全 文 :·食用菌· 北方园艺2016(11):148~150
第一作者简介:徐岩岩(1985-),女,博士,讲师,研究方向为农业微
生物学。E-mail:xuyanyan_sd@163.com.
责任作者:李洁(1962-),女,硕士,教授,研究方向为生物资源开发
利用。E-mail:lijie0651@163.com.
基金项目:河北省科技厅资助项目(13226511);承德市财政局资助
项目(CZ2013007);承德市科技局资助项目(20157029)。
收稿日期:2016-01-29
DOI:10.11937/bfyy.201611039
精制山杏壳木醋液防治平菇
细菌性褐斑病药效试验
徐 岩 岩,刘 晓 光,彭 艳 芳,于 文 清,朱 梦 雨,李 洁
(河北民族师范学院 生物系,河北 承德067000)
摘 要:以“寿研平”平菇(Pleurotus ostreatus)为试材,托拉斯假单胞杆菌为试用菌,采用平板
扩散法和田间防效法测定不同浓度的精制山杏壳木醋液对平菇细菌性褐斑病菌的抑菌活性及对
平菇菌丝生长的影响。结果表明:筛选得到1.25%、2.50%、5.00%精制山杏壳木醋液均可有效抑
制平菇细菌性褐斑病的发生,且可以促进平菇菌丝的生长;在田间施用过程中,可选用1.25%、
2.50%精制山杏壳木醋液进行预防,在平菇细菌性褐斑病大面积发生时可用5.00%精制山杏壳
木醋液进行控制。
关键词:山杏壳木醋液;平菇;细菌性褐斑病;托拉斯假单胞杆菌
中图分类号:S 481+.9 文献标识码:B 文章编号:1001-0009(2016)11-0148-03
20世纪70年代初,平菇生产发展迅猛,经过逾30
年的发展,我国已是平菇生产大国[1]。近年来,由托拉
斯假单胞杆菌(Pseudomonas tolaasi Paine)引起的平菇
细菌性褐斑病在国内外大面积发生[2]。平菇细菌性褐
斑病破坏菇盖表皮组织细胞,产生褐变,使其失去商业
价值[3]。平菇细菌性褐斑病的防治主要是农业防治、化
学防治和生物防治。农业防治贯穿整个流程,从菌种的
筛选到出菇需要严格的监控才能较好的降低发病率;目
前化学防治最为有效的主要化学试剂是溴硝醇、漂白粉
液、二氧化氯和农用链霉素等,但农药残留问题不易解
决[4]。生物防治具有不污染环境、对人和其它生物安
全、防治作用持久、产品无残留等优点,在平菇细菌性褐
斑病防治中将会发挥越来越重要的作用。
木醋液是木材炭化时生成的气体经过冷凝回收得
到的液态产物,现在美国、日本、韩国等国家的农业生产
中均有应用。木醋液提取物中抑菌成分为酚类、乙酸和
糠醛,且对细菌和真菌(霉菌、植物病原菌)均有抑制作
用[5]。随着新型绿色无毒抑菌剂山杏壳木醋液的开发
与利用[6],课题组采用室内抑菌毒力试验与田间试验相
结合的方法[7],研究山杏壳木醋液对平菇细菌性褐斑病
致病菌的抑菌效果。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试“寿研平”平菇菌种及菌棒由平泉县希才应用
菌科技发展有限公司提供。
供试托拉斯假单胞杆菌从发生细菌性褐斑病的平
菇子实体上分离获得。
供试药剂:硫酸链霉素可溶性粉剂(streptomycin,效
价1 000U·mg-1)为江西博莱大药厂产品,精制山杏壳
木醋液为江阴中炬生物技术有限公司提供。
培养基:LB培养基(胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,
NaCl 10g,蒸馏水1 000mL,pH 7.0,琼脂18g)用于培
养细菌;LB培养液(胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,NaCl
10g,蒸馏水1 000mL,pH 7.0)用于培养细菌;PDA培养
基(马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂18g,蒸馏水1 000mL,
pH自然)。
1.2 试验方法
1.2.1 托拉斯假单胞杆菌菌悬液的制备 挑取单个菌
株接种在LB培养液中170r·min-1振荡培养36h,用
无菌水配制成浓度为1×108 cfu·mL-1的菌悬液,备用。
1.2.2 平板扩散法抑菌 取100mL LB培养基微波
炉融化后,待温度降至65℃,在无菌条件下,倒入已灭
菌的培养皿中制作平板,每皿25mL,冷却至凝固。将
100μL浓度为1×10
8 cfu·mL-1的托拉斯假单胞杆菌
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菌悬液加到培养基上,涂布均匀,晾干,打孔8mm×
8mm,每皿4孔,加入100μL药剂,37℃黑暗培养
2d,每隔24h记录1次,测定抑菌圈直径。设置无菌
水对照和链霉素(0.5mg·mL-1)药剂对照处理。每
组处理3次重复。
1.2.3 最佳抑菌浓度筛选 利用无菌水将精制山杏壳
木醋液分别稀释至浓度梯度为50.00%、20.00%、12.50%、
10.00%、5.00%、2.50%、1.67%、1.25%,然后利用平板
扩散法筛选出精制山杏壳木醋液抑菌剂的最佳抑菌浓
度,设置无菌水和链霉素对照。
1.2.4 精制山杏壳木醋液对平菇菌丝生长的影响 采
用平板抑菌法检测不同浓度的精制山杏壳木醋液对平
菇菌丝生长的影响,设置无菌水和链霉素对照。在无菌
操作下,取100mL PDA培养基微波炉融化后,待温度降
至65℃,制作平板,每皿25mL,冷却。取100μL精制
山杏壳木醋液抑菌剂均匀涂布在平板上,至完全吸收。
在无菌操作下,用打孔器从菌种皿取材,在外缘生活力
比较强的菌落处取6mm×6mm菌饼,备用。将打好的
菌饼放置在平板中央,26℃培养8d后,用“十字交叉
法”测定平菇菌丝生长直径,以平均值代表菌落直径。
1.2.5 田间试验 涂抹接种法:待平菇子实体直径5cm
左右开始进行试验。将精制山杏壳木醋液均匀喷雾于
生长情况一致的幼小子实体菌盖上。4h后,用灭菌的
刷子蘸取2mL托拉斯假单胞杆菌菌悬液,均匀涂布在
已喷施山杏壳木醋液的菌盖上。在接种后,每隔24h进
行一次病级的调查。设置无菌水、链霉素与只接种托拉
斯假单胞杆菌对照。参考EATRADA 等[8]的分级标准
调查病情指数。病情指数=∑(各级病菇数×相应级
数)/(调查总菇数×9)×100;防治效果(%)=[病原菌
对照的病情指数-(处理的病情指数-未接病原菌对照
的病情指数)]/病原菌对照的病情指数×100。
1.3 数据分析
试验数据采用IBM SPSS Statistics 19.0进行单因
素方差分析。
2 结果与分析
2.1 精制山杏壳木醋液对托拉斯假单胞杆菌的抑菌活性
精制山杏壳木醋液对托拉斯假单胞杆菌具有显著
的抑菌活性(P<0.05)。木醋液浓度与抑制效果呈正相
关,即山杏壳木醋液浓度越大,抑菌圈直径也越大。
12.50%、10.00% 精 制 山 杏 壳 木 醋 液 与 链 霉 素
(0.5mg·mL-1)抑菌圈直径相当。不同浓度山杏壳
木醋液的抑菌效果差异显著,其中精制山杏壳木醋液
原液抑菌圈最大,可达43.43mm,与使用链霉素的比
较,抑菌圈扩大2.27倍。
表1 不同浓度的山杏壳木醋液对托拉斯假
单胞杆菌的抑菌效果
Table 1 Efect of diferent concentration of refined almond shel
pyroligneous acid on diameter of inhibition
zone of Pseudomonas tolaasi
处理
Treatment
浓度
Concentration
平均抑菌圈直径±SD
Average diameter of inhibition
zone±SD/mm
差异显著性
Significant
diference
空白对照CK - - -
链霉素Streptomycin
/(mg·mL-1)
0.5 19.12±2.27 d
100.00 43.43±2.55 a
50.00 37.70±1.21 b
20.00 33.05±1.79 c
精制山杏壳木醋液 12.50 22.06±1.03 d
Refined almond shel 10.00 21.10±1.07 d
pyroligneous acid/% 5.00 15.68±2.41 f
2.50 8.30±1.68 g
1.67 5.70±1.10 h
1.25 4.10±0.69 h
注:“-”表示没有抑菌圈;不同小写字母表示处理间达到差异显著水平(P<
0.05)。下同。
Note:‘-’present no inhibition zone;diferent lowercase letters indicate a significant
diference at 0.05level.The same below.
2.2 精制山杏壳木醋液对平菇菌丝生长的影响
精制山杏壳木醋液低浓度对(10.00%、5.00%、
2.50%、1.67%、1.25%)对平菇菌丝的生长都具有明显
的促进作用(P<0.05),其浓度1.25%精制山杏壳木醋
液对平菇菌丝生长促进作用最为显著。高浓度(原液、
50.00%、20.00%、12.50%)精制山杏壳木醋液对平菇菌
丝的生长抑制作用显著,其中原液及50.00%浓度处理
下,平菇菌丝均不生长。链霉素与空白对照、12.5%精制
山杏壳木醋液对平菇菌丝生长作用没有显著差异。
表2 不同浓度精制山杏壳木醋液对
平菇菌丝生长的影响
Table 2 Efect of diferent concentration of refined almond shel
pyroligneous acid on hyphae growth of Pleurotus ostreatus
处理
Treatment
浓度
Concentration
平均平菇菌丝直径±SD
Hyphae diameter of Pleurotus
ostreatus±SD/mm
差异显著性
Significant
diference
空白对照CK - 25.67±8.20 b
链霉素Streptomycin
/(mg·mL-1)
0.5 24.56±9.89 b
100.00 - -
50.00 - -
20.00 11.92±0.51 c
精制山杏壳木醋液 12.50 23.83±1.98 b
Refined Almond shel 10.00 40.44±1.20 a
pyroligneous acid/% 5.00 39.79±1.68 a
2.50 36.67±1.27 a
1.67 37.17±1.55 a
1.25 40.06±1.45 a
2.3 田间试验
在田间试验中,精制山杏壳木醋液可以较好的防治
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平菇细菌性褐斑病,但较高的浓度(12.50%)会对平菇子
实体产生药害,导致子实体卷曲。对照药剂链霉素
(0.5mg·mL-1)病情指数为37.06、防效为57.96%,
10.00%、5.00%、2.50%精制山杏壳木醋液防效分别为
52.69%、67.46%、55.21%,均能有效地防治褐斑病,而
且5.00%精制山杏壳木醋液防效略高于0.5mg·mL-1
链霉素,只接致病菌的平菇子实体发病褐变严重,病斑
面积较大。
表3 不同浓度精制山杏壳木醋液对平菇
细菌性褐斑病的田间防效
Table 3 Efect of refined almond shel pyroligneous acid on
brown blotch disease of P.ostreatus in vivo
药剂名称
Bactericide name
浓度
Concentration
平均病情指数
Index of incidence
平均防治效果
Protective efect/%
空白对照Control - - -
强菌对照P.tolaasi control - 88.16a -
链霉素Streptomycin
(mg·mL-1)
0.5 37.06d 57.96b
12.50 53.32b 39.52d
精制山杏壳木醋液 10.00 41.71d 52.69b
Refined almond shel 5.00 28.69e 67.46a
pyroligneous acid/% 2.50 39.49d 55.21b
1.25 45.13c 48.81c
3 讨论
目前,对于平菇细菌性褐斑病的防治主要是使用化
学试剂,但使用化学试剂药物残留比较严重,对平菇生
长和人体健康不利。而且长期大量使用有机合成化学
农药,已经带来了众所周知的环境污染、生态平衡破坏
和食品安全等一系列问题,对推动绿色农业经济,实现
持续发展带来许多不利的影响。因此,寻求高效绿色的
生物农药是现在病虫害防治的重要手段。
山杏壳木醋液是将山杏壳干馏,所产生的气体混合
物经冷凝回收,分离获得的有机产品[9]。粗木醋液是一
种黑褐色液体,有浓烈的烟熏味,该试验中将山杏壳木
醋液通过精制后,除去了木焦油及有害物质,通过室内
毒力试验与活体药效试验发现5.00%、2.50%、1.25%精
制山杏壳木醋液可显著抑制托拉斯假单胞杆菌,促进平
菇菌丝的生长,在褐斑病大面积发生时可用5.00%精制
山杏壳木醋液进行控制,以免大剂量施用造成烧菇现
象。高效、无毒的精制山杏壳木醋液用于平菇栽培过程
中,既能有效控制细菌病害,又能促进平菇菌丝的生长,
可减少菇农生产栽培平菇的成本,提高经济效益。精制
木醋液在田间施用方式正在进一步研究。
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Effect of Refined Biter Almond Shel Pyroligneous Acid on
Brown Blotch Disease of Pleurotus ostreatus
XU Yanyan,LIU Xiaoguang,PENG Yanfang,YU Wenqing,ZHU Mengyu,LI Jie
(Department of Biology,Hebei Normal University for Nationalities,Chengde,Hebei 067000)
Abstract:Taking Pleurotus ostreatus as material,Pseudomonas tolaasi as test bacterial strain,using plate difusion method
and field eficacy test,the efects of diferent concentration of refined bitter almond shel pyroligneous acid on
Pseudomonastolaasiand Pleurotus ostreatus growth were studied.The results showed that 1.25%,2.50%,5.00%of
refined bitter almond shel pyroligneous acid not only had the obvious bacteriostatic efect and could promote the growth
of mushroom mycelia.1.25%and 2.50%of refined bitter almond shel pyroligneous acid could be used in precaution,and
5.00%of refined bitter almond shel pyroligneous acid could be used in control,when brown blotch disease of Pleurotus
ostreatus extensively occured in field.
Keywords:almond shel pyroligneous acid;Pleurotus ostreatus;brown blotch disease;Pseudomonas tolaasi
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