全 文 ：食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2011年 第36卷 第7期提取物与应用
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全吉淑1，张子晗1，刘春彦1，金爱花1，尹学哲2*
(1.延边大学基础医学院，延吉 133000；2.延边大学附属医院，延吉 133000)
摘要：研究祁州漏芦的体外抗氧化活性。以高铁还原力法检测总抗氧化能力，以水杨酸法检测
羟自由基(·OH)清除率，以硫代巴比妥酸(TBA)法测定H2O2和Fe2+诱导的肝匀浆丙二醛(MDA)生成
量。结果表明，漏芦不同溶剂提取物均具有较强的总抗氧化能力和清除羟自由基能力，可抑制
H2O2和Fe2+诱导的肝匀浆脂质过氧化的发生，且呈剂量依赖性。其中，漏芦正丁醇萃取物(RUBF)
的抗氧化活性高于水萃取物(RUAF)。因此，祁州漏芦具有体外抗氧化活性。
关键词：祁州漏芦；抗氧化；脂质过氧化
中图分类号：Q 946 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2011)07-0204-03
Comparative of antioxidative effect of different solvent fractuions of
Rhaponticum unifl orum
QUAN Ji-shu1, ZHANG Zi-han1, LIU Chun-yan1, JIN Ai-hua1, YIN Xue-zhe2*
(1.College of Basic Medicine, Yanbian University, Yanji 133000;
2.Yanbian University Hospital, Yanji 133000)
Abstract: The antioxidative effect of Rhaponticum unifl orum was investigated in vitro. The total antioxidant
activity was determined by ferric reducing method, the scavenging acitivity on •OH was determined by
salicylic acid method, and the malonyldialdehide (MDA) content of H2O2- or Fe
2+-induced liver mitochondria
was detected by thiobarbituric acid (TBA) method. The result showed that the extracts of Rhaponticum
unifl orum concentration-dependently enhanced the total antioxidant capacity, increased the scavenging
acitivity on hydroxyl free radical, and inhibited the lipid peroxidation of liver mitochondria induced with H2O2
or Fe2+. The butanol-soluble fraction of Rhaponticum unifl orum (RUBF) had a higher antixidative activities
than the aueous frantion of Rhaponticum unifl orum (RUBF). It is suggested that Rhaponticum unifl orum
has the antioxidative effect in vitro.
Key words: Rhaponticum unifl orum; antioxidative; anti-lipid peroxidative
收稿日期：2010-08-17 ﹡通讯作者
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30360113)；吉林省科技发展计划资助项目(200705426)。
作者简介：全吉淑(1968—)，女(朝鲜族)，吉林延吉人，硕士，教授，研究方向为天然产物的药理学作用。
活性氧自由基引发的体内脂质过氧化是机体
衰老、心血管疾病及肿瘤发生的重要原因，而中
草药等生物抗氧化剂可有效清除体内过剩活性氧
自由基，从而保护组织的正常结构和功能。目前
祁州漏芦不同溶剂提取物抗氧化活性的
比较研究
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国内外已将抗氧化检测用于抗衰老等保健食品的
评价[1]。祁州漏芦(Rhaponticum uniflorum (L.) DC)
为多年生草本，主要分布于东北及河北、内蒙
古、陕西、甘肃等地。漏芦具有清热解毒、排脓
消肿、通乳的功能，主治乳腺炎、腮腺炎、淋巴
结结核及风湿性关节炎[2]。研究表明，漏芦具有
抗氧化、抗衰老及增强免疫功能等药理作用[3-4]。
本文将进一步探讨漏芦不同溶剂提取物的清除自
由基和抗脂质过氧化作用，为开发抗氧化功能食
品提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 药品和试剂
总抗氧化能力(T-AOC)测试盒、丙二醛(MDA)
和蛋白质测试盒：南京建成生物工程研究所，其
余为国产分析纯。
1.2 仪器
HITACHI himac cp 100α超速离心机：日本
日立公司；U-2010型紫外分光光度仪：日本岛津
公司。
1.3 实验方法
1.3.1 漏芦的提取工艺 漏芦采自吉林省长白
山，由延边大学药学院刘勇镇教授鉴定。将漏芦
切碎后，用90%乙醇回流提取2 h，共3次，合并
滤液，经减压浓缩即得漏芦乙醇粗提物，得率为
8.7%。将乙醇粗提物加水溶解，用等体积乙酸乙
酯萃取，取水层。水层继续用等体积水饱和的正
丁醇萃取，正丁醇层和水层萃取物经减压蒸馏，
即得正丁醇萃取物(RUBF)和水萃取物(RUAF)。
1.3.2 实验动物及动物样品的处理 家兔由延边
大学医学部动物科提供。将兔肝用预冷的0.25
mol /L蔗糖制成10%肝匀浆，于3000 g离心20
min，沉淀洗2次，合并上清液，再于10000 g离
心20 min，所得沉淀洗2次后，用10 mmol/L Tris-
HCl缓冲液配成含蛋白质1.25 g/L的肝线粒体悬
液，4 ℃保存备用。
1.3.3 T-AOC测定[5] 抗氧化物质能将Fe3+还原
为Fe2+，而Fe2+能使菲啉类物质形成稳固的络合
物，在520 nm下通过比色测出其抗氧化能力的高
低。取不同浓度药物溶液0.1 mL，按试剂盒操作
步骤测定化学模拟体系中的T-AOC。对照以0.1
mL双蒸水代替药物溶液。1 min 1 mL样品溶液使
反应体系得吸光度值每增加0.01时，定义为一个
T-AOC单位(U)。
1.3.4 羟自由基清除能力的测定[5] 反应管中依次
加入9 mmol/L水杨酸-乙醇溶液、9 mmol/L FeSO4
溶液及不同浓度药物溶液各1 mL，再加8.8 mmol/
L H2O2 1 mL启动Fenton反应，37 ℃反应30 min。
于12000 g离心6 min，测510 nm处吸光度值，并
计算清除率(SR)。考虑样品本身的吸光，测510
nm处样品的本底吸光度值。SR(%)=[A对照-(A测
定-A本底)]/A对照×100。
1.3.5 肝匀浆脂质过氧化的测定[5] 取1 mL肝匀
浆悬液，加不同浓度药物溶液0.1 mL孵育5 min
后，再加入60 mmol/L H2O2 或6 mmol/L FeSO4 0.1
mL启动肝匀浆的脂质过氧化反应。37 ℃温浴
1 h后，加入15%三氯乙酸1 mL终止反应，再加
0.67% TBA1 mL，于沸水浴中煮沸15 min，冷却
后，离心，测上清液532 nm处的吸光度值，计算
MDA生成量和抑制率(IR)。IR(%)=(A对照-A测定)/A对
照 ×100。
1.3.6 统计学处理 数据以±s表示，用SPSS 11.0
统计软件进行t检验和方差分析。
2 结果
2.1 漏芦提取物的总抗氧化能力
图1 漏芦提取物的总抗氧化能力
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5
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36# 36
结果见图1。本实验考察了漏芦提取物的
T-AOC，在供试浓度范围内，漏芦不同溶剂提取
物具有较强的T-AOC，其T-AOC随药物浓度升高
而增强，呈一定量效关系。实验以4 mg/mL维生
素C(VC)作为对照考察了漏芦不同溶剂提取物的
T-AOC大小，在化学模拟体系中，VC的T-AOC
为3.45U，而相同浓度RUBF和RUAF的T-AOC分
别为5.7和13.2 U，是等浓度VC的3.8和1.7倍。
2.2 漏芦提取物的羟自由基清除能力
结果见图2。在本实验所测浓度范围内，
漏 芦 不 同 溶 剂 提 取 物 可 有 效 清 除 羟 自 由 基 ，
其·OH清除能力随药物浓度升高而增高，呈良
好的量效关系。根据回归方程测得，RUBF和
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图2 漏芦提取物的羟自由基清除能力
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ည
36# 36
RUAF对·OH的半数清除浓度分别为为0.21和
6.9 mg/mL。相同实验条件下，Vc对·OH的半清
除浓度为4.2 mg/mL，稍低于RUAF的半数有效浓
度，却远远大于RUBF的半数有效浓度。
2.3 漏芦提取物对H2O2诱导的肝组织脂质过氧化
的抑制作用
结果见图3。经H2O2诱导后，模型组肝匀浆
MDA生成量均有增高，与正常对照组相比，差
异非常显著(P<0.01)，说明H2O2可促使肝匀浆膜
脂质发生过氧化反应。而在所试浓度范围内，
漏芦不同溶剂提取物可明显抑制肝匀浆MDA生
成(P<0.01)，且抑制率随药物浓度的增加而增
高，呈明显的浓度依赖性。根据回归方程测得，
RUBF和RUAF对H2O2诱导的肝匀浆脂质过氧化
作用的半数抑制浓度IC50分别为0.056、0.25 mg/
mL。
2.4 漏芦提取物对Fe2+诱导的肝组织脂质过氧化
图3 漏芦提取物对H2O2诱导的肝匀浆脂质过氧化作用的影响
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ည
RUBF
RUAF
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ည
36# 36
图4 漏芦提取物对Fe2+诱导的肝匀浆脂质过氧化作用的影响
的抑制作用
结 果 见 图 4 。 经 F e 2 +诱 导 后 模 型 组 肝 匀 浆
MDA显著增高(P<0.01)，而漏芦不同溶剂提取物
明显抑制肝匀浆MDA生成(P<0.01)，且呈一定的
浓度依赖性。根据回归方程测得，RUBF和RUAF
对Fe2诱导的肝匀浆脂质过氧化作用的半数抑制
浓度IC50分别为0.31 mg/mL和3.3 mg/mL。
3 讨论
抗氧化与人类的健康有密切的关系，当人
体的抗氧化出现障碍如自由基的产生、脂质过氧
化、抗氧化酶活力降低等，会导致细胞损伤，引
起心脏病、癌症、衰老等多种疾病。而总抗氧化
能力和活性氧自由基清除能力的测定是评价抗氧
化剂抗氧化活性的常用方法。本实验结果表明，
漏芦不同溶剂提取物均具有较强的总抗氧化能力
和清除羟自由基能力，均可抑制H2O2或Fe2+诱导
的肝匀浆脂质过氧化发生，且呈剂量依赖性，即
浓度越大，抗氧化活性越高。此外，用不同的抗
氧化体系得到的抗氧化活性的强弱顺序可能有所
不同，但就本实验所用的体系来说，漏芦正丁醇
萃取物的活性是最高的，这就证实了漏芦中的抗
氧化活性物质主要存在于正丁醇相中，为中等极
性物质。这与正丁醇相中富含蜕皮甾酮成分的
结果相吻合[6]。综上所述，漏芦作为一种抗氧化
剂，清除机体内自由基和抗脂质过氧化，可延缓
机体衰老，预防心血管系统疾病和癌症的发生。
本研究为漏芦的开发利用提供了科学依据。
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