg·kg-1剂
量下其抗炎作用强于 200 mg·kg-1剂量的穿心莲内
酯和齐墩果酸。为了进一步确证 LAF 的抗炎作用 ,
本研究又运用 4个炎症模型分别考察其对炎症 3个
不同时相的抑制作用 。结果显示 , LAF 在 100 mg·
kg-1剂量下对甲醛致大鼠足跖肿胀 、CMC-Na致大鼠
皮下气囊白细胞游走和角叉菜胶致大鼠皮下气囊肿
等3个模型均具有显著抑制作用 ,且其抗炎作用与
2.5 mg·kg-1剂量地塞米松接近。
在抗炎机制研究中 ,研究药物对下丘脑-垂体-
肾上腺皮质系统的作用十分重要。测定肾上腺中胆
固醇和维生素 C的含量 ,可以间接了解肾上腺皮质
激素合成是否活跃 。为了探讨 LAF 抗炎作用与内
源性抗炎系统(肾上腺皮质系统)的关系 ,本实验检
测了对大鼠肾上腺中维生素 C 和胆固醇含量的影
响。结果表明 , LAF 对大鼠肾上腺中胆固醇和维生
素C的含量以及肾上腺指数均无显著性影响 ,提示
其无ACTH 效应 。说明 LAF 的抗炎作用可能并不依
赖于下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的存在。
从民间植物药中研发高效低毒的新型抗炎药物
是抗炎药物研究的重要途径之一。六棱菊作为一味
广泛应用的民间草药 ,长期用药经验表明 ,该植物药
具有良好的治疗炎症性疾病的功效 ,民间使用记录
和动物实验均未发现明显的毒性反应 。本实验研究
结果初步表明 ,该植物的 LAF 部位是其抗炎活性有
效部位 ,有进一步深入研究的必要。
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(收稿日期:2005-04-07)
○作者来函更正　本刊 2006年 4 月第 7 期 505-508 页刊出的《大黄素对大鼠主动脉非内皮依赖性的舒张作用及其机制研
究》 , 遗漏通讯作者(杨军 , 男 ,博士生导师)。
·835·中国药学杂志 2006年 6月第 41卷第 11期　　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2006 June , Vol.41 No.11